Download - Biochemie I Aminokyseliny a peptidy
![Page 1: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/1.jpg)
Biochemie I
Aminokyseliny a peptidy
![Page 2: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/2.jpg)
Aminokyseliny a peptidy
(vlastnosti, stanovení a reakce)
![Page 3: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/3.jpg)
( -COOH, -NH2 nebo -NH-)
prostorový vztah aminoskupiny a karboxylové skupiny:
- (=2-), -(=3-)..... -(= poslední)
-alanin: +H3N-CH2-CH2-COO-
-aminobutyrát (GABA): +H3N-CH2-CH2-CH2-COO-
AMINOKYSELINY
Když se řekne AK
![Page 4: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/4.jpg)
-aminokyseliny: konfigurace (podle Fischera)
COO- COO-
D: H CNH3
+ L: NH3+ CH
R R
Kódované aminokyseliny (20): -aminokyseliny (kromě prolinu – NH2 skupina zabudována do cyklu)). Alfa = aminoskupina na uhlíku, který
nese karboxylovou skupinu.
AMINOKYSELINY
![Page 5: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/5.jpg)
L--aminokyseliny:
kódované (= proteinogenní, viz dále)
nekódované:
- odvozené od kódovaných aminokyselin
-Tyrkatecholaminy (dopamin, adrenalin, tyroxin...)
-vzniklé modifikacemi bílkovin (posttranslační modifikace)
- metabolické meziprodukty (ornithin, citrulin)
AMINOKYSELINY
![Page 6: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/6.jpg)
Kódované aminokyseliny:
Polarita: N (nepolární), P (neutrální polární), K (kyselá) a Z (zásaditá). Esenciální: pro člověka
OO-
C
C
H H
NH3
+
OO-
C
C
H CH3
NH3
+
OO-
C
C
H CH
NH3
+ CH3
CH3
OO-
CHCH3
CH3C
C
H
NH3
+
CH2
Název / zkratka Vzorec Polarita Esenciální
GlycinGly
N
N
AlaninAla
N
N
ValinVal
N
E
LeucinLeu
N
E
![Page 7: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/7.jpg)
Polarita: N (nepolární), P (neutrální polární), K (kyselá) a Z (zásaditá). Esenciální: pro člověka
Kódované aminokyseliny:
OO-
C
C
H CH
NH3
+ CH3
CH2 CH3
OO-
C
C
H CH2
NH2
+ CH2
CH2
OO-
C
C
H CH2
NH3
+
OO-
OHC
C
H CH2
NH3
+
OO-
C
C
H CH2
NH3
+
NH
IsoleucinIle
N
E
ProlinPro
N
N
FenylalaninPhe
N
E
TyrosinTyr
P
N
TryptofanTrp
N
E
Název / zkratka Vzorec Polarita Esenciální
![Page 8: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/8.jpg)
Polarita: N (nepolární), P (neutrální polární), K (kyselá) a Z (zásaditá). Esenciální: pro člověka
Kódované aminokyseliny:
OO-
C
C
NH3
+
H CH2 NH+
CHNH
C
CH
OO-
OHC
C
H CH2
NH3
+
OO-
C
C
H CH
NH3
+ OH
CH3
OO-
SHC
C
H CH2
NH3
+
OO-
C
C
H CH2
NH3
+
S CH3CH2
HistidinHis
Z
N
SerinSer
P
N
ThreoninThr
P
E
CysteinCys
P
N
MethioninMet
N
E
Název / zkratka Vzorec Polarita Esenciální
![Page 9: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/9.jpg)
Polarita: N (nepolární), P (neutrální polární), K (kyselá) a Z (zásaditá). Esenciální: pro člověka
Kódované aminokyseliny:
Název / zkratka Vzorec Polarita Esenciální
OO-
C
C
H CH2
NH3
+
CH2 CH2 CH2 NH3
+
OO-
C
C
NH3
+
H CH2 CH2 CH2NH C
NH2
NH2
+
OO-
OO-C
C
H CH2
NH3
+
C
OO-
OO-C
C
H CH2
NH3
+
CH2 C
OO-
ONH2C
C
H CH2
NH3
+
C
OO-
ONH2C
C
H CH2
NH3
+
CH2 C
LysinLys
Z
E
ArgininArg
Z
N
Asparagová kyselinaAsp
K
N
Glutamová kyselinaGlu
K
N
AsparaginAsn
P
N
GlutaminGln
P
N
![Page 10: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/10.jpg)
Naučit se AK včetně označeníhmotnosti v Tab jsou uváděny o 18 nižší, tedy takové jaké jsou v bílkovinném řetězci
![Page 11: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/11.jpg)
Rozdělení podle chemické povahy postranních řetězců
Funkční skupiny:
Alifatické Aromatické Hydroxylové Sulfhydrylové Kyselé Basické Polární Nepolární
![Page 12: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/12.jpg)
Hydrofobní aminokyseliny
![Page 13: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/13.jpg)
Polární aminokyseliny
![Page 14: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/14.jpg)
Kyselé aminokyseliny
![Page 15: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/15.jpg)
Bazické aminokyseliny
![Page 16: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/16.jpg)
Větvené aminokyseliny
• leucin, valin, izoleucin• energetické substráty• nezbytné v těžkých stavech (sepse, polytraumata)• součástí specializovaných roztoků aminokyselin
![Page 17: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/17.jpg)
Kódované aminokyseliny:
Jednopísmenkové zkratky
Proč jsou v tabulce vzorce s náboji? obojetné ionty = amfionty
celkový náboj amfiontu: součet všech nábojů (pro Gly v pH 7 = 2)
volný náboj amfiontu: algebraický součet nábojů (pro Gly v pH 7 = 0)
OO-
C
C
H H
NH3
+
![Page 18: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/18.jpg)
kyselina: HA H+ + A-
např. CH3-COOH H+ + CH3-COO-
termodynamická disociační konstanta
zdánlivá
Ka a
aa
H A
HA
.
KH A
HAA
+ -
přičemž K Ka A
H A
HA
.
Úvod do teorie elektrolytické disociace:
![Page 19: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/19.jpg)
báze: B + H2O BH+ + OH-
např: CH3-NH2 + H2O CH3-NH3+ + OH-
bazická zdánlivá disociační konstanta:
ale: Kw = [H+] . [OH-] a tedy:
po spojení:
[H2O] zahrnu do konstanty a vypočtu 1/KB:
KBH OH
B H OB
+ -
.[ ]2
[ ][ ]
OHK
H
w
KBH K
B H H OB
w
+
.[ ].[ ]2
1K
B H
BH KB w
][
.[ ]
+
Kyselá disociační konstanta KA ionisované formy báze B (např. CH3-NH3+)
je tedy rovna:
KK
KA
W
B
Úvod do teorie elektrolytické disociace:
![Page 20: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/20.jpg)
-COOH ,-COOH imidazolium -SH -NH3+ fenol -NH3
+ guanidinium
2,5 4,0 6,0 8,3 9,5 10,1 10,5 12,5
KYSELÉ DISOCIAČNÍ KONSTANTY pKA SKUPIN
VYSKYTUJÍCÍCH SE V BÍLKOVINÁCH
![Page 21: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/21.jpg)
-karboxylová C-koncová 1,7 - 2,6 1,8 - 3,6
imidazolová His 6,0 5,6 - 7,0
-aminová Lys 10,53 9,4 - 11,0
sulfhydrylová Cys 8,33 8,3 - 8,6
Funkční skupina
Aminokyselina
Hodnoty pKA nalezené
ve volných aminokyselinách
Hodnoty pKA
nalezené v bílkovinách
,-karboxylová
Asp, Glu 3,86; 4,25 3,0 - 4,7
-aminová N-koncová 8,8 - 10,7 7,9 - 10,6
fenolová Tyr 10,07 9,8 - 10,8
guanidylová Arg 12,48 11,6 - 12,6
Hodnoty pKA disociovatelných skupin v aminokyselinách a bílkovinách (25 oC)
![Page 22: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/22.jpg)
Mám roztok slabé kyseliny. Jak se bude měnit pH, když budu přidávat NaOH?
Na začátku: jen HA, množství A- odpovídá množství přidaného louhu.
převedeme na pH: (Hendersonova - Hasselbalchova rovnice)
KH A
HAA
+ -
H KHA
AA
+
-
pH pKA
HAA
log
TITRAČNÍ KŘIVKY SLABÝCH KYSELIN
![Page 23: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/23.jpg)
TITRAČNÍ KŘIVKY SLABÝCH KYSELIN
![Page 24: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/24.jpg)
Titrační křivka glycinu
![Page 25: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/25.jpg)
OO-
OO-C
C
H CH2
NH3
+
CH2 C
OO-
C
C
H CH2
NH3
+
CH2 CH2 CH2 NH3
+
OO-
C
C
NH3
+
H CH2 NH+
CHNH
C
CH
![Page 26: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/26.jpg)
Cystin = cystinylcystein
![Page 27: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/27.jpg)
Titrační křivka cystindihydrochloridu
![Page 28: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/28.jpg)
DEFINICE: pH, při němž se amfiont nepohybuje ve stejnosměrném
elektrickém poli (interakce s dalšími ionty, závisí na prostředí - pufr);
označujeme pI
Isoionický bod: pH, při němž je v destilované vodě volný náboj iontu nulový.
ISOELEKTRICKÝ BOD
![Page 29: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/29.jpg)
př.: Gly (titruji Gly.HCl) KA1 KA2
Z = +1 (Gly1+) 0 (Gly) -1 (Gly-1)
Ale v pH = pI platí: [Gly1+] = [Gly-1]
takže:
OOH
C
C
H H
NH3
+
OO-
C
C
H H
NH3
+
OO-
C
C
H H
NH2
pH pKGlyA
1log
[ ]Gly
pH pKGly
A
2log
[ ]
Gly
21 2
pH pK pKGly
A A
log
[ ]
Gly
pI pK pKA A
( ) /1 2
2
ISOELEKTRICKÝ BOD
![Page 30: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/30.jpg)
Více disociovatelných skupin: rozhodují ty, které "sousedí" s pI (nutno načrtnout titrační křivku)
Pro polyionty (např. bílkoviny) tuto rovnici nelze použít (příliš mnoho pKA v
okolí pI)
Isoelektrické body kódovaných aminokyselin
AK pI AK pI AK pI AK pI
Gly 6,0 Ser 5,7 Phe 5,5 His 7,6
Ala 6,0 Thr 5,6 Tyr 5,7 Lys 9,6
Val 6,0 Cys 5,0 Trp 5,9 Arg 10,8
Leu 6,0 Met 5,7 Asn 5,4 Asp 3,0
Ile 6,0 Pro 6,4 Gln 5,6 Glu 3,2
![Page 31: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/31.jpg)
Absorpce UV záření: aromatické (především Tyr a Trp) u 280 nm Absorpční spektra 1: hovězího sérového albuminu (1 mg/ml), 2: lidského imunoglobulinu (1
mg/ml) a 3: DNA (0,1 mg/ml), optická délka kyvety 1 cm.
Optická aktivita: konfigurace (nesouvisí přímo se smyslem rotace)
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
210 230 250 270 290 310 330
vlnová délka [nm]
abso
rbance
1
23
OPTICKÉ VLASTNOSTI
![Page 32: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/32.jpg)
Chemické reakce AK
Stanovení AK (reakce
aminoskupin): ninhydrin,
Sangerovo činidlo, dansylchlorid
![Page 33: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/33.jpg)
Reakce postranních řetězců: modifikační reakce - různá specifita
např.
značení bílkovin radioaktivním jodem
blokování SH skupin (proti oxidaci a vzniku disulfidových můstků)
O
+ I2OHC
C
H CH2
NH
R2
R1
O
OHC
C
H CH2
NH
R2
R1I
O
+ ICH2-CONH2C
C
H CH2
NH
R2
R1
SH
O
C
C
H CH2
NH
R2
R1
SCH2-CONH2 + HI
Chemické reakce AK
![Page 34: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/34.jpg)
Nejdůležitější reakce (hypothetická): vznik peptidové vazby
CH CNH3
+
R1
OO- CH CNH3
+
R2
OO- OO-+ CHNH3
+C
R1 O
NH CH
R2
C
Chemické reakce AK
![Page 35: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/35.jpg)
Chemické reakce AK
![Page 36: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/36.jpg)
Chemické reakce AK
![Page 37: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/37.jpg)
N- konec (začátek), C-konec (konec) acylaminokyseliny, např. Gly.Ala.His = glycylalanylhistidin
Pozor: Ala.Tyr Tyr.Ala
OO- OO-CH
CH3
C
O
NH CH C
CH2
NH3
+CH
CH2
C
O
NH CH C
CH3
NH3
+
OH OH
Nomenklatura peptidů
![Page 38: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/38.jpg)
PŘIROZENÉ PEPTIDY
Zvláštnosti struktury:
nekódované aminokyseliny (ornithin, -alanin ...)
často i D-aminokyseliny
někdy i tzv. -peptidové vazby (Glu)
cyklické struktury (laktamy, disulfidové vazby)
větvené struktury
blokování konců (pyroglutamát, glycinamid)
![Page 39: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/39.jpg)
• meziprodukty odbourávání bílkovinných prekursorů
• synthesa pomocí speciálních enzymových reakcí
(ne na ribosomech cestou protheosynthesy)
Biosynthesa
![Page 40: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/40.jpg)
di a tripeptidy (glutathation, umělý aspartám...)
peptidové hormony (oxytocin, vasopresin....přechod k proteohormonům)
neuromodulátory: enkefaliny (pentapeptidy), endorfiny (15 - 32 AK)
peptidová antibiotika (mnoho nekódovaných AK)
peptidové zoo- a fytotoxiny (hadi, štíři, apamin, falloidiny a amanitiny: Amanita
phalloides)
protaminy (malé bazické lineární peptidy, mlíčí ryb)
polyaminokyseliny (buněčné stěny bakterií: poly--L-Glu, poly--D-Glu)
Skupiny přirozených peptidů
![Page 41: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/41.jpg)
Skupiny přirozených
peptidů
![Page 42: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/42.jpg)
URČOVÁNÍ CELKOVÉHO AMINOKYSELINOVÉHO SLOŽENÍ
AK1-AK2-AK3 ....AKn kyselá nebo bazická hydrolysa AK1 + AK2 + AK3 +....+ AKn
(určit kvalitativní i kvantitativní jednotlivé aminokyseliny -
chromatografické dělení)
![Page 43: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/43.jpg)
URČOVÁNÍ SEKVENCE AMINOKYSELIN V ŘETĚZCI
Edmanovo odbourávání
![Page 44: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/44.jpg)
Sangerova reakce
URČOVÁNÍ N-KONCOVÉ
AMINOKYSELINY
![Page 45: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/45.jpg)
URČOVÁNÍ N-KONCOVÉ
AMINOKYSELINY
Edmanovo odbourávání
![Page 46: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/46.jpg)
a) aktivace (aktivní estery, anhydridy, azidy,
karbodiimidová synthesa)
b) blokování skupin, které nemají reagovat
c) synthesa peptidové vazby
d) odblokování
O-X OO- OO-+CH CNH
R1
" CH CNH3
+
R2
" CHNH3
+C
R1
"
O
NH CH
R2
" C
Q
R10 R10 R10 R10 + HX
SYNTHESA PEPTIDŮ in vitro
![Page 47: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/47.jpg)
Chromatografické metody pro separaci proteinů
• Gelová chromatografie
• Ionexová chromatografie
• Chromatografie s hydrofóbní interakcí
• Afinitní chromatografie
![Page 48: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/48.jpg)
Ionexová chromatografie
• Určena pro separaci látek nesoucích kladný nebo záporný náboj
• Afinita iontů k ionexu závisí na velikosti náboje
• V případě proteinů hraje zásadní roli pH !
• Celulosové a dextranové ionexy
![Page 49: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/49.jpg)
Ionexy
• Katexy – záporný náboj vazba kationtů
silné – sulfo (S), sulfopropyl(SP) OSO3-
slabé – karboxy (C), karboxymethyl (CM) COO-
• Anexy – kladný náboj vazba aniontůslabé – diethylaminoethyl (DEAE)silné – triethylaminoethyl (TEAE)
![Page 50: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/50.jpg)
Ionexová chromatografie proteinů
• Náboj bílkoviny závisí na pH prostředí a isoelektrickém bodu bílkoviny
• pH < pI bílkovina nese kladný náboj separace na katexu
• pH > pI bílkovina nese záporný náboj separace na anexu
• pH = pI celkový náboj bílkoviny je nulový nelze provést ionexovou chromatografii
![Page 51: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/51.jpg)
Ionexová chromatografie
• Nanášení vzorku – nízká iontová síla
• Eluce – gradientová• Zvyšováním iontové síly • Změnou pH
Použití – purifikace a zakoncentrování proteinu, výměna pufru
![Page 52: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/52.jpg)
Typická ionexová chromatografie
Loading starts
Loading ends,Low salt wash begins
Protein absorbance
Peak of unbound protein
Salt gradient
0
1M
Salt gradient begins
Salt gradient ends
Eluted peaks of weakly bound (I), moderately bound (II)
and tightly bound (III) proteins
IIIII
I
![Page 53: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/53.jpg)
![Page 54: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/54.jpg)
Roztok obsahující kyselinu asparagovou (pI = 2,98), glycin (pI = 5,97), threonin (pI = 6,53) a lysin (pI = 9,74) v citrátovém pufru pH 3,0 byl nanesen na sloupec Dowex-50 (katex). V jakém pořadí tyto aminokyseliny ze sloupce vytekly?
Příklad 1
OO-
C
C
H H
NH3
+
OO-
OO-C
C
H CH2
NH3
+
C
OO-
C
C
H CH
NH3
+ OH
CH3OO-
C
C
H CH2
NH3
+
CH2 CH2 CH2 NH3
+
![Page 55: Biochemie I Aminokyseliny a peptidy](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061617/56815041550346895dbe41d9/html5/thumbnails/55.jpg)
Na sloupec DEAE-celulosy (anex) byl nanesen vzorek
obsahující sérový albumin, ureasu a chymotrypsinogen
(isoelektrické body pI jsou 4,9; 5,4 a 9,5) v pufru pH 7,0.
V jakém pořadí tyto aminokyseliny ze sloupce vytekly?
Příklad 2