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Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie
Jocelyne Conne, SRTS VD
ARL, Colmar, 7 septembre 2012
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Quelques étapes de mon parcours • 1985 : Engagée au LCH du CHUV • 1989 : Responsable du laboratoire de sérologie
transfusionnelle du CHUV • 2000 : Fusion avec le laboratoire de sérologie
transfusionnelle du centre de transfusion de Lausanne -> UMT
• 2004 : Responsable qualité • 2007 : Membre de la direction du SRTS VD • 2012 : Nouvelles tâches de direction
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Quelques constatations • 1989 :
– Groupes sanguins en tubes et sur lames, avec des antisérums polyclonaux
– Cartothèque avec plus de 120’000 cartes de groupes sanguins – Tests de compatibilité en 3 milieux – Transfusion de conserves et concentrés érythrocytaires, filtrés sur
demande
• 2012 : – Détermination des génotypages par biologie moléculaire – Enregistrement informatique, antériorités, corrélations bloquantes de
validation et de distribution – Type and screen – Concentrés plaquettaires traités pour l’inactivation des pathogènes
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Mes phrases favorites « à l’époque » …En immuno-hématologie il y a plus d’exceptions que de
règles… …Ne cherchez pas à tout comprendre ni à tout expliquer… …Peu de notions sont indispensables...il faut réfléchir…et être
logique….
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Le SRTS VD c’est:
• Des activités de : – Collecte de sang complet ou de composants – Préparation de produits sanguins labiles – Récolte et conservation de cellules souches
autologues – Echanges plasmatiques et prochainement
saignées thérapeutiques – Distribution de PSL pour tout le canton de Vaud – Laboratoire d’immuno-hématologie patients – Recherche et développement
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Le SRTS VD c’est: • Des dépendances:
– des autres SRTS pour répondre aux besoins transfusionnels du canton de Vaud
– du SRTS BE pour l’achat du plasma ad transfusion – du SRTS BE pour les analyses de qualification
biologique et de biologie moléculaire – du fractionneur pour la vente du plasma
• Des partenariats: – CHUV – SRTS VS et BE (informatique)
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Le SRTS VD c’est:
• Certification ISO • Accréditation ISO • Certification JACIE • Autorisation Swissmedic
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Les analyses immuno-hématologiques « patients »
! Suivi de grossesse ! Investigation (anémie hémolytique,…) ! Tests pré-transfusionnels
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![Page 17: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/17.jpg)
Automatisation - informatisation
• Diminution du risque d’erreur de transcription • Gestion simplifiée du suivi des lots de réactifs • Archivage des résultats et des données • Standardisation • …
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En cas de panne…
• Procédures adaptées • Entrainement de l’ «œil » et du « cerveau »
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Antisérums monoclonaux
• En majorité IgM • Peu de variation d’un lot à l’autre • … Mais… • Un même clone pour plusieurs fournisseurs
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Tests de plus en plus pointus
• Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique consiste à mélanger le sérum (ou plasma) avec des hématies choisies (portant l’antigène approprié pour l’alloanticorps que l’on veut absorber) en utilisant les conditions optimales de réaction pour l’anticorps en cause. Elle permet d’éliminer un ou plusieurs alloanticorps lors de mélange d’anticorps anti-érythrocytaires.
• Test d’inhibition des anti-Chido et anti-Rodgers Les antigènes Chido et Rodgers se trouvent non seulement sur les hématies mais également dans le plasma, fixés sur la fraction C4 du complément. En présence d’anti-Chido ou anti-Rodgers l’ajout de plasma contenant les antigènes correspondant permet de négativer les réactions d’agglutination. Utiliser cette technique lors de suspicion d’anticorps anti-Chido/Rodgers, c’est-à-dire lors d’agglutination de la majorité des hématies-test en Coombs indirect et absence d’agglutination en technique enzymatique.
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![Page 24: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/24.jpg)
La biologie moléculaire
![Page 25: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/25.jpg)
Phénotypes déduits du génotypage
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Mutation
![Page 27: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/27.jpg)
Génotypage Rhésus D dans le sang maternel
Objectifs : • N’injecter de l’anti-D aux mères Rhésus
négatives que si le fœtus est Rhésus positif • Orienter les prises en charge des femmes
enceintes déjà alloimmunisées
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Une histoire sans fin…
L’antigène D
Du – D faible – D weak – D partiel – D variant - ….
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D faible « année 2000 » • Procédure : • Préparer une suspension d’hématies à 3-5 % dans du NaCl à 0.9 % • Identifier 3 tubes • Pipetter une goutte d’anti-D dans les tubes 1 et 2 et une goutte de Rhésus
contrôle dans le tube 3 • Ajouter 1 goutte d’hématies à analyser dans les tubes 2 et 3 et une goutte
d’hématies Du contrôle dans le tube 1 • Incuber les tubes 15 - 30 min à 37°C • Laver trois fois • Ajouter 2 gouttes de sérum de Coombs dans chaque tube • Centrifuger • Lire • En cas d’absence d’agglutination, ajouter 1 goutte d’hématies contrôles par tube,
centrifuger et lire. Si la réaction est négative, recommencer la procédure • Protocoler les résultats
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![Page 34: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/34.jpg)
RHD$(1205)$ status%pa'ent% status%donneur% Phénotype%à%saisir%(1106)% Polymorphisme%nucléo'dique% Référence%épidémiologique%
pos* pos* pos* weak*D*Type*1* 809T>G* Flegel*2006**(How*I*manage…)*
pos* pos* pos* weak*D*Type*2* 1154*G>C* Flegel*2006*(How*I*manage…)*
pos* pos* pos* weak*D*Type*3* 8C>G* Flegel*2006*(How*I*manage…)*
pos* pos* pos* weak*D*Type*5* Flegel*2006*(How*I*manage…)*
pos* pos* pos* weak**D*Type*31* 17C>T* Série*BSD*
pos* neg* pos* weak*parHal*D*Type*4* see*also*DAR* Denomme*et*al.*2005*
pos* neg* pos* weak*parHal*D*Type*11* 885G>T* Série*BSD*
pos* neg* pos* weak*parHal*D*Type*15* "faux"*weak*
pos* neg* pos* weak*parHal*D*Type*21* "faux"*weak*
pos* neg* pos* del* 1227G>A*ou*IVS3+1G>A* Wagner*2001;*Flegel*et*al.*2009;*Körmöczi*et*al*2005*
pos* neg* pos* parHal*DII* 1061C>A* Flegel*2002*
pos* neg* pos* parHal*DIII* Flegel*2002*
pos* neg* pos* parHal*DIV* Flegel*2002*
pos* neg* pos* parHal*DV* Flegel*2002*
pos* neg* pos* parHal*VI* Flegel*2002*
pos* neg* pos* DFR* Denomme*et*al.*2005**
pos* neg* pos* DNU* Flegel*2002*
pos* neg* pos* DBT* Flegel*2002*
pos* neg* pos* DNB* Flegel*2002*
pos* neg* neg* CdeS* Série*BSD*
pos* neg* neg* RHD\CE(2\9)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)*
pos* neg* neg* RHD\CE(3\9)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)*
pos* neg* neg* RHD\CE(3\7)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)*
pos* neg* neg* RHD\CE(4\9)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)*
pos* neg* neg* RHD\CE(8\9)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)*
pos* neg* neg* RHd*psi* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)*
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Les produits sanguins
![Page 36: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/36.jpg)
Produits sanguins: principales indications
• Concentrés érythrocytaires – Maintenir les capacités de l’organisme à transporter et délivrer de
l’oxygène (seuil en général: 80 g/l)
• Concentrés plaquettaires – Assurer l’hémostase primaire (nombre et fonction des plaquettes;
seuil 10 G/l pour les patients en aplasie; 50 G/l pour les interventions chirurgicales lourdes)
• Plasma frais congelé
– Maintenir les facteurs de coagulation (facteurs V et XI); suivre TP (>60%), PTT (<45 s) et fibrinogène (> 1 g/l)
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Prélèvement de sang complet
• Volume prélevé 450 mL ± 50 mL • Solution anticoagulante: 63 mL
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Centrifugation des poches
![Page 39: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/39.jpg)
Séparation des différents composants
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Ajout d’une solution additive
• Le SAG-M contient – du chlorure de sodium pour maintenir l’isotonicité – de l’adénine pour soutenir la production d’ATP et
de 2,3-DPG – du glucose pour soutenir le métabolisme du
globule rouge – du mannitol pour limiter l’hémolyse
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Filtration des concentrés érythrocytaires
![Page 44: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/44.jpg)
Déleucocytation systématique des CE
• Réduction des contaminations • Réduction des réactions fébriles non
hémolytiques • Réduction du risque d�immunisation HLA
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Congélation du plasma
• Livraison au fractionneur (pas de plasma pour transfusion produit par le SRTS VD)
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Fabrication de concentrés plaquettaires à partir de buffy coat
• Récupérer les plaquettes contenues dans une poche de sang total pour produire un concentré plaquettaire.
• Il faut entre 4 et 6 buffy coat pour obtenir une dose thérapeutique de plaquettes (> 2.4 x 1011 plaquettes par poche)
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Extraction des plaquettes après centrifugation
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Prélèvements par aphérèse
• Concentrés plaquettaires • Plasma
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Les contrôles de qualité
![Page 52: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/52.jpg)
Traçabilité papier
![Page 53: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/53.jpg)
et / ou informatique
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![Page 55: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/55.jpg)
Automatisation de la production
![Page 56: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/56.jpg)
Les tests de qualification biologique
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Tests effectués à chaque don • Tests sérologiques: détectent la présence de protéines d�un
pathogène donné, ou d�anticorps contre ces protéines dans le sang du donneur.
• Tests de biologie moléculaire (NAT): détectent la présence
d�ADN ou d�ARN du pathogène dans le sang du donneur
• HIV, HBV, HCV, Syphilis (uniquement tests sérologiques)
• Dès le 01.12.12 : le fractionneur demande 2 PCR supplémentaires (Hépatite A et Parvovirus B19)
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Les autres risques infectieux
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Sources de contamination bactérienne
• Bactériémie du donneur • Mauvaise désinfection de la peau du donneur • Pas d�élimination des premiers millilitres
prélevés • Rupture de stérilité des poches lors de la
préparation des produits
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Pathogènes émergents
• Malaria • Rift Valley Fever • Yellow fever • Chikungunya • West Nile Virus • Dengue
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![Page 62: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/62.jpg)
Mutation des virus
• Les réactifs utilisés pour la détection sérologique ou en biologie moléculaire peuvent d�un coup se révéler inefficaces pour détecter un virus muté
![Page 63: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/63.jpg)
Les mesures préventives
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Inactivation des pathogènes (Intercept)
Pour les concentrés plaquettaires: • Ajout d�amotosalen • Illumination (UV) • Retrait de l’amotosalen
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![Page 66: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/66.jpg)
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Inactivation des pathogènes pour le plasma ?
• Seuls les plasmas des hommes peuvent être utilisés pour la transfusion
• Les plasmas issus de sang complet devront être poolés avant traitement (volume minimal à respecter) -> le plasma des nouveaux donneurs ne pourra pas être utilisé (délai à respecter)
• Le plasma devra être filtré • Les plasmas traités devront être splités • Prélèvements par plasmaphérèse (donneurs B et AB)
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![Page 70: Nouveautés et perspectives en immuno-hématologie · 2012-09-09 · Tests de plus en plus pointus • Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS La technique](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022041503/5e238c248c5f28770b371ac0/html5/thumbnails/70.jpg)
Les bases de la sécurité transfusionnelle
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Les besoins en PSL
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Distribution de PSL par le SRTS VD
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Choix des CE à transfuser
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Les donneurs
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Vigilance donneurs
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La promotion du don & le marketing
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Magazine d’information
• Parution 2 fois/an
• Env. 16 pages
• Tirage 25’000x
• Distribution via les pharmacies, Naville, hôpitaux, etc.
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Give-away : • Autocollants • Jeux de cartes • e-cleaners iPhone / iPad • Accroche-sacs • Porte-clé • Parapluies • Bloc-notes & crayons • Post-it • Stylos
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Quelques projets et actions à venir
• Présence sur les réseaux sociaux • Attitude proactive vis-à-vis des donneurs, en particulier
après le 1er don (ex. prise de nouvelles) • Ouverture un samedi matin par mois • Vaccination contre la grippe • Ouverture nocturne avant Noel • … • … • …
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merci