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Histofisiologia Animal
Aula 2 – Técnicas Histológicas
Professora Melissa Kayser
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Técnicas Histológicas
Para análise em microscopia óptica de
luz é necessária a preparação
de lâminas com corte de tecidos muito
finos.
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Passos para confecção de lâminas
1. Coleta do Material
— Partes de órgãos são retiradas comauxílio de um bisturi, pinça ou lâmina debarbear;
— Não é indicada a extração de porções
grandes (já que o objetivo é obter umacamada fina para ser analisada emmicroscópio óptico)
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substâncias constituintes das células etecidos (fornecendo maior resistência parasuportar as demais etapas);
— Os agentes fixadores mais utilizados sãoo formol tamponado e o líquido de Bouin(ambos fixam as proteínas, evitando suadegradação).
Passos para confecção de lâminas
2. Fixação do Material
— Consiste na utilização de procedimentos
físicos ou químicos para imobilizar as
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Fixação O volume do fixador é 20x o volume da
peça.
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Passos para confecção de lâminas
3. Clivagem
— Consiste na fragmentação do tecido em
pedaços menores.
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Passos para confecção de lâminas
4. Descalcificação
— Retirada do cálcio dos tecidos para poderconfeccionar as lâminas.
- São usados ácidos e EDTA (é o de escolha).
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Passos para confecção de lâminas
- Desidratação
— É retidado a quantidade de água para poderimobilizar com a parafina.
— É a clarificação utilizando o Xilol.
- Diafanização
5. Processamento
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uma substância firme que permita,
posteriormente, seccioná-la em camadasdelgadas;
— A parafina é a mais utilizada nesseprocedimento.
Passos para confecção de lâminas
6. Inclusão ou Infiltração
— Consiste na impregnação do tecido com
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obter cortes sucessivos, delgados euniformes, a partir de blocos de parafinacom peças incluídas.
— Esse aparelho é formado por lâmina (fixa
ou descartável) de aço, afiada, em umbraço ao qual se prende o bloco e que sedesloca verticalmente.
Passos para confecção de lâminas
7. Microtomia
— Consiste em utilizar um micrótomo para
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— Geralmente utilizada em casos específicos (ex:cortes urgentes – exames patológicos);
__ Aparelho utilizado : Micrótomo de Congelamentoou Criostatos;
__ Criostato – cortes são mais finos
Técnica de Criomicrotomia(Microtomia por Congelamento)
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auxílio de uma pinça, para serem
distendidas;
— A água deve estar entre 3 a 8ºC abaixodo ponto de fusão da parafina utilizada;
Passos para confecção de lâminas
Montagem da lâmina histológica
— As fitas obtidas a partir do micrótomo sãotransferidas para um banho-maria, como o
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— Os cortes são separados individualmenteem lâminas de vidro;
— As lâminas são colocadas em estufa a60ºC para secagem (1 a 24 hrs);
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— A maioria dos preparados histológicos
observados nas aulas práticas são corados comuma combinação de 2 corantes: Hematoxilina &Eosina (H.E.);
— A hematoxilina se comporta como um corante
básico e, assim, cora constituintes celulares eintercelulares ácidos em cor roxo-azulado;
— A eosina se comporta como corante ácido e,assim, cora as estruturas acidófilas (ex:colágeno) em rósea-avermelhado
Passos para confecção de lâminas
8. Coloração
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Tricrômico de Masson
cora núcleo de azul escuro;
citoplasma, queratina e músculo – vermelho;
Mucigênio e colágeno – azul claro.
Corantes utilizados na rotina de
laboratórios
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Orceína
cora fibras eláticas de marrom
Artéria aorta
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Weigert
cora fibras eláticas de azul
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Prata
Cora fibras reticulares de preto
astrócitos
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Hematoxilina férrica
Cora as estriações dos músculos, os núcleos
e os eritrócitos de preto.
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Wright e Giemsa
especializado em células sanguíneas
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Passos para confecção de lâminas
9. Selagem
— Usa a Goma de Damar e coloca a lamínulapara deixar uniforme e proteger as lâminashistológicas produzidas.
10. Observação ao Microscópio
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