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Identificação de Enterobactérias.
Dra. Tânia Mara Ibelli VazPesquisador Científico
Instituto Adolfo Lutz - São Paulo
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índice
Família EnterobacteriaceaePatogeniaIsolamento e identificação de enterobactériasAspecto das colôniasIdentificação Bioquímica ( cultura pura)Reação de VM e VPEscherichia coliSalmonellaShigellaKlebsiellaEnterobacterSerratiaCitrobacterProteus - Providencia - MorganellaFluxograma BGN OXIDASEConsiderações finais
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Introdução
Definição
• Bacilos Gram negativos • AAF / Fermentadores da glicose• Oxidase negativa e catalase +• Móveis / imóveis • Cresce em meios comuns
Habitat
Plantas, solo, água, intestino do homem e animais
Família Enterobacteriaceae
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Introdução
Nomenclatura e Classificação
• Métodos Fenotípicos• Moleculares novas espécies reclassificação
Classificação• Gêneros ( 42) • Espécies ( centenas )• biotipos e sorotipos
Complexos
Família Enterobacteriaceae
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Classificação - patogenia
- Enteropatógenos
- Infecções nosocomiais - espécies importantes
- Outras espécies - raras em material clínico
isoladas em : meio ambiente
plantas
animais
Identificação de Enterobactérias
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Enterobactérias - principal componente da flora intestinal normaldo homem.
• Infecções -intestinal, feridas e trato urinário
• Abcessos, pneumonia, meningites
• Infecções nosocomiais
Família EnterobacteriaceaePatogenia
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Infecções intestinais
Características• normalmente na comunidade• DTA – doença transmitida por alimento • surtos / casos isolados• hospitalar
Patógenos entéricos clássicos
Salmonella sppShigella sppE.coli - categorias diarreiogênicasYersinia enterocolitica
Família EnterobacteriaceaePatogenia
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Infecções extra-intestinais Comunidade Hospitalar
• Qualquer espécie• Fatores de risco:
PacienteVeículos de transmissãoAlimentos contaminados
Espécies mais comuns
Escherichia coliKlebsiella pneumoniaeKlebsiella oxytocaProteus mirabilisEnterobacter sppSalmonella ( sorotipos)Serratia marcescensCitrobacter sppProvidencia spp
Família EnterobacteriaceaePatogenia
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ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIASFamília Enterobacteriaceae
Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN
( 18 a 24h 1 mm de diâmetro).
1- Exame macroscópico da cultura:
• Aspecto morfológico das colônias ( AS, MC,SS, TSA )
• Tempo de crescimento e tamanho da colônia
• Observar pureza da cultura
2-Exame microscópico da cultura:
• Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc
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Aspecto das colônias
Agar MacConkey
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Aspecto das colônias
Salmonella. E.cloacaeE.coli
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Salmonella.
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E. coli
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Aspecto das colônias
E. cloacae
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Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Meios presuntivos• IAL (Pessoa e Silva) • EPM-MILI• TSI
IAL
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Provas complementares:
Fermentação de açúcaresLDC- ODC - ADHCiSi
Pesquisa de enzimasDNasegelatinase,lipase, NAR, ONPGase
Identificação Bioquímica
Gram Oxidase VM e VP
Série completa - 47 testes
Família Enterobacteriaceae
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Reação de VM e VPFamília Enterobacteriaceae
• Enterobacter• Klebsiella• Serratia
Maioria das espécies dos outros Gêneros• Salmonella• Shigella• E.coli• Proteus• Morganella• Providencia• Citrobacter• Kluyvera
Enterobactérias VP+ Enterobactérias VP -
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Citrato de Simmons
Escherichia coli
Glicose+/Gás+/-sacarose+/-urease-*H2S-
TDA-indol+LDC+/-Motilidade+/-
lac+CISI -
K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+)
Diagnóstico Diferencial
Citrobacter amalonaticus e C. diversus( LDC-/motil.+CiSi+)
Aeromonas
Marcadores Epidemiológicos
Infec. Intestinais SorotipagemFatores de virulência
Infec. Extra-intestinaisSorotipagemMet. moleculares
Prova
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Salmonella
Glicose+/gás vsac -H2S +urease-TDA - indol -LDC +Mov. +
CiSi+Lac -
Diagnóstico diferencial
Citrobacter spp ( H2S + )Proteus
glicerol
Marcadores Sorotipagem Fagotipagem Moleculares
Prova de
Fermentação
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Shigella
E.coli ( LDC - / Mov.-)
LactoseCi Christ.
Acetato Trab.
Marcadores Sorotipagem Met.moleculares
Glic.+ /gás -sac -urease -TDA -H2Sindol vLDC -Mov. -
CiSi -
Lac -
Diagnóstico diferencial
CitratoSódio
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Klebsiella
Enterobacter ( LDC+ / Mov.-)
ADHODC
Fermentação
Marcadores Sorotipagem Met. moleculares
Diagnóstico diferencial
Lac+CiSi +
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Enterobacter
LDC,ODC,ADHMotilidade
DNaseFermentação
EnterobacterKlebsiellaSerratia
E.cloacae
Marcadores Sorotipagem Met. moleculares
Diagnóstico diferencialLac+CiSi+
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Serratia
Espécies de Serratia
LDC,ODC, malonato,
fermentação , pigmento
Marcadores: Sorotipagem Met.moleculares
Glic.+ / gás-sac. -urease -H2S -TDA -indol -LDC +Mov. +
CiSi +Lac -
DNase +Gelatinase +
Lipase +
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Citrobacter
Glic.+ / gás-sac =Vurease -H2S = VTDA -indol = VLDC -Mov. +
CiSi +Lac +
Espécies de Citrobacter
ODC, indol, H2S malonato
fermentação
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Glic.+/ gás -sac. -urease +TDA +H2S = Vindol = VLDC -Mov. +
CiSi +Lac +
ProteusProvidenciaEspécies H2S +BGN NF
SwarmingTDA, H2S, ODC,
gelatinase,fermentação
Proteus - Providencia - Morganella
Diagnóstico diferencial
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Fluxograma
BGN BGN OxidaseOxidase
Lac + Lac -
E.coliEnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter
ShigellaSalmonellaSerratiaProteusProvidenciaMorganella
Ágar Mac ConkeyÁgar Mac Conkey
IALIALIALIAL
Cit. SimmonsCit. SimmonsCit. SimmonsCit. Simmons
+
EnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter
EnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter
-E.coliE.coli
VP +VP +
+
SalmonellaSerratiaProteus/Prov.(V)
SalmonellaSerratiaProteus/Prov.(V)
-ShigellaMorganellaShigellaMorganella
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IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS
Enterobactérias em microbiologia clínica Poucas espécies
Espécies incomuns , novas espécies, espécies atípicas podem ocorrer(isoladas de material clínico, ambiente, plantas e animais)
PROBABILIDADES
• Tratar-se de uma espécie rara• Cepa contaminada • Uma ou mais testes não adequados na identificação ( turvação)• Manipulação errada ( concentração do inóculo)• Composição e quantidade do meio ( substrato presente)• Controle de Q
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IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS
O que fazer?
Checar tudo:
• Pureza da cultura
• Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando os meios anteriormente utilizados
•Repetir todos os testes em outro sistema de identificação ou utilizar partidas diferentes do meio.
•Encaminhar para laboratórios de referência
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Considerações finais
Importância da caracterização das espécies
• Evitar falsos surtos
• Não identificação do surto
• Atenção para cepas atípicas
• Atenção para espécies raras
• Atenção para pureza das culturas