![Page 1: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/1.jpg)
CentrifugaceCentrifugace
![Page 2: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/2.jpg)
LiteraturaLiteraturaLiteraturaLiteratura
![Page 3: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/3.jpg)
CentrifugaceCentrifugaceCentrifugaceCentrifugaceDůvodem použití centrifug je nutnostDůvodem použití centrifug je nutnosturychlit sedimentaci pevných částic vkapalném prostředí.kapalném prostředí.
Na sedimentaci má vlivNa sedimentaci má vliv
1. vlastnost látky: velikost, tvar, hustota1. vlastnost látky: velikost, tvar, hustota
2. vlastnost prostředí (rozpouštědla):2. vlastnost prostředí (rozpouštědla):hustota, viskozita
![Page 4: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/4.jpg)
CentrifugaceCentrifugaceCentrifugaceCentrifugace
20. léta 20. století - SvedbergSvedberg - počátky20. léta 20. století - SvedbergSvedberg - počátky
laboratorních centrifug a analytické centrifugace;laboratorních centrifug a analytické centrifugace;
teoretické základy metody
50. léta - Brakke - centrifugace v gradientu
hustotyhustoty
![Page 5: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/5.jpg)
Theodor Svedberg Theodor Svedberg Theodor Svedberg Theodor Svedberg
(1884(1884--1971)1971)
Nobelova cena za chemii 1926
pojmenována po něm
Svedbergova jednotka pro vyjádřeníSvedbergova jednotka pro vyjádření
sedimentačního koeficientu
![Page 6: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/6.jpg)
CentrifugaceCentrifugaceCentrifugaceCentrifugace
�� Odstranění hrubých částic z roztokuOdstranění hrubých částic z roztokuSediment (pelet) Sediment (pelet) –– supernatantsupernatantSediment (pelet) Sediment (pelet) –– supernatantsupernatant
�� Izolace organel Izolace organel nebo nebo �� Izolace organel Izolace organel nebo nebo biomakromolekulbiomakromolekul
�� Stanovení základních parametrů Stanovení základních parametrů ––�� Stanovení základních parametrů Stanovení základních parametrů ––MW, hustota, sedimentační koeficientMW, hustota, sedimentační koeficient
![Page 7: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/7.jpg)
PoužitíPoužití
CentrifugaceCentrifugace
Preparativní AnalytickáPreparativní Analytická
![Page 8: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/8.jpg)
Rozdělení centrifugRozdělení centrifug
Centrifugace
Pomalootáčková5 000 ot/min
Rychlootáčková25 000 ot/min
Ultracentrifugace80 000 ot/min5 000 ot/min 25 000 ot/min 80 000 ot/min
![Page 9: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/9.jpg)
Otáčky Otáčky →→ g g Otáčky Otáčky →→ g g
rg .2ω= rg .2ω=rad ω- uhlová rychlost
(rad/s)
f.2πω =(rad/s)
f.2πω =f – otáčky/min
![Page 10: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/10.jpg)
Otáčky Otáčky →→ g g Otáčky Otáčky →→ g g
rad
![Page 11: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/11.jpg)
Preparativní centrifugacePreparativní centrifugace
CentrifugaceCentrifugace
diferenciální zonálnídiferenciálnídvě fáze
zonálnízónydvě fáze
(sedimentzóny
(gradient)supernatant)
![Page 12: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/12.jpg)
Metody nanášení vzorkuMetody nanášení vzorku
MetodaMetoda
frontální zonálnífrontálnívzorek v celé kyvetě
zonálnívzorek - úzká zóna
![Page 13: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/13.jpg)
Preparativní centrifugaPreparativní centrifugaPreparativní centrifugaPreparativní centrifuga
![Page 14: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/14.jpg)
Preparativní centrifugaPreparativní centrifugaPreparativní centrifugaPreparativní centrifuga
![Page 15: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/15.jpg)
Preparativní ultracentrifugaPreparativní ultracentrifugaPreparativní ultracentrifugaPreparativní ultracentrifuga
![Page 16: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/16.jpg)
RotoryRotoryRotoryRotory
�� Úhlový Úhlový –– diferenciální centrifugacediferenciální centrifugace
�� Výkyvné Výkyvné –– zonální centrifugacezonální centrifugace�� Výkyvné Výkyvné –– zonální centrifugacezonální centrifugace
�� Zonální Zonální –– bez kyvet, vzorek je uvnitř bez kyvet, vzorek je uvnitř rotorurotorurotorurotoru
![Page 17: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/17.jpg)
Úhlový rotorÚhlový rotorÚhlový rotorÚhlový rotor
![Page 18: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/18.jpg)
Diferenciální centrifugaceDiferenciální centrifugaceDiferenciální centrifugaceDiferenciální centrifugace
�� opakovaná centrifugace se zvyšující se opakovaná centrifugace se zvyšující se rychlostí otáček = gravitacírychlostí otáček = gravitacírychlostí otáček = gravitacírychlostí otáček = gravitací
![Page 19: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/19.jpg)
Výkyvný rotorVýkyvný rotorVýkyvný rotorVýkyvný rotor
![Page 20: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/20.jpg)
Gradientová Gradientová centrifugacecentrifugaceGradientová Gradientová centrifugacecentrifugace
Hustotní bariera Diskontinuální KontinuálníHustotní bariera Diskontinuální Kontinuální
![Page 21: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/21.jpg)
Gradientová Gradientová centrifugacecentrifugaceGradientová Gradientová centrifugacecentrifugace
Hustotní bariera Diskontinuální KontinuálníHustotní bariera Diskontinuální Kontinuální
![Page 22: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/22.jpg)
Gradientová centrifugaceGradientová centrifugaceGradientová centrifugaceGradientová centrifugacemédiamédia
Kriteria Kriteria pro výběr centrifugačního pro výběr centrifugačního media:media:media:media:�� musí musí v roztoku tvořit gradientv roztoku tvořit gradient�� musí musí v roztoku tvořit gradientv roztoku tvořit gradient�� nesmí nesmí interferovat se vzorkeminterferovat se vzorkem�� musí musí být lehce odstranitelné ze být lehce odstranitelné ze vzorkuvzorkuvzorkuvzorku
![Page 23: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/23.jpg)
Gradientová centrifugaceGradientová centrifugaceGradientová centrifugaceGradientová centrifugacemédiamédia
�� SacharosaSacharosaGlycerolGlycerol�� GlycerolGlycerol Hypertonické prostředí
�� FicollFicoll -- dextrandextran Nutno připravit gradient�� FicollFicoll -- dextrandextran�� PercollPercoll –– SiOSiO22
CsClCsCl Gradient vzniká během centrifugace�� CsClCsCl�� CsCs22SOSO44
Gradient vzniká během centrifugace
�� CsCs22SOSO44
![Page 24: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/24.jpg)
Gradientová Gradientová centrifugacecentrifugaceGradientová Gradientová centrifugacecentrifugace
![Page 25: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/25.jpg)
Gradientová centrifugaceGradientová centrifugace
MetodaMetoda
Izopyknická Nerovnovážná
![Page 26: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/26.jpg)
Gradientová centrifugaceGradientová centrifugace
![Page 27: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/27.jpg)
Gradientová centrifugaceGradientová centrifugaceGradientová centrifugaceGradientová centrifugace
![Page 28: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/28.jpg)
Diferenciální versus gradientová Diferenciální versus gradientová Diferenciální versus gradientová Diferenciální versus gradientová centrifugacecentrifugace
![Page 29: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/29.jpg)
Zonální rotorZonální rotorZonální rotorZonální rotor
![Page 30: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/30.jpg)
Zonální rotorZonální rotorZonální rotorZonální rotor
![Page 31: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/31.jpg)
Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním rotoremrotorem
![Page 32: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/32.jpg)
Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním rotoremrotorem
![Page 33: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/33.jpg)
Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním Centrifugace se zonálním rotoremrotorem
![Page 34: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/34.jpg)
Analytická Analytická ultracentrifugaceultracentrifugaceAnalytická Analytická ultracentrifugaceultracentrifugace
![Page 35: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/35.jpg)
Analytická Analytická ultracentrifugaceultracentrifugaceAnalytická Analytická ultracentrifugaceultracentrifugace
![Page 36: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/36.jpg)
Analytická Analytická ultracentrifugaceultracentrifugaceAnalytická Analytická ultracentrifugaceultracentrifugace
![Page 37: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/37.jpg)
Analytická ultracentrifugaAnalytická ultracentrifugaAnalytická ultracentrifugaAnalytická ultracentrifuga
![Page 38: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/38.jpg)
Optický systémOptický systémOptický systémOptický systém
![Page 39: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/39.jpg)
Optický systémOptický systémOptický systémOptický systém
![Page 40: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/40.jpg)
Optický systémOptický systémOptický systémOptický systém• Absorbční optický systém• Absorbční optický systém
� UV-VIS od 200 do 800 nm detekce makromolekul obsahujících silný chromofordetekce makromolekul obsahujících silný chromofor
• Rayleighův interferenční optický systém
� měří změny indexu lomu� měří změny indexu lomuanalýza makromolekul neobsahujících silnýchromofor (např.polysacharidů) nebo vzorků chromofor (např.polysacharidů) nebo vzorků obsahujích v pufru silně absorbující látky (např.ATP/GTP, DTT oxidovaný)(např.ATP/GTP, DTT oxidovaný)
![Page 41: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/41.jpg)
Optický systémOptický systémOptický systémOptický systémZkřížená optikaZkřížená optika
Interferenční optika
Fotografiký systém
Absorbční systém
![Page 42: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/42.jpg)
Analytická ultracentrifugaceAnalytická ultracentrifugace
Metoda
sedimentační rovnováhy sedimentační rychlostisedimentační rovnováhy sedimentační rychlosti
![Page 43: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/43.jpg)
Metoda sedimentační Metoda sedimentační Metoda sedimentační Metoda sedimentační rovnováhyrovnováhy
ln2 dRT=2
ln
)1(
2
dx
d
V
RTM c
r ρ−=
![Page 44: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/44.jpg)
Metoda sedimentační Metoda sedimentační Metoda sedimentační Metoda sedimentační rovnováhyrovnováhy
ln2 dRT=M r- molární hmotnost V - parciální objem
ω - úhlová rychlost ρ - hustota roztoku2
ln
)1(
2
dx
d
V
RTM c
r ρ−= ω - úhlová rychlost ρ - hustota roztoku
x - vzdálenost od osy otáčení c - koncentrace
![Page 45: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/45.jpg)
Metoda sedimentační Metoda sedimentační Metoda sedimentační Metoda sedimentační rovnováhyrovnováhy
![Page 46: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/46.jpg)
Metoda sedimentační Metoda sedimentační Metoda sedimentační Metoda sedimentační rovnováhyrovnováhy
�� TTermodynamickéermodynamické informainformacece(závisí na (závisí na MrMr))(závisí na (závisí na MrMr))
�� ExperimentExperimentálněálně lze stanovit lze stanovit ::�� ExperimentExperimentálněálně lze stanovit lze stanovit ::
•• Relativní molekulovou hmotnost Relativní molekulovou hmotnost –– sacharosasacharosa MMr r ((MMr r •• Relativní molekulovou hmotnost Relativní molekulovou hmotnost –– sacharosasacharosa MMr r ((MMr r = 360) = 360) ažaž popo viryviry ((MMr = r = mnohomnoho milionůmilionů))
•• Stav molekul v roztoku Stav molekul v roztoku -- asociaceasociace•• Stav molekul v roztoku Stav molekul v roztoku -- asociaceasociace•• Rovnovážné konstanty v roztoku Rovnovážné konstanty v roztoku KK•• Rovnovážné konstanty v roztoku Rovnovážné konstanty v roztoku KK�� výpočet volnévýpočet volné energenergieie asociaasociačníchčních
reareakcíkcí
![Page 47: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/47.jpg)
Metoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlosti
A - abso
rbance
A - abso
rbance
A - abso
rbance
x - vzdálenost
VxMv r )1(2 ρϖ −=
Mr - molární hmotnost V - parciální objem
ω - úhlová rychlost ρ - hustota roztokuf
VxMv r )1( ρϖ −= ω - úhlová rychlost ρ - hustota roztoku
x - vzdálenost od osy otáčení f - frikční koeficient
![Page 48: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/48.jpg)
Metoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlosti
![Page 49: Centrifugace - is.muni.cz · Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentacimá vliv 1. vlastnost](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040705/5e03711e8f8a773a6b210e86/html5/thumbnails/49.jpg)
Metoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlostiMetoda sedimentační rychlosti
�� HydrodynamHydrodynamickéické parametryparametry((závisí na závisí na MrMr a tvaru molekuly)a tvaru molekuly)((závisí na závisí na MrMr a tvaru molekuly)a tvaru molekuly)
�� ExperimentExperimentálněálně lze stanovit :lze stanovit :�� ExperimentExperimentálněálně lze stanovit :lze stanovit :
•• SedimentaSedimentačníční kkoeficientoeficient ss•• SedimentaSedimentačníční kkoeficientoeficient ss•• DifuDifuznízní kkonstantonstantuu D D nebonebo frifrikčníkční faktor faktor ff•• DifuDifuznízní kkonstantonstantuu D D nebonebo frifrikčníkční faktor faktor ff•• Relativní molekulovou hmotnost Relativní molekulovou hmotnost MMrr•• Tvar molekuly v roztokuTvar molekuly v roztoku•• Tvar molekuly v roztokuTvar molekuly v roztoku