Detector Espectrofotometrico UV-Visível

Nos detectores espectrofotométricos o seu funcionamento baseia-se na absorbância

de luz por parte da amostra ao passar através dela qualquer radiação

eletromagnética; normalmente isto ocorre no ultravioleta até o infravermelho, em

um dado comprimento de onda.

Trabalhando-se com detectores espectrofotométricos (UV-VIS), deve-se conhecer as

regiões de absorção da fase móvel utilizada. Uma indicação melhor é obtida pela análise

do espectro do solvente; em caso de presença de impurezas, as regiões em que o mesmo

absorve podem ser alteradas.

É um detector seletivo, pois só detecta os compostos que absorvem no comprimento

de ondaem que o detector for ajustado.É o detector mais utilizado em HPLC, pois

grande maioria das substâncias absorvem radiaçãoUV.

Tipos de detectores UV-VIS:

Existem dois tipos de detectores de luz ultravioleta: o de comprimento de onda

variável (espectrofotômetros), que não só é de aplicação mais variada e sensível,

mas também é mais caro, e o chamado fotométrico que funciona com um ou dois

comprimentos de onda fixos.

Espectrofotométricos:

a. O comprimento de onda é variável entre 190nm e 800nm selecionado através do

monocromador (UV = lâmpada de deutério e VIS = lâmpada de tungstênio).

b. Possui maior aplicação, pois permite selecionar o comprimento de onda mais

adequado para os componentes a serem analisados.

c. Maior sensibilidade: escolha do comprimento de onda de maior absorbância.

d. Maior seletividade: escolha do comprimento de onda onde o soluto de interesse

absorve e outros não.

e. Permite a utilização de análise por gradiente: escolha do comprimento de onda onde

os constituintes da fase móvel não apresentam variação de absorbância.

f. Permite obter o espectro de absorbância de cada componente

separadointerrompendo o fluxo da fase móvel e assim selecionar o melhor

comprimento de onda.

g. Promove eficiência em eluição por gradiente através da habilidade de selecionar um

comprimento de onda onde os componentes da fase móvel não apresentam uma

variação de absorbância para diferentes concentrações.

Figura 1: Célula do detector de ultravioleta para CLAE

Considerações importantes:

i. A fase móvel utilizada não pode absorver no comprimento de onda selecionado

ii. A pureza da fase móvel é extremamente importante (traços de impurezas podem

absorver intensamente no comprimento de onda utilizado): Utilizar solventes grau

HPLC.

Fotométricos:

a. É sensível, econômico e mais que suficiente para se conseguir bons resultados com

todos os compostos que absorvem luz no comprimento de onda em que ele

funciona.

b. É normalmente insensível a variações de vazão e temperatura. A maioria dos

detectores de comprimento de onda fixo, oferecidos no mercado, operam em um

comprimento de onda de 254 nm e um de 280 nm, resultado da absorbância de luz

em 254 nm e da emissão de luz em 280 nm por uma substância fosforescente.

c. Em ótimas condições, pode-se atingir sensibilidades de até 0,001 unidades de

absorbância e, se o composto absorve intensamente na faixa de UV, é possível

detectar quantidades de amostras da ordem de nanogramas (10-9 g).

d. Quando se aplica gradiente na fase móvel e ela apresenta variação significat iva de

absorbância para o UV, é necessário utilizar a cela de referência para compensar

esta variação. Se a fase móvel não absorve ou se a absorbância é constante, pode-se

deixar a cela de referência vazia ou cheia com um dos componentes da fase móvel.

Denomina-se de “cutoff” o comprimento de onda abaixo do qual o solvente absorve

mais de 1,0 unidade de absorbância numa célula de 1 cm de comprimento. Tabelas

apresentando os valores de “cutoff” podem ser úteis para a escolha da fase móvel

adequada. Esses dados são importantes, uma vez que a resposta do detector depende da

diferença entre a absorbância do solvente e a do composto analisado.

Detector Eletroquímico

O detector eletroquímico baseia-se na possibilidade de muitos compostos serem

oxidados ou reduzidos quando seaplica um potencial elétrico.Em um processo

eletroquímico, um par de eletrodos é colocado na cela e um potencial

suficientemente elevado é aplicado provocando uma reação de oxidação ou

reduçãogerando uma corrente que é medida em um detector eletroquímico. A

corrente gerada éproporcional a concentração do composto.

Métodos eletroquímicos de detecção oferecem a mais promissora solução para o

problema de desenvolvimento de um detector para CLAE suficientemente sensível

e não baseado em absorbância de luz. Eles oferecem vantagens de alta seletividade,

alta sensibilidade e serem muito bons para as análises de traços.

É importante destacar que, neste tipo de detecção, a amostra tem que ser constituída

de íons ou compostos que sofram ou oxidação ou redução (detectores

polarográficos). Este detector é seletivo, porque detecta somente as espécies que se

oxidam (ou reduzem) em um potencial inferior ou igua1 ao fixado. Os detectores

eletroquímicos são bons para as modalidades de cromatografia que usam fases

móveis aquosas, tais como a cromatografia por troca iônica, por exclusão ou com

fase reversa por pares de íons ou ate com fase reversa com compostos oxidáveis na

fase água-álcool.

Tipos de detectores eletroquímicos:

Amperométrico

O elemento flui pela superfície do eletrodo onde uma fração das

espécieseletroativas é oxidada ou reduzida (15-20%).

Coulométrico

O elemento flui através de um eletrodo de grafite poroso onde praticamente100%

das espécies eletroativas são oxidadas ou reduzidas e portanto a sensibilidade

émuito maior (10-15 mol = fentomol).

http://www.crq4.org.br/sms/files/file/conceitos_hplc_2010.pdf

http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAUVwAC/apostila-hplc