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Diseños de investigación II:Diseños de investigación II:Diseños de investigación II:Diseños de investigación II:
Estudios Experimentales preEstudios Experimentales preEstudios Experimentales preEstudios Experimentales pre----clínicosclínicosclínicosclínicos
CURSO NACIONAL DE
METODOLOGÍA DE INVESTIGACIÓN EN MTAC
Dr. José Luis Aguilar OlanoDr. José Luis Aguilar OlanoDr. José Luis Aguilar OlanoDr. José Luis Aguilar OlanoInmuno-Reumatólogo. Investigador en Productos Naturales
Jefe Sección Inmunología. Facultad de Ciencias. UPCH
Médico Asistente Servicio Reumatología. HNCH
Past-Presidente
Asociación LatinoAmericana de Inmunología (ALAI)
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No No No No bastabastabastabasta con con con con llevarllevarllevarllevar un un un un cursocursocursocurso de de de de MetodologíaMetodologíaMetodologíaMetodologíade la de la de la de la InvestigaciónInvestigaciónInvestigaciónInvestigación. . . .
Hay Hay Hay Hay quequequeque hacerlahacerlahacerlahacerla....
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TRADICIONAL INFORMACIÓN
ACEPTACIÓN
GLOBAL & FORMAL
CIENTÍFICA
INVESTIGACIÓN
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INVESTIGACIÓN EN PRODUCTOS NATURALES
� Primero: ESTANDARIZACIÓN
� Segundo: ESTUDIOS PRE-CLÍNICOS:
• EVALUACIÓN DE TOXICIDAD
• ENSAYOS BIOLÓGICOS
�Tercero: ENSAYOS CLÍNICOS (humanos):
– FASE I: SEGURIDAD Y TOLERANCIA
– FASE II: TOLERANCIA Y EFICACIA
– FASE III: ENSAYO CLÍNICO
– FASE IV: ESTUDIOS POST-MARKETING
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Estandarización
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Acute Toxicity (LD50)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
DOSES g/Kg
% LD 50
LD50: 14,26 mg/Kg
Busca evidencia de toxicidad in-vivo en animales experimentales
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� Toxicidad Aguda
�Toxicidad Sub-crónica
� Toxicidad Crónica
Evaluación de toxicidad potencial
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![Page 9: Diseños de investigación II: Estudios Experimentales preEstudios Experimentales …bvsper.paho.org/.../20120626Disenos_JoseLuisAguilar.pdf · 2012-07-04 · Diseños de investigación](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042206/5ea81fe131363179e0190734/html5/thumbnails/9.jpg)
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Qué investigar ?
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Información previa: Tradicional, referencias bibliográficas, costumbres de uso, raciocinio lógico
Disponibilidad de materiales y agentes biológicos: cultivos celulares, animales de experimentación, especies diferentes
Disponibilidad de equipos (convenios, estudios colaborativos)
Disponibilidad de personal entrenado (rotaciones, colaboraciones)
Participación de estadista
Qué investigar ?
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Seleccionar modelo apropiado
Referencias de la literatura
Modelos animales: Comité de Ética de Investigación en animales (Ley- 27265).Buscar el modelo animal adecuadoSeguridad de animales
Cultivos celulares: Evaluación de toxicidad, condiciones del cultivo celular, disponibilidad de líneas celulares adecuadas
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PROFUNDIZAR CONOCIMIENTO BIOLÓGICO: POR QUÉ Y CÓMO FUNCIONA EL PRODUCTO O
TÉCNICA ?
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![Page 17: Diseños de investigación II: Estudios Experimentales preEstudios Experimentales …bvsper.paho.org/.../20120626Disenos_JoseLuisAguilar.pdf · 2012-07-04 · Diseños de investigación](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042206/5ea81fe131363179e0190734/html5/thumbnails/17.jpg)
skin muscle tissue
lining layer
sub-lining layer
Esquema de la Cavidad Artificial Subcutánea
artificial cavity
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0
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
PBS Carrageenan UG (100) UG (250) Pentoxifylline UG (100) -Pentoxifylline
+ carrageenan
TN
F -α
( pg/m
l )
*
**
*
*
** % inh
74
96
48
54
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Asociación investigador básico y clínico
![Page 20: Diseños de investigación II: Estudios Experimentales preEstudios Experimentales …bvsper.paho.org/.../20120626Disenos_JoseLuisAguilar.pdf · 2012-07-04 · Diseños de investigación](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042206/5ea81fe131363179e0190734/html5/thumbnails/20.jpg)
GESTIÓN Y ASEGURAMIENTO GESTIÓN Y ASEGURAMIENTO GESTIÓN Y ASEGURAMIENTO GESTIÓN Y ASEGURAMIENTO
DE LA CALIDAD EN EL DE LA CALIDAD EN EL DE LA CALIDAD EN EL DE LA CALIDAD EN EL
LABORATORIO LABORATORIO LABORATORIO LABORATORIO
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Buenas Prácticas de Laboratorio
� Seguridad (Plan de Seguridad)� Equipamiento� Organización� Personal� Procedimientos estándares de operación (SOPs)� Registros� Control de calidad� Garantía de calidad� Calibraciones� Rangos Referenciales
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BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
• Deben de mantenerse todas las medidas de bioseguridad para:
– Evitar contaminación del operador
– Evitar contaminación de personal próximo
– Evitar contaminación de muestras
– Evitar contaminación del ambiente
• Leer Normas Prácticas de Bioseguridad del Laboratorio de Inmunología
• Deben de leer su MSDS (material security data sheet)
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![Page 24: Diseños de investigación II: Estudios Experimentales preEstudios Experimentales …bvsper.paho.org/.../20120626Disenos_JoseLuisAguilar.pdf · 2012-07-04 · Diseños de investigación](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042206/5ea81fe131363179e0190734/html5/thumbnails/24.jpg)
![Page 25: Diseños de investigación II: Estudios Experimentales preEstudios Experimentales …bvsper.paho.org/.../20120626Disenos_JoseLuisAguilar.pdf · 2012-07-04 · Diseños de investigación](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042206/5ea81fe131363179e0190734/html5/thumbnails/25.jpg)
PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS
ESTANDARIZADOS (SOPs)
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CONTROLAR NO ES CUESTIONAR O DUDAR,
ES ASEGURAR LA CALIDAD
NO ES PERSONAL,
ES INSTITUCIONAL
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Todo debe estar documentado
En cada ensayo, el esquema de colocación de muestras debe estar dibujada y debe
conservársela.
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Todo debe estar Todo debe estar Todo debe estar Todo debe estar documentadodocumentadodocumentadodocumentado
Resultado de lecturas de equipos o mediciones debe ser guardada en original, como documento fuente.No transcripción
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TodoTodoTodoTodo debedebedebedebe estarestarestarestardocumentadodocumentadodocumentadodocumentado y y y y conservarseconservarseconservarseconservarse
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UnaUnaUnaUna investigacióninvestigacióninvestigacióninvestigaciónsólosólosólosólo terminaterminaterminatermina cuandocuandocuandocuandose se se se publicapublicapublicapublica en un en un en un en un
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