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A C T I V I D A D N ° 3
P R O Y E C T O C I E N C I A S P A R A E L L E Ó N
S E B A S T I Á N P E Z O A N A V A R R E T E
Diagnóstico microbiológico
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Normas Laboratorio Microbiología
Trabajo de manipulación con manos:
1. Minimizar riesgo de infección.
2. Evitar contaminación de muestras con microbiota comensal (del manipulador) o proveniente del ambiente.
Formas de contagio: 1. Directo: inhalación de aerosoles,
ingestión o penetración por piel.
2. Indirecto: materiales de trabajo contaminados. ¡FRECUENTE!
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Normas Laboratorio Microbiología
Precauciones universales: 1. Uso delantal y guantes (pechera, antiparra).
2. Pelo amarrado.
3. No comer, beber o mascar chicle.
4. Área de trabajo ordenada y limpia. Libre de cuadernos.
5. Limpieza de manos: al final de la jornada con alcohol 70% + lavado de manos, y toda vez que entre en contacto con material contaminado.
6. Tubos y placas de cultivo siempre cerrados.
7. Derrame de material: cubrir con desinfectante 5 min, antes de retirar y limpiar superficie.
8. Al término de la actividad: muestras y material de laboratorio ordenado, mesones limpios, microscopios con lentes limpios, preparaciones en frascos con desinfectantes.
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Mycobacterium tuberculosis Panthera leo
Animal Cuadrúpedo Carnívoro Felino Excelente vista Originario de África subsahariana y Asia Sociales (viven en manadas) Género femenino se encarga de cazar Superdepredador Garras Atacan ungulados
Bacteria Crecimiento lento (15-20 horas) Aeróbica estricta Incolora Alcohol-ácido resistente Pared celular con ácido micólico Muy resistente a frío, congelación y desecación Estado latente Reservorio es el ser humano Crece en medio Lowenstein Jensen Colonias color blanco cremoso, esféricas, secas, rugosas, opacas, polimorfas y de dimensiones variables Descrita por Koch (1882) Genera enfermedad pulmonar, con síntomas respiratorios inespecíficos (tos, expectoración sanguinolenta) y consuntivos (fiebre, baja de peso, sudoración nocturna) Produce la enfermedad infecciosa más prevalente en el mundo Consunción, tisis, mal del rey o plaga blanca Causa más frecuente de Tuberculosis
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Morfología bacteriana
Formas unicelulares básicas: Bacilo
Coco
Espirilada o helicoidal
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Morfología bacteriana
Agrupaciones Diplococos (2)
Neisseria gonorrhoeae
Cadenas (Estreptococos)
Streptococcus pneumoniae
Racimo (Estafilococos)
Staphylococcus aureus
Irregular (Bacilos)
Escherichia coli
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Morfología bacteriana
Colonias Clones celulares.
No forman tejidos.
Cada célula es
independiente.
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Medios de cultivo (bacterianos)
Agar sangre Agar McConkey
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Identificación de microorganismos infecciosos
1. Recolección y transporte de muestras. Siembra/Cultivo/Gram
2. Observación microscópica
3. Cultivos
4. Técnicas inmunológicas-serológicas
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Recolección y transporte de muestras
Sangre, orina, heces, LCR, esputo, punciones, etc.
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Observación microscópica
Mezcla de Staphylococcus aureus
y Escherichia coli.
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Pasos para observación microscópica
Extensión de una fina capa de células sobre el porta con el Asa
Secado al aire
Fijación por flameado del porta
Tinción de Gram
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Tinción de Gram
Cuatro pasos básicos:
1. Aplicar tinción primaria (cristal violeta), a un frotis de cultivo bacteriano fijado por calor.
2. Adición de agente mordiente (lugol, con yodo).
3. Decoloración rápida con alcohol y/o acetona.
4. Tinción diferencial con safranina o fucsina.
Gram Positivo Púrpura.
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Pasos para Tinción de Gram
Paso 1
Paso 2
Paso 3
Paso 4
Tinción primaria Previamente fijado al calor. Usar cristal violeta. Durante 1 minuto. Todas las células se tiñen de color azul-violeta.
Añadir lugol, dejar actuar 3 minutos. Todas las células siguen de color azul-violeta.
Decolorar con alcohol Las células Gram + siguen de color azul-violeta. Las Gram negativas se decoloran.
Tinción de contraste Con safranina , 2 minutos. Las células G+ se ven azul-violeta. Las G- se ven rosas o rojas. Gram (-) E. coli
Gram (+) S. aureus
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Gram (+) y (-)
(Entre paréntesis) Estructuras no presentes en todas las bacterias.
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Staphylococcus aureus
CGP (cocácea Gram positiva)
Estafilococo (racimo)
Coagulasa (+)
Microbiota comensal de piel, nasofaringe, epitelio intestino, vagina.
Catalasa (+) H2O2
Impétigo, celulitis, artritis séptica.
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Staphylococcus aureus
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Streptococcus pneumoniae
CGP (cocácea Gram positiva), capsulado
Diplococo
Estreptococo (cadena)
Clasificación según hemólisis (Streptococcus): Alfa-hemolítico
Catalasa (-)
Patógeno humano exclusivo, oportunista
Colonización en sanos
Neumonía, meningitis, bacteriemia, sepsis.
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Streptococcus pneumoniae
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Escherichia coli
BGN (bacilo Gram negativo)
Fermentación glucosa
Microbiota comensal de intestino (también existen cepas uro/entero-patógenas)
Agar McConkey
Lactosa (+) hidrólisis lactosa, ácidos orgánicos, color rosado
Infecciones: ITU, Diarrea, Meningitis en RN
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Klebsiella pneumoniae
BGN (bacilo Gram negativo)
Fermentación glucosa
Microbiota comensal de intestino
Lactosa (+)
2ª ITU, IIH (heridas)
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Pseudomonas aeruginosa
BGN (bacilo Gram negativo)
BNF (bacilo no fermentador)
Patógeno oportunista
Frecuente IIH
Distribución cosmopolita
Alto grado de supervivencia
IIH: ITU-CA, Infección heridas, atritis
IEH: Otitis nadador, quemados
Olor a manzana
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Control próxima sesión
1. Pre-tratamiento, fijación, tinción y montaje
2. Elementos del microscopio. 3. Bacterias
Estructuras, morfología, clasificación.
Características generales de Gram (+) y (-).
4. Hongos Estructuras, clasificación.
5. Diagnóstico microbiológico Tinción de Gram.
6. TAREA: Buscar las siguientes relaciones ecológicas entre seres vivos y dar ejemplos:
Simbióticas - Mutualismo (+/+) - Comensalismo (+/+) - Parasitismo (+/-) No simbióticas - Amensalismo (+/0) - Competencia (+/-)
(interespecífica, intraespecífica)
- Depredación (+/-)