Aus der Medizinischen Klinik I der Universität zu Lübeck
Direktor: Prof. Dr. med. H. Lehnert
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Akute Effekte von Aldosteron auf das autonome Nervensystem
und den Baroreflex des Menschen
Inauguraldissertation
zur
Erlangung der Doktorwürde
der Universität zu Lübeck
- Aus der Medizinischen Fakultät -
vorgelegt von
Jörg Holzschneider
aus Düsseldorf
Lübeck 2009
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1. Berichterstatterin: PD Dr. med. Silke Heindl 2. Berichterstatter: PD Dr. med. Christoph Lange Tag der mündlichen Prüfung: 07.09.2009 Zum Druck genehmigt. Lübeck, den 07.09.2009
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Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung ....................................................................................... 7
1.1 Aldosteron und das autonome Nervensystem...................................... 7 1.1.1 Aldosteron und das Renin-Angiotensin-System ................................ 7 1.1.2 Das autonome Nervensystem und der Baroreflex ............................. 9 1.1.3 Interaktionen zwischen Aldosteron und dem autonomen
Nervensystem.................................................................................. 11 1.2 Erfassung der Aktivität des autonomen Nervensystems beim
Menschen................................................................................................ 13 1.2.1 Noradrenalin-Spillover ..................................................................... 13 1.2.2 Intraneurale Ableitung der muskulären sympathischen
Nervenaktivität mittels Mikroneurographie....................................... 13 1.2.3 Herzfrequenzvariabilität ................................................................... 17 1.2.4 Katecholaminkonzentrationen in Plasma und Urin .......................... 18
1.3 Fragestellung.......................................................................................... 19 2 Probanden und Methoden.......................................................... 21
2.1 Probanden .............................................................................................. 21 2.1.1 Einschlusskriterien........................................................................... 21 2.1.2 Ausschlusskriterien.......................................................................... 21 2.1.3 Abbruchkriterien............................................................................... 22
2.2 Versuchsablauf ...................................................................................... 22 2.2.1 Studiendesign.................................................................................. 22 2.2.2 Versuchsvorbereitung...................................................................... 22 2.2.3 Versuchsprotokoll ............................................................................ 24
2.3 Mikroneurographie................................................................................. 25 2.4 Herzfrequenzvariabilität und hämodynamische Parameter ............... 27 2.5 Durchführung der Baroreflextests........................................................ 28 2.6 Laboruntersuchungen ........................................................................... 29 2.7 Statistik ................................................................................................... 30
3 Ergebnisse ................................................................................... 32 3.1 Daten der Probanden............................................................................. 32 3.2 Ausgangswerte unter Ruhebedingungen ............................................ 32
3.2.1 Laborparameter ............................................................................... 32 3.2.2 MSNA und hämodynamische Parameter......................................... 33 3.2.3 Herzfrequenzvariabilität ................................................................... 35
3.3 Ergebnisse unter Baroreflextestung .................................................... 36 3.3.1 Barorezeptoraktivierung................................................................... 36 3.3.2 Barorezeptordeaktivierung............................................................... 37
3.4 Veränderungen während sympathoexzitatorischer Manöver ............ 39 3.4.1 Endexpiratorische Apnoe................................................................. 39 3.4.2 Eiswassertest................................................................................... 41
4 Diskussion ................................................................................... 42 4.1 Vergleich mit anderen Studien.............................................................. 42
4.1.1 Fehlender Einfluss des Aldosterons auf die MSNA ......................... 42 4.1.2 Veränderungen der HRV und der Herzfrequenzregulation durch den Baroreflex ................................................................................. 45 4.1.3 Hormon- und Elektrolytveränderungen............................................ 47
4
4.2 Mögliche Wirkungsweisen des Aldosterons ....................................... 48 4.2.1 Genomische und nichtgenomische Hormonwirkungen.................... 48 4.2.2 Zentrale und periphere Wirkungen .................................................. 49 4.2.3 Interaktion von Aldosteron mit Stickstoffmonoxid ............................ 50
4.3 Einschränkungen der Studie und kritische Einordnung der Ergebnisse.............................................................................................. 51
4.3.1 Kritische Einordnung der Methode der Mikroneurographie.............. 51 4.3.2 Methodische Einschränkungen der HRV-Messung ......................... 52 4.3.3 Einschränkungen bei der Übertragbarkeit der Ergebnisse .............. 52
4.4 Ausblick .................................................................................................. 54 5 Zusammenfassung...................................................................... 55 6 Literaturverzeichnis .................................................................... 56 7 Anhang ......................................................................................... 65
7.1 Aufklärungsbogen ................................................................................. 65 7.2 Einverständniserklärung ....................................................................... 66
8 Danksagung................................................................................. 67 9 Lebenslauf.................................................................................... 68
5
Abkürzungsverzeichnis
Abb. Abbildung
ACTH adrenocorticotropes Hormon
ANOVA Analysis of Variance
a.u. arbitrary units
BD Blutdruck
bzw. beziehungsweise
ca. circa
cAMP cyclisches Adenosinmonophosphat
cGMP cyclisches Guanosinmonophosphat
CPT Cold-pressor Test
EDTA Ethylendiamintetraessigsäure
EKG Elektrokardiogramm
et al. et alii
etc. et cetera
HF high frequency
HRV Heart Rate Variability
H.S. Herzschläge
LF low frequency
MIGB Metaiodbenzylguanidin
MR Mineralokortikoidrezeptor
MSNA muskuläre sympathische Nervenaktivität
N. Nervus
NaCl Natriumchlorid
NO Stickstoffmonoxid
NN-Intervall Normal-zu-Normal-Intervall
NN50/pNN50 number/percentage of successive NN interval differences
exceeding 50ms
n.s. nicht signifikant
n.u. normalized units
RAAS Renin-Angiotensin-Aldosteron-System
RMSSD root mean square of successive RR interval differences
6
SDNN standard deviation of NN intervals
SEM standard error of the mean
SSNA skin sympathetic nerve activity
Tab. Tabelle
vs. versus
z.B. zum Beispiel
7
1 Einleitung 1.1 Aldosteron und das autonome Nervensystem
1.1.1 Aldosteron und das Renin-Angiotensin-System
Zum ersten Mal als eigenständiges Hormon isoliert sowie in seiner Wirkung
charakterisiert wurde Aldosteron 1953 von Simpson und Tait (Simpson et al.,
1953). Aldosteron ist zusammen mit Renin und Angiotensin als Bestandteil des
Renin-Angiotensin-Aldosteron-Systems (RAAS) ein wichtiger Regulator des
menschlichen Wasser- und Elektrolythaushaltes. In diesem System bewirkt eine
Durchblutungsabnahme der Niere z.B. bei Hypovolämie oder Hypotonie eine
Reninfreisetzung, welches die Umwandlung des in der Leber synthetisierten
Angiotensinogens in Angiotensin I in Gang setzt. Dieses wird durch das
Converting-Enzyme in die eigentlich blutdruckwirksame Substanz Angiotensin II
umgewandelt, welches um einige Zehnerpotenzen stärker vasokonstringierend
wirkt als Noradrenalin.
Neben dem direkten vasokonstriktorischen Effekt bewirkt Angiotensin II zusätzlich
eine Freisetzung des Mineralokortikoides Aldosteron aus der Nebennierenrinde.
Im Zentrum der Aldosteronwirkung steht hierbei eine Natriumretention mit
Kaliumexkretion, wodurch über die konsekutive Wasserretention eine Erhöhung
des venösen Angebotes erfolgt.
Es gibt jedoch noch eine Fülle anderer Faktoren, die zur Freisetzung von
Aldosteron führen, z.B. Hyponatriämie, Hyperkaliämie, aber auch Lagewechsel
oder Stress (siehe auch Abb. 1).
8
Abbildung 1: Faktoren, welche die Aldosteronausschüttung stimulieren und
hemmen (aus Steinhausen, 1991, Abb. 8.44.)
Die Wirkungen von Aldosteron beschränken sich jedoch keinesfalls auf die
angesprochene Wasser- und Elektrolytregulation. So konnte in verschiedenen
Studien bewiesen werden, daß Aldosteron unter anderem direkten Einfluss auf die
Genese der Myokardfibrose besitzt (Brilla et al., 1993) und endotheliale
Dysfunktionen verursacht (Farquharson et al., 2002; White et al., 2003). Andere
Studien zeigten dessen Beteiligung in Prozessen der perivaskulären Entzündung
und linksventrikulären Hypertrophie (Rocha et al., 2000). Malmqvist et al. konnten
sogar zeigen, daß die Schwere der Linksherzhypertrophie bei der hypertensiven
Herzkrankheit in direktem Verhältnis zur Höhe des Aldosteronspiegels steht
(Malmqvist et al., 2002). Neben diesen peripheren Wirkungsweisen lassen
verschiedene Studien der letzten Jahre (Gómez-Sánchez, 1997; Huang et al.,
2005) außerdem darauf schließen, daß Aldosteron zusätzlich über zentrale
Rezeptoren auf die Blutdruckregulation einwirkt (siehe dazu auch Kapitel 1.1.3,
Seite 11 f.).
9
Die klassischen Wirkungen der Natrium- und Wasserretention werden genomisch
mit einer Latenz von Stunden bis Tagen vermittelt. Dieser Wirkungsweise liegt das
Modell von Jakob und Monod zugrunde: Nach Aufnahme des Hormons in die Zelle
gelangt es über Bindung an den cytoplasmatischen Rezeptor in den Zellkern. Dort
wird ein Repressormolekül inaktiviert, dadurch ein bisher blockiertes Operon frei
und über Transkription und Translation das entsprechende Enzym synthetisiert.
Seit einigen Jahren sind aber auch für das Aldosteron nichtgenomische Wirkpfade
bekannt, mit nur einer Latenz von Sekunden bis Minuten. Lösel et al. konnten in
in-vitro Studien verschiedene schnelle Effekte von Aldosteron zeigen, z.B. auf das
intrazelluläre Calcium oder auf cAMP, welches in der Zelle als sogenannter
second messenger dient, indem es Enzymsysteme modifiziert oder auch die
Membranpermeabilität beeinflusst (Lösel et al., 2004). Charakteristisch für die
nichtgenomischen Effekte ist neben dem schnellen Wirkmechanismus die
fehlende Ansprechbarkeit von Mineralokortikoidrezeptor-I-Antagonisten.
Zu welchen Teilen die oben angesprochenen Wirkungen auf die Myokardfibrose,
endotheliale Dysfunktion etc. genomisch oder nichtgenomisch vermittelt werden,
ist bisher nicht bekannt.
1.1.2 Das autonome Nervensystem und der Baroreflex
Das autonome - oder auch vegetative - Nervensystem wird unterteilt in einen
sympathischen und parasympathischen Anteil.
Die präganglionären Neurone des efferenten Sympathikusanteils nehmen ihren
Ausgang im Seitenhorn des Rückenmarkes zwischen Cervikalsegment 8 und
Lumbalsegment 2. In meist organfern gelegenen Ganglien wird auf die
postganglionären Neuronen umgeschaltet, welche den Reiz mittels des
Überträgerstoffes Noradrenalin bzw. Acetylcholin (nur Schweißdrüsen und
Philoerektoren) auf das Effektororgan übertragen. Eine Sonderform eines
sympathischen Ganglions ist das Nebennierenmark, welches Adrenalin in die
Blutbahn ausschüttet und als hormoneller Anteil des sympathischen
Nervensystems gelten kann. Noradrenalin und Adrenalin binden dabei an zwei
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Haupttypen von Rezeptoren, den Alpha- und Betarezeptoren, welche sich in
weitere Untertypen (α1+2, β1-3) unterteilen lassen.
Die parasympathischen Fasern dagegen haben ihren Ursprung entweder im
Bereich der Hirnnervenkerne III (Oculomotorius), VII (Facialis), IX
(Glossopharyngeus) und X (Vagus), oder für die Beckenregion im Bereich des
Sakralmarkes. Die Ganglien zur Umschaltung liegen hier meist sehr nah an den
Erfolgsorganen bzw. in ihnen selbst (intramural). Der Überträgerstoff ist
ausschließlich Acetylcholin.
Bei den Afferenzen, über welche das vegetative Nervensystem beeinflusst wird,
handelt es sich um sensible Fasern z.B. von Mechano- und Chemorezeptoren,
sogenannte Visceroafferenzen, die über Interneurone mit den Efferenzen zu
einem Reflexbogen verbunden sind.
Sympathische und parasympathische Anteile sind über das zentralnervöse
autonome Netzwerk eng miteinander verbunden und stehen zusätzlich unter
ständiger Einwirkung höherer Zentren wie der Medulla oblongata, dem
Hypothalamus und dem limbischen System.
Für die Regulation des Kreislaufes kommt dabei der Medulla oblongata besondere
Bedeutung zu. Im menschlichen Organismus wird der arterielle Blutdruck ständig
über spezielle Dehnungsrezeptoren, den arteriellen Barorezeptoren gemessen.
Diese befinden sich im Bereich des linken und rechten Sinus caroticus, im Bereich
beider Arteriae carotices communes und im Aortenbogen. Das Messergebnis der
arteriellen Barorezeptoren gelangt über afferente Fasern zum Kreislaufzentrum in
der Medulla oblongata, in welcher sich pressorische und depressorische Areale
abgrenzen lassen. Über den sogenannten Baroreflex wird daraufhin der Kreislauf
entsprechend reguliert:
Bei Blutdruckabfall kommt es über eine Deaktivierung der Barorezeptoren zu einer
Aktivierung der pressorischen Areale der Medulla und damit zu einer Steigerung
der sympathischen Nervenaktivität, welche über direkten neuronalen Kontakt
mittels Noradrenalin sowie über die Ausschüttung von Adrenalin aus dem
Nebennierenmark an die Effektororgane übertragen wird. Am Herzen bewirkt der
Sympathikus eine Frequenzsteigerung sowie eine positive Inotropie, an den
Gefäßen führt er durch eine generelle Kontraktion der glatten Muskeln der
Arteriolenwände zu einer Erhöhung des peripheren Widerstands.
11
Ein Blutdruckanstieg führt umgekehrt zu einer Abnahme der sympathischen
Nervenaktivität und somit zu einer entgegengesetzten Reaktion des
kardiovaskulären Systems im Sinne einer Senkung der Herzfrequenz und
Detonisierung der glatten Gefäßmuskulatur. Unter Ruhebedingungen halten diese
Baroreflexmechanismen den Blutdruck in einem konstanten Bereich.
1.1.3 Interaktionen zwischen Aldosteron und dem autonomen Nervensystem
Das sympathische Nervensystem und das RAAS interagieren auf vielfältige Weise
miteinander. So induziert z.B. eine sympathisch getriggerte periphere
Vasokonstriktion nach den oben beschriebenen Mechanismen eine
entsprechende Reaktion des RAAS, und umgekehrt führt eine durch
Natriumretention herbeigeführte Erhöhung der Vorlast zu einem Effekt auf den
Baroreflex und das vegetative Nervensystem. Weiterhin ist bekannt, daß das
RAAS auch direkt durch nervale sympathische Stimulation der juxtaglomerulären
Zellen aktiviert werden kann (Kopp und DiBona, 1986).
Seit einigen Jahren verdichten sich die Hinweise darauf, daß umgekehrt auch ein
direkter zentraler Einfluß der Hormone des RAAS auf das vegetative
Nervensystem möglich ist. In tierexperimentellen Versuchen konnte bisher gezeigt
werden, dass Angiotensin II über verschiedene Mechanismen die sympathische
Neurotransmission steigert und zu einer Erhöhung der Sympathikusaktivität führt
(Saxena et al., 1992).
Gómez-Sánchez fand in Studien an Ratten heraus, dass auch Aldosteron über
direkte zentralnervöse Mineralo- und Glukokortikoidrezeptoren den Blutdruck
erhöht (Gómez-Sánchez, 1997). Wie die zentralnervöse Wirkung des Aldosterons
dabei die Blutdruckregulation beim Menschen beeinflusst, ist bisher unbekannt.
Vorstellbar wäre eine Steigerung der sympathischen Nervenaktivität im Verhältnis
zum vorherrschenden Blutdruck, also eine Verschiebung des Barorezeptor-
Setpoints hin zu höheren Blutdruckwerten.
Hinweise für eine solche Verschiebung fanden sich bereits in einer Studie unserer
Arbeitsgruppe für Angiotensin II. So zeigte dort eine selektive Angiotensin-II-
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Rezeptorenblockade mit Valsartan eine Modulation des Setpoints zu niedrigeren
Blutdruckwerten (Struck et al., 2002).
Weitere Hinweise auf eine sympathoexzitatorische Wirkung des Aldosterons
geben indirekte Daten über die Wirkung des Aldosteronantagonisten
Spironolacton auf die Herzfrequenzvariabilität (Heart Rate Variability, HRV) und
die 123I-MIGB-Szintigraphie bei Patienten mit chronischer Herzinsuffizienz (Barr et
al., 1995; MacFayden et al., 1997; Kasama et al., 2003). Hierbei zeigte sich unter
Spironolacton unter anderem eine Steigerung der time-domain Parameter in der
Analyse der HRV als Zeichen eines parasympathomimetischen Effektes sowie in
der Szintigraphie eine Verbesserung der Noradrenalinaufnahme des Herzmuskels.
Insgesamt scheint eine Aldosteronblockade also das autonome Nervensystem bei
Patienten mit einer Herzinsuffizienz günstig zu beeinflussen.
Die Autoren Yee und Struthers fanden nach intravenöser Aldosterongabe eine
Abschwächung der Bradykardie nach Stimulation der Barorezeptoren durch
Phenylephrin bei gesunden normotensiven Erwachsenen, und werteten dies als
Beeinträchtigung des Baroreflexes durch Aldosteron (Yee und Struthers, 1998).
Andere Arbeiten jedoch stehen in Widerspruch zu diesen Hypothesen. So fanden
Schmidt et al. bei der Analyse der HRV von jungen gesunden Probanden nach
akuter Aldosterongabe eine Erhöhung des kardialen Vagotonus (Schmidt et al.,
1999). Nach zwei- bis siebentägiger Gabe des Mineralokortikoides Fludrocortison
zeigte sich eine Abschwächung der muskulären sympathischen Nervenaktivität
(MSNA) bei jungen gesunden Probanden (Mion et al., 1994). Auch Izzo et al.
beschrieben schon 1983 nach Fludrocortisongabe eine Unterdrückung der
sympathischen Aktivität, hier gemessen als Plasma-Noradrenalinspiegel (Izzo et
al., 1983).
Diese Arbeiten belegen die komplexen Interaktionen zwischen Aldosteron und
dem vegetativen Nervensystem, die jedoch damit noch nicht vollständig aufgeklärt
sind.
13
1.2 Erfassung der Aktivität des autonomen Nervensystems
beim Menschen
Die Erfassung des sympathischen und insbesondere des parasympathischen
Nervensystems beim Menschen ist mit erheblichen methodischen Schwierigkeiten
verbunden. In den folgenden Absätzen werden daher die zurzeit gängigsten
Verfahren dargestellt und kritisch bewertet.
1.2.1 Noradrenalin-Spillover
Derzeit wird die Bestimmung des Noradrenalin-Spillover mittels Radiotracer als
Goldstandard für die Erfassung der sympathischen Efferenzen zu einem
Organsystem angesehen (Esler et al., 1988). Hierbei wird radioaktiv markiertes
Noradrenalin infundiert, welches später zu einem Teil über die Synapsen in das
Plasma übertritt („spillover“) und an organtypischen Venen entnommen und
gemessen werden kann. Da im Allgemeinen die Menge des abgegebenen
Noradrenalins zur Aktivität der sympathischen Efferenz proportional ist, erlaubt
diese Methode eine recht genaue und organspezifische Aussage über die
jeweilige sympathische Aktivität. Diese Methode ist jedoch invasiv und sehr
aufwendig und kann nur in wenigen Zentren durchgeführt werden. In der
vorliegenden Arbeit kommt sie daher nicht zur Anwendung.
1.2.2 Intraneurale Ableitung der muskulären sympathischen Nervenaktivität
mittels Mikroneurographie
Die Methode der Mikroneurographie wurde Mitte der sechziger Jahre des
zwanzigsten Jahrhunderts von Hagbarth und Vallbo entwickelt (Hagbarth et al.,
1968; Vallbo et al., 2004). Sie ermöglicht es, Potentialänderungen sympathischer
postganglionärer Neurone zu erfassen und somit eine präzise Aussage über die
sympathische Nervenaktivität zu machen. Dafür wird eine Mikroelektrode direkt in
einen Nervenfaszikel in die Umgebung sympathischer Fasern eingestochen. Die
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neuronalen Entladungen werden dann nach Verstärkung und Filterung als
Summenpotential, dem sogenannten Burst, dargestellt (siehe Abb. 2).
Zwei unterschiedliche Arten sympathischer Nervenaktivität können hierbei
abgeleitet werden:
Ø die muskuläre sympathische Nervenaktivität (MSNA) zur Innervation des
Muskelgefäßbettes und
Ø die sympathische Hautnervenaktivität (skin sympathetic nerve activity,
SSNA) zu den Erfolgsorganen der Haut
Die SSNA führt hierbei hauptsächlich vasokonstriktorische, sudomotorische und
pilomotorische Impulse zur Haut. Charakteristisch sind Bursts unterschiedlicher
Länge und Amplitude, der Rhythmus ist hierbei unregelmäßig und im Gegensatz
zur MSNA vom Herzrhythmus unabhängig. Eine Provokation gelingt durch
emotionale Stimuli wie Schreck oder mentalem Stress sowie durch Berührung und
thermale Reize. Klinisch imponiert dies dann als Schwitzen oder Aufstellen der
Körperbehaarung (Wallin et al., 1988).
Die MSNA ist in Ruhe durch kurze Sequenzen rhythmischer, pulssynchroner
Bursts abwechselnd mit Phasen relativer elektrischer Stille gekennzeichnet (siehe
dazu Abb. 2). Eine Aktivierung der MSNA führt im Wesentlichen zu einer
Vasokonstriktion und ist damit ein entscheidender Regulator des peripheren
Gefäßwiderstandes (Delius et al., 1972; Burke et al., 1977). Moduliert wird die
MSNA hauptsächlich über Baroreflexmechanismen, wobei eine Stimulation der
arteriellen Barorezeptoren die MSNA hemmt. Kurzfristige Blutdruckabfälle, z.B.
durch Orthostase, führen zu einer Stimulation der MSNA und folglich einer
peripheren Vasokonstriktion, während ein akuter Blutdruckanstieg mit Stimulation
der Barorezeptoren die MSNA inhibiert (Wallin et al., 1988).
15
Abbildung 2: Simultane Ableitung von MSNA und SSNA. Deutlich zu erkennen
sind die kardiale Rhythmik sowie die inverse Beziehung zu
Blutdruckveränderungen in der MSNA-Ableitung. Beides fehlt bei der SSNA (aus
Vallbo et al., 2004, Abb. 3).
SSNA skin sympathetic nerve activity – sympathische Hautnervenaktivität
MSNA muskuläre sympathische Nervenaktivität
Neben den Barorezeptoren wird die MSNA noch von verschiedenen anderen
Rezeptoren beeinflusst. Ein mögliches Provokationsmanöver zur Stimulation der
MSNA ist daher die endexpiratorische Apnoe, wobei über eine sich einstellende
Kombination aus Hypoxämie und Hyperkapnie periphere und zentrale
Chemorezeptoren erregt werden, was zu einer Stimulation der MSNA führt,
unabhängig von gleichbleibenden oder sogar ansteigenden Blutdruckwerten
(Delius et al., 1972). Eine weitere Möglichkeit bietet der Eiswasser- oder Cold-
pressor Test (CPT), bei dem durch Eintauchen der Hand in eiskaltes Wasser
afferente Signale von Schmerz- und Kälterezeptoren der Haut eine
Sympathikusaktivierung auslösen (Victor et al., 1987).
Die Aktivität des sympathischen Nervensystems variiert zwischen den einzelnen
Individuen relativ stark und reicht von 10-90 bursts/100 Herzschläge (Sundlöf et
al., 1977). Sie bleibt aber innerhalb einer Person relativ konstant (Fagius et al.,
1983), wobei die MSNA mit dem Altern ansteigt (Ng et al., 1993). Auch das
Geschlecht spielt eine Rolle, Frauen haben im Allgemeinen eine niedrigere
Atmung SSNA MSNA Blutdruck
Herzfrequenz
16
Aktivität als Männer (Ng et al., 1993). Das Körpergewicht korreliert mit der Aktivität
des sympathischen Nervensystems, wobei sich bei Übergewicht die MSNA erhöht
(Spraul et al., 1993). Schließlich wird die Ruheaktivität des sympathischen
Nervensystems durch das hormonelle System beeinflusst, z.B. durch ACTH,
Glucokortikoide oder Insulin (Dodt et al., 1998; Scherrer et al., 1993)
In den verschiedenen Muskelgefäßregionen des menschlichen Körpers ist die
sympathische Aktivität weitgehend identisch. Die MSNA ist sehr gut geeignet,
kurzfristige Änderungen des sympathischen Nervensystems zu erfassen, sie
korreliert gut mit dem renalen und kardialen Noradrenalin-Spillover (Wallin et al.,
1992; Wallin et al., 1996).
Eine Schwäche der Methode der Mikroneurographie ist die Abhängigkeit der
Qualität der Ableitung von der korrekten Elektrodenposition. Bereits eine geringe
Dislokation führt zu einer Verschlechterung des Signals. Dies macht eine
Ableitung über einen längeren Zeitraum oder bei körperlicher Aktivität unmöglich.
In sehr seltenen Fällen ist durch die direkte Lage der Elektrode im Faszikel eine
vorübergehende Parästhesie möglich, die sich in allen Fällen wieder zurückbildet.
Durchschnittlich 5 - 10 % der mittels Mikroneurographie untersuchten Probanden
berichten 1 - 3 Tage nach Ableitung über leichte Parästhesien, die wenige Tage
anhalten (Wallin et al.1988). Eine prospektive Studie zeigte, daß lediglich drei von
tausend Versuchspersonen länger andauernde Symptome aufzeigten, die jedoch
in jedem Fall spätestens innerhalb von sechs Monaten verschwanden (Eckberg et
al., 1989).
Bei der in unserer Studie verwendeten Methode wurde die MSNA vom Nervus
peroneus superficialis abgeleitet, wie in diversen Vorarbeiten unserer
Arbeitsgruppe beschrieben (Dodt et al., 1998; Heindl et al., 2001).
17
1.2.3 Herzfrequenzvariabilität
Die Herzfrequenz unterliegt zu großen Teilen Regulationsmechanismen des
autonomen Nervensystems. Der parasympathische Einfluß wird dabei mittels
Acetylcholin über den N. Vagus vermittelt. Der sympathische Einfluß wird dagegen
über die Freisetzung von Adrenalin und Noradrenalin vermittelt. Unter
Ruhebedingungen überwiegt dabei der Vagusreiz, so daß Variationen der
Herzfrequenz in Ruhe hauptsächlich vagal moduliert werden.
Die Messung der HRV ist eine einfache nichtinvasive Methode zur Erfassung der
autonomen Nervenaktivität. Hierbei wird die Variabilität der RR-Abstände im
abgeleiteten EKG analysiert (Task Force of the European Society of Cardiology,
1996).
Eine computergestütze Analyse der HRV im Zeitbereich (time domain) erlaubt
dabei Rückschlüsse auf die kardiale parasympathische Aktivität. Die RR-Intervalle
werden bestimmt und als sogenannte Normal-zu-Normal (NN)-Intervalle
dargestellt. Time domain Parameter können nun unter anderem als mittleres NN-
Intervall, als Differenz zwischen kürzestem und längstem NN-Intervall berechnet
werden. Wir verwendeten hauptsächlich:
Ø SDNN, standard deviation of NN intervals - die Standardabweichung der
NN-Intervalle
Ø NN50, die Anzahl der Intervallunterschiede aufeinanderfolgender NN-
Intervalle größer als 50 ms
Ø pNN50, erhalten durch die Division von NN50 durch die gesamte Anzahl der
NN-Intervalle
Ø RMSSD, root mean square of successive RR interval differences -
die Quadratwurzel des Mittelwertes der Summe der quadrierten Differenzen
aller sukzessiven NN-Intervalle
Bei der Analyse im Frequenzbereich (frequency domain) werden zyklische
Schwankungen der Herzfrequenz mittels Spektralanalyse erfasst und bestimmten
Frequenzbändern zugeordnet. Hierbei können zwei Hauptfrequenzbereiche
unterschieden werden:
18
Ø Der Hochfrequenzbereich (high frequency, HF) zwischen 0,15 und 0,4 Hz
korreliert mit vagalen Einflüssen auf den Sinusknoten
Ø Der Niedrigfrequenzbereich (low frequency, LF) von 0,04 bis 0,15 Hz
repräsentiert die Aktivität sowohl sympathischer als auch vagaler
Komponenten
Während die kardiale parasympathische Aktivität durch die HRV-Analyse im
Zeitbereich und im HF-Bereich gut erfasst wird, ist eine spezifische Aussage über
den kardialen Sympathikus durch die HRV-Analyse meist nicht möglich, da der
LF-Bereich sympathische wie parasympathische Einflüsse in sich vereint. Die
gleichzeitige Bestimmung der Noradrenalinfreisetzung am Herzen und der HRV
zeigte keinen verlässlichen Zusammenhang zwischen diesen beiden Parametern
kardialer sympathischer Aktivität (Kingwell et al., 1994; Grassi et al., 1999).
Wir setzten die HRV daher nur begleitend ein zur Untersuchung vagaler Einflüsse
in der Vorlaufphase des Experiments.
1.2.4 Katecholaminkonzentrationen in Plasma und Urin
Die Messung von Adrenalin und Noradrenalin bzw. ihrer Metabolite im Urin ist eine
der ältesten Methoden, die Aktivität des sympathischen Nervensystems zu
erfassen. Aus offensichtlichen Gründen ist diese Messung statisch und hat daher
über kurzzeitige Änderungen der sympathischen Aktivität eine weniger gute
Aussagekraft.
Die Messung der Plasmakatecholaminkonzentration ist aussagekräftiger,
unterliegt aber ebenfalls deutlichen Einschränkungen:
Das im Plasma zirkulierende Noradrenalin repräsentiert nur ca. 5 - 20% des an
den Nervenendigungen ausgeschütteten Transmitters (Hoeldtke et al., 1983).
Überwiegend wird Noradrenalin aus dem synaptischen Spalt durch aktiven
Transport wieder in die präsynaptische Nervenendigung aufgenommen, ein
weiterer Teil wird extraneural aufgenommen und in den peripheren Gewebszellen
durch Katechol-O-Methyltransferase und Monoaminooxydase inaktiviert
(Eisenhofer et al.,1994).
19
Des Weiteren ist das Verhältnis zwischen synaptischer Noradrenalinfreisetzung im
Gewebe und Übertritt in den Blutstrom in den einzelnen Organen unterschiedlich
ausgeprägt, in Abhängigkeit von der regionalen Durchblutung und Reuptake-
Mechanismen. So liegt die Noradrenalinfreisetzung in der Niere dreifach über der
Abgabe des Transmitters in den Blutkreislauf, in der Skelettmuskulatur beträgt sie
das Zwölffache und im Herzen mehr als das Zwanzigfache (Kopin et al., 1998).
Die Plasmakatecholaminkonzentration kann also nur ein grober Marker für die
allgemeine Aktivität des sympathischen Nervensystems sein und wird daher in
dieser Arbeit nur begleitend eingesetzt.
1.3 Fragestellung
Derzeit liegen widersprüchliche Untersuchungsergebnisse vor bezüglich
Aldosteron und dessen Wirkung auf das vegetative Nervensystem und
insbesondere auf den Baroreflex. Die Ursachen hierfür könnten zum Teil durch die
deutlichen Unterschiede in der verwendeten Aldosterondosis sowie der
unterschiedlichen Art und Dauer der Aldosterongabe in den verschiedenen
Studien bedingt sein. Auch die Art der Erfassung der Aktivität des autonomen bzw.
sympathischen Nervensystems könnte zu unterschiedlichen Untersuchungs-
ergebnissen geführt haben. Schließlich wäre es vorstellbar, daß Interaktionen des
Aldosterons mit anderen neuroendokrinen Systemen unter bestimmten
Voraussetzungen (zum Beispiel bei Krankheitsbildern wie der chronischen
Herzinsuffizienz) zu Modulationen der Aldosteronwirkung führen.
Ziel der vorliegenden Studie ist es, die akuten Wirkungen von Aldosteron auf das
autonome Nervensystem und den Baroreflex bei jungen gesunden Probanden
genauer zu analysieren. Wir stellten die Hypothese auf, daß Aldosteron auch dann
den autonom vermittelten Baroreflex beeinflusst, wenn es in einer geringeren
Dosis als in einer früheren Studie appliziert wird (Yee und Struthers, 1998).
Wir beobachteten hierfür an gesunden Probanden die akuten Effekte von
intravenös injiziertem Aldosteron in Ruhe und während der
Barorezeptoraktivierung und –deaktivierung durch vasoaktive Substanzen. Die
20
applizierte Aldosterondosis wurde so gewählt, daß die erzielten
Serumkonzentrationen von Aldosteron im hochphysiologischen Bereich lagen. Der
zeitliche Rahmen des Experiments sollte nach Möglichkeit sekundäre
Hormoneffekte via Natrium- und Wasserretention oder durch Angiotensin II
vermittelte Effekte ausschließen.
In unserer Studie wurde dabei die Aktivität des sympathischen Nervensystems als
MSNA im N. peroneus superficialis mittels Mikroneurographie direkt abgeleitet.
Des Weiteren wurde über eine fortlaufende EKG-Ableitung die HRV analysiert,
welche Rückschlüsse auf die kardiale parasympathische Aktivität erlaubt.
Während die HRV-Analyse bereits in einer früheren Untersuchung der akuten
Effekte des Aldosterons durchgeführt wurde (Schmidt et al., 1999), liefert unsere
Studie erstmals Daten über die Wirkungen des Aldosterons auf das sympathische
Nervensystem durch direkte Ableitung der MSNA bei gesunden Probanden.
21
2 Probanden und Methoden 2.1 Probanden
Wir führten unsere Studie an insgesamt 16 freiwilligen gesunden
Versuchspersonen beiderlei Geschlechts (acht Frauen und acht Männer) im Alter
zwischen 22 und 48 Jahren durch.
Vor Versuchsbeginn wurde jede Versuchsperson mündlich wie auch schriftlich
anhand eines Aufklärungsbogens (siehe Anhang) über den Inhalt der Studie sowie
über mögliche Nebenwirkungen der eingesetzten Medikamente und Risiken der
Ableitmethode aufgeklärt. Daraufhin legten sie Ihr Einverständnis schriftlich nieder
(siehe Anhang). Die Studie war von der Ethikkommission der Universität zu
Lübeck genehmigt worden. Für alle Teilnehmer galten identische Ein- und
Ausschlußkriterien sowie Gründe für einen Versuchsabbruch.
2.1.1 Einschlusskriterien
Ø gesunde Männer und Frauen im Alter zwischen 18 und 50 Jahren
Ø die praemenopausalen weiblichen Probandinnen befanden sich am
Versuchstag in der follikulären Phase des Menstruationszyklus, um
möglichen Effekten gonadaler Hormone auf das RAAS oder das autonome
Nervensystem Rechnung zu tragen (Hirshoren et al., 2002)
Ø Normgewicht
Ø Nichtraucher
Ø Schriftliche Einverständniserklärung
2.1.2 Ausschlusskriterien
Ø akute Erkrankung am Versuchstag
Ø anamnestisch schwere Vorerkrankungen, insbesondere des
Herzkreislaufsystems, Leber- oder Nierenerkrankungen
22
Ø regelmäßige Einnahme von Medikamenten inklusive oraler Kontrazeptiva
Ø Übergewicht (Body-mass-Index > 26 kg/m²)
Ø Regelmäßiger Nikotinabusus
2.1.3 Abbruchkriterien
Ø Widerruf der Einverständniserklärung durch den Probanden
Ø Überschreiten einer intraneuralen Stimulationsdauer von 45 Minuten beim
Auffinden der Ableitposition (bei längerer intraneuraler Stimulation nimmt
möglicherweise die Gefahr einer Nervenschädigung zu)
Ø Grobe Dislokation der Elektrode während des Versuches
Ø Unerwartete und schwerwiegende Reaktionen auf die durchgeführten
Maßnahmen
2.2 Versuchsablauf
2.2.1 Studiendesign
Die Gabe von Aldosteron bzw. Placebo erfolgte nach einem doppelblinden cross-
over Protokoll. Die Auswahl und Verschlüsselung der Substanz wurde am Morgen
des Versuchstages durch eine medizinisch-technische Assistentin vorgenommen.
Die Studie wurde je Proband an jeweils zwei Versuchstagen mit wenigstens
einwöchigem Abstand durchgeführt.
2.2.2 Versuchsvorbereitung
Die Probanden wurden angehalten, an den Tagen vor einer Untersuchung auf
eine möglichst normale Lebensführung zu achten sowie Alkoholkonsum zu
unterlassen. Am Versuchstag sollte auf koffein- und teeinhaltige Getränke
23
verzichtet werden und die letzte Mahlzeit vor Testbeginn mehr als drei Stunden
zurückliegen.
Nach ausführlicher Aufklärung und Einwilligung der Versuchsperson wurde
zwischen acht und neun Uhr am Morgen des Versuchstages die Testsubstanz als
Bolus intravenös verabreicht. Als Verum wurden 50 Mikrogramm Aldosteron
(Calbiochem-Novabiochem GmbH, Bad Soden) in 1ml 0,9 %-iger NaCl-Lösung
verwendet, als Placebo 1 ml 0,9 %-iger NaCl-Lösung ohne Zusätze.
Anschließend wurde der Proband entlassen und zwischen 13 und 14 Uhr
desselben Tages wieder einbestellt. Nach Entleerung der Blase nahm der
Proband nun auf dem Untersuchungsbett eine halbsitzende, entspannte
Körperhaltung ein. Eine 18 G-Venenverweilkanüle zur Gabe der vasoaktiven
Substanzen sowie zur Abnahme der Blutprobe wurde in einer Unterarmvene
platziert und mittels 0,9 %-iger NaCl-Lösung auf Durchgängigkeit überprüft.
Anschließend erfolgte die Injektion des zweiten Bolus der Testsubstanz (50
Mikrogramm Aldosteron oder Placebo) und Spülung der Kanüle mittels 0,9 %-iger
NaCl-Lösung. Dann wurden das EKG, der Atemgurt und die Blutdruckmanschette
angelegt.
Als nächstes wurde der N. peroneus superficialis des Probanden über dem
Fibulaköpfchen mittels Nervenstimulator aufgesucht und dann eine Ableitelektrode
in einer adäquaten Ableitposition im Nerven platziert.
Daraufhin entspannte sich der Versuchsteilnehmer für 10 Minuten, bevor das
Experiment unter kontinuierlicher Aufzeichnung von EKG, Atemkurve, arteriellem
Blutdruck und MSNA begann. Alle vier Parameter wurden dabei simultan mit einer
Abtastrate von 200 Hz digitalisiert und auf einem PC aufgezeichnet (Chart for
Windows, ADInstruments).
Unmittelbar vor Beginn der Aufzeichnung, also nachdem die Probanden
mindestens 30 Minuten ruhig gelegen hatten, wurde die Blutprobe zur Messung
von Katecholaminen, Aldosteron, Angiotensin II, Renin, Vasopressin, Kortisol,
Elektrolyten und Osmolalität über die liegende Verweilkanüle entnommen.
24
2.2.3 Versuchsprotokoll
Wir begannen das Experiment mit einer fünfzehnminütigen Vorlaufphase, in deren
Verlauf die Versuchsperson ruhig und entspannt auf dem Bett lag.
Es folgte nun als Beweis der korrekten intraneuralen Lage der Elektrode das
Manöver der endexspiratorischen Apnoe, also eine möglichst lange Pause
zwischen Exspiration und der folgenden Inspiration. Dies allerdings maximal so
lange, wie es keine größere Anstrengungen oder Körperbewegungen nach sich
ziehen würde, um eine Dislokation der Sonde zu vermeiden.
Nach weiteren drei Minuten Ruhe begannen wir in randomisierter Reihenfolge mit
der Infusion des ersten blutdruckwirksamen Medikamentes, Phenylephrin oder
Nitroprussid, in drei Stufen über jeweils fünf Minuten in entsprechenden
Dosierungen (Grassi et al., 1995).
Dieser Phase ließen wir eine dreißigminütige Erholungsphase ohne
Medikamenteninfusion folgen, in welcher die Kreislaufparameter wieder auf die
Ausgangswerte fielen. Der Proband wurde weiterhin angehalten, entspannt und
ruhig zu liegen.
Nach der Erholungsphase wurde die zweite vasoaktive Substanz infundiert.
Anschließend folgte eine Nachlaufphase von dreißig Minuten. Zuletzt wurde über
60 Sekunden der CPT als weitere unabhängige Sympathikusstimulation
durchgeführt. Anschließend wurde die Aufzeichnung beendet und die Versuchs-
apparatur vom Probanden entfernt (zur Veranschaulichung siehe Abb. 3).
Abbildung 3: schematische Darstellung des Versuchsablaufs
15min 3min 5min 5min 5min 30min 5min 5min 5min 30min1. 2. 3. 1. 2. 3.
Apnoe Cold Pressor
Start Vorlauf Infusion der Erholungs- Infusion der Nachlauf- Test Ende Blutentnahme 1.vasoaktiven phase 2.vasoaktiven phase
Substanz Substanz
25
Die abgeleiteten Parameter systolischer und diastolischer Blutdruck,
Herzfrequenz, Atemfrequenz und MSNA wurden in 60-Sekunden-Intervallen
ausgewertet. Die Parameter der letzten fünf Minuten der Vorlaufphase dienten als
Basiswerte für den Vergleich mit den folgenden Veränderungen. Da die
Apnoephasen meist keine halbe Minute dauerten, wurden hier die Werte der
letzten 15 Sekunden auf eine Minute hochgerechnet. Die 15 Minuten der beiden
dreistufigen Medikamenteninfusionen wurden jeweils vollständig ausgewertet. Die
letzten fünf Minuten der Erholungsphase und der Nachlaufphase wurden
ausgewertet, um eventuelle medikamentenunabhängige Veränderungen der
gemessenen Parameter aufzudecken. Die Werte der letzten 30 Sekunden des
CPT wurden auf eine Minute hochgerechnet und mit der letzten Minute vor der
Kälteexposition verglichen.
2.3 Mikroneurographie
Mit dem Nervenstimulator wurde zunächst transkutan mit einer Spannung von 30-
80 Volt, einer Reizdauer von 0,2 ms und einer Stimulationsfrequenz von 1 Hz der
Verlauf des N. peroneus superficialis aufgesucht. Die Stelle des Nervens, an
welcher die Stimulation die deutlichste Muskelkontraktion auslöste, wurde als
Punktionsstelle für die Ableitelektrode markiert. Die Referenzelektrode wurde etwa
3 bis 4 cm oberhalb dieser Stelle in das subkutane Fettgewebe eingebracht.
Anschließend wurde die Ableitelektrode unter Stimulation mit einer Spannung von
2-5 Volt, einer Reizdauer von 0,2 ms und einer Impulsfrequenz von 1 Hz
vorgeschoben, bis eine unwillkürliche, der Stimulationsfrequenz entsprechende
Muskelkontraktion der vom N. peroneus superficialis innervierten Muskulatur
auftrat oder der Proband Parästhesien angab. Die Elektrode wurde nun so
platziert, daß vom Probanden keine Parästhesien mehr angegeben wurden und
die Muskelkontraktionen bei einer Spannung von 1,5 Volt deutlich erkennbar
waren. Die intraneurale Position der Elektrode wurde kontinuierlich durch die
Reizung der intramuskulären Dehnungsrezeptoren mittels Beklopfen des
Muskelbauches überprüft. Anschließend wurde die Elektrode adjustiert, bis die
26
muskuläre sympathische Nervenaktivität in Form von Bursts erkennbar war und
ein gutes Signal-Rauschverhältnis vorlag.
Die korrekte Elektrodenlokalisation wurde dabei anhand folgender Kriterien
festgesetzt:
Ø Auftreten charakteristischer muskulärer sympathischer Nervensignale in
Form rhythmisch an den Herzrhythmus gekoppelter Entladungen (Bursts)
Ø Stimulierbarkeit durch Apnoemanöver
Ø Keine Registrierung neuronaler Entladungen nach Schreckreizen, die
typisch sind für sympathische Efferenzen zur Haut, ebenfalls keine
Entladungen unter Bestreichen der Haut, im Sinne sensibler Afferenzen
Ø Burstamplitude von mindestens dreifacher Höhe in Relation zum
Hintergrundrauschen
Für das Aufsuchen des N. peroneus superficialis wurde ein Nervenstimulator
(Model S48 Stimulator, Grass Instrument Company, Quincy, USA) verwendet. Als
Ableit- und Referenzelektroden standen dampfsterilisierte Wolframdrähte zur
Verfügung. Diese sind mit isolierendem Lack versehen, der sich beim
Durchstechen der Haut leicht zurückschiebt, und so die nur wenige Mikrometer
messende Spitze freigibt. Der Durchmesser der Elektroden betrug 0,2 mm. Die
Impedanz der Ableitelektrode war höher als die der Referenzelektrode.
Die über die Elektroden abgeleitete Entladung postganglionärer muskulärer
sympathischer Nervenfasern wurde zunächst 50000-mal verstärkt und
anschließend gefiltert (Bandbreite 700-2000 Hz). Nach Aufarbeitung durch eine
resistance-capacity-Einheit (RC-network) mit einer Zeitkonstanten von 0,1 s
erfolgte die Darstellung des Summenpotentials als mittlere Spannungs-
schwankung.
Um eine mögliche Schädigung des Nervens zu verhindern, wurde der Zeitraum für
das intranervale Auffinden der korrekten Ableitposition auf 45 Minuten, die
gesamte Verweildauer der Elektrode im Nerven auf maximal drei Stunden
begrenzt.
27
Zum Beweis einer korrekten intraneuralen Lage der ableitenden Elektrode wurden
in den Versuch zwei unterschiedliche Manöver zur Stimulation der MSNA
durchgeführt. Zu Beginn des Versuchs ließen wir den Probanden eine
endexpiratorische Apnoe durchführen, am Ende des Experiments wurde der CPT
eingesetzt.
2.4 Herzfrequenzvariabilität und hämodynamische Parameter
Die analogen Signale aller abgeleiteten Parameter (EKG, Blutdruck, Atemfrequenz
und Mikroneurographie) wurden online mit einer Abtastrate von 200 Hz digitalisiert
dargestellt und aufgezeichnet. Wir benutzten dafür PowerLab®-
Aufzeichnungshardware (ADInstruments, Australien) und Chart for Windows
Analysesoftware (Version 4.0, ADInstruments, Australien).
Das EKG wurde als bipolare Ableitung kontinuierlich mittels drei selbstklebenden
Einmalelektroden (ARBO® Kendall, Medizinische Erzeugnisse, GmbH) über die
gesamte Versuchszeit abgeleitet.
Für die HRV-Analyse wurden die EKG-Registrierungen zunächst visuell überprüft.
Ektopische Signale und Artefakte wurden manuell von der Analyse
ausgeschlossen. Anschließend wurde das RR-Intervall automatisch als eine
Funktion der Zeit mit Hilfe eines kommerziell erhältlichen und validierten Software-
Programms analysiert (HRV Module for Chart for Windows Version 1,
ADInstruments, Australien).
Im Zeitbereich wurden folgende Parameter analysiert: SDNN (standard deviation
of NN intervals), RMSSD (root mean square of successive RR interval
differences), und NN50/pNN50 (number/percentage of successive NN interval
differences exceeding 50 ms). Während SDNN Ausdruck der Gesamtvariabilität
ist, spiegeln RMSSD und pNN50 die sogenannte beat-to-beat Variabilität wider
und werden hauptsächlich von der kardialen parasympathischen Aktivität
bestimmt (Kleiger et al. 1995).
Bei der Analyse im Frequenzbereich wurden die zyklischen Schwankungen der
Herzfrequenz mittels Spektralanalyse erfasst und dem Niedrigfrequenzbereich
28
(0,04 - 0,15 Hz) bzw. dem Hochfrequenzbereich (0,15 - 0,40 Hz) zugeordnet.
Während die Schwankungen im Hochfrequenzbereich vor allem durch den Vagus
kontrolliert werden, reflektiert der Niedrigfrequenzbereich wahrscheinlich die
kardiale sympathische Aktivität mit einem zusätzlichen vagalen Anteil (Task Force
of the European Society of Cardiology, 1996). LF und HF Komponenten werden
auch, bezogen auf die Gesamt-Power, in normalized units (n.u.) angegeben.
Die Atemexkursion wurde in Höhe der unteren Thoraxapertur mittels eines
elastischen Gurts über einen Druckwandler (Pneumobelt, Nihon Kohden, Tokyo,
Japan) registriert.
Die Erfassung des arteriellen Blutdrucks erfolgte photoplethysmographisch durch
eine am Mittelglied des rechten Mittelfingers angebrachte pneumatische
Manschette (Finapress, Ohmeda 2300, BOC Health Care, Colorado, USA). Diese
Methode erlaubt die Feststellung relativer Blutdruckschwankungen mit großer
Zuverlässigkeit, während die gemessenen absoluten Blutdruckwerte nicht immer
mit den oszillometrisch gemessenen Werten übereinstimmen. Deshalb wurde der
von der Fingermanschette angezeigte Blutdruck durch dreimalige oszillometrische
Messung am Oberarm per Hand abgeglichen.
2.5 Durchführung der Baroreflextests
Die Modulation der MSNA durch den Baroreflex wurde von uns anhand Infusion
zweier vasoaktiver Substanzen getestet:
Ø als blutdrucksteigernde Substanz Phenylephrin (Baxter Healthcare
Corporation, Deerfield/USA; 10 mg Phenylephrin auf 50 ml 0,9 %-iger NaCl-
Lösung = 0,2 mg/ml)
Ø als blutdrucksenkende Substanz Nitroprussid (Schwarz Pharma GmbH;
6 mg Nitroprussidnatrium auf 50 ml 0,9 %-iger NaCl-Lösung = 0,12 mg/ml)
Die Substanzen wurden dabei in drei aufeinanderfolgenden Phasen ansteigender
Dosis per Venenverweilknüle in eine antecubitale Vene infundiert. Phenylephrin in
29
Dosen von 0,3/ 0,6/ 0,9 µg/kg/min, Nitroprussid in Dosen von 0,4/ 0,8/ 1,2
µg/kg/min (Grassi et al., 1995). Jede dieser Phasen dauerte fünf Minuten. Vor
Beginn dieser 15 Minuten setzten wir eine Einschwemmphase von 2:30 min mit
einer Infusionsgeschwindigkeit von 20 µg/min Phenylephrin und 12 µg/min
Nitroprussid. Diese Phase wurde nicht ausgewertet.
Zwischen den Infusionen der beiden Substanzen lag eine Pause von 30 Minuten.
Welche Substanz wir zuerst infundierten, wurde für jeden Probanden per
Zufallsprinzip ausgewählt.
Die Baroreflexvermittelte Modulation von MSNA und Herzfrequenz bestimmten wir
durch Berechnung der absoluten und der prozentualen Veränderung, und stellten
diese in Relation zu Änderungen des Blutdrucks unter Infusion der vasoaktiven
Substanzen.
2.6 Laboruntersuchungen
Die Katecholamine Adrenalin und Noradrenalin wurden in 5 ml-Spritzen
abgenommen und unverzüglich in Vakuumröhrchen (Vacutainer®, Amersham,
Großbritannien) überführt. Für die Entnahme von Aldosteron, Vasopressin, Renin
und Angiotensin II wurden EDTA- bzw. Serumröhrchen verwandt (S-Monovette®,
Sarstedt, Nymbrecht). Zur Vermeidung eines rasch einsetzenden Abbaus des
Angiotensin II wurde diesen EDTA-Röhrchen zusätzlich 100 µl des Amino-
peptidaseinhibitors Bestatin hinzugegeben. Die Proben wurden sofort in Eis
gekühlt und nach Versuchsende mit 4000 Umdrehungen/min bei 4 °C über 10
Minuten zentrifugiert. Die Überstände wurden in Polysterolröhrchen pipettiert (Fa.
Eppendorf). Anschließend wurden die Proben bei minus 80°C bis zur Bestimmung
gelagert.
Adrenalin (Normalwerte 30-86 pg/ml) und Noradrenalin (Normalwerte185-275
pg/ml) wurden mittels Hochdruckflüssigkeitschromatographie (Chromsystems®,
München) bestimmt. Die Intra- und Interassayvariationskoeffizienten liegen bei
weniger als 6%.
30
Mittels Radioimmunoassay bestimmt wurden Serumaldosteron (Diagnostic
Products Corporation, Los Angeles, California, USA; Intra- und
Interassayvariationskoeffizient 5,0% bzw. 6,9%), Angiotensin II (Peninsula,
Belmont, USA; Sensitivität: 0,3 pg/ml, Intra- und Interassayvariationskoeffizient 9%
bzw. 11%), Plasmarenin (Renin III Generation, Sanofi Diagnostics Pasteur,
Marnes-la-Coquette, Frankreich; Referenzbereich 3,6-20,1 pg/ml, Sensitivität
<1pg/ml, Intra- und Interassayvariationskoeffizient <5% bzw. <14.5%) und
Vasopressin (Buehlmann Laboratories AG, Allschwil, Schweiz; Referenzbereich
0-6,7 pg/ml, Sensitivität 1,25 pg/ml, Intra- und Interassayvariationskoeffizient
<15,3% bzw. <20,2%).
Die Bestimmung von Kortisol erfolgte enzymimmunologisch (Enzymun-Test®
Kortisol, Boehringer, Mannheim, Sensitivität: 27,6 nmol/l, Intra- und Interassay-
variationskoeffizient <5%).
Serumelektrolytkonzentrationen und Serumosmolalität wurden entsprechend der
Standardmethoden im Routinelabor der Klinischen Chemie der Medizinischen
Universität zu Lübeck durchgeführt.
2.7 Statistik
Die photoplethysmographisch gemessenen systolischen und diastolischen
Blutdruckwerte wurden jeweils über 60 Sekunden gemittelt und mit den
Standardabweichungen gespeichert.
Die Burstanzahl pro Minute (Burstfrequenz), die Burstanzahl pro 100 Herzschläge
(Burstinzidenz), sowie die total activity (Gesamtburstfläche) wurden als Parameter
für die MSNA manuell ermittelt. Diese wurden zusammen mit der Herzfrequenz
und dem arteriellen Blutdruck computergestützt für jede Minute analysiert. Für die
Vorlaufphase führten wir zusätzlich aus der EKG-Ableitung eine ebenfalls
computergestützte Analyse der HRV durch.
Die statistische Auswertung erfolgte mit Hilfe des Statistikprogramms SPSS auf
einem PC. Die erhaltenen Mittelwerte wurden initial auf Normalverteilung getestet.
31
Die Darstellung der Ergebnisse erfolgt als Mittelwert ± Standardfehler des
Mittelwerts (standard error of the mean: SEM).
Die Basiswerte der MSNA, der HRV-Analyse und der biochemischen Parameter in
den Aldosteron- und Placeboversuchen wurden mittels gepaarten T-Tests
verglichen.
Die Effekte der Behandlung mit Aldosteron oder Placebo und die Effekte der
Nitroprussid- und Phenylephrininfusionen auf MSNA, Herzfrequenz und Blutdruck
wurden mittels Analysis of Variance (ANOVA) mit dem Messwiederholungsfaktor
Zeit und dem Faktor Behandlung statistisch getestet. Auch die Evaluierung der
Effekte der endexpiratorischen Apnoe erfolgte mittels ANOVA. Wenn ANOVA
einen signifikanten Effekt anzeigte, wurde der Duncan post hoc Test
angeschlossen. Ein p-Wert <0,05 galt als statistisch signifikant.
32
3 Ergebnisse 3.1 Daten der Probanden
Von den 16 getesteten Personen konnte bei neun Probanden (vier Frauen und
fünf Männer) an beiden Versuchstagen über die gesamte Versuchszeit eine
adäquate Ableitqualität erreicht werden. Ein Studienteilnehmer zog sein
Einverständnis während des Versuches zurück, viermal kam es innerhalb der
beiden Versuchstage zu Dislokationen der Ableitelektrode, zwei Versuche konnten
wegen unzureichender Ableitqualität nicht vollständig ausgewertet werden. Keiner
der Teilnehmer klagte über länger als wenige Stunden andauernde
Missempfindungen.
Das Alter der Versuchspersonen betrug zwischen 22 und 48 Jahren (30,4±9,6
Jahre), das mittlere Körpergewicht zwischen 53 und 84 kg (69,1±10,9 kg), der
Body-mass-index betrug zwischen 18,3 und 25,8 kg/m² (22,6±2,6 kg/m²) und die
Größe zwischen164 und 185 cm (175±7 cm).
3.2 Ausgangswerte unter Ruhebedingungen
3.2.1 Laborparameter
Die Blutproben wurden jeweils kurz vor Versuchsbeginn, ca. eine Stunde nach der
zweiten Aldosterongabe entnommen.
Die zweimalige Injektion von je 50 µg Aldosteron am Versuchstag führte zu einem
signifikanten Anstieg der Serum-Aldosteronkonzentration auf 184,7±55,2 pg/ml
gegenüber 54,9±9,7 pg/ml in den Placeboversuchen.
Die Konzentrationen von Renin und Angiotensin II, sowie von Kortison,
Vasopressin, Adrenalin und Noradrenalin blieben dagegen unverändert.
Aldosteron bewirkte keine signifikanten Veränderungen in der Konzentration der
33
Serumelektrolyte Natrium, Chlorid und Kalium, sowie auch keine Veränderung der
Serumosmolalität (siehe Tab. 1).
Tabelle 1: Hormon- und Elektrolytwerte (Mittelwerte ± SEM) in Plasma bzw.
Serum nach Vorbehandlung mit Aldosteron und Placebo (n=9)
Placebo Aldosteron Aldosteron i.S. (pg/ml) 54,9 ± 9,7 184,7 ± 55,2 * Renin i.P. (pg/ml) 4,7 ± 0,8 5,0 ± 0,8 Angiotensin II i.P. (pg/ml) 5,7 ± 0,9 5,5 ± 1,3 Kortison i.P. (µg/dl) 8,5 ± 1,6 8,7 ± 1,2 Vasopressin i.P. (pg/ml) 2,9 ± 0,6 3,2 ± 0,6 Adrenalin i.P. (pg/ml) 24,7 ± 5,5 26,9 ± 5,2 Noradrenalin i.P. (pg/ml) 166,8 ± 39,0 140,0 ± 28,4 Natrium i.S. (mmol/l) 140,1 ± 0,4 139,5 ± 0,7 Chlorid i.S. (mmol/l) 107,5 ± 0,8 106,1 ± 0,4 Kalium i.S. (mmol/l) 3,8 ± 0,1 3,9 ± 0,1 Osmolalität i.S. (mosm/kg) 288,5 ± 1,0 289,5 ± 1,9
* p <0,05, i.S. im Serum, i.P. im Plasma
3.2.2 MSNA und hämodynamische Parameter
Es zeigte sich in den Vorlaufphasen nach Aldosteron- bzw. Placebogabe kein
signifikanter Unterschied der MSNA, gemessen als Frequenz (Bursts/min),
Inzidenz (Bursts/100 Herzschläge) und total activity (a.u.). Die Vorbehandlung mit
Aldosteron hatte also keinen Einfluß auf die MSNA in Ruhe. Auch die
Herzfrequenz sowie der systolische und diastolische Blutdruck in Ruhe wurden
durch die Aldosterongabe nicht signifikant verändert (siehe Tab. 2).
In einer dreißigminütigen Erholungsphase nach den Infusionen der vasoaktiven
Substanzen konnten MSNA und hämodynamische Parameter wieder zu ihren
Ruhewerten zurückkehren. Zum Ausschluß einer relevanten Veränderung im
Verlauf des Versuches wurden die Werte des Vorlaufs mit den Werten der letzten
fünf Minuten der Erholungsphase verglichen. Es fand sich hier keine signifikante
Veränderung (siehe Tab. 3).
34
Tabelle 2: Werte unter Ruhebedingungen (Mittelwerte ± SEM) von MSNA,
Blutdruck und Herzfrequenz nach Vorbehandlung mit Aldosteron und Placebo
(n=9)
Placebo Aldosteron p-Wert MSNA (Bursts/min) 16,4 ± 2,3 17,0 ± 2,2 n.s. MSNA (Bursts/100 H.S.) 26,2 ± 3,8 27,2 ± 3,5 n.s. MSNA total activity (a.u.) 266 ± 46 320 ± 46 n.s. systolischer BD (mmHg) 132,7 ± 5,8 132,3 ± 7,1 n.s. diastolischer BD (mmHg) 75,6 ± 4,0 75,8 ± 4,4 n.s. Herzfrequenz (/min) 63,1 ± 2,8 63,9 ± 3,1 n.s.
MSNA muskelsympathische Nervenaktivität, H.S. Herzschläge, a.u. arbitrary units,
BD Blutdruck, n.s. nicht signifikant
Tabelle 3: Vergleich von MSNA und Kreislaufparametern (Mittelwerte ± SEM) in
Vorlauf- und Erholungsphase (n=9)
Placebo Aldosteron Vorlauf Erholung p-Wert Vorlauf Erholung p-Wert MSNA (bursts/min) 16,4 ± 2,3 15,6 ± 2,3 n.s. 17,0 ± 2,2 16,5 ± 1,8 n.s.
MSNA total activity (a.u.) 266 ± 46 248 ± 43 n.s. 320 ± 46 309 ± 42 n.s.
Blutdruck sys- tolisch (mmHg) 132,7 ± 5,8 139,7 ± 4,4 n.s. 132,3 ± 7,1 130,0 ± 3,4 n.s.
Blutdruck dias- tolisch (mmHg) 75,6 ± 4,0 80,6 ± 2,7 n.s. 75,8 ± 4,4 72,2 ± 1,8 n.s.
Herzfrequenz (/min) 63,1 ± 2,8 61,5 ± 3,4 n.s. 63,9 ± 3,1 64,2 ± 3,4 n.s.
a.u. arbitrary units, n.s. nicht signifikant
35
3.2.3 Herzfrequenzvariabilität
Die Vorbehandlung mit Aldosteron hatte in der Vorlaufphase eine Erhöhung der
HRV-Parameter SDNN, RMSSD und NN50/pNN50 sowie der total power zur
Folge (p <0,05 für SDNN und total power) (siehe Tab. 4). Dies ist vereinbar mit
einer Erhöhung der kardialen vagalen Aktivität (Kleiger et al., 1995).
Tabelle 4: Werte der HRV unter Ruhebedingungen (Mittelwerte ± SEM) nach
Placebo- und Aldosteronvorbehandlung (n=9)
Placebo Aldosteron p-Wert RR Intervall (ms) 940,9 ± 45,6 967,6 ± 53,5 n.s. SDNN (ms) 48,6 ± 4,9 60,6 ± 5,9 0,02 RMSSD (ms) 37,8 ± 4,1 49,8 ± 8,7 0,06 NN50 (Anzahl) 54,1 ± 12,6 74,0 ± 16,1 0,09 pNN50 (%) 16,5 ± 13,9 24,2 ± 6,0 0,11 Total power (ms2) 2510,9 ± 513,1 3956,4 ± 677,4 0,02 LF (ms2) 942,3 ± 300,4 1341,1 ± 341,1 n.s. LF (n.u.) 57,0 ± 3,5 56,4 ± 5,2 n.s. HF (ms2) 550,8 ± 131,3 1069,6 ± 383,4 0,09 HF (n.u.) 37,1 ± 3,0 40,0 ± 5,3 n.s. LF/HF 1,7 ± 0,2 2,1 ± 0,8 n.s.
SDNN standard deviation of NN intervals - Standardabweichung der NN-Intervalle,
RMSSD root mean square of successive RR interval differences - Quadratwurzel
des Mittelwertes der Summe der quadrierten Differenzen aller sukzessiven RR-
Intervalle, NN50 Anzahl der Intervallunterschiede aufeinanderfolgender NN-
Intervalle größer als 50 ms, pNN50 Prozentsatz, erhalten durch die Division von
NN50 durch die gesamte Anzahl der NN-Intervalle, LF low frequency, HF high
frequency, n.u. normalized units, n.s. nicht signifikant
36
3.3 Ergebnisse unter Baroreflextestung
Die Stimulation bzw. Deaktivierung der arteriellen Barorezeptoren erfolgte mittels
intravenöser Infusion von vasoaktiven Substanzen in drei ansteigenden
Dosisstufen.
Die während der jeweils letzten Minute jeder Dosisstufe gewonnenen Daten
(Minute 5, 10 und 15) wurden mit den Werten der Vorlaufphase verglichen.
3.3.1 Barorezeptoraktivierung
Während der Phenylephrininfusion stieg der systolische Blutdruck von 132,7±5,8
auf 154,7±6,5 mmHg (Placebo), bzw. von 132,3±7,1 auf 142,6±7,0 mmHg
(Aldosteron). Der diastolische Blutdruck stieg von 75,6±4,0 auf 90,3±4,0 mmHg
(Placebo) bzw. von 75,8±4,4 auf 83,4±5,1 mmHg (Aldosteron).
Die Herzfrequenz sank von 63,1±2,8 auf 52,2±2,4 /min (Placebo) bzw. von
63,9±3,1 auf 53,4±3,2 /min (Aldosteron).
Die Frequenz der MSNA fiel von 16,4±2,3 auf 1,8±1,3 bursts/min (Placebo) bzw.
von 17,0±2,2 auf 2,3±1,1 bursts/min (Aldosteron). Die total activity sank von
309±42 auf 28±24 a.u. (Placebo), bzw. von 320±46 auf 35±18 a.u. (Aldosteron).
Diese Veränderungen wurden in gleichem Ausmaß sowohl in den Placebo- als
auch in den Aldosteronversuchen beobachtet (siehe Abb. 4).
37
Abbildung 4: Einfluss von Aldosteron oder Placebo auf Blutdruck, Herzfrequenz
und MSNA (Mittelwerte ± SEM) während einer Phenylephrin-Infusion bei neun
gesunden Probanden.
MSN
A (b
urst
s/m
in)
0
10
20
30
Baseline 5 min 10 min 15 min
Syst
. BD
(mm
Hg)
0
100
120
140
160
180
200
Baseline 5 min 10 min 15 min
Dia
st. B
D (m
mH
g)
0
40
60
80
100
120
140
Phenylephrininfusion
Her
zfre
quen
z (/m
in)
0
50
60
70
80# #
# #
―● Aldosteron
- -○ Placebo
# p <0,05 für Aldosteron und Placebo (ANOVA repeated measures factor time).
3.3.2 Barorezeptordeaktivierung
Die Infusion von Nitroprussid bewirkte einen Abfall des diastolischen Blutdrucks
von 75,6±4, auf 68,6±2,6 mmHg unter Placebo bzw. von 75,8±4,4 auf 67,2±3,2
mmHg unter Aldosteron. Der systolische Blutdruck blieb unverändert.
Die Deaktivierung der Barorezeptoren durch Nitroprussid führte zu einem Anstieg
der MSNA-Frequenz von 16,4±2,3 auf 38,3±3,2 bursts/min (Placebo), bzw.
17,0±2,2 auf 38,3±3,8 bursts/min (Aldosteron). Die total activity stieg von 309±42
auf 642±73 a.u. (Placebo) bzw. von 320±46 auf 841±119 a.u. (Aldosteron).
38
Auch die Herzfrequenz stieg unter Nitroprussid, von 62,6±3,0 auf 73,0±5,4 /min
(Placebo), bzw. von 63,2±3,2 auf 83,2±3,9 /min (Aldosteron). Der Herzfrequenz-
anstieg war nach der Vorbehandlung mit Aldosteron jedoch stärker. Diese durch
Aldosteron induzierte Verstärkung des Herzfrequenzanstiegs erreichte statistische
Signifikanz in der höchsten Dosisstufe (p = 0,03) der Nitroprussid-Infusion (siehe
Abb. 5).
Abbildung 5: Einfluss von Aldosteron oder Placebo auf Blutdruck, Herzfrequenz
und MSNA (Mittelwerte ± SEM) während einer Nitroprussid-Infusion bei neun
gesunden Probanden.
Baseline 5 min 10 min 15 min
Syst
. BD
(mm
Hg)
0
100
120
140
160
Nitroprussidinfusion
Baseline 5 min 10 min 15 min
Dia
st. B
D (m
mH
g)
0
40
60
80
100
Her
zfre
quen
z (/m
in)
0
60
70
80
90
100
#
#
*
MSN
A (b
urst
s/m
in)
0
20
40
60
80#
―● Aldosteron
- -○ Placebo
# p <0,05 für Aldosteron und Placebo (ANOVA)
* p <0,05 Aldosteron vs. Placebo (post hoc test)
39
3.4 Veränderungen während sympathoexzitatorischer Manöver
3.4.1 Endexpiratorische Apnoe
Die Apnoephasen dauerten im Mittel in den Placeboversuchen 29,0±5 Sekunden
und in den Aldosteronversuchen 28,7±3,7 Sekunden, und waren damit nicht
unterschiedlich lang. Es wurden jeweils die letzten 15 Sekunden der Apnoe
(hochgerechnet auf eine Minute) mit der letzten Minute vor der Apnoe verglichen.
Während der Apnoe kam es regelhaft zu einem signifikanten Anstieg der MSNA
(Burstfrequenz wie auch total activity) unter Aldosteron- und
Placebovorbehandlung. Der Frequenzanstieg der MSNA war dabei unter
Aldosteron etwas stärker als unter Placebo, ohne jedoch statistische Signifikanz
zu erreichen(102±31% gegenüber 65±36%, p=0,1) (siehe Abb. 6).
Auch der diastolische Blutdruck stieg während der Apnoe in beiden
Versuchsbedingungen an, erreichte dabei aber nur in den Aldosteron-
experimenten statistische Signifikanz (Anstieg von 4,8±1,9 mmHg, p=0,04
gegenüber 2,3±1,9 mmHg). Zwischen Placebo- und Verumversuchen gab es
keinen signifikanten Behandlungseffekt (siehe Abb. 7).
In beiden Versuchsbedingungen blieb der systolische Blutdruck während der
Apnoe konstant.
40
Abbildung 6: Einfluß der Apnoe auf die MSNA (Mittelwerte prozentual ± SEM,
n=9)
Ruhe Apnoe
% d
er B
asal
mes
sung
0
50
100
150
200
Placebo Aldosteron
Burstfrequenz
*
* p <0,05
Abbildung 7: Einfluß der Apnoe auf den diastolischen Blutdruck (Mittelwerte
prozentual ± SEM, n=9)
Diastolischer Blutdruck
Ruhe Apnoe
% d
er B
asal
mes
sung
0
20
40
60
80
100
120
Placebo Aldosteron
*
* p <0,05
41
3.4.2 Eiswassertest
Verglichen wurden die letzten 30 Sekunden des Eiswassertests (hochgerechnet
auf eine Minute) gegenüber der letzten Minute vor der Kälteexposition.
Da dieser Test oft starke körperliche Reaktionen wie Zittern hervorruft, verrutschte
hierunter mehrfach die Ableitelektrode, so daß jeweils nur fünf auswertbare
Signale pro Versuchsreihe zustande kamen. Die Berechnung eines statistischen
Unterschiedes in der Reaktion zwischen Verum- und Placebobedingungen
erscheint bei dieser geringen Anzahl nicht sinnvoll.
Eindeutig zeigt sich jedoch unter der Kälteexposition ein Anstieg der MSNA,
gemessen als Burstfrequenz (Anstieg von 63,2±30,3% unter Placebo bzw. von
153,8±81% unter Aldosteron) sowie als total activity (Anstieg von 135,9±41,7% in
den Placeboversuchen bzw. von 209±27,7% in den Aldosteronversuchen)
(siehe Abb. 8).
Abbildung 8: Einfluß des Cold-pressor Tests auf die MSNA (Mittelwerte
prozentual ± SEM, n=5)
Burstfrequenz
Ruhe Cold-pressor Test
% d
er B
asal
mes
sung
0
100
200
300
Placebo Aldosteron
42
4 Diskussion In unserer Studie wurden die akuten Effekte von intravenös verabreichtem
Aldosteron auf das autonome Nervensystem und auf den Baroreflex bei gesunden
jungen Probanden untersucht. Zusammengefasst bewirkten die beschriebenen
Aldosteroninjektionen eine Erhöhung einiger time domain Parameter der HRV in
Ruhe, welche mit dem kardialen Vagotonus korrelieren. Dieses Ergebnis weist
darauf hin, daß Aldosteron den Parasympathikus in Ruhe verstärken könnte.
Weiterhin fanden wir eine Steigerung des Herzfrequenzanstiegs während der
medikamentös induzierten Barorezeptordeaktivierung in den Aldosteron-
Versuchen. Dagegen beeinflusste Aldosteron weder die basale MSNA noch deren
Regulation durch den Baroreflex.
Im Folgenden werden die Ergebnisse unserer Studie mit denen anderer
Arbeitsgruppen verglichen und mögliche Ursachen für unterschiedliche
Ergebnisse diskutiert. In einem zweiten Teil werden Wirkmechanismen des
Aldosterons dargelegt, die möglicherweise die beobachteten Effekte erklären
könnten. Zuletzt werden methodische Einschränkungen der vorliegenden Studie
sowie die Übertragbarkeit der Ergebnisse auf chronische Krankheitsbilder
bewertet.
4.1 Vergleich mit anderen Studien
4.1.1 Fehlender Einfluss des Aldosterons auf die MSNA
Die mittels Mikroneurographie abgeleitete MSNA wurde in unserer Studie durch
die Gabe von Aldosteron nicht verändert. Eine zweite, nach der Veröffentlichung
unserer Daten durchgeführte Studie mit sehr ähnlichem Design konnte ebenfalls
keinen akuten Effekt von Aldosteron auf die basale MSNA bei gesunden
Probanden nachweisen (Monahan et al. 2007). Beide Studien zeichnen sich
dadurch aus, daß sie erstmals die Wirkung von intravenös appliziertem Aldosteron
43
auf das sympathische Nervensystem des Menschen mittels direkter Ableitung der
MSNA aus dem N. peroneus untersuchen. In mehreren früheren Untersuchungen
konnte eine gute Korrelation der MSNA mit Plasma-Noradrenalinspiegeln bei
gesunden Probanden gezeigt werden (Wallin et al., 1988). Darüber hinaus zeigten
Wallin et al. eine hohe Korrelation der MSNA mit dem kardialen und renalen
Noradrenalin-Spillover, dem Goldstandard für die Messung der Aktivität des
sympathischen Nervensystems (Wallin et al. 1992; Wallin et al., 1996). Bei
unveränderter MSNA nach Aldosterongabe ist daher mit hoher Sicherheit davon
auszugehen, daß Aldosteron in unserer Studie wie in der von Monahan et al.
tatsächlich keinen Einfluss auf die sympathische Nervenaktivität hatte.
Somit wird die in der Literatur diskutierte Annahme, daß Aldosteron den
Sympathikotonus erhöhen könnte, weder durch unsere Ergebnisse noch durch die
von Monahan et al. bestätigt. Die Hypothese, daß Aldosteron zu einer Aktivierung
des sympathischen Nervensystems führen könnte, beruht dabei zum einen auf
tierexperimentellen Studien, zum anderen auf Untersuchungen am Menschen.
Wang und Huang beobachteten nach intrazerebraler Aldosteroninfusion bei
Ratten eine Steigerung von Herzfrequenz und sympathischer Nervenaktivität
sowie eine Abschwächung des Baroreflexes. Das sympathische Nervensystem
wurde hierbei als renale sympathische Nervenaktivität (RSNA) erfasst (Wang et
al., 2003; Huang et al., 2005). Umgekehrt fanden Francis et al. nach Blockade
intrazerebraler Mineralokortikoidrezeptoren mit dem Aldosteronantagonisten
Spironolacton bei herzinsuffizienten Ratten eine Verbesserung der
Baroreflexfunktion. Auch hier wurde die RSNA abgeleitet (Francis et al. 2001).
Nach der Gabe von Spironolacton wurde auch in Untersuchungen am Menschen
eine Verbesserung des kardialen Sympathikotonus bzw. eine Zunahme
parasympathischer Einflüsse beschrieben (Barr et al., 1995; Mac Fayden et al.,
1997; Kasama et al., 2003). Die Autoren schließen daraus auf eine sympathikus-
steigernde Wirkung von Aldosteron. In den genannten Untersuchungen am
Menschen wurde die Aktivität des autonomen Nervensystems jedoch nur mittels 123 I-MIGB-Szintigraphie oder HRV-Analyse erfasst, die MSNA wurde nicht
abgeleitet.
44
Ganz im Gegensatz zu diesen Untersuchungsergebnissen fanden Mion et al. eine
Suppression der MSNA bei gesunden Probanden nach zwei bzw. sieben Tagen
einer Behandlung mit dem oralen Mineralokortikoid Fludrocortison (Mion et al.,
1994). Nach siebentägiger Behandlung mit Fludrocortison führte eine Steigerung
des kardialen Auswurfs infolge der Retention von Natrium und Wasser über den
Baroreflex zu einer Suppression der MSNA. Interessanterweise fand sich eine
Suppression der MSNA auch bereits nach zweitägiger Behandlung mit dem
Mineralokortikoid, obwohl zu diesem Zeitpunkt noch keine Veränderungen des
intravasalen Volumens und des kardialen Auswurfs nachweisbar waren. Als
Ursache dieses frühen Einflusses von Aldosteron auf die MSNA diskutiert der
Autor humorale Mechanismen, wie z.B. Veränderungen von Vasopressin, ANP
oder Angiotensin II.
Diese zum Teil gegensätzlichen Ergebnisse bezüglich der Wirkungen des
Aldosterons auf das sympathische Nervensystem könnten dadurch bedingt sein,
daß Aldosteron in den aufgeführten Studien unterschiedlich lange in
unterschiedlichen Anwendungsmodi und/oder Wirkdosen appliziert wurde. So
wurde in vielen tierexperimentellen Studien Aldosteron bzw. sein Antagonist
Spironolacton intrathekal infundiert und entfaltete seine Wirkungen durch
Stimulation bzw. Hemmung zentraler Mineralokortikoidrezeptoren. Unabhängig
davon lassen tierexperimentelle Studien sicher nur eingeschränkt Rückschlüsse
auf Wirkmechanismen beim Menschen zu. Darüber hinaus wurde in den Studien
am Menschen außer bei Monahan et al. nicht die Wirkung von Aldosteron selbst,
sondern seines Antagonisten Spironolacton untersucht. Schließlich wurde das
sympathische Nervensystem in den meisten angesprochenen human-
experimentellen Studien wie bereits erwähnt nur indirekt mittels 123 I-MIGB-
Szintigraphie oder HRV-Analyse erfasst (Barr et al., 1995; Mac Fayden et al.,
1997; Kasama et al., 2003).
Mion et al. lagen mit ihrer Fragestellung näher an den physiologischen
Interaktionen von Aldosteron und dem sympathischen Nervensystem beim
Menschen. Anders als wir in unserer Studie verwendeten sie jedoch den
Aldosteron-Agonisten Fludrocortison, der neben mineralokortikoiden auch
glukokortikoide Wirkungen besitzt. Neben der unterschiedlichen Applikationsart
45
(intravenös vs. oral) gibt es zwischen unserer Studie und der von Mion et al.
deutliche Unterschiede in der Zeitspanne des Versuchs. So können die von Mion
postulierten humoralen Wirkungen in unserer Studie keine Rolle gespielt haben.
4.1.2 Veränderungen der HRV und der Herzfrequenzregulation durch den Baroreflex
Während Aldosteron in unserer Studie die MSNA nicht veränderte, hatte es
signifikante Effekte auf die HRV. Nach Aldosterongabe erhöhte sich der time
domain Parameter SDNN als Zeichen einer vermehrten Variabilität der RR-
Abstände, sowie der frequency domain Parameter total power. Beide Parameter
werden durch den kardialen Vagotonus beeinflusst (Hayano et al., 1991; Kleiger et
al., 1995). Passend hierzu zeigten die ebenfalls parasympathisch regulierten time
domain Parameter RMSSD und NN50/pNN50 ein Trend zu einer Erhöhung in den
Aldosteronversuchen.
Die durch Aldosteron induzierten Veränderungen dieser time- und frequency
domain Parameter der HRV sind also mit einer Erhöhung des kardialen Vagotonus
vereinbar. Unser Ergebnis steht damit in Einklang mit einer früheren Untersuchung
von akuten Aldosteroneffekten bei gesunden Probanden, in der ein signifikanter
Anstieg von pNN50 nach intravenöser Gabe von 50 µg Aldosteron beschrieben
wurde (Schmidt et al., 1999).
Andererseits stimmen unsere Ergebnisse bezüglich der Regulation von
Herzfrequenz und MSNA durch den Baroreflex nicht mit zwei weiteren Studien
ähnlichen Designs überein. In unserer Studie verstärkte Aldosteron den Anstieg
der Herzfrequenz während der Barorezeptor-Deaktivierung mittels Nitroprussid.
Wir konnten jedoch keinen Effekt von Aldosteron auf die Herzfrequenz nach
Barorezeptor-Aktivierung mittels Phenylephrin oder auf die Baroreflexregulation
der MSNA nachweisen. Im Gegensatz hierzu schwächte Aldosteron in einer
Studie von Yee und Struthers den Abfall der Herzfrequenz während der
Phenylephrin-Infusion bei gesunden Probanden ab, wohingegen keine Effekte
während der Nitroprussid-Infusion auftraten. In dieser Studie wurde der Baroreflex
46
über indirekte Parameter wie Blutdruck und Herzfrequenz erfasst, die MSNA
wurde nicht abgeleitet (Yee und Struthers, 1998). Die erst kürzlich veröffentlichte
Studie von Monahan et al. konnte erstmals zeigen, daß Aldosteron sowohl die
Baroreflex-Kontrolle der Herzfrequenz als auch der MSNA abschwächt (Monahan
et al., 2007). Die Daten von Monahan et al. und teilweise auch die von Yee und
Struthers stützen das in der Literatur diskutierte Konzept, daß Aldosteron
möglicherweise die Baroreflexsensitivität beim Menschen vermindert.
Eine mögliche Erklärung für diese von unserer Studie abweichenden Ergebnisse
liegt in den unterschiedlichen Protokollen, die für die Baroreflex-Tests angewendet
wurden. So wurde der systolische Blutdruck in den Experimenten von Yee und
Struthers um durchschnittlich ca. 60 mmHg gesteigert oder gesenkt, in unseren
Experimenten jedoch nur um durchschnittlich 20 mmHg. Die in unserer Studie
erzielten leichten Blutdruckveränderungen bewirkten jedoch ebenfalls signifikante
reflektorische Anpassungen von MSNA und Herzfrequenz, und waren somit gut
geeignet, die Baroreflexregulation innerhalb physiologischer Grenzen zu
untersuchen. Dagegen verwendeten Monahan et al. zur Baroreflex-Testung die
modifizierte Oxford-Technik, welche auf kurz hintereinander folgenden
Bolusinjektionen von Nitroprussid und Phenylephrin basiert. Mit dieser Technik
wird wahrscheinlich die akute Baroreflexfunktion gut erfasst. Die von uns gewählte
kontinuierliche Infusion der vasoaktiven Substanzen in drei Dosisstufen stellt
ebenfalls ein etabliertes Protokoll zur Baroreflex-Testung dar (Grassi et al., 1995).
Möglicherweise führt hierbei eine Adaptation der Barorezeptoren zu einer
Verschleierung möglicher akuter Effekte des Aldosterons, was aber durchaus
physiologischen Bedingungen entspricht.
Darüber hinaus wurde Aldosteron in den genannten Studien in anderen
Dosierungen und Verabreichungsmodi als in unserer Versuchsreihe angewendet,
was ebenfalls zu unterschiedlichen Ergebnissen geführt haben kann. So
verabreichten Yee und Struthers wesentlich höhere Dosierungen des Aldosterons
als intravenöse Infusion. Die Konzentration von Aldosteron im Serum erreichte
dort im Mittel mit 489,8 pg/ml ca. das Siebenfache der Placebokontrollen, in
unserer Studie nur ca. das Dreifache. Eine Abhängigkeit der Wirkungen
Aldosterons von der applizierten Dosis ist bekannt (Schmidt et al., 1999) und wird
47
in Kapitel 4.2.1 (Seite 48 f.) dieser Arbeit weiter diskutiert. Im Übrigen kann selbst
bei Erkrankungen des Herzkreislaufsystems, bei denen ein pathogenetischer
Einfluss von Aldosteron angenommen wird oder bewiesen ist, der
Serumaldosteronspiegel im normalen oder hochnormalen Bereich liegen. Vor
diesem Hintergrund hat die Untersuchung der Effekte einer eher geringen
Aldosterondosis wie in unserer Studie ihre Berechtigung.
4.1.3 Hormon- und Elektrolytveränderungen
Die zweimalige intravenöse Gabe von 50 µg Aldosteron am Versuchstag
resultierte in einem Anstieg des Serumaldosterons auf das Dreifache der
Ausgangswerte. Die so erreichten Serumaldosteronspiegel liegen damit im
hochphysiologischen Bereich, wie sie bei gesunden Menschen nach dem
Aufrichten von einer liegenden in eine aufrechte Position oder nach einer
natriumarmen Diät von 10-15 mmol/Tag beobachtet werden (Coghlan et al.,
1979). Solche Werte finden sich aber auch bei Patienten mit kardiovaskulären
Erkrankungen, bei denen eine pathogenetische Rolle des Aldosterons vermutet
wird oder bereits erwiesen ist, wie der chronischen Herzinsuffizienz (Sigurdsson et
al., 1994; Kato et al.,1996) oder dem arteriellen Hypertonus (Kurbanov et al.,
2003).
Die von uns gewählte Dosis sowie der Zeitrahmen der Aldosteron-Vorbehandlung
führten zu einer Erhöhung des Serumaldosteronspiegels ohne Veränderungen der
Elektrolyte, insbesondere Natrium und Kalium, und der Osmolalität. Auch blieben
die Spiegel von Renin und Angiotensin II, sowie von Kortisol, Vasopressin und der
Plasmakatecholamine unbeeinflußt. Somit konnten in unserer Studie akute
Aldosteron-Effekte in vivo untersucht werden, die wie beabsichtigt unabhängig von
Natrium- und Wasserretention sowie Angiotensin II vermittelt werden.
48
4.2 Mögliche Wirkungsweisen des Aldosterons
Im nächsten Abschnitt werden einige Wirkmechanismen des Aldosterons
dargelegt, die möglicherweise die in unserer Studie beobachteten Effekte erklären
könnten.
4.2.1 Genomische und nichtgenomische Hormonwirkungen
Durch die zweimalige Gabe des Aldosterons am Versuchstag wurden akute bis
subakute Aldosteronwirkungen erfasst. Die Wirkung des Aldosterons wurde dabei
möglicherweise einerseits durch frühe genomische Wege übermittelt. Dieser Weg
ist seit langem bekannt und beinhaltet unter anderem die bereits angesprochene
Natrium- und Wasserresektion unter gleichzeitiger Kaliumexkretion. Die volle
Hormonwirkung wird dabei erst nach Stunden bis Tagen erreicht. Andererseits ist
sehr gut vorstellbar, daß Aldosteron in unserer Studie auch nichtgenomische
Wirkungen entfaltet, die mit einer Latenz von Sekunden bis Minuten auftreten
(siehe dazu auch Kapitel 1.1.1, Seite 7 ff.). Eine genaue Differenzierung zwischen
genomischen und nichtgenomischen Effekten ist auf der Grundlage unseres
Studiendesigns nicht möglich.
Bei den wahrscheinlich nichtgenomisch übermittelten Wirkungen scheint unter
anderem die Höhe des Aldosteronspiegels die Effekte des Aldosterons auf das
kardiovaskuläre System entscheidend zu beeinflussen. So beobachteten Schmidt
et al. nach der Gabe von 0,5 mg Aldosteron bei den Probanden innerhalb von
Minuten, also über nichtgenomische Mechanismen, einen Tonusanstieg der
peripheren Gefäße. Niedrigere Dosen von 0,05 mg Aldosteron (ähnlich der von
uns gewählten Dosierung) führten dagegen jedoch nicht zu einer peripheren
Vasokonstriktion, sondern erhöhten im späteren Verlauf des Versuches den
kardialen Vagotonus (Schmidt et al, 1999).
Des Weiteren scheint auch die Interaktion von Aldosteron mit dem adrenergen
System Einfluss auf die kardiovaskulären Reaktionen zu haben. Diese Hypothese
wurde für die nichtgenomischen Mechanismen ebenfalls von Schmidt et al. bereits
in einer Studie untermauert (Schmidt et al., 2001). In dieser kam es nach
49
Vorbehandlung der Probanden mit dem Betablocker Esmolol nach
Aldosterongabe zu einem Blutdruckanstieg, nach Vorbehandlung mit dem
Betarezeptoragonisten Dobutamin führte Aldosteron jedoch zu einer milden
Blutdrucksenkung. Bei allen Betrachtungen über die Wirkungen von Aldosteron ist
also zu berücksichtigen, daß zumindest die schnelle Modulation des
Herzkreislaufsystems abhängig ist von der Aldosteronmenge und dem
Erregungszustand des sympathischen Systems, auf welchen diese
Aldosteronmenge trifft.
4.2.2 Zentrale und periphere Wirkungen
In unserer Studie bleibt offen, ob Aldosteron den kardialen Vagotonus in Ruhe und
die Baroreflex-Regulation der Herzfrequenz über zentrale oder periphere
Wirkmechanismen beeinflusst. Daß Aldosteron durchaus über zentrale MR auf
das autonome Nervensystem Einfluss hat, zeigen verschiedene Tierversuche. In
Experimenten an Ratten injizierte Gómez-Sánchez Aldosteron intraventrikulär
(Gómez-Sánchez, 1997). Dabei kam es zu einem signifikanten Blutdruckanstieg,
welcher nach ebenfalls zentraler Gabe eines MR-Antagonisten (Prorenon)
reversibel war.
Studien am Menschen zeigten bisher allerdings, dass eine Erhöhung des
Vagotonus eher durch eine Blockade des zentralen MR auszulösen war (Yee et
al., 2001; Fletcher et al., 2004). Aldosteron könnte jedoch ebenfalls zu einer
zentral vermittelten Erhöhung des Vagotonus führen, indem es zentrale
nichtklassische MR aktiviert, deren Bedeutung bisher nicht vollständig geklärt ist.
Diese Art von zentralen MR zeichnen sich unter anderem dadurch aus, dass sie
nicht durch den klassischen MR-Antagonisten Spironolacton zu beeinflussen sind
(Lösel et al., 2004).
Es erscheint also durchaus denkbar, dass Aldosteron in unseren Experimenten
über einen zentralen Wirkmechanismus eine allgemeine Verstärkung des basalen
Vagotonus bewirkt. In dem erhöhten basalen Vagotonus könnte auch eine
Erklärung für den beobachteten stärkeren Anstieg der Herzfrequenz während der
Baroreflexdeaktivierung in den Aldosteronversuchen liegen. Die plötzliche
Unterbrechung dieses erhöhten Vagotonus durch den Blutdruckabfall könnte zu
50
einer überschießenden Reaktion des Herzens im Sinne einer verstärken
Herzfrequenzzunahme geführt haben.
Neben möglichen zentralen Effekten des Aldosterons könnten jedoch auch
periphere Wirkmechanismen zu den in unserer Studie beobachteten
Veränderungen der Herzfrequenzregulation führen. So wäre eine verstärkte
Ansprechbarkeit der Endorgane - in diesem Fall des Herzens - gegenüber
Katecholaminen eine mögliche Erklärung für die beobachteten
Herzfrequenzveränderungen. Dieser Einfluss konnte bereits in mehreren Studien
für Glukokortikoide gezeigt werden, so führt z.B. nach Hydrocortisonvorbereitung
die intraarterielle Gabe von Noradrenalin zu einer signifikanten Steigerung des
Gefäßwiderstandes (Sudhir et al., 1989; Hauck et al., 1997).
Daß für Aldosteron ähnliches gilt, zeigen Versuche von Weber et al.: Die durch
Noradrenalin angeregte Kontraktion von Hasenarterien konnte durch die
Hinzugabe von Aldosteron verstärkt und verlängert werden. Dies geschieht
wahrscheinlich, indem Aldosteron den Abstrom von Noradrenalin vom Rezeptor
der Gefäßmuskelzelle hemmt (Weber et al., 1982).
4.2.3 Interaktion von Aldosteron mit Stickstoffmonoxid
Eine weitere Möglichkeit, wie Aldosteron die Ansprechbarkeit der Endorgane
beeinflussen könnte, liegt in der Interaktion des Hormons mit Stickstoffmonoxid
(NO). NO kann physiologischerweise als Botenstoff von Endothelzellen an die
umliegenden glatten Muskelzellen abgegeben werden (auch endothelium derived
relaxing factor). Freigesetztes NO führt über eine Aktivierung der Guanylatzyklase
mit Erhöhung des second messengers cGMP zu einer Tonussenkung der glatten
Gefäßmuskelzelle. Für NO wurden in Tierversuchen weitere Effekte
nachgewiesen, so fand sich eine Hemmung der vaskulären und chronotropen
Reagibilität gegenüber einer Stimulation des kardialen Sympathikus sowie eine
Verstärkung der vagalen Reaktion des Herzens (Bucher et al., 1992; Choate et al.,
1999; Sears et al., 1999).
Es gibt aus anderen Tierversuchen deutliche Hinweise darauf, dass Aldosteron die
Konzentration von NO wie auch der NO-Synthase reduziert (Chun et al., 2003).
Vermutet werden hierfür posttranskriptionelle Mechanismen, der Effekt kann über
51
die Gabe von Spironolacton aufgehoben werden. Wenn Aldosteron also
tatsächlich die Bioverfügbarkeit des NO herabsetzt, könnte darüber
möglicherweise die verstärkte Herzfrequenzsteigerung unter Nitroprussid in den
Aldosteron-Versuchen unserer Studie erklärt werden.
4.3 Einschränkungen der Studie und kritische Einordnung der
Ergebnisse
4.3.1 Kritische Einordnung der Methode der Mikroneurographie
Wie bereits erwähnt, konnte in mehreren früheren Untersuchungen eine gute
Korrelation der MSNA mit Plasma-Noradrenalinspiegeln sowie dem kardialen und
renalen Noradrenalin-Spillover bei gesunden Probanden gezeigt werden (Wallin et
al., 1988; Wallin et al. 1992; Wallin et al., 1996). Aufgrund dieser Untersuchungen
wird die MSNA in vielen humanexperimentellen Untersuchungen als Surrogat für
die kardiale sympathische Nervenaktivität verwendet.
Einschränkend ist zu bemerken, dass in Ausnahmefällen auch eine differentielle
Aktivierung verschiedener Organsysteme durch den Sympathikus beschrieben
wurde. Azevedo et al. fanden beispielsweise nach der Gabe des nichtselektiven
Betablockers Carvedilol eine Reduktion des kardialen Noradrenalin-Spillovers,
vermutlich über eine Blockade peripherer Betarezeptoren. Die MSNA blieb
gleichzeitig aber unbeeinflusst (Azevedo et al., 2001).
Es ist daher nicht mit absoluter Sicherheit auszuschließen, dass Aldosteron in
unserer Studie trotz unveränderter MSNA möglicherweise die kardiale
sympathische Aktivität erhöhte und somit eine gesteigerte Herzfrequenzantwort
auf Nitroprussid bewirkte.
52
4.3.2 Methodische Einschränkungen der HRV-Messung
In unserer Studie konnten wir mittels Analyse der HRV Veränderungen feststellen,
die auf eine Erhöhung des kardialen Vagotonus hinweisen. Trotz einiger
Unzulänglichkeiten der Methode wird die HRV Messung breit zur Evaluierung vor
allem des parasympathischen Anteils des autonomen Nervensystems eingesetzt.
So wird die HRV zum Beispiel durch Atmung und Alter der Probanden verändert,
und es bestehen deutliche interindividuelle Unterschiede (Goldberger et al., 2001).
Davon weitgehend unbeeinflusst bleiben die HF-Bereiche, welche den
Parasympathikus repräsentieren. Der sympathische Anteil des autonomen
Nervensystems wird durch die HRV jedoch, unter anderem aus technischen
Gründen, nur unzureichend abgebildet. So besteht der den Sympathikus
repräsentierende Niedrigfrequenzbereich in der Spektralanalyse wohl zu einem
gewissen Anteil auch aus parasympathischen Effekten, welche von denen des
Sympathikus nicht zu trennen sind (Task Force of the European Society of
Cardiology, 1996).
Die optimale Aufzeichnungsfrequenz zur Analyse der Herzfrequenz wird in der
Literatur mit 250-500 Hz angegeben (Task Force of the European Society of
Cardiology, 1996). Die relativ geringe Aufzeichnungsfrequenz von 200 Hz in
unserer Studie könnte dazu geführt haben, dass wir keinen eindeutigen Effekt von
Aldosteron auf die frequency domain Parameter nachweisen konnten.
4.3.3 Einschränkungen bei der Übertragbarkeit der Ergebnisse
Es muss sicherlich unterschieden werden zwischen akuten und chronischen
Effekten des Aldosterons. In unserer Studie wurden akute Aldosteroneffekte bei
gesunden Probanden untersucht, die unabhängig von Natrium- und
Wasserretention sowie Angiotensin II vermittelt wurden. Bei den beobachteten
Effekten handelt es sich um nichtgenomische oder frühe genomische
Hormonwirkungen.
Demgegenüber führt die chronische Gabe eines Mineralokortikoids bei gesunden
Personen über klassische genomische Wirkpfade zu einer Natrium- und
Wasserretention und zu einer Steigerung des kardialen Auswurfs. Wahrscheinlich
53
über den Baroreflex kommt es nachfolgend zu einer Suppression der MSNA (Mion
et al., 1994). Darüber hinaus könnte infolge eines über längere Zeit erhöhten
Aldosteronspiegels auch eine Verschiebung des Baroreflexsetpoints auftreten,
und damit eine Veränderung des gesamten Baroreflexes. Ähnliche Daten, welche
diese Vermutung nahe legen, fanden sich bereits in einer Studie unserer
Arbeitsgruppe für Angiotensin II (Struck et al., 2002).
Akute Wirkungen des Aldosterons können also nicht ohne weiteres auf Zustände
mit chronischem Hyperaldosteronismus übertragen werden. Ebenfalls nur
eingeschränkt möglich ist eine Übertragung von Ergebnissen aus Studien, die
Aldosteron-Effekte bei jungen, gesunden Menschen beschreiben, auf Menschen
mit einer chronischen Aktivierung des sympathischen Nervensystems und des
RAAS. Bei der chronischen Herzinsuffizienz besteht beispielsweise einerseits eine
Erhöhung des Sympathikotonus, andererseits liegen erhöhte Spiegel von Renin,
Angiotensin II und Aldosteron vor (Ferguson et al., 1990; Kaye et al., 1995).
Die genannten Probleme bei der Übertragbarkeit von Ergebnissen betreffen fast
alle Studien, welche die Effekte von Aldosteron beim Menschen untersuchen.
Trotz dieser allgemeinen Einschränkungen beschreibt unsere Studie umfassend
die akuten Effekte einer relativ geringen Dosis von Aldosteron auf das autonome
Nervensystem und den Baroreflex bei gesunden Personen. Dabei wurden
erstmals die akuten Wirkungen des Aldosterons auf das sympathische
Nervensystem beim Menschen mittels mikroneurographischer Ableitung der
MSNA direkt untersucht.
54
4.4 Ausblick
Von der Komplexität der Interaktionen zwischen Aldosteron und dem autonomen
Nervensystem konnte in dieser Studie nur ein kleiner Ausschnitt aufgedeckt
werden.
Eine pauschale Aussage über allgemeine Wirkungen von Aldosteron, wie sie in
vielen vorangegangen Studien getätigt wurden, scheint problematisch. Vielmehr
kristallisiert sich eine sehr differenzierte Wirkungsweise des Aldosterons heraus,
im Sinne eines Modulators in den Regelmechanismen der Kreislaufregulation.
Welche Wirkung letztendlich entfaltet wird, scheint erstens sehr stark von der
Dosis des Aldosterons abhängig zu sein, und zweitens davon, auf welche
Verhältnisse bzw. welchen Tonus des autonomen Nervensystems das Aldosteron
im Organismus trifft.
In weitergehenden Studien müsste versucht werden, die Wirkpfade des
Aldosterons weiter zu differenzieren. So könnte über klar definierte Zeitachsen mit
Messungen nach wenigen Stunden sowie nach mehreren Tagen stärker zwischen
genomischen und nichtgenomischen Wirkungen unterschieden werden.
Ein weiterer zu untersuchender Ansatz erscheint auch die Interaktion von
Aldosteron und dem Botenstoff NO im Sinne einer Verminderung der
Bioverfügbarkeit von NO durch Aldosteron.
55
5 Zusammenfassung In Tierversuchen wurde gezeigt, daß Aldosteron die Baroreflexfunktion
abschwächt. Bezüglich des Einflusses von Aldosteron auf das autonome Nerven-
system und den Baroreflex beim Menschen bestehen derzeit uneinheitliche
Untersuchungsergebnisse. In der vorliegenden Arbeit werden die akuten bzw.
subakuten Effekte zweier Aldosteroninjektionen bei neun gesunden Probanden
auf das autonome Nervensystem und den Baroreflex in einem doppelblinden,
placebokontrollierten cross-over Design untersucht. Die parasympathische
Nervenaktivität wurde mittels HRV-Analyse und das sympathische Nervensystem
über eine direkte Ableitung der MSNA mittels Mikroneurographie erfasst. Die
Baroreflexkontrolle von MSNA und Herzfrequenz wurde mittels intravenöser
Infusion vasoaktiver Substanzen getestet.
Die Injektion von Aldosteron erhöhte die Aldosteronspiegel im Serum auf ca. das
Dreifache im Vergleich zu Placebo. Die basale MSNA, der Blutdruck und die
Herzfrequenz wurden durch Aldosteron nicht beeinflusst. Aldosteron bewirkte
Veränderungen einiger Parameter der Herzfrequenzvariabilitätsanalyse, die mit
einer Verstärkung des kardialen Vagotonus in Ruhe vereinbar sind. Des Weiteren
führte Aldosteron zu einer Zunahme des reflektorischen Anstiegs der
Herzfrequenz während Deaktivierung der Barorezeptoren durch Nitroprussid. Die
Baroreflex-Kontrolle der MSNA wurde durch Aldosteron jedoch nicht verändert.
Die von uns beobachteten Wirkungen des Aldosterons stimmen teilweise mit
vorhergehenden Studien am Menschen überein. Abweichende Ergebnisse im
Vergleich mit anderen Studien sind hauptsächlich darauf zurückzuführen, daß
Aldosteron unterschiedlich lange in unterschiedlichen Anwendungsmodi und
Wirkdosen appliziert wurde. Unser Versuchsdesign erlaubt keine Aussage
darüber, ob die beobachteten Wirkungen des Aldosterons zentral oder peripher
vermittelt wurden oder ob es sich um nichtgenomische oder frühe genomische
Wirkungen handelt.
Unsere Studie zeigt, dass eine physiologische Aldosterondosis akute bzw.
subakute Veränderungen innerhalb des autonomen Nervensystems und der
Baroreflex-Funktion bei gesunden Probanden hervorruft. Dabei wurde erstmals für
diese Fragestellung die MSNA direkt abgeleitet.
56
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65
7 Anhang 7.1 Aufklärungsbogen
Sehr geehrte Probandin, sehr geehrter Proband,
Sie erwägen, an unserer Untersuchung über die Rolle von Aldosteron (ein Hormon
der Nebennierenrinde) bei der Regulation des autonomen (=unabhängigen)
Nervensystems teilzunehmen. Vielen Dank dafür! Ein Anteil des autonomen
Nervensystems, das sogenannte sympathische Nervensystem, ist mit dem
arteriellen Blutdruck eng verknüpft und scheint auch eine Rolle bei der Entstehung
des Bluthochdrucks zu spielen. Diese Information dient dazu, Ihnen den Ablauf
der wissenschaftlichen Untersuchung zu erläutern. Außerdem sollen Sie informiert
werden, ob für Sie durch die Teilnahme Risiken entstehen und wie häufig diese
sind.
Zuerst müssen wir klären, ob bei Ihnen eine Erkrankung vorliegt, die gegen eine
Durchführung der Untersuchung spricht. Zu diesem Zweck werden wir Sie
gründlich befragen, Ihnen Blut abnehmen und ein EKG durchführen. Stellt sich
heraus, daß Sie für die Teilnahme der Untersuchung geeignet sind und möchten
teilnehmen, beginnt die Studie, in der Sie am Versuchstag zweimal das Hormon
Aldosteron oder eine Lösung ohne Wirkstoff (ein sogenanntes Placebo) injiziert
bekommen. Ob sie den Wirkstoff oder das Placebo bekommen, weiß der
Untersucher ebenso wenig wie Sie, weil allein dieses Wissen das
Untersuchungsergebnis beeinflussen könnte. Umso wichtiger ist es deswegen,
daß Sie sich und Ihren Blutdruck gut beobachten. Am Versuchstag führen wir
dann die Ableitung der sympathischen Nervenaktivität durch. Dieser Versuch wird
dann im Abstand von mindestens einer Woche wiederholt.
Die sympathische Nervenaktivität wird über eine haarfeine Nadel, die in einen
oberflächlich gelegenen Nerven am Unterschenkel eingestochen wird, abgleitet.
Das Aufsuchen des Nervens mit der Nadelelektrode ist oft etwas unangenehm. Ist
eine gute Ableitposition gefunden, ist die Untersuchung schmerzfrei. Dies ist für
die folgende etwa 2,5 Stunden dauernde Ableitung sehr wichtig, da Sie entspannt
und ruhig liegen sollen. Es werden während dieser Zeit einige Tests durchgeführt,
66
die dazu dienen, die Aktivität des sympathischen Nervensystems für kurze Zeit zu
steigern und zu unterdrücken. Hierzu wird Ihnen eine Venenverweilkanüle am Arm
gelegt, über die Ihnen nacheinander ein blutdrucksenkendes und ein
blutdrucksteigerndes Medikament infundiert wird. Diese beiden Medikamente sind
kurz wirksam, leicht steuerbar und werden Ihren Blutdruck nur geringfügig
beeinflussen. Dies reicht jedoch aus, um messbare Veränderungen des
sympathischen Nervensystems hervorzurufen. Sie werden außerdem zu Beginn
noch gebeten, die Luft so lange wie möglich anzuhalten. Während der gesamten
Zeit leiten wir die sympathische Nervenaktivität ab, entnehmen einmal Blut über
die Venenverweilkanülle, registrieren den Blutdruck (über eine Manschette am
Finger) und das EKG.
Unerwünschte Wirkungen:
Durch die Ableitung der sympathischen Nervenaktivität über eine Nadelelektrode
kann prinzipiell der Nerv geschädigt werden. Gelegentlich treten nach der
Untersuchung Mißempfindungen oder Kribbelgefühle im Unterschenkel auf, die
nach einigen Tagen verschwinden. Ganz selten können diese auch länger
anhalten, was in unserem Labor bisher jedoch noch nie vorgekommen ist. Durch
das Legen einer Venenverweilkanüle kommen sehr selten Infektionen oder
Gerinnselbildungen vor. Nicht auszuschließen ist natürlich eine Unverträglichkeit
gegen den Wirkstoff Aldosteron.
7.2 Einverständniserklärung
Hiermit erkläre ich mich zur Teilnahme an der Studie „Einfluß von
Mineralokortikoiden auf die Regulation des sympathischen Nervensystem bei
gesunden Personen“ bereit. Ich wurde über Ablauf und Risiken der Studie
ausführlich aufgeklärt. Ich versichere, daß meine Einwilligung freiwillig erfolgt. Mir
ist bekannt, daß ich sie zu jedem Zeitpunkt zurückziehen kann.
Lübeck, den:.................. Unterschrift des Probanden:..................................
67
8 Danksagung Meiner Doktormutter, Frau PD Dr. med. Silke Heindl danke ich für die Vergabe
des Promotionsthemas und für ihre intensive und engagierte Betreuung meiner
Arbeit, die konstruktive Kritik und fortwährende wissenschaftliche Diskussion
sowie die gute menschliche Zusammenarbeit.
Herrn Prof. Dr. Med. Christoph Dodt, danke ich herzlich für sein immer offenes
Ohr während der experimentellen Phase der Studie, insbesondere bei kniffligen
Fragen der mikroneurographischen Technik.
Frau Christiane Otten aus dem Klinischen Labor danke ich für die Durchführung
der zahlreichen Hormonbestimmungen und die liebenswerte Beratung in labor-
technischen Fragen.
Meinen Probanden danke ich für die Teilnahme an dieser Studie, ihre Ausdauer
und die nette Zusammenarbeit.
Meinen Eltern danke ich, daß sie mir das Studium der Medizin durch ihre
Unterstützung ermöglicht haben.
Meiner Frau Andrea danke ich, daß sie mir immer den Rücken frei gehalten hat,
und meiner Tochter Jula, daß sie da ist.
68
9 Lebenslauf
Jörg Holzschneider Schubertstraße 7a 22083 Hamburg Persönliche Angaben: Geburtsdatum: 26. Dezember 1976 Geburtsort: Düsseldorf Familienstand: verheiratet, eine Tochter ______________________________________________________________________ Schulausbildung: 08/83 - 07/87 Grundschule in Meerbusch 08/87 - 05/96 Mataré Gymnasium in Meerbusch 08/93 –02/94 Ottawa Hills Highschool, Grandrapids, Michigan/USA 1996 Abitur am Mataré Gymnasium ______________________________________________________________________ Zivildienst: 08/96 - 09/97 Zivildienst – Behindertenbetreuung ______________________________________________________________________ Studium: 10/97-05/04 Studium der Medizin an der medizinischen Universität zu Lübeck 09/99 Physikum 08/00 1. Staatsexamen 03/03 2. Staatsexamen 05/04 3. Staatsexamen ______________________________________________________________________ Arzt im Praktikum/ Assistenzarzt: 07/04-09/04 Arzt im Praktikum in der Abteilung für Naturheilverfahren und rehabilitative Medizin, Asklepios Klinik Nord, Hamburg 10/04-09/06 Assistenzarzt in der Abteilung für Naturheilverfahren und
rehabilitative Medizin, Asklepios Klinik Nord, Hamburg Seit 10/06 Assistenzarzt in der I. Medizinischen Abteilung, Asklepios Klinik
Nord, Hamburg ______________________________________________________________________ Zeitraum der Dissertation: 01/02-09/02 experimentelle Arbeit in der Arbeitsgruppe von Professor C. Dodt,
Medizinische Klinik I der Universität zu Lübeck 02/06 Artikel der Arbeit erscheint im „Journal of Neuroendocrinology“