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Validacin de los mtodos microbiolgicos
CARACTERISTICAS DE LOS RESULTADOSDE MEDICION DE METODOS
MICROBIOLOGICOS
Bqca. QM Alicia I. Cuesta,Consultora Internacional de la FAO
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Objetivos de la clase
Conceptos de precisin, veracidad o justeza y exactituden mtodos microbiolgicos.
Estudios de intercomparacin: tipos, caractersticasgenerales.
Incertidumbre de medicin: Concepto, clculo, expresinen le resultado.
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La naturaleza y la forma en que se comportan los
microorganismos determina las caractersticas delos resultados obtenidos por los mtodosmicrobiolgico.
En general la distribucin de los microorganismospodra describirse mediante modelos estadsticos,
como cantidad de microorganismos por unidad devolumen o peso ( Distribucin de Poisson)
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Qu caractersticas
tienen los resultados de medicinmtodos microbiolgicos
cuantitativos cuando los repito?
Qu caractersticas
Tienen que tener?
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Caractersticas de los resultados de medicinMETODOS MICROBIOLOGICOS
CUANTITATIVOSISO 5725 (trueness and precision) of measurementmethods and results
PRECISIN:proximidad entre resultados
de mediciones independientesdel mismo mensurando,
bajo condiciones estipuladas.
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PRECISIN:
Repetibilidad (r):
Grado de concordancia entre los resultados de sucesivasmediciones del mismo mesurandomediciones del mismo mesurando realizadas en lasmismas condiciones de medicin.(ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos ygenerales de la metrologa: 1993)
Reproducibilidad (R):Grado de concordancia entre los resultados de sucesivasmediciones del mismo mesurandomediciones del mismo mesurando realizadas endiferentes condiciones de medicin.(ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos ygenerales de la metrologa: 1993).
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PRECISIN:
Resultados imprecisosResultados precisos
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JUSTEZA O VERACIDAD (TRUENESS):
Grado de concordancia entre el promedio deuna gran serie de mediciones y el mesurando(ISO 5725).
Proximidad entre el promedio de una gran seriede mediciones y el valor de referencia.
SESGO (bias): resultado de la medicin menos elvalor de referencia o valor asignado.
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Valor verdadero: valor en consistencia con la
definicin de una magnitudConcepto abstracto,
no realizable en la prctica.
Error de medicin: resultado de la medicinmenos el valor verdadero.
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EXACTITUD
Definicin: es el grado de concordancia entre el
resultado de una medicin y el valor delmensurando
EXACTITUD
PRECISIN
+JUSTEZA
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Ejemplo:
Precisin. Justeza y Exactitud
Resultados precisos y justos:
exactos
Resultados precisos y No justos:No exactos
Resultados imprecisos y justos:No exactos
Resultados imprecisos y No justos:No exactos
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El laboratorio microbiolgico tiene la
responsabilidad de garantizar que losresultados que l produce sean exactos,validos y confiables
de modo de poder tomar una decisinacerca de la inocuidad y calidad sanitaria de
los alimentos.
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IncertidumbreEXACTITUD
Desviacin estndar
PRECISIN:
RepetibilidadReproducibilidad
Sesgo (bias),
desvio, error sistemtico
JUSTEZA O VERACIDAD(TRUENESS):
EXPRESINCUANTITATIVA
CARACTERSTICACUALITATIVA
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Cmo determino en la prctica el
VALOR VERDADERO?
Valor convencionalmente verdadero, o valor
asignado o valor de referencia (vREF).El valor asignado o valor de referencia loobtenemos de: Estudios intercomparacin (Ensayos de AptitudInterlaboratorio, Estudios colaborativos)o
Cepas de referencia certificadas(2da opcin es difcil de obtener en microbiologa)
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DESVIO (BIAS)
Clculo en la prctica es:
Resultado de la medicin menos elvalor de referencia o asignado.
BIAS= x- vREF
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Ensayos de Aptitud InterlaboratorioMtodos cuantitativos (Proficiency
Testing) :
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ESTUDIOS DE
INTERCOMPARACIN :
La intercomparacin es una herramienta muy
valiosa como evaluacin externa cuantitativade la calidad de los laboratorios.
Ejemplo ensayos de aptitud interlaboratorio. Norma en las que se basan el laboratorio proveedor deinterlaboratorio: Gua ILAC G13 o ISO 43.
Anlisis de resultados de los interlaboratorios:
Z-score ISO/DIS13528 Statistical methods for use inproficiency testing by interlaboratory comparisons.
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Proveedor de estudios colaborativos
Prepara las muestras con diferentes niveles de
analito.
Establece el protocolo que deben cumplir los
participantes de la intercomparacin.Instructivo de anlisis de muestra, fecha derealizacin anlisis y envo de los resultados, etc.
Enva las muestras.
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Ejecucin de los ensayos de aptitud:
Los resultados obtenidos por los laboratorios participantes
deben ser enviados al organizador quien los evala.
Es fundamental enviarmuestras homogneas
y estables
Se realizan ensayos y pruebas estadsticas antes delenvo para asegurar la homogeneidad y estabilidad del
material enviado.
El organizador confecciona y enva un informe con informacinsobre el anlisis y evaluacin de los resultados
de todos los laboratorios participantes.
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Segn el objetivo que persiguenpodemos tener diferentes tipos de
estudios de intercomparacin :
Ejercicios de ensayos de aptitudinterlaboratorio.
Estudios colaborativos.
Estudios de certificacin.
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ENSAYOS DE APTITUD INTERLABORATORIO:
Estn abiertos a todos los laboratorios que quieranparticipar y pueden ser obligatorios debido a procesos deacreditacin.
Nos permiten evaluar la aptitud de un laboratorio pararealizar el ensayo.
Se usa como herramienta de ASEGURAMIENTO DECALIDAD DE LOS RESULTADOS DEL ENSAYO.
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ESTUDIOS COLABORATIVOS:
Estn dirigidos a laboratorios especializados,
con experiencia y calidad reconocida.Estos laboratorios son seleccionados por elorganismo que gestiona el ejercicio.
Cada laboratorio debe seguir en forma estrictaun protocolo previamente consensuado pararealizar el mtodo.
Los estudios colaborativos permitenVALIDAR MTODOS.
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ESTUDIOS DE CERTIFICACIN:
Estn dirigidos a laboratorios especializados,
con experiencia y calidad reconocida.
Estos laboratorios son seleccionados por el
organismo que gestiona el ejercicio.
Los estudios de certificacin tienen como
objetivo la PREPARACIN (y posteriorcomercializacin) DE MATERIALES DEREFERENCIA CERTIFICADOS.
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Evaluacin de los resultados obtenidos
en los estudios de intercomparacinmtodos cuantitativos:
Eliminacin de los valores aberrantes segnGrubbs y Cochran Norma ISO-FIL 135B:1991.
Prueba de Z score. ISO/DIS13528 Statisticalmethods for use in proficiency testing byinterlaboratory comparisons.
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LOG 10
En microbiologa
los valores de ufc/ml o g
se distribuyen dando
una curva asimtrica.Para normalizarla se usa
logaritmo en base 10.
La distribucin Normal
est definida
por y
DISTRIBUCION NORMAL
-2
-
+
+2
68%
95,5%
16%
2,25%
16%
2,25%
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ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE
MEDICIN EN MICROBIOLOGA
Definicin: la incertidumbre de medicin es un
parmetro asociado al resultado de la medicin,que caracteriza la dispersin de los valoresque podran ser razonablemente asignados al
mesurando.
NOS PERMITE TENER CONOCER ALMESURANDO.
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ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE
MEDICIN EN MICROBIOLOGA
Los laboratorios de ensayo deben tener y deben aplicarprocedimientos para estimar la incertidumbre de medicin.
La estimacin de las incertidumbres en las medidas yresultados en los laboratorios de microbiologa de
alimentos es parte importante del control de calidad internode los resultados obtenidos.
Es una indicacin cuantitativa de la calidad del resultado
INDICA LA CALIDAD DE LA MEDICINDa idea de la confiabilidad del resultado.
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INCERTIDUMBRE????Pregunta: Qu es el resultado de una medicincuantitativa?Respuestas:1.Un registro de calidad.2.Un criterio de aceptacin rechazo.
3.Una comparacin.4.Un nmero ( unidades)5.Ninguna de las anteriores es correcta.
Respuesta correcta es la 5:no es un nmero sino unintervalo de nmeros.
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A Declaracin de no cumplimiento con la
especificacin.
BC
Limitarse a informar
los resultados ysu incertidumbre(INDETERMINADO)
D Declaracin de cumplimiento con la especificacin.
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Un laboratorio de ensayo
competente debe estar encondiciones de poder brindar unaafirmacin sobre la incertidumbre de
los resultados de los ensayosrealizados
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Primer Paso:IDENTIFICACIN DE LAS
FUENTES DE INCERTIDUMBRE:Se enumeran las posibles fuentes de incertidumbre quepueden afectar el resultado de un ensayo:1. TCNICAS/INSTRUMENTOS.
Asociadas:al material de referencia. a la uniformidad de la distribucin de losmicroorganismos en la muestra
a la exactitud de los equipos utilizados para establecermedida de masa y volumen. al mezclado de las muestras. al volumen usado.
a la calidad de medio de cultivoa las condiciones de incubacina la lectura e interpretacin de los resultadosa las pruebas confirmatorias
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IDENTIFICACIN DE LAS
FUENTES DE INCERTIDUMBRE (cont) :
2. HUMANAS:
Asociadas:a la lectura de placas.
a la experiencia y pericia del personal en la
interpretacin de los resultados. a la reproducibilidad de las determinaciones por cambiode observadores, a los instrumentos u otros elementos.
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IDENTIFICACIN DE LAS
FUENTES DE INCERTIDUMBRE (cont)
3. AMBIENTALES:
Asociadas: a las condiciones atmosfricas, temperatura y humedad,polvo.
a las contaminaciones biolgicas.
a las vibraciones.
interferencias electromagnticas.
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Segundo Paso:
Formas de clculo Incertidumbre :
CUANTIFICACIN DE CADACOMPONENTE DE LA INCERTIDUMBRE.
CASO 1:Para la cuantificacin de la incertidumbre se tieneen cuenta los componentes tipo A y tipo B:
Evaluacin tipo A: Evaluacin estadstica de laincertidumbre estndar.Se estima una desviacin estndar, la cual se obtiene
estadsticamente utilizando mediciones repetidas, actuales o previas.Evaluacin tipo B: Evaluacin no estadstica de laincertidumbre estndar.Se utiliza toda la informacin disponible para calcular la variabilidad decada fuente de incertidumbre
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Fuentes de informacin para el
clculo:
Datos obtenidos de mediciones previas.
Especificaciones del fabricante.
Datos provenientes de los certificados de calibracin.
Datos tomados de manuales, registros, etc.
Experiencia o conocimiento general del comportamientoy propiedades relevantes de los materiales einstrumentos.
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Formas de clculo Incertidumbre
(cont):
CASO 2: Se calcula la incertidumbre estndarconsiderando los datos de validacin y aseguramiento decalidad del mtodo:
La incertidumbre se estima combinando cuadrticamente
la desviacin estndar repetibilidad (Sr) y dereproducibilidad (SR)
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Formas de clculo Incertidumbre (cont):Para el caso 1 y 2:La contribucin de los distintos componentes de laincertidumbre deben quedar expresados como un desvo
estndar
Tercer Paso:INCERTIDUMBRE COMBINADA (uc): es la raz de las
varianzas totales.Ejemplo: caso 2uc=Sr2+SR2
Cuarto Paso:INCERTIDUMBRE EXPANDIDA (Ue): es la incertidumbretotal uc multiplicada por el factor k = 2.Ue= uc x k
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Cuarto Paso (cont):Expresin del resultado de un ensayoy su incertidumbre asociada:
El resultado (Rdo) se expresa asociado a la Ue.
De la siguiente manera:
Rdo + Ue (es un intervalo)
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Expresin de la Incertidumbre
en microbiologa
Ejemplo: Recuentototal en leche en polvo
x
ucR
Resultados
UeR
1.1 x 104 ufc/g
12% ufc/g
24% ufc/g
1.1 0.3 x 104 ufc/g
0.8 x 104 a 1.4 x 104 ufc/g
1.1 x 104 24% ufc/g
Documentos para
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Documentos paraEstimacin de la incertidumbre de
medicin en microbiologaReferencias:
EURACHEM / CITAC Guide. Quantifying Uncertainty in AnalyticalMeasurement.
CAEAL. Policy on the Estimation of Uncertainty of Measurement inEnvironmental Testing.
NMKL Procedure N 8 (1999) Measurement of uncertainty in microbiologicalexamination of foods.
UKAS Publication ref: LAB 12. The Expression of Uncertainty in Testing.
Seppo 1. Niemela Uncertainty of quantitative determinations derived bycultivation of microorganisms Publication J3/2002ADVISORYCOMMISSIONFOR METROLOGY Chemistry Section Expert Group for Microbiology
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Con una frecuencia establecida por el laboratoriose revisa, se incorporan nuevos datos y serecalcula la incertidumbre para cada parmetro.
Se elabora un informe conteniendo toda lainformacin relacionada con el clculo y losresultados obtenidos de incertidumbre para el
ensayo.
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El clculo de la precisin y exactitud de un mtodomicrobiolgico cuantitativo, nos indica la calidadde la medicin realizada por el laboratorio y, por lotanto, nos da idea de la confiabilidad de losresultados.
Como veremos ms adelante, dicho clculo sepuede realizar usando los datos obtenidos de los
estudios de validacin y aseguramiento decalidad.
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Graciasporsuatencin