Genska ekspresija
mikro RNA (miRNA)
u mijelodisplastičnom
sindromu – san ili java?
Mirjana Mariana Kardum ParoKlinički zavod za medicinsku biokemiju i laboratorijsku medicinu
Klinička bolnica Merkur
Referentni centar Ministarstva zdravstva za izradu i primjenu bioloških referentnih intervala medicinskobiokemijskih pretraga
prema Circulation Research. 2011;108:219-234. (van Rooi E et al.)
otkriće miRNAu C. Elegans
otkriće miRNA u humanim
uzorcima
prve korelacije miRNA i
nastanka tumora
povezivanje miRNA s bolesti
miRNA iz transgeničnih
miševa
otkrivanje miRNA u
plazmi
otkriće prvih genetskih delecija specifičnih miRNA
miRNA u plazmi -biljeg kardijalne
bolesti?
prva istraživanja o biogenezi i
funkciji miRNA
miRNA u terapeutske
svrhe?
miRNA
Genska ekspresija miRNA
Genska ekspresija miRNA u MDS-u
Autor Broj bolesnika/
broj zdravih osoba
Porijeklo
miRNA
Metode određivanja
genske ekspresije miRNA
Literaturni izvor
Hussein i sur. 24 / 3 mononuklearne stanice
RT-PCR Leuk Res
2010;34:1169-74.
Sokol i sur. 44 / 17 mononuklearne stanice
metoda mikrorešetke Br J Haematol 2011;153:24-32.
Erdogan i sur. 10 / 10 mononuklearne stanice
metoda mikrorešetke Exp Hematol 2011;9:915-26.
Merkerova i sur. 43 / 9 CD34+ stanice koštane srži
RT-PCR Eur J Hum Genet 2011;19:313-9.
Votavova i sur. 7 / 5 CD34+ stanice koštane srži
RT-PCR J Hematol Oncol 2010;4:1.
Hussein i sur. 25 / 10 mononuklearne stanice
RT-PCR Ann Hematol 2010;90:307-13.
Genska ekspresija miRNA u MDS-u
zatajenje KS
progresija u AML
trombocitopenija neutropenija
anemija
Trombocitopenija
Displazijatrombocitoza
prema Eur J Haematol 2016;96:553-63..
Genska ekspresija miRNA u MDS-u
lošija prognoza!
učestaliji relaps!
klaster miR-125a/99b/let-7a
povećana genska ekspresija
miR-99b u 30% MDS
povećana genska ekspresija
miR-125a u MDS = lošija
prognoza!
snižena genska
ekspresija u MDS
(IPSS-HR)
povećana genska
ekspresija u MDS
(IPSS-LR)
Metode određivanja genske
ekspresije miRNA
prema Analytica Chimica Acta 2011;699:134-152. (de Planell-Saguera M et al.)
Metoda Mehanizam djelovanja Prednosti Nedostaci
Nothern blot
komplementarna
oligonukleotidna
sonda se veže na ciljnu miRNA
uhvaćenu na nitroceluloznu
membranu
široko primjenjiva
kvantitativna
zadovoljavajuće specifičnosti
nisko osjetljiva
potrebne velike količine
uzorka
vremenski zahtjevna
analiza
mikropostroja
hibridizacija nukleinskih
Kiselina između miRNA i
odgovarajuće komplementarne
sonde imobilizirane na
mikropostroj
profiliranje višestrukih miRNA
istovremena analiza više miRNA
brza računalna analiza podataka
nisko osjetljiva
nisko specifična
in situ hibridizacija
detekcija miRNA hibridizacijom
komplementarnog lanca
nukleotidne sonde na sekvencu
od interesa
razlučivost na staničnoj /
substaničnoj razini pomoću
neradioaktivnih sondi
dugotrajna
semikvantitativna
kvantitativno
određivanje
lančanom reakcijom
polimeraze
reverzna transkripcija ciljane
miRNA u komplementarnu DNA
uz umnažanje lančanom
reakcijom polimeraze što
rezultira fluorescencijom
visoko osjetljiva
kvantitativna
točna
jednostavna
visoko osjetljiva
specifična
financijski i vremenski
zahtjevna
preporuke .... 2017.
Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 2017; Volume 55, Issue 5 (May 2017)
Special issue: miRNAs in human disease and their impact on laboratory medicine
Best practice recommendations to standardize preanalytical variables
in the detection of circulating and tissue miRNAs (Khan et al.)
Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 2017; Volume 55, Issue 5 (May 2017)
Special issue: miRNAs in human disease and their impact on laboratory medicine
miRNA assays in the clinical laboratory: workflow, detection
technologies and automation aspects (Kappel A et al.)
preporuke .... 2017.
dileme ... cell-miR-39 vs. miR-126?
miRNA stabilne u serumu/plazmi:
let-7a miR-92a miR-26b
let-7c miR-93 miR-423-5p
miR-21 miR-103a miR-222
miR-22 miR-126 miR-26a
miR-23a miR-145 miR-191
miR-24 miR-146a miR-25
različite genske ekspresije miRNA su ili odraz heterogenosti MDS-a ili posljedica različitih protokola istraživanja
smanjene genske ekspresije miR-146a, miR-150, let-7a, miR-23a, miR-103 i miR-126 u MDS-u
miR-125a, miR-99b i let-7a predstavljaju potencijalne prognostičke biljege rane dijagnoze i klasifikacije MDS-a
miR-144, miR-16, miR-25, miR-451, miR-651, miR-655 i let-7a mogući prognostički biljezi MDS-a normalnog kariotipa
daljnja istraživanja usmjeriti na otkrivanje genskih ekspresija specifičnih miR koje bi mogle pomoći u razlikovanju MDS-a visokog rizika (IPSS-HR) od MDS-a niskog rizika (IPSS-LR)
Zaključno ...
.... Hvala na pažnji!
»Referentni centar Ministarstva zdravlja za dijagnostiku i liječenjemijelodisplastičnog sindroma« (NN 47/09)
Centar izvrsnosti u mijelodisplastičnom sindromu (MDS Foundation)
Projekt “Prognostička vrijednost i dinamika cirkulirajuće mikroRNA u visokorizičnom mijelodisplastičnom sindromu liječenom 5-azacitidinom”(Hrvatska zaklada za znanost)
Baza projekata
Detalji projekta<< Pretraživanje
Naziv projekta:
Prognostička vrijednost i dinamika cirkulirajuće mikroRNA u visokorizičnom mijelodisplastičnom sindromu liječenom 5-azacitidinom
Voditelj: Vrsta natječaja:
Slobodanka Ostojić Kolonić Istraživački projekti
Rok: Šifra: Akronim: Trajanje:
2016-06 5842 MDSmicroRNA 20.03.2017 - 19.03.2021
Znanstvena područja: Biomedicina i zdravstvo
Znanstvena polja: Kliničke medicinske znanosti
Ustanova: Klinička bolnica "Merkur", Zagreb
Ključne riječi: myelodysplastic syndrome, microRNA, 5-azacitidine, prognostic factors, high risk