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UTILIZZO DI U1-snRNA PER LA
CORREZIONE DEL DIFETTO
SEVERO DI FATTORE VII DELLA
COAGULAZIONE
Università degli Studi di Ferrara
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FVa
FVIIaTF
FX FXa
PT TH
FVII
mutazione nel
gene del FVII
Deficienza congenita di FVII
malattia autosomica (cr.13) recessiva a penetranza variabile
con frequenza 1/500.000
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IVS7 +5GA
(FVII Lazio)
EXON 8
TGG / GTGGGTACC
A
Exon 6 Exon 7 Exon 8* * * * *
IVS7 5’ss is in the 1st of highly
homologous 37bp repeats
containing identical cryptic 5'ss (*)
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Ex7 Ex8Ex.6
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Ex7 Ex8Ex.6
IVS7+5GA
IVS7+5G/A
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Ex7 Ex8Ex.6
L’utilizzo di una snRNA-U1 modificata
può ripristinare il corretto splicing del
messaggero?
?
IVS7+5G/A
IVS7+5GA
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Costruzione di un vettore di espressione per la U1snRNA
modificata appositamente per riconoscere il mutato 5’ss
Ex7 Ex8
u
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Ripristino parziale dello SPLICING mediante
snU1+5A
Estrazione RNA
ed RT-PCR
U1+5aIVS7+5GA
COTRASFEZIONE
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RT-PCR 7F-8R
Ex7 Ex8
Ex7 Ex8
M Wt IVS7+5A
+U1+5A
Ripristino parziale dello SPLICING mediante
snU1+5A
7FFAM
Ex7 Ex8Ex.6
IVS7+5GA 8R
In seguito a trattamento con U1+5A si nota la comparsa di un messaggero normale
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CONCLUSIONI
•L’ utilizzo di una U1 modificata è in grado di ripristinare parzialmente
il corretto processamento del messaggero del FVII.
•Le U1snRNAs modificate possono rappresentare un approccio
terapeutico mutazione-specifico nella deficienza di FVII così
come per altre patologie causate da mutazioni di splicing.
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