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Tesis de Posgrado

Dosaje foto-colorimétrico deDosaje foto-colorimétrico desulfanilamidas en líquidossulfanilamidas en líquidos

orgánicosorgánicos

Lambardi, Horacio Alberto

1942

Tesis presentada para obtener el grado de Doctor en Químicade la Universidad de Buenos Aires

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Cita tipo APA:Lambardi, Horacio Alberto. (1942). Dosaje foto-colorimétrico de sulfanilamidas en líquidosorgánicos. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_0295_Lambardi.pdf

Cita tipo Chicago:Lambardi, Horacio Alberto. "Dosaje foto-colorimétrico de sulfanilamidas en líquidos orgánicos".Tesis de Doctor. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 1942.http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_0295_Lambardi.pdf

’OOÍDONONOMOOOMD

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D’OODOP’PPDDOPOOIPDDOPDP.«uH-plaqcanonA4ouoauom

"woncanoa.ooafianza»

fa iniciación de estas humildes 11neas,sean de reco­

nocimiento a mis maestros del¿hoctorado en Huímica;y,de eterno

agradecimiento al Dr. Venancio :eulofeu,que supo orientar en tn

todo momento,1aforma de allanar las dificultades que se pre­

sentaron; y al Lr.‘yogelio'h.?re11es,que con la gentileza

que siempre le ha oaracterizado,puso a disposicioón del sus­

crito,todos los elementosnecesarios,incluso el laboratorio

de uoras banitarias de La fiación,haciendo de esta manera po­

sible la realización del trabajo.

h todos ellos muchasgracias.

'r//r

1.) .————*‘.°.'.“."1°."..“——-————————.°..1.".É.‘í“.'íï".‘t“.‘ï".‘í‘i‘1¿{Wai-4‘: ¿421. es

Cuandobonagkmrcsentd’ en 1935 sus trabajos su)er la ac­ción qtíinicter'fipioa del: 43sultonaniihó'iáïéáiüixgggwbensol. se pen­só que se había encontrado la soluc‘láh'ïr ‘trÏ-¡t'am‘fégéáde numerosasinfeccionesmasta que fueron apareciendo las contrarihdadesfiugran toxicidad.que hizo del producto.una sustancia de índice tara!péutico mw bajo. ‘\

.ue pensó que la acción quimcterfipica del productq residíaen el grupo diazo.Los investigadores franceses, Tretoul y\ colaboraidores,\12} tratand.o de comprobar ésto,descubrieron que la‘Ï‘-\ecoidn

bacteficfdamra debida al grupo:p-aminobcncenosulfonamido,¡o‘fnfimedo luego por .cOlebro'ok en _Inglatcrra.- ' “¡a

La accion bactericida del p-aminobenoencsulfonamid’o pQ‘TOsobre ¿1 estreptococo hemolftico,oscilaba ln vitro",en conosnfif‘a­ciones de 1/10.()L)0a I/IBoUUv. "In vivo“ 'las oonce'ntraciones no}?cesarias para; ¿{si acción terapgtíticamgn muchomayores,apareoien*do a veces efectos tóxicos sobre riñon c hígado.

trocurandc disminuir su toxicidad y aumentar su solubilidadse prepararon numerosos derivados del p-aminobencenesulronamido,aGOptandose para esas sustancias el nombra de:"SULF¡‘aMIDu&".Z.csautoreszLong ini. and Bliss (2);oitan diez dáíiïaïcís' 'q'de'se. emple­an teraïeuticïanïente“estableciendo que la droga,no tiene ningúnefecto curstivo,en concentraciones que tengan menos de 15 mg. por100 ml. de sangre.!¿l inconVenicnte que presentaron estos compuestotomfué la intoleranciamn algunos pacientes.en dosis poco máselevada que la terapéutica.­

Los sulfanilamido derivados citados por los autores Longand Iilfsst2hy otros que posteriormente han tenido gran empleoterza'pduti’cosson loz: siguientes;

\

Nogpre guímiooV'V*VVVVV"VVV

HL

¿Oz/¡flyp-aminobenoenesu1ronam1da.

¿animal “8.366109.Vvvvvvv v vvïsTT'v-vProntylin-Streptooido­' rontoail 'albun­'Lyaoooooine-Sultamida' ( 1162 'F )

.Sultghilamiáá'

9:63”44sulfonan1do-2.4dian1no­

benceno.

rrontoailÏrrontosil Ilavum.

ff: N/BNH.COC”J14(qu "¿5° 5°.!"e

4-8ulronamidofen11-2-azo­7-acet11amino-1-hidroxinattil-3-6-disu1fonatosódiooo

Nooprontosilfírontosil soluble

í”_—cut<::::>

0¿(r/¡b

N4-bencilsu1fan11anida

Septaoinehroseptaoino

(46!.P)v 'vv

o:NH—-<___>50¿¡”yN4-su1ranilsulfanilamida.

Disuldn.

13ombre;¿qg_í_r =._1_c_p_ ¡{ameno la tu}; ny!9119a

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o" Ulianmm... ___ sub/ví". hlerón

;ï-4au1fun11-¡;¿usdimetil­aulfannamida

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| l m 8 '--.=693“¿IY-H Daggnan".ulfOpiridina

2-eu1fanilam1do ¿.¡iridina. '

/f"¡ flu‘

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4-43diamin1difenilsulfona

/n h­— b ._— ü/ik pnl 'eh \ )

593d; 59/!..oluaeptac1ne .

VW

4-43diace‘ildiaminodifenilaulrona .

¡Í¿ChR.“ _ , ¡thf-< Psoz” °\ ju . ulfatiamo­S Oibazol

sulfanilz mirxotiáuzoi.

iïoqb1:0 (¿ninia o ¿(mega 1.at gra. m6dipa."—'9011999'. O'.".'...-v,.."-.­x2»,

¿”501- < > N= "(z > y" Ia” sulronamidocrieoidina

4-aulronam1do-2-4diam1noazobenzol .

flvÑYo, rfh-00-“J .i lbu‘úd

p-aminobenceneaulfomeqtoami: a .

LI necesidad de controlar 1a concentración de lab anterio­rendrog'asmn sangre y orina,nos ha nevado a estudiar uno de 10-:métodos oolorimétricos de dosaje.

Toogia_dc ¿un medicionequáotométxioqa_y“Qe-qripgiág'O"--"'. O.O.-....39;.¿‘11-¿222'ít2asaliese! '­

¿srs poder a¿iiosr al doseje de una sustenois,nne reacción oolorimótrioe.es nesesario ver si cumplela ley de ser.

upongsnos un haz luminoso de rayos paraieïos,¡roveniente deuna ¿sente luminoss¡1óm,ara tig .1¡.ouys intensidad llamamos-1'¿8 obvio.gue La La; si atravesar fina cepa, de vas oierte sustsnoie x

'no aaldró oon ia mismaintensidad que entró¡pon¿10 tanto emergsróoon una intensidad le: M

idi La Luz “ue.penetra en un cuerpo es totaliente sbsorbids.sedios que este eso;aoo¡osso contrario es trsneióoid o transparente.tiendo estos dos términos usados ,ars,nenoionsr s1ïtsnómeno,sin gue

.interrrete la relación existente Ii y Io. 3‘1valor de La relación á ¡I deíominaremos¿a tor}; sbggrqióg

:¿ste rector debeser uns:¿E(¡,d.¿.e) sisndóÏÏ '..."-'-'..-"Ii a intensidad del haz inminoso incidente.

.¿e a " -‘ emergente]

.3 - freodbnoie de LJ redisoión. 'd - es‘euor que struvisss 01 han losinoso.

- qoerioients ds_sxtigg¿ón—(oonstente que pere osda tr nsnois,"""'.-...-.’..""."-. soiodependsde is sustanei-absorbenl

te y de 1a unidad de longit‘ elegidao - ooneentrsoión de is sustancia ‘¡hflpor absorción de ia:\sdis­

ciones produce el colorá a KLo sismo que para is reflexión .ei factor de absorción d:)pnds

de i: treousnois de le radiación,siendo pisunus uds fósil ¿»serbidesquo otrus' E F¡\

neoeserismcnts 1a intensidad de la radiación smergenke.deneñde4rádel número de particulas que encuentre el atravesar el obmp0;ooryfl‘eso,s1 factor de absorción debe darse por unid c de espesor y en tub­oión de su concentración.

¿e deduce que ei coeficiente de absorción estó ligado conla ¡)d. ¿y lg c,medisnte 1a ecuación :

.' ¿'W3.¿J b ‘ conocida como la ley de,Lambert-leer. k16,

1 y 9 n

l w r . ‘

Pmsmab Tambop DlaFPígmaj pork-(¿botas . c‘1)>c:>57>u.loasEspejos—.1 f ¡1fu'h‘o

+4" Lámpara

ObJGÏ'ívosy/Tambor'íil V L Cuboïas POPÏ’a-cuth-JS ‘(Ondenhddones

— F19. “94 —­

supongamos ahora una sus-tancia ooloreudmpara 1a cual se cum­ple 1a ley de Beer.Consideremosconcentraciones variables:c¿;c;,¿;.........,Cn.¡mtre 'estas' y los factores de absorción/podremosÏigarlos enlas siguientes formas: '

e, I, f 1*ï' -’5{€—-' \¡ .LU‘G: Í .¿Hle' ll ' ’ e

; HL‘ (T: '. ¡(,7 i : 1‘“? y'._ L s. 'l‘ ’ IC Í .I ¡vc

t’LX I

Tomandologaritmos: ¿mi t ¿d e. ¡ Ara (tïe

1. __

¿Wxrcá ”-—.I') ¿H ¿d,’ V e ‘

.> N - eL (h

lista constante dependerfi para cada sustancia de;1a longi‘. \d Qde la. sustancia absorbente.y de 1a unidad elegida para medir g. '

na constante g es factible de ser detersinada experimentalmente;

los factores de ab'sorcidn; (¿si ¡(á-'-í"(L-2.5. j'tiel­ s¿4‘ c

son medibles en aparatos llamados ÍOtÓBOtIOBecOROOIÉG1.a 15y determinn

nados los factores de absorción,“ determinan las concentracionesmediante las zórmulas:

C"=¡íy: ft'l-f. C1.

Nosotros utilizamos para las anteriores determinacioneefilz

Lg},Tur-1:21:50DE .Fb ¿FI-ÍIC Ïï-Zvcvq'vvo'ocvvvv-vctcvt'v“'9Conohemos visto en 1a determinacion de los coeficientes de ab­

sorcfdn, interviene 1a longitud de onda,rasdn que implica 1a necesidadde ut lizar luz monocromfitioauos espectrcrotdmetros poseen prismasde dispersión. que permiten cot'ener luz monocronáticat'

“l rotómetro de ulrricn-üeiss,no ea es“eotr otómetro;"ero esposicle obtener luz de suriciehte pureza,para la determinación de 1aexperiencias.mediante 8 filtros expeotrales;que dividen el expectrovisible ,muy aproximadamenteen 8 partes iguales.

Cada una de stas ,artea difieren entre si.en unos 35 a ,5¿¡;Ïïatos flitroe catan montados en un tambor a revolver,lo que pen

te intercambiarlos con facilidad .be los designa mediante la letramayuscula é_y un ndmaro,que es aproximadamente la dóoima parte del vlor promedio,de la longitud de onda,que pro oroiona.

..oompañamoalas figuras l y I» lo que nos evitará hacer una descción’susointa del aparato.

Los coeficientes de absorción de las sustancia8,igua1adou en elotro campomediante dos diafragmas.cuadrangulares,que al girar,lo hacen :los lados consecutivos opuestos,en la dirección de la diagonaldel ouadrado.Le forma tal que su centro está colocado siempre en elmismolugar,¿obre el eje óptico del aparato Lfig.2;.

Si llamamoe.: ' ''q .‘angulo ¿e rotación del tambor.s - ¡rea de la abertura del diafragma.correspondiente al ¡nguloX»- longitud de la diagonal del diafragma que corresponde a1 an

gulo de rotaciónaL - lado del diafragma correspondiente al ¡ngulo de rotación“

'I a intensidad del haz luminoso cuando la abertura es g

:Io- intensidad del haz luminoso cuando la abertura es máxima._ara poder relacionar todos estos valorea.elegimoa el lado.del

diafragma comounidad,cuando lu abertura es máxima.uuegoa1 girar eltambor tendremos:

Para:a-053-0;L-0¡I-0 ¡DUOi Q 9 O ' Q C ‘ ' Q' p

a-aóo; s .1 ; L a 1 ; I . ¡o ;n .v'ae Q ' O ' '

Comoal giro completo,es decir 3602 correaponde.extinción totaldel'diafragma,1a abertura g,estd relacionuda con el ángu10c¡.siendola diagonal L,runo16n line'al de o(.

Lor lo tanto: T' ‘ e: A mJ. ¿(oK

y por otra parte como sabemos que; L.E-zi 5. :1­lo 4 ‘L

y euctltwendo en (l)

q3'52Los tambores,fueron gr duadoa de torna que,cada división de“,

corresponda a loa valores 1-. que resulta de la expresión anterior.¿obre cada tambor hay dos gacalaeuna en negro que indica 7'09- ¿J

y otra en rojo que nos daLog ¿Ii­' cSupongamOaambos tambores colocados cn 0,eacala en rojo.los cam;

pos están igualmente iluminadocsinterponemoá en uno de loa campos,una cubeta.una cubeta con la coluciln coloreada a determinar,y en ot:de igual longitud,aguu destilada.loa camposhan variado au intensidadde luz.5erá necesario correr el tambor que corresponde al agua desti‘lada,h¿eta que el campototal deflcoular resulte homogeneamenteilumi­

kwnado.

La lectura en rojo corresponde a un cierto Valor los _—que coir

cido 'ccn log "f‘que es lo que queríamos demostrar' "_, .

r

:ggïïI:_UE ¿un conglg¿¿¿,u uh uu; METODO“¡CT gigaV""0'v‘VVO!"'V'OOVVVV'Ñ'Ñ'V‘VVWOQVQ""Q9"'"9'

La necesidad de encontrar un método fácil de dosaJe,de las suitnilanidas.que permitiera conocer con exactitud,1a conosntraéión en esangre de las mismas,indujo a Marshall,en 1937 xljfbuseard'un métodocuantitativo rápido,basado en una diazotaoidn ¿el amino grupo. eaplicable el m6todo,para las siguientes sulfanilamidas¿p-aminesulfonemida;N4-sultanilsulfanilamidagN4-sulfanil-NJNSGimetilsultanilamida;2-suifan11amidop1r1a1na;auiranfiamiaotiazoi;y' la p-aninosulfanilami­da acetilada.;l métodoes solamente aplicable a est s sulfanilemidaspuesto que eíije el amino grupo libre.

La primitiva técnica de Marshall 1);deeprotsiniza con alcohol.diazata sn 1a forma corriente,y capula con la dinetilaqnftilamina,en solución alcoholica,que 61 mismoposteriormente reemplaza por,laetilenaftildiamina.

modificación Marshallínarshell.lroc.SOc.Bxper.Biol.and “cdi.M3 ¿a 1937;».Ut111'zael do'i'do paratáiuencïnirinioo ¿omodespfoteini­.Eenteicuya acidez puede ser utilizada para diazotar y aun para hierelizar el compuestoconjugaao.‘ara favorecer 1a henólieie de los nenatías se utiliza solución de saponina al 0,U5 fi.

La técnica de mamlet-Marshsll <5).¿tf11¿h el ácido trioloraoé­tioo‘el 5 fi comodesproteinizsnteai ¿h todo lo otro muysemejantecon la primitiva técnica de Marshall.

Werner(12).en cambio¿e diazotar.treta 1a sangre desyroteinizede 06h ácido trioloracótioo al 5 %,conp-dimetilaminobsnzaldehido,su¡{todo no ss ten exacto comolos 'unterioreemero «¿uese preete admi­reblemente para la titulación aproximadastampoooss específico,comono lo es le de marsha11,1as dan.todas lan amines cíclicas.eiempreque la función.umino no está bloqueada.y se debe tener presente cuando al enfermo se le h¡ hecho tratamientos con novocafna.

fille. “amonn(12; del uEbOÏfitOIiOde .uimoterápia del Instituto.seteur de..arfs.¿esfiroteiniza con ácido triciordoetico el Su ,,dia­rota en la torna corriente y capula con solución a1coholiooLcet6nicade a1fadimetilnartilamina a 1a concentración de 1:250­

H.M:fiartmannx13) utiliza en cambio de la ¿nina terciaria los

tenoles,cuya velocidad de reacción es mayor que la de laa aminas.

_s_í¿¿;_1¿!30':o".TER)“: I'ZUTIC-JLÍ h .‘TUDIADOI‘Q'Q’.i""Í'..."I"""V"'V"'Decididos a ensayar los métodos con sulfanilamidas,tropezamos con

dificultades para la obtención de ciertas drogas sn estado de pure­za.La casa "Bayer",nostacilitdzaultanilamida.ulirdn y prontesil ru­brdn.en esggdo d; purezn¡6ste dltimo no utilizable en nuestros trabaJoa.

El "albucid“ puro,noe fue facilitado por la casa"Schering”.Ïüzïa aultanilamidopiridina y en el sultanilamidoíiazol,Hemos

tenido que purificar la droga.a partir de las comprimidos.Los excipientcs que acompañana las sulfanilamidaa,son insolu­

'bles En alcohol,y enoambio,éstaa son nacho mas solubles en este di­aolvente,qua en el agua;siendolo aun muchomás en caliente que enfrio¡aprovecbanoa esta prOpiedad para aepararloa. ero,loa preparadosde algunas casas,tienen comoexcipiento,eatearato de magnesio,quecon el alcohol en oalients,da una tonalidad amarilla.Causa que nosimpidió utilizar el extractor americano,debiendoseparar la drogaen frio y purificar por cristalización.

Las drogas por nosotros utilizadas en estos trabajos,fucronp-amihobencenesulranilamida;p-aminobenoeneaulfanilaostoamida¡p-ami­nobencenesulfanilamidotiazol y p-aminebenoenesulfanilamidOpiridinao¿or ser las actualmente de mayor empleo terapéutica.‘ En cuanto al ulirón (N4-aulfanil-N3N30inetilsultanilamida2 elmétodo pr0‘u08t0 no dió ¿asaltado,pue€o que loa datos obtenidos noconcordaban con las concentraciones calculadasgprobablemente porruptura de la molécula apareciendo dos amino grupo en cambio de uno,lo que hacia aparecer valores más altos que las debidos.

ESTUDIQDI')un uña. ¿>25mama.«un...c.v.v.v..vvvv-ïmvïïï7ï7

En el resumen do los antecedentes bibliográficos,hioimoe menciáde aíhunos de 103 diferentes mltcdcs de análisis.Nos decidimos a protundizar el metoüode 1arahall.ucdirioaci6n de Mile.dancnn ¡5):delLaboratorio de .uimioterapia del Instituto rastas: ¿e Pari;.fiÍtodo e

'31 cual se efectua la desproteinisación con ácido tricloracítico al50 %,previa hemdlisis con solución aoucda de sapcnina a1 O,5ï;eprcve6h; la acidez del mediopara diazctar cán nitrito de sodioaf ¿,1 f;y agrega la amina terciaria,en solución acetona-alcohol en pÁrtes i­gualea.y a 1a relación ds 1.250 de diqetilalfanai’tilamina.

Tratamosen lo posible ¿3 trabajar con sustancias.ezietentes elos laboratorios de analisis biológiooe31ers lo cual hicimos las sigguientes modificaciones:utilizanoe la concentración del acido tricloacótico a1 20 fi en lugar dell50 fi;varianQO solo la oantidad,en cambide 2 ml. utilÏEamoe 5 nl. pata 5 ll. de sangre.

Comola tinción de la sepcnine es producir la hemólisia,la reeplazanos con agua destilada,{2.5.13)opero comola lisis de los hena­ties es muchomás lenta en este caso;esperamos 158.para tener la segridad de hemólisis total. í

Comoel efeso de nitritcïnoleata,puesto que 'rovcca nitrosacio­nes.¿e coloración amarillente .10 eliminanos despues de formado eldiazoico,oon solución de urea al 10 %.1nd16ndoaehacer esta eliminesción con doidoaminosulrónioo (17);h6k¿kroa utilizamos 1a urea por seesta una sustancia de fácil ¿dLuisioidn en los laboratorios de andlisis biológicos.

se dimetilalranaftilamina¿en vez de usarla en solución de acetona-aÏoohol al 1 25dsla reemplazhnos por solucion 1 lbn en alcoholde 95%.(soluoián due tiene la ventaja de conservarse Hurante muchosmeses) ‘12);d11uyendc en el momektc de usar en la pro croidn de 1.25en afoáhof de 95?. \ ' '

nos diferentes m6todce,{l;5¡paconsejan esperar de 15 a 21 minu­tos,despues de agregada la ¿imetilalfanuftilaminn,antes dehscer laslecturas colorimétricas.-Hnsayamos nosotros con una concentración de0.59 mg/lúxml. de solucidh.haciendm lecturas a los 10,15,2o,3fi y alos SÉ! ‘Viendc que las abaorcicnes de luz iban on aumentc,anarecien

' \

do constancia .on las muestras leidas a las 24 horas de estacionamieto.

¿ara evitamos esta “para ,ostudiamos 1a aceleración de la reaooióxï por calentamientomomparandu loa resultados obtenidos con loslogrados por 24hs. de estacionamiento.

¿La1a tabla siguiente se 6361100..

1) 0.252'; 'o,26

o.u4 3') 'o,25 0,,256 oalentado aga a 602.4')'o,26 ' ' "5)”o.2u

-.___.“4.-.”

1) 0.43.0944

0,03 3') 'o.43 0.433 oalontanos 2Q! a 602.4') '0.44 ' ' "

l 5;) :0p43

.........__._.....-.._..__¿L.-uu.

1) 0.342') 'o,320

0.04 3') 'orss’ 0.333 Calentanoa 30,! . 609.4')o'.347' ’ ' ""p.329

1) 0,4825') 'o.47o3")'o.47'o 0,475 Calentanos 30;! a 602.

0,08 4') '0.47'6 ' ' i' " '

y5:) :oms

..,-..-......v.._.{

y a; 0.350"2'; '0.34'6

0.04 3') .0,34O 0.344 oalentamoa 45‘ a 602..' ' 4') 'o,34'2 ' "

5';-3,348

c

1, 0,4782'”)"0,478

0:08 ÏJ‘Ó.484 0,475 oelentamos 45’s 902.4')'o.47e ' "'

zw?1) 0,2482') 13.243

0,04 5,‘b.245 U,244 sin calefacción leido a las 24 ua.4'; 'o,244 ' '

5:) :o.243

1) 0,4102') 'U.4'J7

mua 3') 'o,4'1u 0,411 sin calefacción leido e las 24 ha.' ' 01').an

5:) :0.41Ï9

Comose observe 1a formación de oolorante.ea mayor a los 30“ a6ufi. he temperatura,qne la muestra leida a las 24 ha de eataoiánamien¿b y mantenida en fr10.La La permanencia de mayor tiempo.45ln a 60;,no 016 aumento apreciaflïe‘heoolor;por 10 anal consideramos 39m5‘19temperatura de 60“ como óptima para esta reacción. 1

ComoMarehíïí(1).en su primer trabajo aconseja esperar 3mantesde agregar 1a amifln'teroiaria.para que la recuperación de 1a aulfanilamida sea del LOGfi ,Por eso buscamos los tiempos óptimos para 1a di­

azotaoión;enognïr¿nd¿ los siguientes resultadoe:

Experiencias realizadas sobre 1 m1. de ¡ala solución que correaponde a 0,1 mg de droga,obtuv1moaa

H¿.e 7 - ¿­Fx- - e) ..­‘\'*" V '“ .' . 1, zo a. ¿#9771; u.493 1; u.554 1) b.556 1; 0.558á) b.491 á) "0.548 2') 0.559 2') "0.557

5)ÏJ.498 0.492 5;'b.550 0.556 5)'b,560 0.558 i>'».558_0.5574’) 'o.490 ' 4‘) 'o,56'o’ 4’) 'o.56'o ' 4) 73.5645'.>"0,491 5') 'o.55'2 5’) '0.55'7 5') ‘o.559

tiehpo 5m tiánpo loIl tiehpo 15m tionpo gp“

Lo que nos indica que despues de loa loln no hay ulterior formaeción ¿e diazoioo.

Todolo anterior plantea seis problemas:l¡ueíolieis.-2)Deaproteiniaaoldh.-3)Eliminaoidn del.ezoeao de nitrito¡ÏÉleooión de'ia ¡mina terciaria y'Hn eoluoión.-5)Tiempode diaaota­oion.-6)Tiompo de lectura. v"IJEn afiïprinitiva tdonioa Marshall no henoliaaba(l);modifioada por 61¿iamo en 1937 (18);Kanlet;Harehall lo hace oon solución de aaponinaal 9,572(5).af ig'ua'i que fa modificación de Marshall del 19.37(ia).m1ib Jifibih utiliza el agua deetilada comofienoliaanto .La ventaía'que ¿ete procedimiento aporta es obvio. '2)heeproteinización:loa desproteinizantes clásicos con el alcohol y¿f ¿oido tricloracgtioo a distintas ooncontraoiones;encapitulos anterioree ya lo hemostratado con las correspondientes citas bibliográ­fioaa:(l;18;5¡2;12).El heoho que noe otros hayamORadeptado el trioloaodtiso a la concentración del 20%ea;la posibilidad de encontrarloen todo laboratorio de análisis'ïiológioo.3)La eliminación del nitrito antes de agregar la amina terciaria ya¿Barone en el trabajo de Marahall de 1937 (18)3todoe los o+roe inveeútigadorea lo continuan habiendo,ya varianio fa sustancia ¿oido paratolueneultdnioo (18)¡urea (5;17);o bien modificando la concentración deestao (l7).(5Ï3nosotros‘ntilfáamoe solución de urea al 10%.4) La'ele'oáidn de la amina teroiariadud tácilmueeto qde'al iniciar¿hiba trabajos no existia ninguna de las citadas en la bibliografía(l¡2;5;l7;18) y tuvimos que prepararnos uno.elegimoa la dimetilalran

‘naftilamina‘bor parecernoe la de maefácil ejecución.

smarehan en su primitiva técnica x1),indica la necesidad de esperari’minutos antes de oopnlarm sino ¿aftiplioar por un cierto factor,para tener 1a certeza de recuperar el 10x; de sulfenilamida.i«;eali.:e­do el ensayo por nosotros,encontramoa qïe .paadoe los 1.olllno .hay practicamente formación de diazcicoscon lo cua]. transcurridos los lomeli­minlbamosel exceso de nitrito con solución de urea. '6IMareha11 en (1 y 18) aconseja esperar Varios minutos antes de lafactura colorfndtricann igual torna proceden ï-Zamlet(5) .Yhalle -¿amon(5);noeotrce realizamos lc ensayos en frio y'ebtuvinïoa costancía rs­

'ci'en a las 24hs.,10 que nos novid a estudiar 1a aceleración de 1a re­acción por calentamiento a diferentes temperaturas y tiempos, llegando

a 1a conclusión que 1a óptima ee de 628 'O. y 1:0“ de espera.

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Comoee ha visto por lateoría desarrollada en 1a página esindisbensable la determinación de ln constante K-__É para cadasustancia. ' -«;¿

para lo cual preparamos soluciones desP-aminobenbenesultanilamida;pleminobenoeneaootilsulfonanida5p-aminoHEnoenesultonamido-z-piri­dina;p-aminobenoenesulronamidotissol;que contenían 10 mg. de cadauna de estas drogas ,en IUu mi. de soluoidnaheoha en caliente,entriada y llevada a volumen.Tonamoscantidades variables de estas soluoionos,1es agregamos2.5 ¿i de solución de ácido trioloreodtioo;6,5 m1.de agua,1 al. de solución reciente de nitrito de sodio a1 t,1’,espermos 10 minutos.1uego agregamos 3 ll. de solución de urea ¿1 Íb ; yesperábamoshasta ausencia de ión nitrito,oon papel ozonosodfieo,ve­

{itioado esto agregamos5n1. de solución eloohálioa de dinetibu nat­tilamina al 13250; y oalentamos durante 30ma 50-602 C. Estas solu­ciones las realísabamos en natraoes de SJ n1.,¿ue.fn;go'ilevabamos avolumeny leíamos en el Iotómetro de EuÍÏrioh,oon el tiltro . SO.

Comose observe de los gráficothay una marcada prOnoroionalidaentre concentración y Logú;;_ .

Obteniendoyara ias antedichas soluciones,los siguientes valoreque 5 su vez representamoe.1es curvas oaractristioae de cada sustan­oia:

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¿ara estudiar que el métodopodía ser aplicado a los dosajes en,san­‘gre y orina,se añadieron cantidades pesadas de sulfanilamidae,a esosmedios,y se procede a su dosificación,utilizando las curvas obtenidasy,ademñs aprovechamospara efectuar una comprobación colorimétrica.con solución tipo empleando un colcrimetrc Leitn.

¿rocediendo para los dceaJes en sangre en la siguiente forma:’A2 ml. de sangre lee agre¿íbamos cantidades Variables;de solu­

cionee dd p-aminobonceneeulfonemidasp-aminobenceneeulfonacetomida;p-aminobenceneeulfonamidopiridina3p-aminobencenesulfonamidosulfctdazoen concentraciones de. 0,1 mgpor ml. de solución;dejabamos en reposo2 horas;y luego les agregábamoeagua destilada hasta completar el vo­lumen de 15 m1.,eeperfibamoc 15 minutos hasta hemólisis tctal,yluegc

ni 5 ml. de solución de ácido tricloracd’tico al 20 %.gota a gota yagitando;riltramos tomamoslu ml. del faltrudo,agre¿amcs 1 ml. de sc­lución reciente de nitrito de sodio al 0,1 %,esperamos 10 m. y y agrgamos5 ml. de solución de dimetilalfanattilamina en solución alcohólica al l:250,calentamoe a 50-60 :C. durante 30 m..llevamos a volumeen matraces de SUm1.. y lefamos'fos coeficientes de absorción en el"fotímetro de iulÏrich.

bos volumenes agregados de eulranilamida fueron: 1325y 2.4 ml.de 1; solución madrc,cbteniendc las siguientes absorcicnee,que multiplicadas por la 5 determinada,en los trabajos preliminares,ncs danlos siguientesresultados:

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METUDU¿EFIHITI»0oÉ.Ï .Ï E'ÉE 'O se e'vvvv'vvváovvvvv'q

Con todos los datos oLtenidoa,adoptamos el método siguiente:Reactivos: \\ ‘"""gofución de ácido tricloracético al 20 %.

'solución reciente de nitrito de eodiá ¿i 0,1 á.'Solución de urea al lo 53 ' '.soluoión de sulfanilamíáae al G.1 mgpor ml. (ésta solución no¿che tener más de una semana a; preparada) 'Solución alcohólica de dimetilalranaftiíamina al l:lOO.para ser

'diluida en el momentode ser usada al 1:250. ‘ ..ïrooedimiento: ' .""'ÜÏÏÍÏÍÍÏ'de sangre oxalatada le agregamos13 ml. de agua destila­da,esberamos 159 hasta hemdlieis total,y luego gota a gota le agrega­mosb ml. de solución de ácido trioloracético al 20 %,agitamoe y til­tramoa;sonre l" ml. del ¿iltrado le agregamosl uf.‘ae solución aenitrlto al 0,f “,esperamoa lo m. y luego destruimos el exceso de n1­trito con solución ae urea,¿ue veriricamos con papel ozon0800piogarre¿amos 5 ml. de solución 1:25? de dimetilalranartilamine y oalentamosa 50-60¿ C. durante 30h.;Lleüamoa a volumen (50 ml.) y leemos en elfotometr¿.En caso de'reafízar ¡i lectura cofl'dh ooforimetro.conjunta­mente con-1a marcha de las reacciones anteriores,debemos ir preparan­do,de prererencia dos muestras testigos que airieran en un 50‘ entresí;con las soluciones madres de ln aulranilamida que deseamos anali­zar

U1utiiiamoa el rotómetro,laa absorcionee leidas las multiplicanmosflor la i determinada para cada sustanois,psra encontrar la conoentración oe Hroga que corresponde o bien buscamos este valor en lacurva logaritmica.

¿1 en vez realizamos la lectura con un colorímstro.deoemos reoordsr,que esta se relaciona con la concentración mediante:

QD.= _ ____x Laáu: L C

CONCUUSIUIJLSvvvvvwvvvvvv

Los doeajes heohoa en muestras ad hoc,nos comprueban que el cortrol ¿o la droga,realizado por ol metodo de Nurehall-Hamonn (5).oonlas modificaciones hechas por nosotroe,es bdeno para'eate tipo de anéliais.Cometiéndoae errores que oscilan alrededor del 5 /,para la zp-am1¿obenoeneeulfonam1da;p-aminobenoeneaulronncetoamiáa¡p-amifiooencenesulfonamidOpiridinn;p-eminObenceneaulfonamidotiazol.

Soaajcs en gran cantidad,realizadoa con el Ulirón (N-4-sulfanil­N-N4JïmetileulfanilamidaJ,nos demostró la imposibilidaí'de realizar‘15; doaajea con esta téohica,por cuanto no cumple la ley de Beer.

ïuy probablemente aca debida a una nalifioaoión del gffipo eul­f6n105,con ruptura do la molécula,puesto que obteníamos valores mayo­ree que,los que lee correspondía por un solo amino grupo diazotable.

Marzo de 1942

BI LI GRAFII‘.‘,"""""N2 {autor l:evista

'V v .,

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3 Marshall ....nu'alRevie. o'r 'Blochemistry 194o4 'arand Marshall ' The.Jour.Ame€.Med.Chen.Sooc.31939._5 ’J.F.Ma'tquez ' otdallda'des nïédláaa.-fiic.19396 ,Rlïon'e-Poulenc .500.Parisien hexpanfilïimique .Dagenan.

' ' "’693'"con treinta citas bibli'ogrfificas.7 M.M.Gley.-A.Girard 'La P'resse Medical.pag 1291 año 1937a 'Pl'er're Dur'el' 'La 'Presse 'Medicaln-año 193e-pag.lll39 'R.Mart1'n,l>anth1er, ‘ ' '

' ' et coll. La Presse Medical.-año l940-pag.lOllO II.Nienann 'llui'miotera'pia de las infecciones .gonooóoi­. v v

'cas y estafilocóoicas.11

' l'and Practicas de .uímica Organica.12 A.F.Hollemann 'Tratado de ._u'ím1u ofganlca.13 vJ:AÏSÉnchez luímlca Analítica d'e Medicamentos Organico14 123111.3y lui-¡Ludueña 'Facultad- de Ciencias ‘Médioas Farmacia y l:

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