dnr reparacija, rekombinacija ir transpozicija
DESCRIPTION
DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA. 8.1 DN R REPARACIJA. Kadangi dauguma mutacijų yra žalingos, DNR reparacijos sistemos yra gyvybiškai svarbios organizmo išgyvenimui Ląstelėse yra keletas DNR reparacijos sistemų, ištaisančių skirtingų tipų DNR pažaidas - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/1.jpg)
DNR REPARACIJA, DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR REKOMBINACIJA IR
TRANSPOZICIJATRANSPOZICIJA
![Page 2: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/2.jpg)
Kadangi dauguma mutacijų yra žalingos, DNR reparacijos sistemos yra gyvybiškai svarbios organizmo išgyvenimui Ląstelėse yra keletas DNR reparacijos sistemų,
ištaisančių skirtingų tipų DNR pažaidas Daugeliu atveju DNR reparacija yra
daugiapakopis procesas 1. Surandama DNR struktūros anomalija 2. Nenormali DNR pašalinama 3. Sintetinama normali DNR
8.1 DNR REPARACIJA
8-2
![Page 3: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/3.jpg)
Dažniausi DNR reparacijos tipai
Sistema Aprašymas
Tiesioginė reparacija
Fermentas tiesiogiai atpažįsta netaisyklingą DNR struktūrą ir verčia ją į taisyklingą struktūrą
Bazių ar nukleotidų ekscizijos reparacija
Pradžioje atpažįstamos netaisyklingos bazės ar nukleotidai ir pašalinami iš DNR struktūros. Šioje srityje iškerpamas DNR segmentas. Komplementari DNR grandinė naudojama kaip matrica naujam segmentui sintetinti.
Neatitinkančių nukleotidų reparacija
Procesas, panašus į ekscizinę reparaciją: skirtumas tik tas, kad atpažįstami neteisingai suporuoti nukleotidai.
Rekombinacinė reparacija
Vyksta, jei replikuojantis dėl DNR pažaidos susidaro nereplikuotos DNR spraga. Vyksta mainai tarp DNR segmento su spraga ir normaliai replikuotos DNR. Po to spraga gali būti užpildyta, panaudojant komplementarią grandinę kaip matricą.
8-3
![Page 4: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/4.jpg)
Keletu atvejų nukleotidų kovalentinės modifikacijos gali būti tiesiogiai pašalintos, veikiant specialiems fermentams
Fotoliazė gali reparuoti timino dimerus Ji perskelia dimerus, atstatydama normalią DNR struktūrą
O6-alkilguanino alkiltransferazė reparuoja alkilintas bazes Ji perneša metilo ar etilo grupę nuo bazės ant alkiltransferazės
baltymo cisteino Ši reakcija negrįžtamai inhibuoja alkiltransferazę
8-4
Pažeistos bazės gali būti reparuojamos tiesiogiai
![Page 5: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/5.jpg)
8-5Tiesioginė pažeistų DNR bazių reparacija
a) Tiesioginė timino dimero reparacija b) Metilintos bazės tiesioginė reparacija
DNR fotoliazėkerpa dvi jungtistarp timinodimero
Atstatoma normali dviejų timinų struktūra Atstatoma normali guanino struktūra
Alkiltransferazė katalizuojaalkilo grupėspašalinimą
![Page 6: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/6.jpg)
Bazių ekscizijos reparacijoje (BER) dalyvauja fermentai, priklausantys DNR-N-glikozilazių klasei Šie fermentai gali atpažinti nenormalią bazę ir suardyti
jungtį tarp jos ir DNR karkaso dezoksiribozės Priklausomai nuo rūšies ši reparacijos sistema gali
pašalinti tokias nenormalias bazes, kaip: Uracilą; timino dimerus 3-metiladeniną;7-metilguaniną
8-6
Bazių ekscizijos reparacija pašalina pažeistą DNR
![Page 7: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/7.jpg)
8-7
Priklausomai nuo to, kas yra pašalinamas – purinas ar
pirimidinas, susidaro apurininiai arba apirimidininiai saitai
Įkarpos replikacija (nick replication) būtų tikslesnis terminas
N-glikozilazė atpažįsta nenormalią bazę ir nukerpa jungtį tarp bazės ir fosfodezoksiribozinio karkaso
Apirimidininisnukleotidas
AP endonukleazė atpažįsta trūkstamąbazę ir kerpa DNR karkasą trūkstamosbazės 5’ pusėje
Įkarpa
Įkarpos transliacijos regionas
DNR polimerazė naudoja 5’-3’ egzonukleazinįaktyvumą pažeistai sričiai pašalinti; susidariusispraga užpildoma normaliais nukleotidais; ligazė susiuva srities kraštus
![Page 8: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/8.jpg)
Svarbus bendrasis DNR reparacijos procesas yra nukleotidų ekscizijos reparacija (NER)
Šis reparacijos tipas gali reparuoti daugelį skirtingų DNR pažaidų tipų, tarp jų timino dimerus ir chemiškai modifikuotas bazes
NER yra randama visuose prokariotuose ir eukariotuose Jos molekuliniai mechanizmai geriau ištyrinėti prokariotų
ląstelėse
8-8
Nukleotidų ekscizijos reparacija pašalina pažeistos DNR segmentus
![Page 9: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/9.jpg)
E. coli NER sistemai veikti reikia keturių pagrindinių baltymų Jie žymimi UvrA, UvrB, UvrC ir UvrD
Pavadinti taip dėl to, kad dalyvauja ultravioleto šviesos indukuotų timino dimerų reparacijoje
Jie taip pat dalyvauja reparuojant chemines DNR pažaidas
UvrA, B, C ir D atpažįsta ir pašalina trumpą pažeistos DNR segmentą
DNR polimerazės ir ligazė baigia reparacijos procesą
8-9
Nukleotidų ekscizijos reparacija pašalina pažeistos DNR segmentus
![Page 10: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/10.jpg)
8-10
Timino dimeras
UvrAB kompleksas slenka DNR, ieškodamas DNR pažaidų
Aptikus pažaidą, UvrA yra pašalinami, o vietoje jų prisijungia Uvr C
Uvr C padaro įpjovas abiejosetimino dimero pusėse
![Page 11: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/11.jpg)
8-11
Dažniausiai įpjovos yra daromos 4-5 nukleotidų atstumu nuo pažaidos 3’galo ir 8 nukleotidų atstumu nuo 5’ galo
Įpjova Įpjova
Uvr D yra helikazė, pašalinantipažeistą sritį. Uvr B ir C yra paleidžiami iškomplekso
DNR polimerazė užpildo spragą, o DNR ligazė susiuva
Timino dimero nebėra
![Page 12: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/12.jpg)
Pigmentinę kserodermą gali sukelti defektai septyniuose skirtinguose NER genuose
Nukleotidų ekscizijos reparacija pašalina pažeistos DNR segmentus
Keletas žmogaus ligų išsivysto dėl paveldimų defektų NER genuose Šių ligų pavyzdžiai yra pigmentinė kseroderma (xeroderma
pigmentosum; XP) ir Kokaino (Cockayne) sindromas (CS) Abiejų sindromų būdingas bruožas yra jautrumas Saulės šviesai
8-12
![Page 13: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/13.jpg)
Bazių neatitikimas yra dar viena DNR struktūros anomalija
DNR dvigubos spiralės struktūra paklūsta AT/GC bazių poravimosi taisyklei Tačiau DNR replikcijos metu dėl klaidos gali būti įjungta
netatitinkanti poros bazė
DNR polimerazei būdinga 3’-5’ korekcijos savybė, dėl kurios yra aptinkamas ir ištaisomas bazių neatitikimas
8-13
Neatitikimo reparacijos sistema aptinka ir ištaiso bazių porų neatitikimus
![Page 14: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/14.jpg)
Tačiau jei ši korekcija nesuveikia, tada pradeda veikti metilo nukreipiama bazių neatitikimo reparacijos sistema
Ši reparacijos sistema randama visose organizmų rūšyse. Tai rodo jos gyvybinę svarbą
Žmogaus irganizme šios sistemos defektai yra siejami su kai kurių tipų navikų išsivystymu
8-14
Neatitikimo reparacijos sistema aptinka ir ištaiso bazių porų neatitikimus
![Page 15: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/15.jpg)
Molekuliniai bazių neatitikimo reparacijos mechanizmai geriausiai ištyrinėti E. coli Dalyvauja trys baltymai - MutL, MutH ir MutS
Baltymai pavadinti “Mut”, kadangi jiems nesant mutacijų dažnis yra žymiai didesnis
Pagrindinė MutH ypatybė yra ta, kad jis gali atskirti tėvinę grandinę nuo dukterinės
Tėvinė grandinė yra metilinta, o dukterinė kol kas nemetilinta
8-15
Neatitikimo reparacijos sistema aptinka ir ištaiso bazių porų neatitikimus
![Page 16: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/16.jpg)
8-16
Veikia kaip jungtis tarp MutS ir MutH
Metilo nukreipiama bazių neatitikimo reparacija E. coli
MutS baltymas aptinka neatitikimą. MutS/MutL kompleksas prisijungiaprie MutH, kuris jau yra prisijungęs prie hemimetilintos srities
Tėvinėgrandinė
Naujagrandinė
Neatitinkantibazė
MutH kirpimo vieta
MutH daro įpjovą nemetilintoje grandinėje.Egzonukleazė šioje vietoje pradedaskaidyti nemetilintą DNR ir sustojaiš karto už bazių neatitikimo
![Page 17: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/17.jpg)
8-17Metilo nukreipiama bazių neatitikimo reparacija E. coli
MutH kirpimo vieta
DNR polimerazė užpildo spragą,DNR ligazė susiuva galus
Neatitinkanti bazė reparuota
![Page 18: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/18.jpg)
Kai kurie DNR pažaidų tipai gali sustabdyti DNR replikaciją Pavyzdžiui, timino dimeras sustabdo suporuotos bazės
įjungimą į naujai susintetintą dukterinę grandinę Susidaro replikacijos spraga
Dėl šios spragos gali susidaryti chromosomų aberacijos ir kitos mutacijos
Tačiau šias spragas gali užpildyti rekombinacinė reparacija
8-18
Pažeista DNR gali būti reparuojama rekombinacijos būdu
![Page 19: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/19.jpg)
8-19
DNR grandinės A ir C turi tas pačias sekas
DNR grandinės B ir D turi tas pačias sekas
Pastaba: Rekombinacinė reparacija vyksta tada, kai
jau yra dvi DNR kopijos
Vykstant rekombinacijai, A grandinės sritis yra pakeičiamaC grandinės tokia pačia sritimi
![Page 20: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/20.jpg)
8-20
Spraga reparuojama, tačiau timino dimeras išlieka
Spraga, esant A grandinėje, užpildoma DNR polimerazės irDNR ligazės, panaudojant B grandinę kaip matricą
![Page 21: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/21.jpg)
Ne visa DNR yra reparuojama vienodai intensyviai Aktyviai transkribuojami prokariotų ir eukariotų genai yra
reparuojami efektyviau, negu netranskribuojama DNR
DNR reparacijos fermentų pirmaeilis nukreipimas į aktyviai transkribuojamus genus suteikia keletą biologinių pranašumų 1. Aktyvių genų DNR struktūra yra mažiau kompaktiška
Todėl tokie genai yra jautresni DNR pažeidžiantiems veiksniams
2. DNR sritys, tyrinčios aktyvių genų, yra svarbesnės išgyvenamumui, negu netranskribuojamos sritys
8-21
Aktyviai transkribuojamos DNR reparacija
![Page 22: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/22.jpg)
E. coli baltymas, vadinamas transkripciją ir reparaciją sujungiančiu faktoriumi (transcription-repair coupling factor; TRCF) tarpininkauja tarp DNR reparacijos ir transkripcijos Jis nukreipia NER sistemą į aktyviai transkribuojamus
genus, turinčius pažeistą DNR Ši sistema eukariotuose yra ištyrinėta menkiau;
nustatyta keletas baltymų, galinčių atlikti TRCF funkciją Šie baltymai nustatyti tiriant individus, pasižyminčius
dideliu mutacijų dažniu Pvz., tiriant Kokaino sindromą identifikuoti du genai – CS-A ir
CS-B, koduojantys baltymus, veikiančius kaip TRCF8-22
Aktyviai transkribuojamos DNR reparacija
![Page 23: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/23.jpg)
8-23
TRCF
RNR polimerazė
Timino dimeras
Timino dimeras sustabdoRNR polimerazę
TRCF veikia kaip helikazė ir pašalina RNR polimerazęiš pažeistos srities
RNRpolimerazė (turi UvrA
jungimosivietą)
Vyksta NER reparacija
Uvr A/B kompleksas pritraukiamas, o TRCF paleidžiamas
![Page 24: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/24.jpg)
Kai kurios pažaidos išvegia visų reparacijos sistemų ir lieka DNR Jos taip pat gali “išgyventi” ir iki DNR replikacijos
Replikacinės DNR polimerazės, tokios, kaip E. coli DNR pol III yra jautrios DNR struktūros pokyčiams Todėl jos negali vykdyti replikacijos, jei DNR struktūra yra
pažeista Pažeistos DNR replikacijai reikalingos specializuotos DNR
polimerazės8-24
Pažeistą DNR gali replikuoti pažaidas apeinančios DNR polimerazės
![Page 25: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/25.jpg)
Šie specializuoti fermentai padeda vykti apeinančiai pažaidas DNR sintezei, (translesion DNA synthesis; TLS)
TLS polimerazės turi aktyvų centrą su laisva, paslankia kišene Todėl jos gali prisitaikyti prie aberantinių struktūrų, esančių
matricinėje grandinėje Neigiama TLS polimerazių savybė yra žemas replikacijos
tikslumas Klaidų (mutacijų) dažnis svyruoja nuo 10-2 iki 10-3
Kai replikacinė DNR polimerazė aptinka pažeistą DNR sritį, ji užleidžia vietą TLS polimerazei
8-25
![Page 26: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/26.jpg)
E. coli apeinanti pažaidas replikacija vyksta esant ekstremalioms sąlygoms, kurias skatina DNR pažaidos
Šis reiškinys yra vadinamas SOS atsaku
Jo metu pradeda veikti keletas genų, kurių produktai reparuoja DNR, atstato replikaciją ir sustabdo priešlaikinį ląstelių dalijimąsi
Nereparuota pažeista DNR yra replikuojama DNR polimerazių II, IV ir V
8-26
![Page 27: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/27.jpg)
8.2 DNR REKOMBINACIJA Genetinės rekombinacijos metu formuojasi
chromosomų trūkiai, o susidarę fragmentai jungiasi, sudarydami naujas kombinacijas
Skiriami trys pagrindiniai rekombinacijos tipai 1. Homologinė rekombinacija
Vyksta tarp homologinių DNR segmentų Būdinga visiem organizmams
2. Saitspecifinė rekombinacija Vyksta rekombinuojant nehomologiniams DNR segmentams
specifinėse vietose (saituose) 3. Transpozicija
Vyksta kai maži DNR segmentai, vadinami transpozonais, persikelia į įvairias chromosomų vietas
8-27
![Page 28: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/28.jpg)
8-28Eukariotų chromosomų krosingoveris
Taip pat vadinami netėviniais genotipais
8.2.1 Homologinė rekombinacija Mejozės I ir retkarčiais mitozės metu vyksta krosingoveris
Tai yra DNR mainai tarp homologinių chromosomų neseserinių chromatidžių; jie sukuria naujas alelių kombinacijas
Anksčiau minėti seserinių chromatidžių mainai nesukuria naujų alelių kombinacijų, todėl nėra laikomi genetinės rekombinacijos forma
![Page 29: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/29.jpg)
Kartais genetinė rekombinacija du skirtingus alelius paverčia dviem identiškais aleliais Procesas, kai vienas alelis yra paverčiamas kitu aleliu, yra
vadinamas genų konversija
Genų konversija gali atsirasti dviem būdais 1. DNR spragų reparacinės sintezės metu 2. Vykstant DNR bazių neatitikimo reparacijai
Genų konversijos priežastys
8-29
![Page 30: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/30.jpg)
8-30Genų konversija, vykstanti spragų reparacijos metu
Viršutinė chromosoma turi recesyvinį b alelį, o apatinė chromosoma dominuojantį B alelį
Geno sritis
Įvyksta dvigrandinis trūkisrecesyviniame gene
Sritis, gretima dvigrandininiam trūkiui, Iškerpama, o tai pašalina recesyvinįb alelį
Baltymas RecA skatina grandinėsinvaziją ir D kilpos formavimąsi
![Page 31: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/31.jpg)
8-31
Abidvi chromosomos turi B alelį
Genų konversija, vykstanti spragų reparacijos metu
Reparacinės sintezės metu dominuojančioB alelio DNR grandinė yra naudojama kaipmatrica spragai užtaisyti
![Page 32: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/32.jpg)
Vykstant šiam procesui du mažai homologiški ar visiškai nehomologiški DNR segmentai gali rekombinuoti specifiniuose saituose Šie saitai yra palyginti trumpos DNR sekos, nurodančios
specifinę rekombinacijos vietą Chromosomų fragmentų karpymą ir susijungimą
katalizuoja specializuoti fermentai
Saitspecifinę rekombinaciją naudoja: Kai kurie virusai – savo DNR įterpti į šeimininko DNR Žinduoliai – antikūnų įvairovei sukurti
8.2.2 Saitspecifinė rekombinacija
8-32
![Page 33: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/33.jpg)
Antikūnai arba imunoglobulinai (Ig) yra baltymai, gaminami imuninės sistemos B ląstelių Jų funkcija yra atpažinti svetimus darinius (virusus, bakterijs ir
kt.) ir nukreipti juos sunaikinimui Šie svetimi dariniai dar vadinami antigenais
Antigeno-antikūno atpažinimas yra labai specifinis Kiekvieno tipo antikūnas atpažįsta vieną epitopą
Kiekviena B ląstelė sintetina tik vieno tipo antikūnus Tačiau organizme yra milijonai B ląstelių, sintetinančių
skirtingus antikūnus
Antikūnų įvairovę sukuria saitspecifinė rekombinacija
8-33
![Page 34: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/34.jpg)
Milijonų skirtingų antikūnų molekulių sintezė iškelia įdomų genetinį klausimą Jei viskas vyktų pagal standartinį mechanizmą, organizmui
reikėtų milijonų skirtingų antikūnų genų. Tuo tarpu visame žmogaus genome yra apie 35,000 genų (ar dar mažiau)
Taigi, kaip organizmai sukuria milijonus antikūnų molekulių su skirtingomis aminorūgščių sekomis polipeptiduose?
Išsivystė neįprastas procesas, kurio metu DNR yra kerpama ir susiuvama, vykstant saitspecifinei rekombinacijai Šiam mechanizmui įgyvendinti pakanka tik keleto didelių
antikūno pradinių genų Jų DNR yra pertvarkoma daugeliu skirtingų būdų, taip sukuriant
skirtingas aminorūgščių sekas8-34
![Page 35: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/35.jpg)
Antikūnai yra tetrameriniai baltymai, sudaryti iš dviejų sunkių ir dviejų lengvų polipeptidinių grandinių
8-35
Sunkioji grandinė
Antigenas
Variabili sritis
Hipervariabili sritis
PastoviossritysLengvoji
grandinė
Specifinių antigenųprisijungimo sritys
![Page 36: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/36.jpg)
Vienas lengvosios grandinės tipų yra (kapa) lengvoji grandinė Pradinį geną sudaro įvairios sekos arba domenai
Maždaug 300 variabilių domenų (V=Variable) Kiekvienas koduoja skirtingas aminorūgščių sekas
Keturi sujungimo domenai (J=Joining) Kiekvienas koduoja skirtingas aminorūgščių sekas
Vienas pastovus domenas (C=Constant)
8-36
Domenų išsidėstymas lengvosios grandinės pradiniame gene
![Page 37: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/37.jpg)
Vykstant B ląstelių diferenciacijai lengvosios grandinės pradinis genas yra sukarpomas ir sujungiamas taip, kad vienas V domenas yra sugretinamas su J domenu
Rekombinacijos signalo seka yra randama kiekvieno V domeno pabaigoje ir kiekvieno J domeno pradžioje Ši vieta (saitas) dalyvauja saitspecifinėje rekombinacijoje
Rekombinaciją inicijuoja du baltymai - RAG1 ir RAG2 Jų pavadinimas yra akronimas nuo recombination-
activating gene
8-37
![Page 38: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/38.jpg)
8-38
Susjungimas nėra visiškai preciziškas, todėl keletas bazių gali būti įterptos arba pamestos sandūros srityje. Tai sukuria papildomą antikūnų įvairovę
Lengvosios grandinės pradinis genas
RAG1 ir RAG2 katalizuoja trūkiųsusidarymą variabilaus domeno pabaigoje ir sujungimo domeno pradžioje. Pavyzdyjetai vyksta V78 pabaigoje ir J2 pradžioje
Tarpinė DNR pametama. NHEJbaltymas katalizuoja paskutiniojo Vdomeno ir pirmojo J domenosusijungimą
Nonhomologous DNA end joining
Genas transkribuojamas į mRNR pradedant paskutiniuojuvariabiliu domenu
![Page 39: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/39.jpg)
8-39
Vyksta srities, esančios tarppirmojo J domeno ir C domenosplaisingas
mRNR yra transliuojama į polipetidą, sudarytą iš vieno V, vieno J ir vieno C domenų
Du lengvųjų grandinių polipeptidai Ir du sunkiųjų grandinių polipeptidaisudaro funkcionalų antikūno baltymą
Sunkiosios grandinės polipeptidas
Funkcionalus antikūnas,susidarantisvienojeB ląstelėje
![Page 40: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/40.jpg)
Sunkiosios grandinės polipeptidai gali būti sukuriami, panaudojant panašų rekombinacijos mechanizmą
Sunkiosios grandinės pradinis genas turi Apie 500 variabilių domenų 4 sujungimo domenus 12 įvairovės domenų (D=Diversity ), randamų
tarp V ir J Pradžioje kombinuojami D ir J
Po to vyksta V rekombinacija su DJ Tie patys baltymai, katalizuojantys VJ susiliejimą,
dalyvauja ir sunkiosios grandinės geno rekombinacijoje
8-40
![Page 41: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/41.jpg)
Visas šis procesas yra vadinamas V(D)J rekombinacija (D) vyksta tik sunkiosios grandinės gene
V(D)J rekombinacija sukuria didžiulę polipeptidų įvairovę Lengvoji grandinė
300 (V domenų) X 4 (J domenai)
= 1,200 galimų kombinacijų
Sunkioji grandinė 500 (V domenų) X 12 (D domenų) X 4 (J domenai)
= 24,000 galimų kombinacijų
Lengvosios ir sunkiosios grandinių kombinacijos sukuria 1,200 X 24,000 = 28,800,000 galimų antikūnų molekulių!!!
8-41
![Page 42: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/42.jpg)
Transpozicija yra mažų DNR segmentų integracija į chromosomą Tai gali vykti daugelyje skirtingų genomo vietų
Šie DNR segmentai yra vadinami transpozabiliais elementais (TE) Kartais juos dar vadina “šokinėjančiais genais” (“jumping
genes”) TE pirmoji identifikavo Barbara McClintock,
tyrinėdama kukurūzus Po to buvo aptikta daugybė TE bakterijose, grybuose,
augaluose ir gyvūnuose
8.2.3 Transpozicija
8-42
![Page 43: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/43.jpg)
Transpozonų fenotipinė raiška augaluose
Kukurūzo grūdas su spalvotomis aleurono dėmėmis Dėmės atsiranda dėl Ac-Ds sistemai priklausančių transpozonų
Žirnių požymis wrinkled, atsirandantis dėl traspozabilaus elemento insercijos į struktūrinį geną, koduojantį krakmolo sintezei reikalingą fermentą
8-43
![Page 44: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/44.jpg)
Nustatyti trys pagrindiniai transpozicijos būdai 1. Paprasta transpozicija 2. Replikacinė transpozicija 3. Retrotranspozicija
Transpozicijos būdai
8-44
![Page 45: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/45.jpg)
8-45
Šis mechanizmas taip dar vadinamas “cut-and-paste”
Plačiai aptinkamas bakterijose ir eukariotuose
a) Paprasta transpozicija
![Page 46: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/46.jpg)
8-46
Vyksta TE replikacija ir kopijos insercija į kitą chromosomos vietą
Šis mechanizmas santykinai retas ir sutinkamas tik bakterijose
b) Replikacinė transpozicija
![Page 47: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/47.jpg)
8-47
Šis mechanizmas labai dažnas, tačiau sutinkamas tik eukariotuose
Šio tipo elementai vadinami retroelementais, retrotranspozonais arba retropozonais (RE)
c) Retrotranspozicija
Transkripcija
Atvirkštinėtranskriptazė
![Page 48: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/48.jpg)
Transpozabilių elementų DNR sekos yra kelių tipų Pagal tai, kokios sekos juos sudaro, skiriami šie
pagrindinai TE tipai Insercinės (įterptinės) sekos Sudėtiniai transpozonai Replikaciniai transpozonai Retroelementai
Virusų tipo Ne virusų tipo
Tačiau aptinkami ir įvairūs kiti TE struktūrų variantai
TE būdingos specifinės DNR sekos
8-48
![Page 49: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/49.jpg)
8-49
Paprasčiausias TE
Tiesioginiai pasikartojimai
Randami šeimininko DNR
Katalizuoja transpoziciją
Invertuoti pasikartojimai
Invertuoti pasikartojimai yra tokios pačios, tik priešingų krypčių, DNR sekos
5’ CTGACTCTT 3’3’ GACTGAGAA 5’
5’ AAGAGTCAG 3’3’ TTCTCAGTC 5’
ir
Ilgis varijuoja nuo 9 iki 40 bp
a) Elementai, judantys po genomą paprastos transpozicijos būdu
Transpozazės genas
Insercinė seka
![Page 50: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/50.jpg)
8-50
Turi papildomų genų, nereikalingų transpozicijai vykti
Tik dvi invertuotos kartotinės sekos transpozono galuose dalyvauja transpozicijoje
Suteikia selektyvinį pranašumą
a) Elementai, judantys po genomą paprastos transpozicijos būdu
Sudėtinis transpozonas
Transpozazėsgenas
Atsparumo antibiotikams
genas
![Page 51: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/51.jpg)
8-51
Sandara panaši į insercinės sekos Skirtumas tas, kad tarp invertuotų sekų randamas rezolvazės genas
Transpozazė ir rezolvazė reikalingos šio tipo elemntų transpozicijos katalizei
b) Elementai, judantys po genomą replikacinės transpozicijos būdu
Replikacinis transpozonas
Transpozazėsgenas
Rezolvazėsgenas
![Page 52: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/52.jpg)
8-52
Evoliuciškai susijęs su žinomais retrovirusais
Kaip ir jų virusiniai atitikmenys, jie koduoja virusinius baltymus, reikalingus transpozicijai
Ilgos terminalinės kartotinės sekos
Dažniausiai kelių šimtų nukleotidų ilgio
c) Elementai, judantys po genomą retrotranspozicijos būdu
Retroelementų sandara yra gana įvairi Jie klasifikuojami, remiantis evoliuciniais ryšiais su
retrovirusų sekomis Retrovirusai yra RNR virusai, gaminantys DNR kopiją, kuri
integruojasi į šeimininko genomą
Virusų tipo retroelementas
Atvirkštinėstranskriptazės
genas
Integrazėsgenas
![Page 53: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/53.jpg)
8-53
Daugelis nepasižymi sekų panašumu Evoliuciškai yra kilę iš normalių eukariotinių genų
Pavyzdys Kartotinių sekų Alu šeima yra kilusi iš vieno senovinio pirmtako geno,
žinomo kaip 7SL RNR genas Šio geno seka retropozicijos būdu nukopijuota daugiau nei 500,000
kartų Tai sudaro maždaug 5-6% žmogaus genomo
c) Elementai, judantys po genomą retrotranspozicijos būdu
Ne virusų tipo retroelementas
Atvirkštinėstranskriptazės
genas
![Page 54: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/54.jpg)
TE gali būti pilni (arba autonomiški), kai jie turi visą informaciją, būtiną transpozicijai vykti
TE yra nepilni (arba neautonomiški), kai jiems trūksta geno(ų), reikalingų transpozicijai vykti
Kukurūzų Ds elementas (Dissociation) yra nepilnas Jam trūksta transpozazės geno
Pilna šio TE versija yra Ac lokusas (Activator) Jis turi transpozazę
Todėl nepilno TE (tokio kaip Ds) transpozicija gali vykti tik tada, jei kitoje chromosomos srityje yra transpozazės genas (pvz., Ac lokuse)
8-54
![Page 55: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/55.jpg)
Pastarųjų dešimtmečių tyrimai rodo, kad TE, greičiausiai, yra visų rūšių genomuose
TE turi įtakos mutacijoms ir evoliucijai
8-55
Kai kuriais atvejais eukariotų genomo kartotinės sekos yra susidariusios dėl TE proliferacijos
Žinduoliuose randamos kartotinės sekos: LINEs
Long interspersed elements Dažniausiai nuo 1,000 iki 5,000 bp ilgio Genome aptinkama nuo 20,000 iki 100,000 kopijų
SINEs Short interspersed elements Trumpesni nei 500 bp Pavyzdys: Alu sekos
Žmogaus genome yra nuo 500,000 iki 1,000,000 kopijų
![Page 56: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/56.jpg)
Transpozonų biologinė reikšmė evoliucijai yra diskutuojama
Dvi pagrindinės hipotezės: 1. TE egzistuoja tiesiog todėl, kad jie tai gali!
Kitaip tariant, jie yra kaip parazitai Jie gali daugintis kartu su šeimininku, kol nesukelia šeimininkui
tokios žalos, kuri reikšmingai sumažintų jo išgyvenimo galimybes Ši hipotezė vadinama savanaudiškos (selfish) DNR teorija
2. TE egzistuoja todėl, kad jie suteikia organizmui tam tikrą pranašymą
Bakteriniai TE perneša atsparumo antibiotikams genus TE gali padidinti genetinę įvairovę vykstant rekombinacijai TE gali sukelti egzonų inserciją į struktūrinių genų koduojančias
sekas Šis reiškinys, vadinamas egzonų perkėlimu (exon shuffling), gali
skatinti išsivystymą genų, pasižyminčių įvairesnėmis funkcijomis8-56
![Page 57: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/57.jpg)
Viena aišku: TE gali greitai patekti į organizmo genomą ir ten
proliferuoti
Drosophila melanogaster TE, vadinamas P elementu, atsirado rūšies genome apie 1950
metus Per pastaruosius 50 metų P išplito visose pasaulio D.
melanogaster populiacijose Vieninteliai kamienai be P elemento yra D. melanogaster linijos,
surinktos gamtoje iki 1950 m.
TE gali veikti chromosomų struktūrą ir genų ekspresiją
8-57
![Page 58: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/58.jpg)
Galimos transpozicijos pasekmės
Pasekmė Priežastis
Chromosomų struktūra
Chromosomų trūkiai TE ekscizija
Chromosomų persitvarkymai
Homologinė rekombinacija tarp TE, esančių skirtingose genomo vietose
Genų ekspresija
Mutacijos Klaidinga TE ekscizija
Genų inaktyvacija TE insercija į geną
Genų reguliacijos sutrikimas Geno transpozicija prie reguliacinės sekos arba reguliacinės sekos transpozicija prie geno
Egzonų struktūros pakitimas
Egzonų insercija per TE į struktūrinių genų koduojančias sekas
Genų duplikacijos Sudėtinio transpozono susidarymas ir kopijos perkėlimas į kitą genomo vietą
8-58
![Page 59: DNR REPARACIJA, REKOMBINACIJA IR TRANSPOZICIJA](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061600/56814923550346895db65ddf/html5/thumbnails/59.jpg)
Kadangi nemaža dalis pasekmių gali būti žalingos, transpozicijos reiškinys paprastai yra griežtai reguliuojamas
Ji vyksta tik keletoje individų esant tam tinkroms sąlygoms Tokie veiksniai kaip radiacija, cheminiai mutagenai ir
hormonai stimuliuoja TE judėjimą Jei reiškinys nėra griežtai reguliuojamas, jis gali būti žalingas
Drosophila melanogaster
8-59
M linijos patelės
(neturi P elemento)
P linijos patinai
(turi daug P elementų) X
Palikuonims būdingos įvairios anomalijos (tarp jų didelis mutacijų ir chromosomų aberacijų dažnis)
Šis žalingas reiškinys, vadinamas hibridų disgeneze, pasireiškia dėl to, kad P elementai gali laisvai transpozuotis