Download - klorofil a
![Page 1: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/1.jpg)
VAJA 3
FOTOSINTEZNI PIGMENTI
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
![Page 2: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/2.jpg)
Fotosintezni pigmenti
Klorofili: klorofil aklorofil b
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Karotenoidi karoteni (β-karoten)ksantofili (lutein, violaksantin, zeaksantin, anteraksantin, …)
![Page 3: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/3.jpg)
karotenoidi
klorofil b
klorofil a
antenskikompleks
reakcijskicenter reakcijski
center
svetlobasvetloba
zman
j še v
a nje
e ne r
gije
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Fotosintezni pigmenti sodelujejo pri absorpciji svetlobe
![Page 4: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/4.jpg)
klorofil a bakterioklorofil aklorofil b
Klorofili
![Page 5: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/5.jpg)
Ksantofili:
lutein
Karoteni:
β-karoten
Karotenoidi
neoksantin
![Page 6: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/6.jpg)
valovna dolžina (nm)
abso
rpci
jaIRUV
spekter vidne svetlobe
bakterioklorofil aklorofil b
klorofil a
![Page 7: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/8.jpg)
2) Ločba - kromatografijaSilikagel G(stacionarna faza)
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Vaja 4.1: Absorpcijske lastnosti asim. pigmentov
1) Ekstrakcija
hladen aceton tema, MgHCO3, Na2SO4
kloroform
15 mm10
0 m
m30
mm
![Page 9: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/9.jpg)
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
2) Ločba - kromatografija
ab
retenzijski faktorRf = b / a
+ aceton – 5mlheksan/ dietileter/ aceton (6: 3 :2)(mobilna faza)
centrifugiranjesupernatant
Merjenje absorpcijskih spektrov na spektrofotometru(350-700 nm)
![Page 10: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/10.jpg)
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
monokromatskavpadna svetloba
monokromatorsvetlobni vir prizma
vzorecprepuščena svetloba detektor zapisovalnik /
računalnik
Spektrofotometer
Absorbanca:
A = log I0 / I A = ε • c • l Beer-ov zakon
c = koncentracija, l = dolžina poti, ki jo opravi svetloba skozi vzorec, ε = molarni ekstincijski količnik
![Page 11: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/11.jpg)
valovna dolžina (nm)
abso
rpci
jaIRUV
spekter vidne svetlobe
bakterioklorofil aklorofil b
klorofil a
![Page 12: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/12.jpg)
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Vaja 4.2: Kvantitativno določevanje asim. pigmentov
hladen aceton tema, MgHCO3, Na2SO4 Izmerimo volumen
ekstrakta (V)
vakuum
vakuumska filtracija
Vzorec znane mase (G)
Meritev absorpcije na spektrofotometru pi 470, 645 in 662 nm
![Page 13: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/13.jpg)
klorofil a: Ca = 11.24 x A662 - 2.04 x A645
klorofil b: Cb = 20.13 x A645 - 4.19 x A662
karotenoidi: Cx+c = (1000 x A470 - 1.9 x Ca - 63.14 x Cb) / 214
Dokončne vsebnosti pigmentov v mg g-1 dobimo po upoštevanju sveže mase tkiva (ali še bolje suhe mase, če smo jo določili), iz katerega smo naredili ekstrakt = G (g) in ob upoštevanju volumna ekstrakta, t.j. volumna porabljenega acetona = V (ml).
Cy x Vkončna koncentracija: C = --------------------
G x 1000
y = a, b, x+c
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
![Page 14: klorofil a](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022013123/588db6bb1a28ab08218bcb2c/html5/thumbnails/14.jpg)
SPAD vrednost
Klo
rofil
(μg
cm-2
)
Merjenje klorofila s klorofilmetrom (SPAD Minolta)
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006