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Dra. Regina Maura Bueno Franco Laboratório de Protozoologia
Universidade Estadual de Campinas Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal
Instituto de Biologia
Mini-Curso Teórico e Prático: Detecção de Ovos de Helmintos em Hortaliças
Controle de Qualidade:
Metodologia de Detecção de Ovos de Helmintos em
Hortaliças
(Parte 3)
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Programa de Controle de Qualidade: Atitudes Principais - Laboratório/Unicamp
03
Objetivo: minimizar erros e aumentar o nível de confiança dos resultados laboratoriais.
3 atitudes principais: Implementar estrutura organizacional que garanta
qualidade – escolha de um líder;
Foco no requerimento/objetivo analítico:
Adotar métodos para solução de problemas.
Contínuo treinamento dos recursos humanos :
Envolvimento e motivação
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Proposta da Estrutura do Programa de Controle de Qualidade: Etapas
03
1. Escolha da Metodologia a ser utilizada
2. Avaliação da Sensibilidade Alcançada pelo Laboratório
3. Escolha de Critério de Aceitação
4. Resolução de Problemas
5. Aprovação para iniciar o processamento de amostras dos “clientes”
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1. Escolha da Metodologia a ser utilizada
04
1.1. Métodos padronizados são requeridos para isolar, concentrar e identificar parasitos em hortaliças. Fonte: Smith & Cook, 2009. In: Global Issues in Food Science and Technology.
1.2. Metodologia Escolhida deve: Fácil execução; poucos passos. Baixos Custos Validado no laboratório Apresentar Reprodutibilidade Detectar um baixo número de formas parasitárias.
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Metodologia padronizada na FUNED, MG:
05
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2.Avaliação da Sensibilidade alcançada pelo Laboratório
“Matriz”: Vegetais: alface, rúcula e coentro
(50g)
“Spike”: Padronização de uma suspensão contendo número conhecido de ovos
“Seeding”: Contaminação dos Vegetais no Laboratório
Processamento laboratorial e Eficiência de Recuperação Alcançada
6
Spike: 18
horas antes!
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“Spike”: Padronização de uma Suspensão contendo número conhecido de ovos
7
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Preparo da suspensão purificada de ovos de Ascaris suum.
8
• Dissecação do Verme Fêmea, adulto:
1 2
3 4
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Enumeração dos Ovos na Suspensão produzida no laboratório
Contagem Nº de Ovos
1 307
2 367
3 364
4 327
5 385
6 339
7 343
8 360
9 344
10 371
Média: 350,7
DP: 23,1
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Determinação da Viabilidade dos Ovos:
Suspensão “estoque” de ovos
Ácido sulfúrico
0,05M 10L
(0,694 mL H2S04/250 mL de H20)
8 mL
Incubação Temp. Amb. 4 semanas
1L liquido da placa + 19 L de solução de Tween 80 (0,01%)
Contagem dos ovos
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Determinação da Viabilidade dos Ovos: Contagem dos ovos
Ovos com camada mamelonada: 257
Ovos sem camada mamelonada: 62 Total: 319 ovos Então: 319 100% 257 X X= 80,5% com camada mamelonada
319 100%
62 X X= 19,5% sem camada mamelonada
Azul de
Metileno 0,05%
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Aspecto dos ovos da suspensão purificada
012
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13
Teste de Viabilidade: Ovos viáveis e Não viáveis
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Contaminação dos Vegetais no Laboratório
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Contaminação dos Vegetais no Laboratório: 3 réplicas + 1 “branco”
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Amostras contaminadas são examinadas com a Metodologia Escolhida
16
Registro/inspeção de rede
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18
Eficiência de Recuperação: Dados de 9 Laboratórios
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Escolha do Critério de Aceitação
Eficiência de Recuperação para Alface: Média de 59,6 ± 26,1 (%)
Eficiência de Recuperação para Rúcula: Média de 49,4 ± 22,8 (%)
Que valor estipular como critério de aceitação???
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Critério de Aceitação: Busca na Literatura
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Unicamp Unicamp
Utaaker K S; Huang Q; Robertson L J. A reduced-cost approach for analyzing fresh produce for contamination with Cryptosporidium oocysts and/or Giardia cysts. Food Research International, v.77, p.326-332, 2015.
30% Recuperação Aceitável:
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Resolução de Problemas
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Unicamp Unicamp
Lab. D e Lab. H: • não atingiram a Eficiência de 30%
Lab. H: recuperação baixa para ambas as matrizes analisadas!
- Busca de problemas de forma retrospectiva! - Causa: Centrífuga!
Lab. B e Lab. H: • não atingiram a Eficiência de 30%
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Comentários finais
22
Unicamp Unicamp
Atingida a Eficiência de 30% (no mínimo)
Pode ser interessante realizar experimentos de precisão na rotina:
Carta-controle.
Laboratório está apto para processar amostras dos “clientes”
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Obrigada por sua atenção!
Agradecimentos: • A Doutoranda Carolina Cortiz Pineda, ao Dr. Diego Leal (UFParaná) pelo preparo da suspensão purificada de ovos de Ascaris suum e Flaviane Matozinhos (FUNED-MG) pelo auxilio durante a realização do Projeto “Parasitos em Alimentos: Um estudo interlaboratorial”. • Contato Profa. Regina Maura:
E-mail: [email protected]