![Page 1: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/1.jpg)
AGAROZ JEL VE İMMUNFİKSASYONELEKTROFOREZİUYGULAMALARI DR. ÇİĞDEM SÖNMEZ S.B.Ü. DR. ABDURRAHMAN YURTARSLAN ANKARA ONKOLOJİ EAH
![Page 2: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/2.jpg)
ELEKTROFOREZ
Bir ayrıştırma tekniği
Elektriksel alan altında yüklü moleküllerin farklı göç özelliklerine dayanır.
İki kelimenin birleşimi
Electro=Elektrik
Phoresis= Göç-taşıma Migration- Carry accross
![Page 3: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/3.jpg)
ELEKTROFOREZ TARİHÇE
![Page 4: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/4.jpg)
ELEKTROFOREZ TARİHÇE
• 1834-Michael Faraday –“Faraday's laws of electrolysis”
• 1882-Robert Koch- Agarose culture medium
• 1903- Arrhenius -understanding of ions in water solutions Dissociation theory Nobel Price
• 1926 Svedberg work on protein and ultracentrifuge Nobel Price
• 1937- Arne Tiselius “ The moving boundry method studying the electrophoresisiofproteins “
• Quartz U-tube and protein boundaries detected by photography using ultraviolletlight
• A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures"- Tiselius apparatus. Nobel ödülü 1948
• Albumin, α, β, γ-globulin fraksiyonları
![Page 5: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/5.jpg)
ELEKTROFOREZ TARİHÇE
• 1937 Araki agarın iki ana bileşenini açıklamış
• Düşük sülfür içeriği ve yüksek sülfür içeren agaropektin
• 1946-Agarose gel
• 1956-Oliver Smithies-Nişasta jel
• 1957-Joachim Kohn-Selülöz asetat elektroforez
• 1959-Raymound ve Weintraub – Davis ve Ornstein- Hjerten Poliakrilamid jel
• 1967- Hjrten-Serbest bölge elektroforezi (free zone electrophoresis)
• 1969-Weber K and Osborn M. SDS jel elektroforezi
• 1971-Danna and Nathans-DNA nın jel elektroforezi ile ayrıştırılması
• 1983-Capillar electrophoresis
![Page 6: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/6.jpg)
ELEKTROFOREZ PRENSİBİ
Prensip:
Genellikle sulu çözeltide (Tampon) içinde destek matriksinde
Değişken yükleri ve kütleleri nedeniyle, karışımdaki farklı moleküller ve parçacıklar farklı hızlarda göç eder.
Elektriksel alanda yüklü moleküller ve parçacıklar ters yüke göç eder.
• Pozitif yüklü partiküller (katyon) negatif yüklü elektroda (katod)
• Negatif yüklü partiküller (anyon) pozitif yüklü elektroda (anod) doğru ilerler
Sonuç olarak; tek fraksiyonlara (bantlar) ayrılır.
Proteinler ve nükleik asitler başta olmak üzere yüklü biyomoleküllerin
ayrımlanması ,
tanımlanması,
molekül ağırlığının belirlenmesi (rutinde belirlenmez ).
![Page 7: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/8.jpg)
ELEKTİRİKSEL ALAN • Doğrusal akım (DC) sağlayan güç kaynakları kullanılır.
• Voltaj arttıkça göç süresi kısalır
• Ama düşük resolusyona ve yüksek ısıya neden olur. Dolayısıyla ayrışma kalitesi kötü olur.
• Deneysel yaklaşım gözlem ve tecrübe ile elektriksel alan değerlendirilir.
![Page 9: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/9.jpg)
TAMPON
İki temel görevi var:
• Uygulanan elektrik akımını taşır.
• Ortam pH’sını sabit tutarak, elektroforez süresince protein yükünün sabit kalmasını sağlar,
Tamponun pH’ı, konsantrasyonu, iyonik gücü analitlerin göçü üzerinde etkilidir;
Standart Protein elektroforezinde pH 8.0-9.0
• Sıklıkla kullanılan tamponlar :
•Tris Borate EDTA (TBE)-Stabilpahalı uzun ayrışma zamanı pH 8.0civarı
• Tris Acetate EDTA (TAE)-ucuz, kısa ayrışma zamanı pH 8.0dan yukarıda short separation time.
• Phosphate EDTA (TPE) –pH 7.0 civarı
![Page 10: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/10.jpg)
DESTEK MATRİKS
• Ayrıştırılacak materyalin serbestçe penetrasyonuna izin vermeli
• Elektroforezi yapılacak moleküller ile etkileşime girmemeli
• Kendisi elektrik yük taşımamalı.
• Ayrışma molekülün ağırlık -yük oranına ve destek ortamın pore genişliğine bağlıdır.
• Sınıflandırma da oldukça önemlidir
• Kullanılan jeller
• Kağıt
• Sellüloz asetat
• İnce tabakalar
• Agaroz jel
• Poliakrilamid jel
• Üre jel
• Örneğin uygulandığı yerde çökerek makromoleküllerin elektroforezine engel olmasına (bulk flow) izin vermemeli.
![Page 11: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/11.jpg)
SICAKLIK
• Her aşamada ısı kontrolü önemlidir.
• Sabit sıcaklık; ısıya hassas proteinlerin denatürasyonunu önlemek açısından da önemlidir
• Isı kontrol edilmez ise jeldeki pore çapları değişir.
• Protein göçü etkilenir.
![Page 12: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/12.jpg)
ELEKTROFOREZİ ETKİLEYEN FAKTÖRLER
Numune Kaynaklı Elektroforez İşlemi Kaynaklı
Molekülün yükü ve yükünün gücü Elektriksel alan gücü
Partikülün şekli veya büyüklüğü Destek matriks pore genişliği
Molekülün yükünün yoğunluğu Ortam ısısı
Molekül ağırlığı Ortam pH
Proteinin yapısı 3. ve ya 4. yapısı Tampon viskositesi
![Page 13: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/13.jpg)
BOYAMA
• Elektroforez işleminde yürütme sonrasında jel
• Yıkanır fixe edilir ve kurulanır
• Boyama ve sonra yıkama işlemine tabi tutulur
• Boyama aşamasında asetik asit veya metanol ile muamele edilir
• Kullanılan bazı boyalar
• Plazma proteinleri • Amidoblack
• Bromfenol mavisi
• Coomassie Brilllant Blue
• Lipo proteinler • Sudan black
![Page 14: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/14.jpg)
DANSİTOMETRE
• Tarama
• Kantitasyon
• Raporlama
•
![Page 15: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/15.jpg)
ELEKTROFOREZ BİLEŞENLERİ
Elektroforez
• Numune• Elektiriksel yük• Destek matriks• Isı• pH• Tampon • Maske• Pipetler• Süre
Boyama
• Sudan black• Bromfenol blue• Asit blue• Asit violet• Ethidium bromit• Amino black• Oil Red O• Nitrotetrazolium
blue• Coomassie Brilliant
blue
Dansitometre
• Tarama• Farklı dalga boyları • Yazılım
Raporlama
• Değerler• Görüntü• Grafik • Yorum/açıklama
![Page 16: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/16.jpg)
ELEKTROFOREZ TESTİ İLE
• – İyonik yük taşıyan her şey ayrıştırılır.
• –Nükleik asitler, DNA, RNA
• –Proteinler, peptid, Amino asitler
• –Organik asitler/bazlar
• –Enzimler- izoenzimler
• –Hemoglobin
• –İlaçlar- pestisitler
• –Inorganic anyon/katyonlar
![Page 17: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/17.jpg)
KLİNİK BRANŞLAR
• Biyoloji
• Biyokimya
• Farmakoloji
• Genetik
• Patoloji
• Hematoloji
• Adli tıp
• Araştırma Laboratuvarları V.s
![Page 18: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/18.jpg)
ELEKTROFOREZ ÇEŞİTLERİ
Moving boundry Electrophoresis
Zone Electrophoresis
• 1. Kağıt elektrofore
• 2. Selüloz asetat elektroforezi
• 3. Jel elektroforezi
• a. Poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE)
• b. Agaroz jel elektroforezi
Kapiller elektroforez
![Page 19: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/19.jpg)
JEL ELEKTROFOREZİ
• Jelatinöz bir yapı destek ortam olarak görev yapar
• Sıklıkla kullanılan jeller
• Agaroz jel
• Poliakrilamid jel
• Nişasta
• Pulsed field Jel Elektorofrezi
• İzoelektirik Fokuslma
• Diğer
![Page 20: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/20.jpg)
AGAROZ JEL
• Kolay, hızlı, ucuzdur.
• Deniz yosunundan elde edilen bir polisakkarittir
• Agaroz ile daha düşük elektroozmotik etki meydana geldiğinden agara tercih edilir.
• β-1,3-D-galaktoz / 3,6-anhidro-α-1,4-galaktoz • Kaynar suda çözülür ve sertleşir, soğurken jelleşir.
• Poliakrilamid jele göre daha büyük pore sahptir.
• proteinlere daha düşük afinitesi, mükemmel dansitometrik okumaya olanak sağlayan kurutulduktan sonra kalan doğal saydamlığıdır.
• Hazır ticari preparatlar, serum proteinlerinin LDH izozimlerinin, lipoproteinfrakiyonlarının analizinde başarıyla kullanılmaktadır.
![Page 21: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/21.jpg)
ELEKTROFOREZ TESTİ TESTLERİ
• Protein elektroforez
• Lipid elektroforezi
• Hemoglobin elektroforezi
• BOS immunelektroforez
• İzoenzimler CK-LDH-ALP
![Page 22: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/22.jpg)
CK İZOENZİM ELEKTROFOREZİ
![Page 23: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/23.jpg)
LDH İZOENZİM ELEKTROFOREZİ
![Page 24: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/24.jpg)
ALP İZOENZİM ELEKTROFOREZİ
![Page 25: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/25.jpg)
LİPİD ELEKTOROFORZİ
![Page 26: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/26.jpg)
PROTEİN ELEKTROFOREZİ
![Page 27: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/28.jpg)
EEDEDE
![Page 29: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/30.jpg)
Normal plazma hücreleri
Poliklonal immünglobulinler
Bir plazma hücresinin maligntransformasyonu
Poliklonal immünglobulinler
Monoklonal immünglobulinSerum protein elektroforezinde
kalitatif ve/veya kantitatif değişiklikler
P1 P2 P3 P4 P5
Monoklonal immünglobulin ve serum proteinelektroforezi
11.4.2018Prof. Dr. Erdinç Devrim
![Page 31: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/31.jpg)
M PROTEİN
• Çoğu serolojik tümör markörünün aksine, M-proteinleri son derece çeşitlidir.
• M-proteinlerinin her biri benzersiz değişken bölge sekanslarına sahiptir
• Pentamerik IgM'den (~ 900.000 Dalton), monomerik serbest hafif zincirlere (~ 24.000 Dalton) kadar değişebilir.
• Bazı proliferatif plazma hücresi bozukluklarında serum konsantrasyonları ile oldukça yüksek iken bazılarında M-proteinine çok az ya da hemen hemen rastlanmaz.
• Tedavi yanıtının değerlendirilmesinde kullanılır.
• M protein azalma miktarı önemlidir
![Page 32: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/32.jpg)
İDRAR PROTEİN ELEKTROFOREZİ
![Page 33: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/33.jpg)
İDRAR PROTEİN ELEKTOROFOREZİ
• 24 saatlik idrar
• İdrar toplamasında prezervatif olarak sadece tolüen ve timol kullanılabilir.
• İdeal olan prezervatifsiz toplanmasıdır.
• Buzdolabında 14 gün, donmuş 7 gün stabildir.
• İdrar protein miktarı tayini (günlük atılan protein miktarı )
• MM hastalarında tanı ve takip de kullanılır
• M Protein varlığı ve immunfikasasyon elektroforezi le birlikte değerIendirilir .
![Page 34: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/34.jpg)
İDRAR PROTEİN ELEKTROFOREZİ
Avantajları
Basit manuel semiotomatik tam otomatik metod
• 30 mg/L konsantre idrarda sensitif(100 kat konsantre edilence
• Kantitatif
• Desavantajları
• Böbrek fonksiyonundan etkilenir
• Laboratuvar
• Yoğun emek kosnantasyon ile birlikte protein kaybı
• 24 saatlik idrar toplamada zorluk
• Hasta şikayetleri
• Geniş hacimler
• Subjektif değerlendirme
• DKK de kötü tekrarlanbilirlik sonuçları
![Page 35: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/35.jpg)
PATOLOJİK SERUM PROTEİN PATERNLERİ
Gamopati (gamma, beta veya alfa-2 bölgesinde M-proteini saptanır)
Monoklonal –biklonal gamapati
Poliklonal gamopati
Karaciğer hastalığı
Bağ dokusu hastalığı
Kronik enfeksiyon
Hematolojik olmayan malignansi
Hipogammaglobulinemi
Diğerleri
Azalmış albümin ve artmış α-1 ve α-2 globulinler (enfeksiyon veya metastatik malignansi)
alfa-1 antitripsin eksikliğ α-1 globulinde belirgin azalma
Bisalbunemi İki albümin bandı (bisalbüminemi)
Nefrotik sendrom albümin ve γ bölgesinde azalma, artmış α bölgesi
Karaciğer hastalığı albümin ve β bölgesinde azalma, artmış γ bölgesi
![Page 36: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/36.jpg)
İMMUNGLOBULİNLER
• Plasma hücreleri tarafından üretilirler
• Hafif Zincir Fab-Ağır Zincir Fc
• Disülfit bağları ile bağlanması ile meyana gelirler
![Page 37: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/37.jpg)
İMMUNFİKSASYON ELEKTROFOREZİ
• Örnek aplikasyonu
• Yürütme
• Anti serum uygulama
• Presipitasyon (bekleme)
• Yıkama
• Boyama
• Değerlendirme
![Page 38: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/38.jpg)
İMMÜNFİKSASYON
M-proteinini 0,2 g/L’ye dek saptayabilir
Normal görünüm
En koyu IgG boyanır
Bunu daha hafif IgA izleyebilir
IgM boyanmaz veya belli belirsiz
K >L (K ve L görünümünde uygunsuzluk
varsa M-proteini için dikkat!)
![Page 39: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/39.jpg)
SPE ENDİKASYANLARI VE YANLIŞ YORUMLAMA
IGG-KAPPA,IGA-KAPPA BİKLONAL GAMOPATİ
IGA-LAMBDA MONOKLONAL BANT
![Page 40: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/40.jpg)
Beta merkaptoetanol
![Page 41: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/41.jpg)
71 yaşında Kadın Sırt ağrısı dizde ve omuzda artraljiRutin X-ray taramada litik kemik lezyonları kemik iliği aspirasyonunda %24 plasmah. SPE M protein 24% plasma cells. Serum IFE Lambda monokonal bant
Kemik iliği plasma h. Oranı ve semptomlar MM tanısı koydurabilirler . M protein tip belirlenmeden de MM tanısı konabilir. Ancak M prtoen tipi önemildir. Tedaviyi takibi ve prognozu belirler
![Page 42: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/42.jpg)
IMMUNGLOBULİN-D MM
![Page 43: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/43.jpg)
![Page 44: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/44.jpg)
ELEKTROFOREZ SİSTEMLERİ
• Manuel
• Yarı otomatik
• Tam otomatik
• Entegre sistemler
![Page 45: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/45.jpg)
ELEKTROFOREZ VE İMMUNFİKSASYONSİSTEMLERİ
• Gel ve anti serum seçimi
• IG-G, IG-A-IG-M
• IG-D, IG-E
• Kappa
• Lambda
• FL-Kappa
• FL-Lambda
![Page 46: Agaroz Jel ve İmmunfiksasyon Elektroforezi Uygulamaları · •–Enzimler- izoenzimler •–Hemoglobin •–İlaçlar- pestisitler •–Inorganic anyon/katyonlar . KLİNİK BRANŞLAR](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050312/5f73fc92824f9040b67c41bf/html5/thumbnails/46.jpg)
TEŞEKKÜR EDERİM.....
Dr. Çiğdem Sönmez
S.B.Ü. Dr. Abdurrahman Yurtarslan Ankara Onkoloji EAH