Download - 乳腺中心实验室 2012 级硕士 李满秀
乳腺中心实验室2012级硕士 李满秀
研究背景BRCA1 germline mutations 具有很高的乳腺癌及卵巢癌的患病风险,根据二次打击学说, BRCA1 野生型等位基因的失活被认为是肿瘤发生过程中的限速环节,而这种失活形式常常为 LOH 。
正常细胞在急骤的 BRCA1 功能丧失下难以生存,如纯合的BRCA1 突变可导致小鼠早期胚胎死亡
BRCA1 相关联的乳腺癌常同时伴有其他基因的体系突变,如 P53 , PTEN
?BRCA1 突变携带者的正常细胞常呈现出异常的表型,如单倍剂量不足( haploinsufficiency )
loss of wild-type BRCA1 是否是 BRCA1-associated breast tumors 发生的始动环节, BRCA1 突变相关肿瘤究竟是如何演变的。
研究方法55 例 BRCA1-associated 和 20例 sporadic 乳腺癌
PTEN P53 BRCA1 LOH
每个肿瘤记数100-200 个细胞
IHC immunofluorescence FISH
每个肿瘤计数 100-200 个细胞,记录 3 种基因的状态 (i.e.,
wild-type =wt and mutant =mut). 所有的肿瘤细胞均可归类为以下 8 种情况: PTENwtTP53wtBRCA1wt, PTENwtTP53wtBRCA1mut,
PTENwtTP53mutBRCA1wt, PTENwtTP53mutBRCA1mut,
PTENmutTP53wtBRCA1wt, PTENmutTP53wtBRCA1mut,
PTENmutTP53mutBRCA1wt,
PTENmutTP53mutBRCA1mut.
模型成立假设(i) 浸润性肿瘤仍包含肿瘤演变过程中的各期细胞;(ii) 如果所有的肿瘤细胞均包含突变 X ,而只有少部分细胞含有 Y
突变,那么突变 X 必然发生在 Y 之前;(iii) 携带一种或多种改变的肿瘤细胞其增值与死亡率无明显区别;(iv) 通过计数单个或联合改变的细胞可以验证肿瘤可能的演变路径; (v) 通过分析少部分细胞可以提供肿瘤整体的信息 .
• 同一患者的组织,具单一因子突变的所有细胞中,突变量最多的为 first event ;
• the first event 确定后,比较携带两种因子改变的细胞中,剩下两种因子突变的个数,较多者确定为 the second ;
• 只要有具备三种突变的细胞存在,则剩余的因子为 the
third.
Loss of PTEN was the first event in 28/55 tumors,
followed by mutation in p53 or BRCA1 LOH with about
equal probability;
Mutation in p53 was the second most common first event
in 17/55 tumors, almost followed by BRCA1 LOH.
BRCA1 LOH was the least common first event in 10/55,
only followed by p53mutation sometimes.
loss of PTEN was the first event 的 pathway 1 改变的多为TNBC , TP53 or BRCA1 LOH 为第一事件的 pathway 2 肿瘤多为 luminal 。
•在这些乳腺癌中, PTEN 突变常见于 ER 阴性乳癌,而在 luminal 细胞中 PTEN 突变少见,因而考虑在 luminal
细胞中会不会存在 PI3K 的突变从而替代了 PTEN 的突变呢?•结果示:散发乳癌中, luminal 型 PI3K 的突变率达6/10, 散发三阴中该比例为 0/10. 而在 BRCA1 相关的55 例患者中,检测到 2 例突变分别为( ER-,ER+). 故推测 BRCA1 突变的 luminal 肿瘤发病途径与散发型不同。
瘤内异质性The loss of wild-type BRCA1 may not be
the first event in most BRCA1-associated
breast tumors, and even in tumors that display
apparent loss of the wild-type BRCA1 allele,
not all tumor cells showed this change.
单倍定量不足Loss of BRCA1 在 BRCA1-associated 的乳腺
癌中很少是 the first event ,乳腺上皮细胞中 BRCA1 单倍定量不足( haploinsufficient )为 BRCA1 突变乳腺癌风险增加提供了很好的解释。
•Ki67, 增值标记物 , PR- 潜在的促分裂因子;•Immunofluorescence 检测发现: significantly
more Ki67+, PR+, and Ki67+ PR+ cells in
contralateral normal breast tissue of BRCA1
mutation carriers diagnosed with breast cancer
compared with that observed in controls.
• During the analysis of Ki67+ cells, we noticed occasional multipolar mitoses in normal breast tissues from BRCA1 mutation carriers, suggesting aberrant centrosome function. We found significantly higher (P ≤0.01) numbers of cells with more than 2 centrosomes in BRCA1 mutation carriers compared with controls
总结•1 , The first event : loss of PTEN> P53 mutation> BRCA1 LOH;
•2,BRCA1 LOH 的肿瘤中,仍有部分细胞保留有 BRCA1蛋白功能;•3 , BRCA1 突变携带者的正常乳腺具有细胞增值快,多级分化,中心粒增多等特点;•4 ,这些皆提示 BRCA1 单倍定量不足的促进细胞增殖及异常分裂,增加 BRCA1 突变者患癌风险。
谢谢!