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CULTIVO Y AISLAMIENTO DE ESTAFILOCOCOS DE MUESTRA DE PIEL
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OBJETIVO: Estudiar las características de los
microorganismos del grupo de los estafilococos, y su
relación con su patogenia en la piel.
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CARACTERÍSTICAS
- Células esférica casi de 1 um
- En racimo
- Colonias lisas, prominentes,brillantes
- Gram +
- Fermentan carbohidratos (glucosa, maltosa,
sacarosa) con producción de ácido láctico pero, no
gas.
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- Producción de pigmentos
- Crecimiento óptimo 37 C (mesófilos)⁰
- Catalasa +
- De los estafilococos, S.aureus es el único que tiene
coagulasa-positiva.
- El género Staphylococcus se compone actualmente de
33 especies.
- No Produce esporas
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Los Staphylococcus de importancia médica son:
a) S. aureus
b) S. epidermidis
c) S. saprophyticus
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PATOGENIA
Toxinas
Enzimas
-Alfa: Produce una coloración verde sobre y alrededor de la colonia -Beta: Produce una hemolisis total de los eritrocitos que rodean la colonia, y en ocasiones de mayor tamaño (colonias doradas).-Gamma: Efectos sobre los eritrocitos, son estreptococos no hemolíticos.
Enterotoxinas
Coagulasa: actúa transformando el fibrinógeno en fibrinaLipasas: permiten colonizar aéreas en la piel Hialuronidasa: actúa sobre el ácido hialuronicoNucleasa: Actúa sobre el ADN
Provocan intoxicación y envenenamiento por
la ingestión de alimentos
contaminados
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TIPOS DE CULTIVO
Vogel Johnson Agar.
Medio utilizado para la rápida detección de estafilococos coagulasa
positivo fermentadores de manitol. Por inoculación directa: sembrar en
forma masiva.
Staphylococcus aureusColonias negras, rodeada de
una zona amarilla.
Staphylococcus epidermidis
Negras, pequeñas, sin zona amarilla alrededor.
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S 110. Para el aislamiento y diferenciación presuntiva de
estafilococos, en base a la producción de pigmentos, la fermentación
de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras
muestras. Directa, en superficie, por estriado o por
extensión. Siembra directa, en superficie, por estriado o por
extensión.
Microorganismo Pigmento Fermentación de
manitol
Hidrólisis de la
gelatina
Prueba de la
coagulasa
S. aureus + + + +
S. epidermidis - - + -
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Agar sal manitol, muestra la fermentación de manitol de los
estafilococos.
+
Colonias se verán amarillas rodeadas de una zona del mismo
color.
-Colonias rojas rodeadas de una zona del mismo
color o purpura.
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Agar sangre
El objetivo de la siembra es el cultivo de muestras diversas para
obtener crecimiento bacteriano en colonias aisladas ( cultivo y
aislamiento), además del estudio de reacciones hemolíticas en una
amplia variedad de microorganismos.
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IMPORTANCIA MÉDICA
Agente etiológico de un gran número de enfermedades en el hombre
Todos los tejidos de la economía pueden ser colonizados e infectados
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Pueden desarrollar resistencia: La colonización es un gran peligro
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ENFERMEDADES
Impétigo
Forúnculo
Celulitis
Abscesos
Ántrax estafilocócico
Pénfigo del recién nacido
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OTROS APARATOS Y SISTEMAS
Aparato respiratorio: Sinusitis, Otitis, Faringitis, neumonitis, abscesos pleurales,
Aparato Digestivo: Enterocolitis, Absesos en hígado, peritonitis, intoxicación,
SNC: Meningoencefalitis, Aparato genitourinario: Cistitis, prostatitis,
nefritis Sistema cardiovascular: Endocarditis,
miocarditis, pericarditis Ojos y anexos: Conjuntivitis, foliculitis, Septisemias
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PROCEDIMIENTO
1. Dividir las cajas con medio de cultivo en dos, con un lápiz graso.
2. En una de las secciones sembrar la cepa de Staphylococcus
aureus por estría cruzada, en cada una de las cajas de medio de
cultivo.
3. Con un hisopo estéril, tomar la muestra de piel, oprimiendo
suavemente.
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MATERIAL
1 Gradilla 1 Mechero 1 Placa de agar sangre 1 placa de agar sal manitol 1 Placa de agar S-110 1 Paquete de isopos 1 Cepa Staphylococcus aureus Microscopio opcional y aceite de inmersión y
colorantes para tinción Gram
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4. Descargar la muestra en la otra sección
5. La prueba de la coagulasa se efectúa tomando una asada de la cepa
e inocular por suspensión en el tubo de plasma citratado, incubar a 37
C durante 4, 8 y 24 hrs, observar la formación de coágulo. Si en este ⁰
tiempo no se ha formado reportar la prueba como negativa.
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6. Para efectuar la prueba de la catalasa, tomar una asada de la cepa
y suspender en una gota de agua sobre un porta objetos,
adicionarle una a dos gotas de peróxido de hidrógeno y esperar la
formación inmediata de burbujas, de ser así reportar la prueba
como positiva.
7. Hacer una tabla donde se indiquen todos los resultados
8. Interpretar resultados
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BIBLIOGRAFÍA
Pahissa, Albert, Infecciones producidas por Staphylococcus aureus, Marge medica books;2009.
Romero Cabello R, Microbiología y parasitología humanas, 3ra Ed., Edit. Médica Panamericana, México, 2007