detecÇÃo molecular do hpv em pacientes encaminhadas À urs – sagrada famÍlia - pbh vanessa...
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““DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV
EM PACIENTES ENCAMINHADAS
À URS – SAGRADA FAMÍLIA - PBH” Vanessa Carla de Moraes Gonçalves Cirino
Orientadora: Profa. Annamaria Ravara Vago
PAD – Departamento de Morfologia - ICB – UFMGLaboratório de Biologia das Interações Celulares
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INCIDÊNCIA DO CÂNCER DO COLO DO ÚTERO
15% DE TODAS AS CATEGORIAS DE CÂNCER FEMININO
2O TIPO DE NEOPLASIA MAIS COMUM ENTRE AS MULHERES
MAIOR INCIDÊNCIA ENTRE MULHERES DE 40 A 60 ANOS
40.000 NOVOS CASOS SÃO DIAGNOSTICADOS A CADA ANO
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Estimativas para o ano 2005 das taxas brutas de incidência por 100.000 e de número de casos novos por câncer, em mulheres, segundo localização primária.
Localização PrimáriaLocalização PrimáriaNeoplasia malignaNeoplasia maligna
Estimativa dos Casos NovosEstimativa dos Casos Novos
Minas GeraisMinas Gerais Belo HorizonteBelo Horizonte
CasosCasos Taxa Taxa BrutaBruta CasosCasos Taxa Taxa
BrutaBruta
Pele não Melanoma Pele não Melanoma 5.440 5.440 55,96 55,96 840 840 66,43 66,43
Mama Feminina Mama Feminina 4.220 4.220 43,46 43,46 850 850 66,99 66,99
Traquéia, Brônquio e Pulmão Traquéia, Brônquio e Pulmão 770 770 7,95 7,95 130 130 10,41 10,41
Estômago Estômago 800 800 8,24 8,24 160 160 12,93 12,93
Colo do Útero Colo do Útero 1.580 1.580 16,27 16,27 300 300 23,28 23,28
Cólon e Reto Cólon e Reto 1.110 1.110 11,45 11,45 270 270 21,25 21,25
Esôfago Esôfago 350 350 3,61 3,61 40 40 3,47 3,47
Leucemias Leucemias 410 410 4,19 4,19 80 80 6,09 6,09
Cavidade Oral Cavidade Oral 330 330 3,38 3,38 60 60 4,86 4,86
Pele Melanoma Pele Melanoma 210 210 2,21 2,21 60 60 4,67 4,67
Outras Localizações Outras Localizações 7.010 7.010 72,12 72,12 1.490 1.490 117,32 117,32
TotalTotal 22.23022.230 228,75228,75 4.2804.280 337,39337,39
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HISTOLOGIA
ConnectiveConnective TissueTissueStratified SquamousStratified Squamous
EpitheliumEpithelium
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INCIDÊNCIA DAS NEOPLASIAS
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NEOPLASIAS INTRAEPITELIAIS CERVICAIS
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COILOCITOSE
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Nova Classificação Bethesda System.
NIC I » lesão escamosa intra-epitelial de baixo grau (LSIL)
NIC II, III e carcinoma in situ » lesão escamosa intra-epitelial de alto grau (HSIL)
Células escamosas atípicas de significado indeterminado » ASCUS
Células glandulares atípicas de significado indeterminado » AGUS
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FATORES DE RISCO
Infecção por HPVParidade elevada
Início precoce da vida sexual ativa
Multiplicidade de parceiros sexuais
Tabagismo
Uso de contraceptivo oral
Casos de imunossupressão
Baixo nível socioeconômico
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VIAS DE TRANSMISSÃO
Sexual
Neonatal
Através de pinças, luvas, roupas, equipamentos, etc.
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VÍRUS DO PAPILOMA HUMANO
(HPV)
baixo risco : : 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 53- 55, 57, 59, 66 e 68; 53- 55, 57, 59, 66 e 68; médio e alto risco: : 5, 8, 16, 18, 31, 5, 8, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59;33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59;
Câncer de peleCâncer de pele
Câncer de mucosasCâncer de mucosas
1, 2, 5 e 8
16, 18, 31 e 45
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O GENOMA DO HPV
Dupla Hélice de DNA circular,8000 pb, 3 segmentos:
“Early-region” (E) – E1, E2, E4, E5, E6, E7
“Late-region” (L) – L1 e L2
“Long control region” (LCR)
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MÉTODOS DE DETECÇÃOCLÍNICO - LABORATORIAIS
Citopatológico
Colposcópico
Histopatológico
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MÉTODOS DE DETECÇÃO MOLECULARES
Captura Híbrida
Hibridização com sondas
PCR – Reação em Cadeia da Polimerase
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OBJETIVO
Realizar a extração do DNA e detecção de um fragmento do genoma viral amplificado por PCR das amostras cervicais coletadas de pacientes na URS – Sagrada Família.
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METODOLOGIAMETODOLOGIA
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POPULAÇÃO POPULAÇÃO ESTUDADAESTUDADA
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DESENHO EXPERIMENTALDESENHO EXPERIMENTAL
PACIENTES ENCAMINHADAS
n = 82
COLETA DE AMOSTRASECTO E ENDOCERVICAIS
EXTRAÇÃO DE DNA
COLORAÇÃOAg+
PCR
ELETROFORESEGEL DE POLIACRILAMIDA
Proteinase KFenol: Clorofórmio: IAA
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MECANISMO DO PCR
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PCR – fragmento de 450 pb do genoma viral ( Região de L1)
Primers : MY09 e MY11
Programa de 40 ciclosPrograma de 40 ciclos
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PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTODE 450 pb DO GENOMA DO HPV
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PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 110 pb DO GENE DE β–GLOBINA HUMANO
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RESULTADOS
Amostras coletadas 82
Extração de DNA 60
PCR – HPV 40
PCR – β-Globina 6
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RESULTADOS
AMOSTRASAMOSTRAS PCR - HPVPCR - HPV PCR – PCR – ββ-Globina-Globina
11 -- - -
22 -- ++
33 ++ ++
44 ++ ++
55 -- ++
66 -- + +
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OBJETIVOS FUTUROS
Realizar a comparação entre os achadosclínico-colposcópicos, citológicos, histopatológicos e moleculares obtidos nas amostras analisadas.
Realizar a detecção dos subtipos de HPV.
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BIBLIOGRAFIA Ministério da Saúde/ Instituto Nacional do Câncer, 1996, Viva Ministério da Saúde/ Instituto Nacional do Câncer, 1996, Viva Mulher. Programa Nacional do Câncer do Colo Uterino – Manual Mulher. Programa Nacional do Câncer do Colo Uterino – Manual Informativo, RJ.Informativo, RJ.
Villa, L. , Caballero, O. L. , Levi, J. E. , Pena, S. D. J. , Simpson A. J. G. Villa, L. , Caballero, O. L. , Levi, J. E. , Pena, S. D. J. , Simpson A. J. G. An approach to Human Papillomavirus indentification using low An approach to Human Papillomavirus indentification using low stringency single specific primer PCR. stringency single specific primer PCR.
Franco, E. L. The sexually transmitted disease model for cervical Franco, E. L. The sexually transmitted disease model for cervical cancer: incoherent epidemiologic findings and the role ofcancer: incoherent epidemiologic findings and the role ofmisclassification of human papillomavirus infection. Epidemiology,misclassification of human papillomavirus infection. Epidemiology,v.2, p.98 – 106, 1991. v.2, p.98 – 106, 1991.
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AGRADECIMENTOSProfessora Annamaria Ravara Vago
Pacientes participantes deste Projeto de Pesquisa
Professora Cleida A. Oliveira
Lucas Henrique, Sandra Moraes (Mãe) e Altair Cirino (Pai)
Amigos do Laboratório ( Alan, Soraya, Daniela, Alexandree Carla)
Equipe do Serviço de Patologia da URS – Sagrada Família(Médicos, Enfermeiros e Auxiliares de Enfermagem).