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NUTRIÇÃO EM BACTÉRIAS
CULTIVO DE BACTÉRIASDra. Maria Cecília Pereira SoaresFevereiro, 2014
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Agenda
• Aspectos essenciais quanto (ao/à):– Nutrição microbiana (bacteriana) – Capítulo 3
(TRABULSI)– Crescimento Bacteriano – Capítulo 4 (TRABULSI)– Resistência bacteriana – Capítulo 9 (TRABULSI)
• Controle de crescimento de microrganismos por:– Agentes físicos – Capítulo 7 (TRABULSI)– Agentes químicos – Capítulo 7 (TRABULSI)
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Você lembra o que falamos quanto à
nutrição/respiração dos microrganismos?
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Nutrição/Respiração
• Podem ser autótrofos ou heterótrofos (parasitas, saprófitas, simbiontes)
• Podem ser aeróbios, anaeróbios e facultativos
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Algumas particularidades (Fontes de Energia)
• Bactérias autótrofas apresentam bacteriofila (não há produção de oxigênio; a água não funciona como doadora de elétrons).
• Algumas bactérias são quimiotróficas (por meio de reações químicas de oxidação).
• Algumas bactérias são litotróficas (oxidam compostos inorgânicos, ex. S, auxiliam na degradação de materiais), outras são organotróficas (oxidam compostos orgânicos, maior grupo)
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Algumas particularidades (Fontes de Material Plástico)
• Fontes de Carbono: íons bicarbonato (autótrofas), carboidratos, aa, lipídios, etc (heterótrofas)
• Fontes de Nitrogênio: por simbiose (leguminosas), nitratos
• Íons inorgânicos essenciais:– Macronutrientes: P (PO4
-3, S (aa), K (enzimas, regulador PO, Mg (Ribossomos), Fe (pigmentos).
– Micronutrientes: Co, Zn, Mn, Na, etc.
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• Água• Oxigênio
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O que são meios de cultura?
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Definição
Material nutriente preparado no laboratório para crescimento de microorganismo
Agar nutrienteCaldo nutriente
Agar inclinado
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Meio Quimicamente Definido (Sintéticos)
EX:Componentes QuantidadesGlicose 5,0gFosfato de amônia monobásico 1,0gCloreto de sódio 5,0gSulfato de Magnésio 0,2gFosfato de potássio dibásico 1,0gÁgua 1 litro
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Meio Complexo
Ex: Agar nutrienteComponentes QuantidadesPeptona (Proteína parcialmente digerida) 5,0GExtrato de carne 3,0G Cloreto de sódio 8,0GAgar 15,0GÁgua 1 Litro
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Meio de cultura Seletivo e Diferencial
▪ Seletivo – elaborados com o objetivo de favorecer o crescimento da bactéria de interesse e impedir o crescimento de outras bactérias
▪ Diferencial – utilizado para fácil identificação da colônia de bactéria de interesse quando existem outras bactérias crescendo na mesma placa
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▪ Exemplo: Agar MacConkey – Considerado seletivo e diferencial
▪ Composição –Sais biliares e cristal violeta- Inibidores do crescimento de bactérias gram-positivas – Seletivo
▪ Lactose – Permite diferenciar bactérias fermentadoras de lactose ( colônias vermelhas ou rosas) das não fermentadoras( colônias incolores)
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Meio de Enriquecimento
▪ Isolamento de bactérias presentes em pequeno número junto com outras que estão em grande quantidade – geralmente é liquido e contém todos os nutrientes necessários para favorecer a multiplicação da bactéria de interesse
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Exemplo: Identificação das Salmonelas
Caldo Selenito - meio de enriquecimento para o isolamento de Salmonella spp a partir de materiais clínicos, especialmente fezes
▪ No meio de cultura, peptona fornece os nutrientes adequados necessários para o crescimento bacteriano, a lactose é o carboidrato fermentável, selenito de sódio inibe a flora Gram positivas e a maior parte da flora intestinal, exceto Salmonella spp,durante as primeiras 8-12 horas de incubação
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Temperatura:• Psicrófilas (0 a 18 ºC)• Mesófilas (25 a 40)• Termófilas (50 a 80)
pH: 7,0
Enzimas (passagem de nutrientes)
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Conservação:• Tubos (repique)• Geladeira (meio específico)• Óleo mineral• Liofilização (meio/ suspensão/
congelamento à – 30ºC/ sublimação/ fechado hermeticamente)
• Nitrogênio liquido (-179ºC)
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CRESCIMENTO BACTERIANO
Dra. Maria Cecília Pereira SoaresFevereiro, 2014
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MAS AFINAL, O QUE É CRESCIMENTO?
![Page 21: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/21.jpg)
Definição:
• Somatório dos processos metabólicos progressivos que conduz à divisão (reprodução).
• Considerar que pode ser: em comprimento, largura e altura
• Inferido como individual e populacional.
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Posso medir? Pode!
• Métodos diretos:– Centrifugacão– Peso seco
• Métodos indiretos:– Estimativas colorimétricas ou espectofotométricas– Medida de consumo de susbstâncias/ acúmulo– Turbidimetria (leva em conta a absorbância)
• Métodos de contagem de partículas– Direto: Coulter, câmaras de contagem, esfregaços corados– Indireto: Diluição seriada, plaqueamento
![Page 23: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/23.jpg)
RESITÊNCIA BACTERIANA
Dra. Maria Cecília Pereira SoaresFevereiro, 2014
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Definição:
• Não reação diante de antibioticoterapia por:– Inexistência de um alvo– Quando um alvo não é atingido (parede celular – ß lactâmicos, glicopeptídeos
[vancomicina]; membrana – polimixinas; síntese de proteínas – cloranfenicol, eritromicina, estreptomicina; síntese de DNA, RNA – metronidazol, rifamcinas)
– Não inativação de um processo
• Curiosidade:– Bactericida: causa morte– Bacteriostático: impede o crescimento
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Resistência bacteriana
• A bactéria pode ser:– Sensível– Resistente
• A resistência pode ser:– Natural (todas mesma característica)– Adquirida (apenas uma amostra se altera)…… Seleção?
• Ocorre por meio de:– Mutações– Processos de recombinação genética(transformação, transdução,
conjugação)– Transposons (DNA “móvel”)
![Page 26: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/26.jpg)
Resistência bacteriana
• Estafilococos• Enterobactérias• Micobactérias
• Mutação• Plasmídeos
![Page 27: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/27.jpg)
INTERVALO????
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• Nutrição Bacteriana1
• Crescimento bacteriano2
• Resistência bacteriana3
O que já vimos?
![Page 29: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/29.jpg)
• Controle de Microrganismos:1
• Agentes físicos2
• Agentes químicos3
O que veremos
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CONTROLE DE CRESCIMENTO
Dra. Maria Cecília Pereira SoaresFevereiro, 2014
![Page 31: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/31.jpg)
Definições:
• Esterilização:– Processo de destruição, inativação definitiva e/ou remoção de todas as
formas de vida de um objeto ou material. Não há graus de esterilização.
• Desinfecção:– Destruição de microrganismos capazes de transmitir infecções. Utiliza-
se neste caso substâncias químicas em objetos ou materiais Reduzem ou inibem o crescimento, mas não esterilizam necessariamente.
• Anti-sepsia:– É um tipo particular de desinfecção, pela utilização de substâncias
químicas aplicadas na pele, mucosa ou tecidos vivos.
![Page 32: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/32.jpg)
Definições:
• Germicida:– Específico para cada tipo de germe: virucida,
bactericida, fungicida, esporocida. Mata os referentes germes.
• Assepsia:– Ausência de microrganismos em uma área.
Previnem a entrada de um microrganismo.
![Page 33: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/33.jpg)
Métodos físicos
• Calor úmido (desnaturação de proteínas)– a) Fervura (mata bactérias, fungos
e vírus em 15 minutos) – Caseiro– b) Autoclavação (método de
esterilização) – Laboratorial– c) Pasteurização (mata bactérias
patogênicas) – leite, creme de leite, vinho,etc) (30’ a 63ºC ou 72ºC + 5” a 140ºC + resfriamento)
![Page 34: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/34.jpg)
Autoclaves (trinômio Tempo x P x Tº)
![Page 35: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/35.jpg)
Métodos físicos• Calor seco (Oxidação do material)– a) Flambagem (método de
esterilização) – Laboratorial, utiliza-se alça e fio de platina
– b) Incineração (método de esterilização) – Industrial, Hospitalar; para papéis, carcaça de animais, restos hospitalares
– c) Fornos (método de esterilização – estufas) – Laboratorial; Vidraria dentre outros materiais
![Page 36: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/36.jpg)
Flambagem
![Page 37: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/37.jpg)
Fornos (binômio Tempo x Tº)
![Page 38: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/38.jpg)
Métodos físicos• Filtração (Remoção mecânica)– Separação de bactérias e fungos em meios ou
soluções líquidas/gases
• Radiação (Destruição do DNA)– Tem seus efeitos dependendo do tempo,
comprimento de onda e distância da fonte– Ionizantes (raios gama): mais energia,
comprimento de onda curto, geram radicais super-reativos; material descartável hospitalar
– Não ionizantes (UV): menos energia, comprimento de onda mais longo, baixa penetração
• Baixas temperaturas (Microbiostático)– Geladeira (≤0º); congelador (-20ºC); Nitrogênio
líquido (-179ºC)
![Page 39: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/39.jpg)
Filtros HEPA Utilizados em Câmaras de Fluxo Laminar
![Page 40: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/40.jpg)
Unidades de Membranas Filtrantes Descartáveis, Pré-Esterilizadas e Montadas
![Page 41: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/41.jpg)
Micrografia Eletrônica de Varredura de Bactérias e Algas Aquáticas Retidas em um Filtro Nucleopore
![Page 42: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/42.jpg)
Capela de fluxo laminar com uma fonte de radiação ultravioleta utilizada para a descontaminação das superfícies internas
![Page 43: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/43.jpg)
Métodos químicos• Podem ser:– Esterilizantes (matam)
– Desinfetantes (reduzem carga microbiana)
– Curiosidades: nem sempre cheiro forte quer dizer que é excelente bactericida, por exemplo; mesmo sendo baratos podem ser tóxicos e corrosivos; estudar o local onde será utilizado
![Page 44: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/44.jpg)
Métodos químicos• Álcoois:– Desinfetantes, Bactericida, Desnatura
proteínas (se álcool + água e previamente limpos), Lise das células, se isopropílico menos corrosivo, glicóis são usados para desinfecção de câmaras, quartos e salas
• Halogênios:– Iodo: tintura é bactericida, fungicida e
esporocida; se combina com aminoácidos de forma irreversível
– Cloro: em formato, por exemplo de hipoclorito, que oxida os grupos SH de certas enzimas vitais
![Page 45: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/45.jpg)
Métodos químicos• Agentes de superfície:– “Sabões”, inativam, inibem respiração,
alteram a permeabilidade da membrana – clorohexidine (bacteriostático, que se liga à parede, provoca danos e libera conteúdo citoplasmático)
• Agentes oxidantes:– Libera oxigênio, extremamente reativo, e
oxida sistemas enzimáticos – água oxigenada (solução a 3%), usada para lavagem de feridas e produz gás, por efeito da catalase, facilitando limpeza; permanganato de potássio (1:5.000-2.000)
![Page 46: Aula 3 - Microbiologia: Nutrição, Crescimento, Resistência e Controle Bacteriano](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012315/559122821a28ab351c8b462c/html5/thumbnails/46.jpg)
DÚVIDAS???????