![Page 1: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/1.jpg)
06.06.2016
1
Hemoglobinopatiermolekylær basis og diagnostikk
Runa Marie GrimholtForsker, bioingeniør med spesialistgodkjenning
Enhet for blodcelleforskning, Avdeling for medisinsk biokjemi
Oslo UniversitetssykehusBioingeniørkongressen 1.‐3. juni 2016, Oslo
37
Hemoglobin
38
Typer hemoglobin
HbA 2α 2β 97 %HbA2 2α 2δ 2‐3 %HbF 2α 2γ <1 %
HbA
HbA2HbF
![Page 2: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/2.jpg)
06.06.2016
2
Syntese av globinkjeder
39
Globingenene
40
HBA2 HBA1
HBBHBD
Chr 16
Chr 11
![Page 3: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/3.jpg)
06.06.2016
3
Hemoglobinopati
41
Thalassemi ‐ Hemoglobinvariant
Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene
Thalassemi
Delesjoner eller sekvensvarianter i genet eller i genets reguleringsområder som gir nedsatt syntese av
• α‐ globinkjeder → α‐thalassemi
• β‐ globinkjeder → β‐thalassemi
Hemoglobinvariant
Sekvensvarianter i globinkjeden som fører til endring av aminosyre.
→ syntese av globinkjeder med endret struktur
Utbredelse
• De hyppigste monogene sykdommene i verden
– Ca 24 % av verdens befolkning
• Vanligst i land hvor malaria er eller har vært utbredt
42
![Page 4: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/4.jpg)
06.06.2016
4
Alvorlighetsgrad
43
Thalassemi
44
Hb MCH MCV RBC
![Page 5: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/5.jpg)
06.06.2016
5
Beta‐thalassemi
45
Beta+: Redusert syntese Beta0: Ingen syntese
Beta‐thalassemi
46
Beta‐thalassemia minor (beta+ eller beta0)Beta‐thalassemia major
![Page 6: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/6.jpg)
06.06.2016
6
Alfa‐thalassemi
47
Alfa‐thalassemi
48
Alfa‐thalassemi (ett‐gens)Alfa‐thalassemi (to‐gens)Alfa‐thalassemi (HbH‐sykdom)Alfa‐thalassemi (Hb Barts hydrops fetalis)
![Page 7: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/7.jpg)
06.06.2016
7
Utredning
49
Medisinsk biokjemi, OUS
Standard utredning
Hematologi, ferritin og CRP
Gap‐PCRAlfa‐thalassemi
HPLCBioRad Variant II
Utredning
50
Medisinsk biokjemi, OUS
Utvidet utredning
DNA sekvenseringHBA, HBB og HBD
KopinummeranalyseAlfa‐ og beta‐globingen cluster
![Page 8: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/8.jpg)
06.06.2016
8
Sekvensering
51
52
Real‐time kvantitative PCRΔΔCq‐metoden
Kopinummeranalyse
Pasient Kontroll Kalibrator Kontroll
![Page 9: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/9.jpg)
06.06.2016
9
Utredning beta‐thalassemi
53
HbA2α 2β
HbA22α 2δ
Eksempel 1
54
Hematologiske og biokjemiske analyser
RBC 5,5 x10^12/L ↑ (3,9‐5,3 x10^12/L)
Hb 10,5 g/dL ↓ (11,7‐15,3 g/dL)
MCH 20,7 pg ↓ (27‐33 pg)
Ferritin 57 µg/L (15‐200 μg/L)
CRP >0,6 mg/L ↑ (<4 mg/L)
Gap‐PCR Negativ
![Page 10: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/10.jpg)
06.06.2016
10
Hemoglobintyping
55
Beta‐thalassemi minor
BioRad Variant II
Utredning av alfa‐thalassemi
56
Alfa‐thalassemi gap‐PCR HbH ved HPLC
![Page 11: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/11.jpg)
06.06.2016
11
Sekvensvarianter
57
Startkodon
SpleisesetetPromotor
IntronMissens variant
Nonsens variant Stoppkodon
Poly A setetLeserammeskift
Eksempel 2
58
Hematologiske og biokjemiske analyser
RBC 6.90 x10^12/L ↑ (4,3‐5,7 x10^12/L)
Hb 11.9 g/dL ↓ (13,4‐17,0 g/dL)
MCH 17.2 pg ↓ (27‐33 pg)
Ferritin 146 µg/L (25‐300 μg/L)
CRP 10.2 mg/L ↑ (<4 mg/L)
![Page 12: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/12.jpg)
06.06.2016
12
Hemoglobintyping
59
BioRad Variant II
Ikke beta‐thalassemi
Resultat gap‐PCR
60
Fusjonsgen
HBA2 HBA1
Resultat: Heterozygot 3.7 kb delesjon
Meget lett alfa‐thalassemi
![Page 13: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/13.jpg)
06.06.2016
13
Utredning alfa‐thalassemi
61
Hematologiske og biokjemiske analyser
RBC 6.90 x10^12/L ↑ (4,3‐5,7 x10^12/L)
Hb 11.9 g/dL ↓ (13,4‐17,0 g/dL)
MCH 17.2 pg ↓ (27‐33 pg)
Ferritin 146 µg/L (25‐300 μg/L)
CRP 10.2 mg/L ↑ (<4 mg/L)
Kopinummeranalyse alfa‐globingenene
62
HBA1
HBA3.7
HBA2
HS‐40
Patient sample Control sample Control sample Calibrator
![Page 14: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/14.jpg)
06.06.2016
14
Sekvensering av alfa‐globingenene
63
HBA2 HBA1
HBA2:c.*94A>G• Poly A signal
Polyadenylering
64
![Page 15: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/15.jpg)
06.06.2016
15
Sekvensering av alfa‐globingenene
65
HBA2 HBA1
HBA2:c.*94A>G• Poly A signal
HBA1:c.*46C>A• mRNA degradation?
Oppsummering
66
Mann fra PalestinaMikrocytær anemi (Hb 11,9 og MCH 17,2)Erytrocytose (RBC 6,9)Genotype: αTα/‐α3,7
Kan vi forklare pasientens hematologiske forandringer???
HBA2 HBA1
?
![Page 16: Hemoglobinopatier molekylær basis og diagnostikk - NITO · Hemoglobinopati 41 Thalassemi ‐Hemoglobinvariant Hemoglobinsykdommer forårsaket av mutasjoner i globingenene Thalassemi](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022020115/5cbe32bf88c9936b6a8c1a32/html5/thumbnails/16.jpg)
06.06.2016
16
Utredning alfa‐thalassemi
67
Hematologiske og biokjemiske analyser
RBC 6.90 x10^12/L ↑ (4,3‐5,7 x10^12/L)
Hb 11.9 g/dL ↓ (13,4‐17,0 g/dL)
MCH 17.2 pg ↓ (27‐33 pg)
Ferritin 146 µg/L (25‐300 μg/L)
CRP 10.2 mg/L ↑ (<4 mg/L)
68