![Page 1: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/1.jpg)
Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом
проточной цитометрии
Научный центр педиатрии и детской хирургии, г. Алматы
![Page 2: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/2.jpg)
• Согласно мировой статистике, 3,3-4,7 детей из 100 тысяч заболевают лейкемией в возрасте до 15 лет. Около 40-46 % случаев приходится на детей 2-6 лет.
• В Казахстане ежегодно заболевают 130 детей.
![Page 3: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/3.jpg)
• Хромосомные изменения обнаруживают приблизительно у 60-70 % больных.
• неблагоприятные факторы внешней среды: ионизирующее излучение, действие электромагнитного поля, химических веществ, бензола, медикаментов, в состав которых входят алкилирующие соединения.
• вирусы (HTLV-I - Т-клеточный лйкоз/лимфома взрослых; вирус Эпштейна-Барр – лимфома Беркитта, Лимфома Ходжкина)
![Page 4: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/4.jpg)
! Особенно чувствительны к воздействию электромагнитного излучения дети школьного возраста, организм которых еще не сформировался: даже всего несколько часов в неделю, проведенных около компьютера, опасны для их здоровья. В 1997 году в США опубликованы данные по увеличению количества заболеваний детей лейкозом, которые более 2 часов в день играли на компьютере и в видео игры.
![Page 5: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/5.jpg)
![Page 6: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/6.jpg)
• Основной клинической симптоматикой ОЛ служат процессы гиперплазии опухолевой ткани (бластная трансформация костного мозга, увеличение лимфатических узлов, органов, появление опухолевых инфильтратов и т.д,) и признаки подавления нормального кроветворения.
![Page 7: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/7.jpg)
Клиническая симптоматика развернутой стадии ОЛ складывается из 5 основных синдромов:
• 1. гиперпластического
• 2. геморрагического
• 3. анемического
• 4. интоксикационного
• 5. инфекционных осложнений
![Page 8: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/8.jpg)
• Л.- опухолевые клональные заболевания кроветворной системы с первичным поражением костного мозга. Мишенью опухолевой трансформации являются стволовые кроветворные клетки и коммитированные клетки-предшественники. Субстрат опухоли представлен бластами.
![Page 9: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/10.jpg)
FAB-классификация, 1976
• Лф: L1, L2, L3• Миело: М0, М1,
М2, М3,М4, М5,М6, М7
![Page 11: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/11.jpg)
Иммунофенотипирование
• CD – кластер дифференцировки• Антитела (мембранные гликопротеины,
карбогидраты, гликолипиды)• Проточная цитометрия является
современной технологией быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов.
![Page 12: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/13.jpg)
Образцы для проточной цитометрии
• кровь• костный мозг• ликвор• суставная жидкость• плевральная жидкость• асцитическая жидкость• клетки тканей (например, опухолей)
![Page 14: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/14.jpg)
Проточные цитофлюориметры
![Page 15: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/15.jpg)
• Концепция соответствия фенотипа злокачественной клетки фенотипу нормального клеточного аналога на каждом уровне дифференцировки. В большинстве случаев ОЛ бласты имеют иммунофенотип, сравнимый с нормальными гемопоэтическими клетками аналогичных стадий дифференцировки.
![Page 16: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/16.jpg)
Иммунологическая идентификация включает:
• Определение линейной принадлежности злокачественных клеток
• Анализ клеточного созревания, т.е. уровня дифференцировки, степени гетерогенности популяции злокачественных клеток
• Аберрантности, т.е. отличия от нормальных аналогов• Клональности • Определение количества гемопоэтических клеток• Контроль и мониторинг эффективности терапии • Выявление минимальной остаточной болезни
![Page 17: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/18.jpg)
• Лейкемические клетки можно отличить от их нормальных аналогов по ряду критериев. К основным типам аберрантности фенотипа л.клеток относятся:
![Page 19: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/19.jpg)
• Коэкспрессия антигенов нескольких линий
• Асинхронная экспрессия антигена• Избыточная экспрессия антигенов• Отсутствие экспрессии или низкий
уровень экспрессии антигена• Фенотипический профиль,
практически не встречающийся в норме
![Page 20: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/20.jpg)
Структура иммунологических вариантов острых лейкозов НЦПиДХ
ОЛЛ
ОМЛ
бифенотипы73,8%
24,6%
1,6%
![Page 21: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/21.jpg)
Частота выявления различных фенотипических вариантов ОЛ1,91%
4,8%1,6%
4,0%
12,7%
6,4%
5,6%
54,0%9,5%
В1
В2
В3
Т
М0
М1-2
М3
М4
![Page 22: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/22.jpg)
Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза
• 1995, 2009• Балльная оценка экспрессии маркеров проводится для
того, чтобы отличить БОЛ от ОЛ с коэкспрессией маркеров «чужих» линий, если в популяции бластов не менее 20% клеток одновременно несут м. и л. маркеры. Диагноз БФЛ устанавливатся, если маркеры и м. и л. линии набирают более 2 баллов. Учитывается также СИФ.
![Page 23: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/23.jpg)
Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза
БаллыБаллы Маркеры В рядаМаркеры В ряда Маркеры Т рядаМаркеры Т ряда Маркеры Маркеры миелорядамиелоряда
22 CD79aCD79acyIgMcyIgMcyCD22cyCD22
CD3cy/memCD3cy/memTCRTCRαβαβTCRTCRγδγδ
MPOMPO
11 CD19CD19CD10CD10CD20CD20
CD2CD2CD5CD5CD8CD8
CD13CD13CD33CD33
0,50,5 TdTTdTCD24CD24
TdTTdTCD7CD7CD1aCD1a
CD14CD14CD15CD15CD64CD64CD117CD117
![Page 24: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/24.jpg)
За последние 5 лет в НЦПиДХ было выявлено 6 бифенотипических лейкозов, причем 3 из них имели фенотип Т-линейной и миелоидной направлений дифференцировки, и 3 случая В-линейной и миелоидной направлений дифференцировки.
![Page 25: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/25.jpg)
Суммарный иммунофенотип
Т+миело: CD7+mCD3+CD2+CD117+CD13+CD15+HLA-DR+CD34+MPO+
В+миело:CD19+CD22+CD79а+CD13+CD33+CD117+CD15+HLA-DR+CD34+MPO+TdT+
![Page 26: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/26.jpg)
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
100 101 102 103 104
CD7 FITC100 101 102 103 104
CD2 FITC
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
100 101 102 103 104
CD22 FITC
100 101 102 103 104
CD10 FITC
100 101 102 103 104
CD22 FITC
![Page 27: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/27.jpg)
Мегакариоцитарный лейкоз (М7)
• С 2010 по 2014гг - 12 больных: 6 – м, 6 – д, с-м Дауна - 3
• CD42a+CD42b+CD41+CD33+HLA-DR-CD34-MPO-
• CD33+CD41a+CD42a+CD42b+CD61+HLA-DR-CD34-MPO-,
• Коэкспрессия CD4, CD7, CD56
![Page 28: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/28.jpg)
Мегакариоцитарный лейкоз (М7)07.12.10-Muhtarzhanova-pk.456
100 101 102 103 104
CD42a FITC
07.12.10-Muhtarzhanova-pk.458
100 101 102 103 104
CD37 FITC
07.12.10-Muhtarzhanova-pk.449
100 101 102 103 104
CD20 FITC
07.12.10-Muhtarzhanova-pk.444
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
![Page 29: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/29.jpg)
Эритробластный лейкоз (М6)26.02.10-Atakulaev.334
0 200 400 600 800 1000FSC-Height
26.02.10-Atakulaev.334
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
26.02.10-Atakulaev.344
100 101 102 103 104
CD38 FITC
![Page 30: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/30.jpg)
Плазмобластный лейкоз15.02.10-Soltanbaev.216
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
15.02.10-Soltanbaev.222
100 101 102 103 104
CD7 FITC
16.02.10-Soltanbaev.245
100 101 102 103 104
CD38 FITC
16.02.10-Soltanbaev.246
100 101 102 103 104
CD38 FITC
![Page 31: Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062408/5681361b550346895d9d8fe5/html5/thumbnails/31.jpg)
Спасибо за внимание!