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ANTICUERPOS ANTI-CITOPLASMÁTICOS
Y MITOTICOS
MI Alarcón Torres
Servicio de Análisis Clínicos
Hospital Universitario de Gran Canaria-HUGCDN
AUTOANTICUERPOS: DE LA IMAGEN AL DIAGNÓSTICO
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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CITOPLASMA CELULAR
Retículo endoplasmático liso
Membrana nuclear
Mitocondrias
Nucleolo
Nucleo
Lisosomas
Ap de Golgi
R E rugoso
Membrana celular
Ribosomas
Centriolos
Vacuolas
Ribosomas
Citoesqueleto
Vesículas
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AC ANTI CITOPLASMA DE CELULA HEp-2
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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Consenso internacional sobre estandarización
de la nomenclatura de los patrones sobre células Hep-2
(ICAP) Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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PROPUESTA ICAP
• Nombre: Golgi-like
• Descripción morfológica: Polar citoplásmico
• Identificación de autoantígeno: Giantina, golgin-160
• Relevancia clínica: Descripción
En cada patrón definido debe constar de 4 conceptos básicos:
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Patrones citoplasmáticos
AC-15 ___ AC-23
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Nivel experto
Nivel competente
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PATRONES CITOPLASMÁTICOS
EN CÉLULAS HEp-2
Código Competente Experto Anticuerpo
AC-15 Fibrilar Lineal Actina
AC-16 Fibrilar Filamentoso Citoqueratina y vimentina
AC-17 Fibrilar Segmental Tropomiosina, a-actinina
AC-18 Moteado Puntos discretos Lisosomas, GW
AC-19 Moteado Denso Fino PL7/PL12
AC-20 Moteado Fino Jo1, OJ, EJ
AC-21 Reticular Mitocondrias
AC-22 Golgi Golgi
AC-23 Rods and Rings IMPDH2
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AC-15: Fibrilar Lineal
Nivel competente Nivel experto
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Tinción • Fibras del citoesqueleto,
con pequeños depositos granulares
• Cables de actina estriados
que atraviesan el eje de las células
Asociación clínica
Actina / miosina
– Hepatitis crónica activa - EMTC
– Cirrosis hepática – Miasthenia gravis
Actina - Hepatitis autoimmune – Enf Crohn – CBP – VHC
- Hemodialisis (long term) – Raro en EAS
AC-15: Fibrilar Lineal Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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Ac Anti-músculo liso
Antígeno “diana”:
Actina y F-actina
Asociación clínica:
HAI-1
CBP, EAS
Métodos de detección:
IFI HEp2
IFI Tejido estomago de rata
IBlot (F-Actina)
Tinción
AC-15:Citoplasmática fibrilar lineal
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AC-16: Fibrilar Filamentoso
Nivel competente Nivel experto
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Tinción Microtubulos y filamentos intermedios,
se extiende desde el borde nuclear
Asociación clínica
Anti-Vimentina
Reacción cruzada con ac anti-hélice,
- Enferm. infecciosas o inflamatorias
- Hemodiálisis a largo plazo
- Sujetos sanos
Anti-Queratina - Enf. hepática alcohólica (69%)
- Común en EAS y psoriasis
AC-16: Fibrilar Filamentoso Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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AC-17: Fibrilar Segmental
Nivel competente Nivel experto
EKL Chan, CA von Muhlen. ICAP 2014
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Se asocia a ac anti-α-actinina, vinculina y tropomiosina
Tinción
Mayor tinción de segmentos cortos,
cuerpos densos, a lo largo de las fibras
Asociación clínica
- Miastenia gravis,
- EII: E. Crohn y Colitis ulcerosa
AC-17: Fibrilar Segmental Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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AC-18: Moteado Puntos discretos
Nivel competente Nivel experto
Autoantigenos:
Anti-argonaute2 (Ago/Su):
Componente de puntos GW (GWB),
GW182
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Se asocia a:
Ac anti- cuerpos GW y lisosomas*
(Ag: GW182, Ago2/Su)
Tinción Granular brillante en cuerpos GW
en el citoplasma de las células
en interfase con alto numero
durante finales de S y G2 fases del ciclo
Asociación clínica - CBP, SAF, EAS,
- procesos neurológicos y autoinmunes
AC-18: Moteado Puntos discretos
(*) no hay evidencia molecular para sustentar que este patrón,
esté asociado a objetivos lisosomales
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18 EKL Chan, CA von Muhlen. ICAP 2014
AC-18: Moteado Puntos discretos Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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AC-19: Denso Fino y Homogéneo
Nivel competente Nivel experto
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Se asocia a ac anti-sintetasas y ribosomas
Antígenos frente a PL7, PL12, Proteina P ribosomal
Tinción
Homogénea nuboso y mate
en el citoplasma
Asociación clínica
- Síndrome anti-sintetasa, PM/DM,
- RNP rib, LES, LES neuropsiquiátrico
AC-19: Denso Fino y Homogéneo Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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Antigeno diana: Anti-PL-7 Sintetasa de treonil ARNt
Anti-PL-12 Sintetasa de alanil ARNt
Asociación clínica:
Anti-PL7/PL12 (Solomon J. 2011)
• Frecuente en mujeres (PL7-63% y PL12-75%)
• Mayor incidencia de EPI (70-100%)
• Menor incidencia de miositis (<50%)
• Pronóstico depende de la severidad de la EPI
• Respuesta a tto inmunosupresor variable
• Ac Anti-PL7: En sujetos con EPI y ANA y anti-Jo1 (-),
Anti PL7 en el 77% de casos, con afectación muscular,
Raynaud y Artritis en 42% de casos
• EUMYONET (PL7): (Labirua-Iturburu, 2012)
- 18/964 (1.87%); 83 % en mujeres.
- EPI 78%, Miositis 75%, Artritis 56%, Raynaud 40%,
Fiebre 30% y Pericarditis en 22%.
- Otros ac asociados: ANA, Ro52 y SSa/Ro
Método de detección:
- IFI- Hep-2: AC-19: Citoplasmático denso fino
- IB: Ag recombinante Solomon J. J Bras Pneumol 2011. Labirua –Iturburu A, Medicine,2012
Anti PL12
Ac anti-sintetasa: PL7/PL12 Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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AC-20: Moteado fino
Autoantigeno: Histidil-Sintetasa
Nivel competente Nivel experto
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Tinción
Pequeñas gránulos dispersos
en el citoplasma, sobre todo
homogéneo o bien densa con
fondo moteado
Asociación clínica
- Síndrome Jo-1 (miositis y EPI)
- Síndrome anti-sintetasa, PM / DM
- Esclerodermia limitada
- Enfermedades neurológicas
- Derrame pleural idiopático
Patrón Fino Moteado-AC20
Anti-Jo1 y PL12 - EPI
AC-20: Moteado fino Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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Anti Jo-1
Ac anti-sintetasas:Jo1/PL1, OJ, EJ
Antígeno “diana”:
Enzimas citoplasmáticas:
Anti-Jo1/PL1 Sintetasa Histidil RNAt
Anti-EJ Sintetasa de glicina ARNt
Anti-OJ Sintetasa de isoleucil ARNt
Asociación clínica:
20-40% pacientes con MII
48% en PM, ES=95% , Artritis 90%
Con frecuencia está asociado a EPI (60-70%)
Relacionado con la actividad de la MII
Se asocia a anti- Ro52 con EPI severa y extensa
Método de detección :
IFI Hep2, ELISA, IBlot
Tinción
AC-20:Citoplasmática moteado fino
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AC-21: Moteado Reticular Nivel competente
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Se asocia a ac anti-mitocondriales:
1) Piruvato dehidrogenasa E2 (PDC-E2/M2*)
2) Cadena ramificada del complejo E2 (BCOADC-E2)
3) 2-oxo glutarato dehidrogenasa complejo E2 (OGDC-E2)
4) Subunidad E1 de PDC
5) E3 BP/proteina X
* PDC-E2, antígeno mas importante en la patogenesis de la CBP
Tinción
Granular brillante grueso filamentoso y moteado
Asociación clínica
• CBP
• Esclerosis sistémica (43%), SSj
• Ac centroméricos frecuentemente asociados
• Raro en otras EAS
AC-21: Moteado Reticular Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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Antígeno “diana”:
M1 a M9: M2 (Piruvato deshidrogenasa)
M4 (Sulfito Oxidasa)
M9 (Glucógeno Fosforilasa A)
Asociación clínica:
En CBP, presenta Ac. anti-M2, M4, M8 y M9
M2: Marcador de CBP (prevalencia 95%)
M4 y M8: baja prevalencia, asociados a M2
M9: estadíos iniciales de CBP (82%)
Método de detección:
IFI-Hep-2, IFI-Tejido de riñón de rata
ELISA (detecta y cuantifica subtipo M2),
IBlot: anti-M2, anti-3E-BPO
Tinción:
AC-21: Citoplasmática moteado reticular
Ac anti-mitocondrias Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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AC-22: Citoplasmático Polar-Golgi Nivel competente
Autoantigenos:
Giantina/Macrogolgina, golgina95/GM130,
golgina-97, golgina-160 y golgina-245
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Tinción
Golginas: Aparato de Golgi
Asociación clínica
• Raro en el SSj
• LES, AR, EMTC, y otras EAS
• Ataxia cerebelar idiopática,
• Degeneración cerebelar paraneoplásico
• Infecciones virales - EBV y VIH
AC-22: Citoplasmático Polar-Golgi Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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AC-23: Rods and Rings (R&R) Nivel competente
Autoantigeno:
Inosin-5-monofosfato dehidrogenasa 2
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Se asocia al antígeno IMPDH2 (inosin-5-monofosfato dehidrogenasa 2)
y otros
Tinción Distintas varillas y estructuras de anillos en el
Citoplasma de celulas en interfase.
Algunos R&R también se encuentran en núcleo
Asociación clínica • VHC, post tratamiento IFN/ Ribavirina, resistencia al tto
• Raro en LES
• Hashimoto
• Sujetos sanos
AC-23: Rods and Rings (R&R) Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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Ac anti-citoplasma - HEp-2
HAI SAS, DM/PM
Anti-Sintetasas
(Jo1, EJ, OJ,
PL7, PL12) y SRP(*)
Anti-músculo liso (Actina)
Anti-SSa y
Anti-Ro52 (*)
SS
AC-15 Fibrilar Ac-19 y AC-20
Moteado Moteado
CBP
Anti-Mitocondrias (M2, BPO)
AC-21 Reticular
Criterios Clínicos
Inmunoblot Triple tejido /Inmunoblot Inmunoblot
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Autoantígeno:
SRP (Signal Recognition Particle): Proteina de 54 kDa
y 72 kDa del complejo citoplasmático
de 6 RNA-proteínas (Proteínas-7SL RNA)
Asociación Clínica:
Presente en 5% de pacientes con MII, ES 93%
- 7-10% Polimiositis y 2-3% Dermatomiositis
- Relacionado con la actividad de la MII
- No se asocia a otros Ac
Síndrome de miopatía necrotizante
- Altos niveles de CK
- Enfermedad severa y Afectación miocárdica
- Rápida progresión y Mal Pronóstico
- Resistencia y mala respuesta a tto
- Supervivencia. 20-30%
Método de detección:
- Patrón IFI-Hep-2: No definido por la ICAP
Citoplasmático débil moteado granular denso y difuso
- IB: Ag recombinante
Ac anti-SRP Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
• Autoantígeno:
No pertenece al complejo scRNP.
Proteína de 52 kDa es una ubiquitin-ligasa E3 de la familia de proteínas TRIM 21 (tripatite motif protein) de localización citoplasmática
• Asociación Clínica
20% en SSc: l-SSc 60% y d-SSc 36%, asociado a EPI
MII: PM, DM, S. Overlap y CBP (80%).
Inf. viricas y neoplasias 62%
Tb asociado a HAI y SLA 76-96%
• Asociado a otros Ac:
Ssa/Ro 60 kDa, 90% LES y SS, 72%
Jo1 60%, EPI mas severa y extensa (Vacnsa, 2009)
Otras Antisintetasas, 99%
Tb Cent B y A, Scl70, RNA polIII, Pm/Scl y Ku, 60%
• Valor pronóstico
• Método de detección
- Patrón IFI: No definido por la ICAP
Citoplasmático no especifico o negativo en HEp-2 y
Moteado fino en HEp2000 (transfectadas con Ro)
- ELISA, IB: Ag recombinantes
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Anti-anti-Jo1/Anti-Ro52/TRIM21:
• Severidad
• EPI
• Miositis
• Afectación articular
• Riesgo de cáncer
MII: DM (24%), PM (27%), MCI (21%)
Otros: S. Sjögren, LES, SScl
Ac anti-Ro52/TRIM21 Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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INMUNOTRANSFERENCIA EN LINEA (LIA)
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Patrones mitóticos
AC-24 ___ AC-28
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Nivel experto
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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AC-24: CENTROSOMAS
Sinónimo
Centriolos
Antígenos Asociados
Pericentrina, Nineína,
Cep250, Cep110
Enfermedades Asociadas
Raro en ES,
Fenómeno de Raynaud,
Infecciones (virales y por micoplasmas)
Descripción
Centriolos, visibles como pequeños
puntos nítidos (1-2/célula) en citoplasma
o en los polos del huso mitótico.
Nivel experto
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Sinónimo Huso mitotico
Antígenos Asociados
HsEg5
Enfermedades
Asociadas
Raro en SSj
LES y otras conectivopatías.
Descripción
Tinción en las fibras del huso entre los polos en células en
mitosis, junto con una tinción con forma de pequeños conos
en los polos.
Las fibras del huso pueden teñirse tanto en patrones
parecidos a NuMA como en algunos no-NuMA.
Los patrones NuMA conllevan tinciones moteadas en el
núcleo.
Nivel experto
AC-25: HUSO MITÓTICO Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
40
Sinónimo MSA-1v, Centrofilina
Antígenos Asociados NuMA
Enfermedades Asociadas SSj,
LES Y otros
Descripción
Tinción granular nuclear con
tinción de fibras del huso
mitótico
Nivel experto
AC-26: HUSO MITÓTICO like Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
41
Sinónimo Cuerpo medio
Antígenos Asociados
Ninguno
Enfermedades Asociadas
Raro en ES,
Fenómeno de Raynaud,
Tumores malignos
Descripción
Tinción del puente que une las
dos células hijas al final de la
división celular, pero antes de que
las células se separen totalmente.
Nivel experto
AC-27: PUENTE INTERCELULAR Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
42
Enfermedades Asociadas
Raro en lúpus discoide (LED),
Leucemia linfocítica crónica (LLC),
SSj, Polimialgia reumática.
Descripción
Tinción punteada en el borde de los cromosomas de
células en profase y metafase, sin ninguna tinción
en células en interfase
Nivel experto
AC-28: ENVOLTURA
CROMOSÓMICA MITÓTICA
Sinónimo
Proteína de cobertura
cromosómica, antígeno de células
en división, autoantígeno de
cromosomas mitóticos (MCA)
Antígenos
Asociados Histona H3 modificada, MCA-1
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RECOMENDACIONES
Desde la CEI/SEQC recomendamos, en consenso con la GEAI/SEI:
1.- Utilizar la nomenclatura estandarizada para definir los patrones de IFI, tal como se
establece en el Consenso Internacional sobre nomenclatura de Patrones de células Hep-2
2.- Configurar en los SIL e informes del laboratorio, la definición de los patrones de células
HEp-2, nucleares y citoplasmáticos, al menos a nivel competente, tal como se indica en
dicho Consenso
3.- Realizar la búsqueda y confirmación de las distintas especificidades de forma
ordenada y racional, tomando como base la imagen, siguiendo siempre las pautas
establecidas en las GPC
4.- Utilizar los algoritmos de consenso internacionales y criterios clínicos establecidos
para el diagnóstico de EAI para lograr una mejor adecuación de la demanda y rentabilidad
de las pruebas de Autoinmunidad
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45
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47
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48
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49
PL12
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
50
PL12
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
52
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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