Download - به نام پروردگار
![Page 1: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/1.jpg)
پروردگار نام به
![Page 2: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/2.jpg)
یادآوریتحقیق؟ • موضوع انتخاب و بندی گروه
– - : همراه صفحه چند در تحقیق پاورپوینت ارایه نحوهمنابع
بیوتکنولوژی • تعریفکالسیک – بیوتکنولوژی از مثالهاییمدرن – بیوتکنولوژی
چیست؟ • کلونینگچیست؟ • تراریختشده؟ • سازی شبیه انسان
![Page 3: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/3.jpg)
بیوتکنولوژی
جلسه دومPCR
![Page 4: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/4.jpg)
واكنشزنجيرهايپليمرازPolymerase chain reaction
![Page 5: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/5.jpg)
Purine
Pyrim idine
GuanineAdenine
Cytosine Thymine Uracil
![Page 6: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/6.jpg)
Thymine Adenine
Cytosine
Guanine
Adenine
Guanine
ThymineCytosine
![Page 7: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/7.jpg)
Leading Strand
Laging Strand
3’
5’3’
5’
5’5’
5’3’
3’5’3’3’
5’
Single strand binding proteins
DNA Polymerase
Okazaki fragment
RNA Primers
Primase
5’ 3’5’
Helicase
سازی DNAهمانند
![Page 8: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/8.jpg)
سازی همانند در کلیدی های DNAآنزیم
• DNA Polymerase• DNA Ligase• Primase• Helicase• Topoisomerase• Single strand binding protein
![Page 9: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/9.jpg)
PCR چیست؟از • خاصی قسمت آن در که الگو DNAروشی
تکثیر گرمایی سیکلهای در پلیمراز آنزیم توسطگردد می
•: باکتری در ژن کلونینگ روش جایگزینتر – سادهتر – هزینه کمسریعتر–
![Page 10: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/10.jpg)
تاریخچهموليسیكر1985•برندهنوبل1993•
![Page 11: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/11.jpg)
دالیل پیشرفت این روش
•DNAپلیمرازمقاومبهحرارتدستگاههایترمالسایکلر•
![Page 12: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/12.jpg)
موادموردنیازآبدیونیزه•Taq)پلیمراز)•(dNTPsنوکلئوتید)•پرایمرها•بافرآنزیم•(Mgکوفاکتور)•(DNAالگو)•
![Page 13: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/13.jpg)
PCRمراحل واکنش دناتوراسیوناولیه•مراحلیکهچندینسیکلتکرارمی•
شونددناتوراسیون–اتصالپرایمرها–طویلشدن–
طویلشدننهایی•
![Page 14: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/14.jpg)
Overview of PCR
.1Temperature Cycling
Denaturation 94°Annealing 55°Extension 72°
2 .Every cycle DNA between primers is duplicated
![Page 15: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/18.jpg)
PCR Amplification
![Page 19: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/19.jpg)
Exponential Amplification
![Page 20: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/20.jpg)
PCRMelting
94 oC
Tem
pera
ture
100
0
50
T i m e
5’3’3’5’
![Page 21: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/21.jpg)
PCRMelting
94 oC
Tem
pera
ture
100
0
50
T i m e
3’5’
5’3’
Heat
![Page 22: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/22.jpg)
PCRMelting
94 oCAnnealing
Primers50 oC
Extension72 oC
Tem
pera
ture
100
0
50
T i m e
3’5’
5’3’5’
5’
Melting94 oC
![Page 23: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/23.jpg)
PCRMelting
94 oCMelting
94 oCAnnealing
Primers50 oC
Extension72 oC
Tem
pera
ture
100
0
50
T i m e
30x
3’5’
5’3’
Heat
Heat
5’
5’
5’
![Page 24: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/24.jpg)
PCRMelting
94 oCMelting
94 oCAnnealing
Primers50 oC
Extension72 oC
Tem
pera
ture
100
0
50
T i m e
30x
3’5’
5’3’5’
5’
5’
5’
5’
5’
![Page 25: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/25.jpg)
PCRMelting
94 oCMelting
94 oCAnnealing
Primers50 oC
Extension72 oC
Tem
pera
ture
100
0
50
T i m e
30x
3’5’
5’3’ 5’
5’5’
5’
5’
5’
Heat
Heat
![Page 26: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/26.jpg)
PCRMelting
94 oCMelting
94 oCAnnealing
Primers50 oC
Extension72 oC
Tem
pera
ture
100
0
50
T i m e
30x
3’5’
5’3’ 5’
5’5’
5’
5’
5’
5’
5’
5’
5’
![Page 27: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/27.jpg)
Fragments of defined length
PCRMelting
94 oCMelting
94 oCAnnealing
Primers50 oC
Extension72 oC
Tem
pera
ture
100
0
50
T i m e
30x
3’5’
5’3’ 5’
5’5’
5’
5’
5’
5’
5’
5’
5’
![Page 28: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/28.jpg)
Plateau phase
Linear phase
Exponential phaseEnd point analysis on agarose gels
Cycles
PCR
Pro
duct
Polymerase Chain Reaction
![Page 29: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/29.jpg)
الکتروفورز
![Page 30: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/30.jpg)
در موثر PCRعوامل
• Reagent and instrument • User mistakes• Template • Primers
![Page 31: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/31.jpg)
کاربردها برخیژنتیکی • بیماری تشخیصافراد • هویت تعیینویروسی • بیماری تشخیصتوسط • ویروسی Real-Time PCRتیترکلونینگ • ژن برای ژنی خاص قطعه تکثیرکلونینگ • ژن برای جهش ایجادکلونینگ • ژن برای خاص قطعات کردن اضافهژن • بیان RT-PCRبررسی
![Page 32: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/32.jpg)
بر ای Real Time PCRمقدمه
![Page 33: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/34.jpg)
What’s Wrong With Agarose Gels?• *Low sensitivity• *Non-automated
• *Size-based discrimination only• *Results are not expressed as numbers• *Ethidium bromide staining is not very
quantitative
![Page 35: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/35.jpg)
Threegeneralmethodsforthequantitativedetection :1-TaqMan,Beacons,Scorpions
2 .Hybridisationprobes3 .DNA-bindingagents
(SYBRGreen)Thefirsttwomethodsarespecificformats.
![Page 36: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/37.jpg)
Fluoresces when boundto dsDNA
![Page 38: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/38.jpg)
![Page 39: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/39.jpg)
![Page 40: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/40.jpg)
DNAPolymerase5'exonucleaseactivity
![Page 41: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/41.jpg)
Polymerization
5’3’
5’5’3’5’
ForwardPrimer
ReversePrimer
TaqMan® ProbeR Q
Taqman probes are “hydrolysis” probes
![Page 42: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/42.jpg)
Displacement
5’3’
5’5’3’5’
ForwardPrimer
ReversePrimer
RQ
![Page 43: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/43.jpg)
Hydrolysis
5’3’5’
5’3’5’
Q
R
![Page 44: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/44.jpg)
Polymerization Completed
5’
3’5’
5’3’5’
R Q
![Page 45: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/45.jpg)
FRETEmission
P
Excitation
Amplicon
Hybridization probes
![Page 46: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/46.jpg)
Denaturation
95oC
![Page 47: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/47.jpg)
FRET Emission
P
ExcitationTm
55oC
Primer/Probe Annealing
FluorimeterReading
![Page 48: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/48.jpg)
72oC
Primer Extension
![Page 49: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/49.jpg)
MolecularBeacons
![Page 50: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/50.jpg)
Scorpion
![Page 51: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/51.jpg)
Product confirmation
![Page 52: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/52.jpg)
Melting curve analysis
![Page 53: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/53.jpg)
Melting peaks
![Page 54: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/54.jpg)
![Page 55: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/55.jpg)
![Page 56: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/56.jpg)
SERIES OF 10-FOLD DILUTIONS
threshold
Ct
![Page 57: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/57.jpg)
![Page 58: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/58.jpg)
![Page 59: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/59.jpg)
Real-Time PCR Applications
• Quantification of DNA and RNA• Identify of presence and copy number of
sequence– Identification and quantification of pathogen– Diagnosis of disease condition
• Quantitation of Gene Expression• Array Verification
![Page 60: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/60.jpg)
Real-timePCRadvantages
*amplificationcanbemonitoredreal-time *nopost-PCRprocessingofproducts
(highthroughput,lowcontaminationrisk ) *ultra-rapidcycling)30minutesto2hours(
*requirementof1000-foldlessRNAthanconventionalassays
(3 picogram=onegenomeequivalent) *detectioniscapabledowntoa2-foldchange
*confirmationofspecificamplificationbymeltingpointanalysis
*mostspecific,sensitiveandreproducible *notmuchmoreexpensivethanconventionalPCR
(exceptequipmentcost)
![Page 61: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/61.jpg)
Real-timePCRdisadvantages
*notidealformultiplexing *settinguprequireshightechnicalskillandsupport
*highequipmentcost
* * * *DNAcontamination)inmRNAanalysis(
![Page 62: به نام پروردگار](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062222/568166d2550346895ddae4c1/html5/thumbnails/62.jpg)
باشین • موفق