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• Divisione in gruppi di tre persone
• Assegnazione di tre articoli originali per gruppo. Gli articoli sono divisi in tre tematiche (A, B, C)
• Ciascun componente del gruppo sceglie uno dei tre articoli da presentare in un breve seminario secondo un calendario prestabilito. Gli altri due componenti del gruppo dovranno prepararsi a rispondere a domande (semplici) sull’articolo alla fine del seminario dei compagni di gruppo
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• Seminario da 0 a 6
• Domande ai componenti dello stesso gruppo di chi presenta (una per seminario) da 0 a 2
• Esame finale da 8 a 20
• Altri elementi che potranno contribuire al voto finale: 1) interventi durante la discussione dei seminari, 2) presenze
VALUTAZIONE
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CELL 32.44
EMBO J 13.999
EUR J BIOCHEM 2.852
J BIOL CHEM 7.368
MOL CELL BIOL 9.666
NATURE 25.814
SCIENCE 23.872
IMPACT FACTOR
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articoli originali
rassegne “reviews”
libri di testo
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Schema trasferimento e
ibridazione
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Altre tecniche di analisi
•Estensione del primer (primer extension)
•Protezione dalla S1/RNasi (mapping)
•RT-PCR
•Real time PCR
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mRNA totale
oligo antisenso marcato
mRNA globina
cap
5’3’
ibridazione
estensione con RT
Analisi dei frammenti estesi su gel di sequenza
frammento protetto
Estensione del primer
(primer extension)
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Protezione da RNasi (RNase Protection)
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Protezione da RNasi
(RNase Protection)
mRNA totale
sonda RNA antisenso
mRNA globina
cap
5’3’
ibridazione
trattamento con RNasi
Analisi dei frammenti protetti su gel di
sequenza
frammento protetto
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Protezione da RNasi (RNase Protection)
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Analisi interazioni
DNA-proteine:
saggio di footprinting
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Analisi interazioni
DNA-proteine:
saggio EMSA
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![Page 21: Divisione in gruppi di tre persone Assegnazione di tre articoli originali per gruppo. Gli articoli sono divisi in tre tematiche (A, B, C) Ciascun componente](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022081602/5542eb49497959361e8b4776/html5/thumbnails/21.jpg)
Coimmunoprecipitazione
![Page 22: Divisione in gruppi di tre persone Assegnazione di tre articoli originali per gruppo. Gli articoli sono divisi in tre tematiche (A, B, C) Ciascun componente](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022081602/5542eb49497959361e8b4776/html5/thumbnails/22.jpg)
Affinity co-purification(pull down)
![Page 23: Divisione in gruppi di tre persone Assegnazione di tre articoli originali per gruppo. Gli articoli sono divisi in tre tematiche (A, B, C) Ciascun componente](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022081602/5542eb49497959361e8b4776/html5/thumbnails/23.jpg)
Sistema dei due ibridi
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Sistema dei due ibridi
![Page 25: Divisione in gruppi di tre persone Assegnazione di tre articoli originali per gruppo. Gli articoli sono divisi in tre tematiche (A, B, C) Ciascun componente](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022081602/5542eb49497959361e8b4776/html5/thumbnails/25.jpg)
Sistema dei tre ibridi
![Page 26: Divisione in gruppi di tre persone Assegnazione di tre articoli originali per gruppo. Gli articoli sono divisi in tre tematiche (A, B, C) Ciascun componente](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022081602/5542eb49497959361e8b4776/html5/thumbnails/26.jpg)
Chromatin immunoprecipitation (Chip)
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Biologia molecolare - Robert F. Weaver Copyright © 2005 – The McGraw-Hill Companies srl
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An example of a ChIP assay done in yeast using an antibodies raised against the gene-specific transcription factor Gal4 and the general transcription factor and proteasome constituent Sug1. Different PCR primers (amplifying DNA segments A-E) were employed to probe for the presence of the two proteins along the GAL1 gene under non-inducing (raffinose) or inducing (galactose) conditions. Gal4 is known to be localized to the promoter. Therefore, the ChIP signals in regions B and C for this protein reflect the presence of longer DNAs in the sample which are co-IP’d with Gal4 and amplify using the B and C region primers. This reflects the relatively low resolution of the ChIP assay. Sug1 is an elongation factor and is therefore found throughput the gene.
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Sistemi di espressione
•In vitro: - estratti cellulari
•In vivo: - cellule in coltura - animali transgenici
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Gene reporter
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Vettori di clonaggio per lievito
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![Page 33: Divisione in gruppi di tre persone Assegnazione di tre articoli originali per gruppo. Gli articoli sono divisi in tre tematiche (A, B, C) Ciascun componente](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022081602/5542eb49497959361e8b4776/html5/thumbnails/33.jpg)
Ricombinazione omologa
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Vettori episomali
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•transiente
•stabile
•vettori episomali
•vettori virali
Trasfezione di cellule in coltura
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