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Obtención de Componentes Sanguíneos: Fraccionamiento
Enrique Girona Llobera31 de enero de 2008
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Blundell J, The Lancet, 1829
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Ca. 1876, Bellevue Hospital, N.Y.
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1892. Adler J, “Transfusión de sangre de cabra”, detalle. (Simon Bernheim "Transfusion de sang de chevre et tuberculose pulmonaire")
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Dr. Durán, 1937
Dr. Lewisohn, 1915
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Fenwal, 1953
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Hemoterapia
• Los progresos en la obtención y conservación de los diferentes componentes sanguíneos han hecho posible la administración separada de las distintas fracciones hemáticas
Hemoterapia Moderna
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Hemoterapia
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1,100Glóbulos Rojos
1,062-1,082Glóbulos Blancos
1,058Plaquetas
1,026Plasma
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• Distintas configuraciones bolsas de extracción:– “Arriba-Abajo”, “Arriba-Arriba”
• Filtración prealmacenamiento• Fraccionadores automáticos
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Centrifugación
Centrifugación
Suave
Media
Intensa
PRP
CH
Plasma
CLP
CHPL
Plasma
CH
Plasma
CLP
CHPL
Media
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Conservación
• Como consecuencia de fraccionar la donación de sangre total.
• Componentes sanguíneos obtenidos precisan condiciones diferentes para su conservación.
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Condiciones óptimas de Almacenamiento
• En el caso de componentes celulares(hematíes y plaquetas) el almacenamiento debe asegurar no solo la FUNCIÓN si no también su VIABILIDAD.
• En el caso del plasma y sus derivados, deben conservar la función de las proteínas, especialmente de los factores de coagulación.
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Hematíes
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Almacenamiento de los hematíes
OBJETIVO:• Mantenimiento de la viabilidad celular:
– Supervivencia de los hematíes a las 24 horas de la transfusión (≥75%).
• Mantenimiento de su función celular:– Capacidad de las células transfundidas para
transportar normalmente el oxígeno a los tejidos.
• Refrigerados a 2º C a 6º C
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Conservación de los hematíes
Produce una serie de alteraciones:
“Lesión de almacenamiento”:
1. Cambios bioquímicos2. Cambios biomecánicos
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Metabolismo del hematíe
• Dos fosfatos orgánicos desempeñan un papel fundamental:
– 2,3-difosfoglicerato (2,3-DPG)
– Adenosintrifosfato (ATP)
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• 2,3-DPG hace que la hemoglobina tenga una mayor afinidad por el O2 cesión menor del mismo a los tejidos.
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• Grupos S-nitrosotioles – S nitrosohemoglobinaAcción sobre arteriolas y capilares incremento
flujo sanguíneo
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1.Cambios bioquímicos
a) Descenso progresivo en los niveles de 2,3-DPG.
b) Progresivo descenso en la concentración de ATP y cambios morfológicos en los hematíes.
c) Cambios metabólicos: • Preferencia vía glicólisis anaerobia frente a la
pentosa fosfato, perdiendo poder reductor volviéndose más sensible a ataques oxidativos.
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1.Cambios Bioquímicos: 2,3-DPG
• Los niveles de 2,3-DPG disminuyenlinealmente las dos primeras semanas de almacenamiento.
• Recuperación rápida de la mitad de los niveles de 2,3-DPG a las 12 horas de transfundidos.
• A las 24 horas niveles normales de 2,3-DPG.
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Metabolismo Hematíe
•Energía: ATP
•NADH: Mantiene el hierro reducido (ferroso).
•2,3-Difosfoglicerato: Regula afinidad de la hemoglobina por el oxígeno
90% vía Glicolisis anaerobia
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Soluciones de almacenamiento•ACD: Acido-Citrato-Dextrosa (glucosa)
•CPD: Citrato-Fosfato-Dextrosa (glucosa).
Retrasa la pérdida de 2,3-DPG, mejorando la función y ligeramente la supervivencia al incrementar el pH.
•CPD-A: Citrato-Fosfato-Dextrosa (glucosa)-Adenina.
Adenina se desamina en inosina rápidamente →niveles aceptables de ATP.
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2.Cambios biomecánicos
a) Pérdida de fosfolípidos de la membrana eritrocitaria y una distribución anómala de los mismos:
– Equinocitos y esferocitos
b) Aumento de la fragilidad osmótica:– Hemólisis de los hematíes
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Soluciones aditivas
• CPDA-1; CPDA-2– Incremento cantidad de glucosa
• SAG-M:– Manitol como protector de la membrana
eritrocitaria.• ADSOL:
– Incremento dosis de adenina
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Viabilidad de los hematíes Refrigerados
• ACD ó CPD: 21 días• CPDA: 35 días
Soluciones aditivas:
• SAG-M [Salina, adenina, glucosa, manitol]: 42 días.
• ADSOL: 45 días.
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Futuro
• Estandarización de los CH• Alargamiento de caducidad actual• Disminución riesgo transfusional por
infección• CH universales
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Estandarización
• Disminuir la variabilidad en el contenido de hemoglobina por unidad – Adaptar extracción a la volemia y
hemoglobina/hematocrito del donante.– Eritroféresis
• Conocer la cantidad de hemoglobina de los CHs ajustaría el consumo a las unidades necesarias.
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Incremento Caducidad
• 1986 (Meryman, et al.): Posible almacenar hematíes viables durante 100 días.
• Soluciones Aditivas Experimentales (EAS):– NaCl– NaH-CO3
– Na2HPO4
– adenina– glucosa– manitol.
EAS76: Cambios en la concentración de NaCl } 12 semanas
(2003 Hess et al.)
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haematologica 2007;92 (Extra 1) 63-66
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Disminución riesgo transfusionalpor infección
• Inactivación de patógenos en CHs:– Cerus: S-303, suspendido en Fase III (2003)– Anticuerpos en 2 pacientes transfundidos con
hematíes tratados
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CH universales
• Tratamiento enzimático
• PEGilación (PoliEtilenGlicol)
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Acción Enzimática
Liu et al. Nature Biotechnology 2007
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Plaquetas
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Centrifugación
Centrifugación
Suave
Media
Intensa
PRP [PQ]
CH
Plasma
CLP
CHPL
Plasma
CH
Plasma
CLP x 5 + SAP pool
CHPL
Media
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Almacenamiento de plaquetas
• El almacenamiento debe asegurar no sólo la FUNCIÓN si no también su VIABILIDAD.
• No contienen ADN ni ARN activación y liberación de sus gránulos incapaces de resintetizarlos.
• Particularmente susceptibles a dañarse si se almacenan de manera incorrecta.
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Plaquetas: Cambios Morfológicos por Activación
microtúbulos
1μm
microfilamentosα δ
gránulos
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Puntos críticos en la conservación de las plaquetas
• Temperatura• pH• Intercambio gaseoso
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Conservación de Plaquetas
• Temperatura: – Frío produce DAÑO PLAQUETARIO las
plaquetas cambian su forma DISCOIDAL por ESFÉRICA.
• 18-24ºC
• Observación del fenómeno del remolino u “ondas muaré” (“Swirling”)
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Conservación de Plaquetas
• pH:– Pérdida rápida del glucógeno intraplaquetario
Lactato pH– pH de 6,2 a 6,8 cambios reversibles– pH < 6,2 proceso irreversible:
• Hinchazón• Aglutinación• Lisis
• 6,4-7,4
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Conservación de Plaquetas
Intercambio gaseoso:• Bolsa permeable a los gases:
– Oxigenación adecuada– Eliminación del dióxido de carbono resultante del
metabolismo del ácido láctico• Mantenerse en agitación contínua:
– Facilitar el intercambio gaseoso a través de la bolsa.• 24 horas sin agitación, sin daño irreversible
plaquetar.
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Conservación de Plaquetas
• Viabilidad plaquetar: 7 días• Periodo máximo de conservación: 5 días
– Riesgo de sepsis en receptores por contaminación bacteriana.
• RD 1088/2005: hasta 7 días si se emplea un método de detección o reducción de contaminación bacteriana.
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El Problema:
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El problema: contaminación
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Inactivación
• Plaquetas:
– Amotosalén (psoraleno S-59), Cerus.– Riboflavina, Gambro.
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Intercept (Cerus)
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Mirasol (Gambro BCT)
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Automatización
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Parámetros Fraccionamiento
• Extracción de 450 mL ± 45 mL [+ 63 mL de CPD, (100 mL de SAG-M)]
• Tª conservación sangre recién extraída:– Refrigerada entre +20º C y +24º C :
• Placas de 1,4 butanodiol ( de + 37º C a + 22º C)
• Hasta un máximo de 18-24 horas prefraccionamiento (mínimo 2 horas).
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Moltes Gràcies!!!