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Les nouveaux outils pour maitriser la mise
en bouteille stérile
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Risque de « relargage »
Pollution du matériel
Vin avec une forte population levurienne
Filtration = réduction proportionnelle
de la charge
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La filtration de mise
si élimination de 99,9999% des levures par filtration de mise
levures/ml avant filtration
levures /ml levures / bouteille
100 0,0001 0,075
1000 0,001 0,75
10 000 0,01 7,5
100 000 0,1 75
1 000 000 =début de FA
1 750
Mise en bouteille stérile = levures/bouteille <10 (voir <1)
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• Adaptation du traitement de mise
•Adaptation du type de filtration à la population levurienne
•Suivi microbiologique de la mise en bouteille
Risque de « relargage »
Pollution du matériel
Augmentation des risques de
contamination du matériel
Vin avec une forte population levurienne
• Analyses de la population levurienne par cytométrie de flux
•Analyse du SO2 moléculaire, libre et total
= Maîtrise des risques
= garantie de qualité de la mise en bouteille stérile
1 vin contaminé peu mettre en cause tout le
travail d’une journée
Filtration = réduction proportionnelle
de la charge
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La cytométrie de flux
• Quoi ?
• Pourquoi ?
• Comment ?
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Partec: l’innovation en marche depuis 40 ansPrincipes des appareils de Cytométrie en Flux Partec: l’innovation en marche depuis 40 ansPrincipes des appareils de Cytométrie en Flux
Pascal Brunou, David BastienPartec France
1968 2008 1968 2008
La cytométrie : quoi ?
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Agrosciences:
• Recherche vétérinaire• Aquaculture• Biologie végétale• Sélection variétale
Applications Industrielles:
• Agroalimentaire (jus de fruit, bière…)• Produits cosmetiques• Pharmaceutique• Industrie du papier
Domaines d’applications (2)
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Analogie entre microscopie et cytométrie de fluorescence
Echantillon liquide focalisé sous l’objectif et le trajet optique du cytomètre
Echantillon fixe sur lame au microscope
Cytométrie: = « mesure des cellules »
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PMT 1
PMT 2
LASER
Système fluidique - Focalisation hydrodynamique
Cellule de mesure = cœur du système
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Excitation par un laser des particules injectées
Side Scatter (SSC) + Fluorescence
Forward Scatter(FSC)
Laser
Source d’excitation lumineuse ultra-performante type laser
pour une excitation et analyse des signaux d’émission en quelques microsecondes
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Différentes approches pour le marquage des cellules
Anticorps Anticorps
Sondes intra-cytoplasmiquesSondes intra-cytoplasmiques
Marqueurs de surface - organites cellulairesMarqueurs de surface - organites cellulaires
Sondes ADN Sondes ADN
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Configuration simple ou multi-couleurs
Système Mono-paramétrique Système Multi-paramétrique
source d’excitation simple / sources multiples
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Représentation des résultats en 3 dimensions :
* taille-structure (FSC) / activité fermentaire de la levure (Fluorescence)
* Densité de population = couleur
- taille-structure (FSC)
- population
- Activité levurienne (fluorescence)
- population
La cytométrie : quoi ?
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10X
100X
1000X
Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total
30.040 317.610 136.780
300.400 3.176.100 1.367800 4.844.300
Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total
2.670 29.810 11.330
267.000 2.981.000 1.133.000 4.381.000
Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total
330 4.580 1.620
330.000 4.580.000 1.620.000 6.530.000
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Caractéristiques de la méthode
• Gamme de mesure : 100 à 500.000 levures/ml (sans dilution)
• Limite de détection : 100 à 1000 levures/ml
• Répétabilité : <10% de la mesure
• Bonne corrélation entre l’activité fermentaire de la levure et l’intensité de la fluorescence mesurée
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La cytométrie de flux, un outil qui :
Permet un comptage rapide et précisPermet de connaître la viabilité et l’activité
fermentaireApporte une solution efficace pour la
maitrise des mises en bouteille stériles