Transcript
Page 1: Poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol oxidase immobilisation

����� ����������� ����� ��� ,4:%'%+*%'&& 4&00&5;<�: %0�%00&8���.-7

Poly(hydroxyethyl methacrylate-��-glycidylmethacrylate) reactive membrane utilised forcholesterol oxidase immobilisationSinan Akgol,1 Gulay Bayramoglu,2 Yasemin Kacar,3 Adil Denizli1 andM Yakup Arıca3�1Department of Chemistry, Hacettepe University, 06532 Beytepe-Ankara, Turkey2Department of Chemistry, Kırıkkale University, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey3Department of Biology, Kırıkkale University, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey

(Rec

� CoE-ma

� &

��������� �� ������������� ������������������������ ������������� � ��������� ��������

��� �������� �� !���������� ��������������� " ������������� ������������ ����� ���

�������� ������������ ���� �� ��� �������� " �� ��������# �$������%���������� �&'(�)

*�������� ������ ��� ���������� �������� � ��� �������� �� "����� �+����� ���� �������

��� ���� ��%�� ��� ��� ������ ��%�� " ��� ��������) �� �+����� " ,-�� " ��$��� ������������� ��� ��� " ��������# ��� ��� �%�� ��$��� �������� ��%� ./0 " ��� ������� ����+���)

&����������� ����+�� ��� �� ��������� " ��� ��$��� �� ���� �� ��� ��������%�� ���������) 1��

����%� ��������%�� ��� ,°* ������ ���� ���� " ��� "��� ��$��� ��� ��� �����2������ ������) 1��������� ������+���� ���� �������� "� "��� ��� ���������� ����������� �� /3°* ���� ����%����� ���� "���� 4)3.�43�4 ����4 ��� �� ���� �).5�43�� ����4# ��������+���) 1�� ���������� ��$��� ����+������ "%�� � �� 6%��� ������ �� ��� �������� �����������)

� �33� 7����� " *������� &��%����

8������� ����� ������� �� �� ���� �� ��� ������� �� � ����� ��������� �� ����� � �����

INTRODUCTION��� ������� ������� ��� ��� ����� � ������

�� ��� �������� �� �� ������� � � � ������� ��

������� ��������� �� ��� � ��� ������� �������

� ������� ������ �� ������� � ��������

������� �� ����� ���� !��� � �� �� ���� � ����

� " # ��$���� � ��� ���� � � ��� �� �����

������ �� ���� �� �������%�& �� ���� �� ��

���� �� ���� ��� � ������ ��� ������� � �

�� ��� � ����� ��� ������� ������ � � ������

������� �� ��� �������� �� ���������'�( ���

���� �� � ��� ������� � ��� ���� ����� �����

� � � ����� ��������� � �� ��� �� �������

��������� �� ���� �� ���� � ���� � � ������

������ ����� ���# )� � ���� � ����� #�����

#���� �� �� � � ������ ����� #��� ��� �

���������� ��� ������ �� ���������� ��� ��� ����

��� ���� �� � ��� ������� � ��� � ��� ���

��� ������� � � � ����� �� ������� � � ��

�� � � �� �������� ������(*+

,� ����� � ����� �� "������������� ������

��� ������� ��� ����� � �� �� ������ � � '����� �� ��� ���� �� ������ � ����� �� � ������

� � ��� "��� ������ ������� ����� �� �������

������ ������� �� ������ ����� �� ����� � �

eived 18 April 2001; revised version received 13 November 2001; acc

rrespondence to: M Yakup Arıca, Kırıkkale University, Department ofil: [email protected]

00& ! ����� � ,������ �������� ����� ��� 0272*.%0'8&00&89'

��������-�. / �� ���� �� � ���� � �����

%'0*&+0�� � �� ����� � �� %00��� � #���� �# �

����� � �����1�� #��� ���� ���� �� ������� ��

������ � ��� �� �� ��������� � � �� ����� � ��

��� ��� ��� �� ������� ���� ���� ����� ���� ����

�� ����� � ����� �� ������� ����� � ��� ���� ����

�� ���� ������ � �� ����� �� �� ����2

3 ��4&���� ������� ���������5 4�����5

���� ���� � ����� �� ���� ���� ���� ���� ��

��� ������� � � ������� �� �� ��� �� � �����

�������� �������� ��� � ��� �������� ����

#��� ����� � ���� � � ����� ��� ����� �� � ��

� ��� �� �� � ������� � ���� #� �� � �� ��� �

��� ������� � �� ���� ��� ��� �� ��� ����� � �

� �� � ���� ������� � ����� � ��� ���� #�� � �����

�� ���� ����������� ���� #�� � ����� ��

���������� � �� ��� ��� �� ��� ��� � ��� �

������� �������� � � �� ������ �������� �

����� � ���� � ����� �� ������ ����� ���

�� ������ ������ ��� ��%0*%&

6������� ��������� 46��5� ��� ���� �

��������� ��� �� &�'��� ��� �� �� ���

������ �� ���� � �� #���� ���� #��� �����������

��� �� �� ���� ��� ��� � ��� � � � �����

� ����� � ��� #��� �� ��������� #��� �� �� ���)��

epted 2 January 2002�

Biology, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey

0�00 %'%+

Page 2: Poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol oxidase immobilisation

��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��

=� � ������� ��)� � ����� � � ������� � ����� ��

������ ��� �� ���� ����� �� �)���� �����%'�%(

! �� � ��� ���� �� ���� ��� � ���� �����

�� �� ������� �: 4%5 ��������� � � ������

����� #��� �� �� �������� ����� 4���� � ��� �

��� � ����� ������ ����� �� �������5� 4&5

����� � � ������ �� � � �������� � � �#

�������� � � ��� � ������� ������ � ��� 4����

� � ��4������� ���������� ���������� ������������5� � ��4��� ������� ����� ���)�����������5 � ��4��� ������������ ���������� �������

���5�%7�%+ �� ����� � � ���� ������ ��� �����

� ����� ��� ���� �� ��� ������ �� ������ ����

�� �� � ��� ��� ������ �� ������ ��� ������

�� �� ������ �� ���� � ���� � ������ ��

� ��� �� �� ��� � ��� ��� ��� ���� ��

�$������ ��� � �� �� � ������ �� � �� �����

� � � ��� �� ��� � �������� � �������

�� ��� ������ ������ � �� �4����*6��5

���� � ������� ������ �� �� ���� � ��� #�

����� �� ��� ������ � � �� � � �������� �

� &���� ������� ��������� 4����5 #��� ��������

��������� 46��5 �� >?��������� �� � � �����

���� � �� ��� ������� � � ������ 4������ ����� ����� ������� ��=/5� ��� ���� � �� ��������� �� ���

��� ������ �� �� � ��� �� ����� �� ��� �����

��� ��� ������ ���� #��� �� ��� ���� � ��

������ � � � � � � � ����� ��� ������� � �

������ �� � ����� �� ������ �� ������ ����

� � #� ���� � ��� ��� ������� � � �� ����� �

����� �� � ����� ��������� �� ����� � �� ����

�� � ����� ��� ������� � �� �����*6��

� � ���� ������ �� � ������ ������� ������

��� ������ � ��� ������ � ��� �� ���� � ����

�� � ��� � ������� � � � ������ ����� �� �

��������� � � � ������� � � �� ����� � ��

�� � ���� "����� <������ � ����� �� � ��� ��

��� ������� ������ �������� �� ������ ���

�������� �� )������ ������ 4�� �� ���5#�� ���������� �� ����� � � ����� �������� �����

�� �� �� ��������� �� ������ ��� � ��� ���

� ������� ������ #�� �� ��������

EXPERIMENTALMaterials,� ����� � ����� 4�, %�%�'�+� � � ������� ��������� �� �������� � #��� #��� �����1� �������

'(>���%� � ���5 �� �� ����� 43<;� �, %�%%�%�-� ��� ��� � � � ������� &00>���%� � ���� #���������� �� ��� !��� ,������ , 4!� @ ���� �<�

>!�5 �� ���� � �������� &���� ������� �����

����� 4����5 �� �������� ��������� 46��5

#�� ������ � � A��) �6 4!#�������5� ��

� �� #� ��������� ���� ������ ������ �� ���

������� � ��� B��� �� �� )��� � (°, ����� ������������ �� ������� ������ 4��=/5� �� ����� ��

�� � C�%00� ������������ ����� ��� ��� ��

� ���� ���� ������ 4=!�5 #�� ������ � �

!��� ,������ , � ��� ��� �������� #�� �

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

������� ��� �� ������� � � ���) �6

4;������ 6����5�

Preparation of poly(2-hydroxyethyl methacrylate-��-glycidyl methacrylate) membrane �� � ��4&���� ������� ���������� �������������������5 �4����*6��5 ��� ��� �� ��� ����

��� � � #� ����� �� >? �������� �� � � ���

������ �� �� � �������� � #� ���� �� ��

��� ���� � ��� 4������: 2�0��5 � &7°, ���� ��� ��� �� ����� � %�� �� ������ ����

�� � ������ 47��5 � ������ ���� 4%�+��

%�'&�%0�& � �5� 6�� 40�(�� '�'%�%0�& � �5���=/ 4%0��5 � � �������� � ������ �� �� ��

���� ����� 4'��� 70��� �� -�05� �� ��������

������ #� ����� �� �B�������� � &7°, �

%7��� �� ���� ����� #������ �� ������ #�

���� � ��� ��� ��� � ��� �� ��� ��� � � ���#��

����� ��� ���� � � &0���� ���� � �������� ��

��� �4����*6��5 ������� #�� #���� �����

����� #��� ��������� #�� �� ��� ��� ����� ������

4������: %�0��5 #��� ��� � �

Membrane characterisation studies���������� �� �� ��� ������ �� �������#�� �� #�� � � ) �� ��������� #�� � (.�� �# ����

������ ���)� 4�%�5 #�� #������ ��� �� ������� ������ � #��� �� ���� �� ����� ��� �

+0°, � &(� ����� � ����� #������ �� #�� � ����� � ��� ������� �������� �

� �� #�:

D�� � ����� 4%w/w) � ���� � ������� � %00�%�

D��� �� �� �� � ��� #������ � �# ���� �� ��

������� ������������

� ������ � ��� �� �� ���� !������ ����� � ��� ����� � ��� ���� � ��4����*6��5 �������

#�� ������ ����� E�<@ E�! 7+00 �������

����� � ��� �� ��� ��� � ���� #��� � �� ����

������ �������

���� �� ��� A �F ����� � ��� �4����*6��5������ #� ������ ����� !������� A �F

.000 ����� ����� �� � ����� �4����*6��5

������ 40�%�5 �� G= 40�%�5 #�� �� �����

������ ��� ������ #� ������ � � � ����� ��

��� ������� �� ����

Immobilisation of cholesterol oxidaseA����� �� �� �� � �� ����� �4����*6��5

������ ���)� 4%0�� ������ %�0��5 #�� �B�����

���� �� �� ����� ����� 470��� �� .�05 � &��

�� ������� �� � ��� ��� ���� ������ � �����

��� �� ����� � ����� 470��� %�� ���%5� ��� �������� � � �� ����� � ����� � ��� �4����*6��5

������ ���)� #� ���� �� � &&°, � %.��

#���� � ����� ���� ������ ��� ���� � ������� ����

%'%-

Page 3: Poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol oxidase immobilisation

� $#��%� �� �

���� ��� �� ��� �4����*6��5 ������ ���)�

#�� �� ��� � � ��� ������ �� #���� #��� %�

/,� �� ���� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05�

�� � ��� � ��� ������� �� ����� � ����� �

��� �4����*6��5 ������ ���)� #� �����

����� �� ������� ��� ������ �� 1�� � ������

�� �� � � ���� #����� ��� ��� ������� � ������

����� , ����� =������ =��� � ��� ���� �

�������� �� =�� ��%- � ������ � ���� � ��

������� #��� =!� � ���� �� � )� #� � ������� �

40�07*0�70�� ���%5 #� ���� �� ��� ������� � �� ���� �� ��� ������ �� #�� � ���� ���

Activity assays of free and immobilised cholesteroloxidase �� ������� � ��� �� ��� ������� �� ����� �

����� #� ��������� �� ���� � ��� � �� #���

� ����� ������ ���� ���

,� ����� �<& �&< �����������,� ����� � �����

,� ��������'� ���&<& �&�

�&<& ��;��������� ������3� �������;����������&<

������ �������

�'�� %00�� �� ����� � � ���� � 4%00��5 #� ���

��� �� ���� ����� �� ����� � 4'�.+�5 �� ������ �

� ���&� � 4%'��5 �� �� � C�%00 4(��5� ����

������ � '0���� ��� � ���� #� ��� �� � %00��

#��� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05� ��� �����

� ���� � #� ���� �� ��� �� ��� ������

�� ��� ������ � ������ �� ����� 4+�0��5

�� ������������ 4%'�&��5 �� �� ����� �����

4%00��� 0�%�� �� -�05� �� ��B� � � (�.�� � ����

������ �� 0�%�� � �� ����� � � ���� � 40�7*

%0��5 #�� ����� �� ���������� � '7°, �

%0��� �� #�� ���� �� ���� � #� ���� �����

�� ����� 0�%�� � ������ � ���� � 4� �������

�� ����� � ����� %�� ���%5 ��� ������� ���

���� 4�# ������ ���)�5� ���� ����� � �

�������� ��� 4%�7��� '0H5 �� ���� #�

������ � 7&7�� �� >?8?�� ����� �� � ����

4!������� � ��� %+0%� )� � E��5�

���� ������� ���� #�� ���� �� �� ��� ��

��� (�0*.�0 �� �������� ��� &0*(7°, �

�������� ��� �� �� �������� � 1��� � ��� ���

�� ��� ��� ������� ��������

<�� �� ����� � ����� ���� � ��� ���� � � �

����� � � %�� � �� ��������'� �� �� �&<& �� ������� ��� � ����� ��� �� �����1� ������� �� ���

����� � �� ����� � ����� ����� �� �� � � �����

Stability of immobilised cholesterol oxidase inrepeated use �� ������ � � ��� ��� ������� �� ����� � �����

������� ��� ������ ���� ��� #� ������ �

�������� � �� �� ��� �������� ���� !���� �� ����

��� ��� ��� ������������� ���)� #�� #����

%'%.

#��� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �� ���� �

����� ��� ���� ������ '0 ����� �������������

Thermal stability �� ����� ���������� � ��� ��� �� ��� �������

�� ����� � ����� #�� ���� �� �� ������� ���

������ ������� � ��� ������ ��� ��� � ����

�������� ��������� 470� +0 �� -0°,5 �� �� ������ ����� 40�%�� �� -�05 � %00���� ���� ���

%0��� ���� ������� ����� #� �� ��� ��

����� � �������� ������� � �������� � ���

�� 1��� �� �������� � �� � ������ #� #���������� � �

��$ � ��$0 � #�� �(�#��� $0 �� ��� ������ ������� �� $ �� ��� ������� ������� � 4���5�

Storage stability ��� ��������� #� � ������� � �������� ���

�������� � ��� �� ��� ������� �� ����� � �����

����� �� ��� �� �� �� �� ����� ����� 40�%��

�� -�05 � (°, � +0 ���� �� ������ ���������

#�� ���� ��������� � �������� � ��� �� ���

������� � ��� ����� � #� �������� � ������

��� � ��� ������ ������� � ���� � ��� ������

��������

RESULTS AND DISCUSSIONProperties of the p(HEMA–GMA) membrane support�� ��� ������ ������ � �� �� ���� � ����

� ������� ������ ���� #� ����� �� � � ���

������ � � ��� ������ � � ��� &���� �������

���������� #��� �������� ��������� �� >?

�������� �� � � �������� � �� ��� ������� � �

������ 4��=/5� �� � �� ��B������ ���� ���� ��

�� �� ����� � �� � � ����� ������ ��� ������� �

��� ���� ������ ��� ������ � � ���� ��

��������� � ����� ���� � ������� ������ ��� �����

� ���� �� � ��4����� �� � �5� �� ������ ���� �

#� ��������� �� ��� ��� ������ �� �� � �� #�

����� ��� ����� ��� ��� ���� #��� �� �� � ���

1��� �� �� �� ���� � ��� � ��� � �������� � 8

� ����� ��� ������� � � � ������ �� <I, ��

/I, � ��� � ��� �� ��� �� ���� � ��� �

�������� ������ � ��� ��� �� ������ �������

���� � ������ � ��� �� ���� � ��� ��� ������� �

� ������� �� � ������ A����� �� �� �� ����

���� ���� �� � ��� � � � � ����� ���)��� #���

�������� ���� ���� � ��� 4��� � ��� �� ���� ���

� ���5 � ��� � ���� ������� ���� �������

���������� � ����� �� 4�� �� -�05%+ �� �������

������� � ��� �4����*6��5 ������ �� ���

������ �� A�� %�

�� ������ �� �4����*6��5 ������ ���

������ ��� �� ��� ������� ��� � �������� ��� ����

!����� ��� � �� � � #�� #�)��� ��� ��� ���

� ��� #����� ��� ��� ���� ��� ������ ��� �������

���#��� ��� � ���� ����� �� ����� � ���)� �

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

Page 4: Poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol oxidase immobilisation

Figure 1. Chemical structure of p(HEMA–GMA) membrane.

Figure 2. SEM micrographs of poly(HEMA–GMA) membrane: (A) surface;(B) cross-section.

��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��

#��� �� #�� � ����� �� ��� �� ��� ��� ���

#��� ��� ��� � ������� �� ������ ��� ������� �

�� � ���������� �� #�� � ����� � ��� �4����*

6��5 ������ #� ��������� �� ��� #�����

��������� ���#��� ��� #�� �# ���� �� ��� ��

������� �� �� #� (-H�

!������ ����� � ��� ���� 4!��5 �������� ��

A�� &4�5 �� 4=5 �� # ��� ����� �� � �������� ��

������� � �4����*6��5 ������� ������

������� �� ������ �� #� ������ � �� �����

�� ���) �������� #���� � ��� � ���� ��� �

� ��� ������� � � �������� �� ����� � ������

� ��� �4����*6��5 ������ �� �� � ����

���� ��� ����� �� ��� � ���� ������ �����

� #��� � # ������� �� ��� ����� �������� �� ���

�����

�� � � ����� � � �� ��� � ���� �� 6��

����� � � ��� �� A �F ����� �� ��� �� �� #� ��

A�� '� ��� A �F ����� � �4����*6��5 ��� ���

���������� ��������� ����� � ��� � ��� ��� �

����� ���� �� � � � ���� � �'700���%��� �� ��� ���������� ����� �� � � �� ����

�� 6�� � ��� ��������� ����� � � �&2'0���%

�� ��� ������ ����� � � &2+0���%� �� ����� �� %-(0���% �������� ��� ���� � �1���� � � � ������ �� 6��� �� �� ���� � �� ����� ��� ���

� 2%0���%�

Figure 3. FTIR Spectrum ofp(HEMA–GMA) membrane.

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

Immobilisation of cholesterol oxidase �� ������ #� ��� ������� � ��� �4����*

6��5 ������ �� � ����� � ����� ���� �)����

� ����� ��� �� ������ �� ���� � ��� � ���

������ �� ��� ��� � ��� � ��� ������ #��

%'%2

Page 5: Poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol oxidase immobilisation

Figure 4. Covalent immobilisation of cholesterol oxidase onp(HEMA–GMA) membrane.

Figure 5. Effect of pH on the activity of free and immobilised cholesteroloxidase.

Figure 6. Effect of temperature on the activity of free and immobilisedcholesterol oxidase.

� $#��%� �� �

� ���� ��� � ���� �� ���� ������ � ������ ���

��� ������� � ���� � 4A�� (5� �� ���� �� A�� &� ���

������ �� ��� �� ��� ������� � �� � ��� ������

����� � ��� ������ �� #����� ��� � � ����

�� ��� ������ �� ���� � ���� ��� ����� �

� ��� ���� � � ��� ������� #��� ��� ��� �������

������� �� ���� � 7'�� � ������ #� ��� �������� �� ��& � ������� �� ��� � ��� ������

������ � �� +-H � ��� ������ ��������

?���� � ��� )������ ������ �� � ��� � ����� ��� ������� �� ����� � ������ #�� ���������

����� �� ����� � � �������� �� ��� ��� ��

��� ������� ������ �������� ��������*������

)������ ����� � #� ������� A ��� ��� ������

�� #� %�2��� ��� � � ������� ��� �������

�� ����� � ������ ��� ����� �� #� &�-���

�� ������� '.H ����� ��� ��� � ��� ���

������� A ��� ��� ������� ��� #� '&>���%

� ����� ��� �� � � ����� ��� ������� � � ���

������ � ��� �4����*6��5 ������� ���������� �����1����� � &%>���%� �� ����� ����� )������ ������ � ��� ��� ������� ������

� ��� �� ��� � ��� ��� ����� ������� �� 4�������

�� � ����5� � ����� � ������� �������

������ �� ��� ������ � ������ 4��� ����� ��

� ����� ��������5� A����� �� �� �� ��� ��

����� ��� ��� ������� � � ��� ������ �� �����

������ ��� � �� ���� � ��� ������� ����

�������� ��� ����� ��������� �� �� ���� ���

��� ������� �� ����� � ����� �� #�� � #� ������

1���� � ������ � ���� � ��� ��� � �������

Effect of pH and temperature on catalytic activity �� �� ������ � ��� ������� � ��� �� ��� �������

�� ����� � ����� �� ���� ������� �� ����� � ���� �

� �������� �� ����� 4(�0*.�05 �� ��� ������ �

�������� �� A�� 7� �� ����� � ������ ������� �

��� ��� ��� ������� �� ����� � ����� � �� �� ���

��� 4 ��� �� -�05� �� �� � 1�� � ��� ��� �

������� ������ �� � �������� �������� ���� ���

��� ������� �� ����� � ����� ������� �����1�����

%'&0

��� ��� �������� �� ��� ��� � � � � #� ��

������ ��� ����� �� � ���� �� �������� � ���

��������� � � �� ����� � ����� � ������� ��������

� � ������ ��� �������� � ��� ������ � �������

� ��� ����� � ��� �4����*6��5 �������

�� ������ � �������� � ������ ������� #�

����������� �� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �� ���

�������� ��� &0*(7°,� �� ����� ��������� ������ � ��� ��� ������ #� � �� '7°,�#���� ��� � ��� ��� ������� ������ �� ��� � �

��������� �� � ����� ��� ������� � #� � �� (0°,4A�� +5� �� ��� �������� � �� ��� ������� �������

��������� ����� ������ �������� ����� ���

���� ��� � �������.�%2 �� ������ ��� � ����� �

��� ������ � ��� ���� � �� ����� � �� ��� ��

"��������� �� ����� �� ����� ������ � ����� � ���

������ � ������ � � ����� ��� � �� � �� ��

�� � � ������� � ��� ��������&0

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

Page 6: Poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol oxidase immobilisation

Figure 7. Stability in repeated use of immobilised cholesterol oxidase.

Figure 9. Thermal stability of immobilised cholesterol oxidase at threedifferent temperatures.

��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��

Stability in repeated use �� ���� �� �������� � ��� ������� ������

������� �� ��� ��� ��� �� � ������� �� �������

�������� � ��� �)� ��� ������� ������� � �

������ �� ��� ���� ��� � �������� <���

�� �� �������� � ��� ��� ������� �� ����� � �����

#� ��������� � ���������� ���� ���� �� �

'7°,� �� ������ �������� �� A�� - �� # ��� ���

��� ������� ������ ������� ������ �� �� ���

��� � ��� ����� ������� ��� %+ ������� ���� ����

����� ������ �� �� ����� � ����� � �� #�

������� �� ���� � �� ����� &(H ��� '0 ������ �

���� ���� �� � ������ �������� � � ��� �������

�� � � �� ����� � ����� �� � ����

Thermal stability �� ������ � �������� � ��� �������� � ��� ���

�� ��� ������� �� ����� � ����� �� �� #� �� A��� .

�� 2� ������������ �� ����� � ��� ��������

Figure 8. Thermal stability of free cholesterol oxidase at three differenttemperatures.

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

�������� ��� ����� �� � ����� �������� �

#� ������ � ��� ��� ������� �� ����� � �����

� ��� �4����*6��5 ������ � ���� #���

��� � ��� ��� ������� �� 70°,� ��� ��� ����� ������� ������� ������ +'H �� ..H ��������

������������ ��� %00��� � ��� �������� �� +0°,���� ��� ������� � � #� ��������� � ���� �� #�

�� ��� ��� ��� � �� = �� ��� ��� �� ��� �������

������� � �� �� � ���� ������ ������� � -0°, ���

(0��� �� .0��� � ��� �������� ������������ ��

�������� �� ����� �������� � �� � ������ �

��� �� ��� ������� ������� #�� ��������� � �

��� �������� ������ ������� &�'� ����� � ������������ ���������� ��� ������ � �������� ��

��� %� �� ����� �������� � �� � ������ �

��� �� ��� ������� ����� �� � -0°, #��

�������� � #� 4���5 %�0+�%0�% ����% �� #� 4���5&�+.�%0�& ����%� ������������ ���� ������ ���������� ��� ���� �������� � ��� ������� �� ����� �

����� ��� ��� �����1����� ����� � ����� ����

������� �� ��� ��� �������� � ������� �������

�� � ��� ������� �� ��� � ������ ������� � � �����

������� # ��� �� ��������� ������� �����

�������� �� ���� �� ��� � ����� � ��� ���

����� �������� �� ��� � ���� ���# ) �� ������

� ��� �������� �� � ����� ��� ������� � ���� ��

� ���� ��� � ������ ��� ����� ������� �

��������&0 �� ����� �� �� �� �� ���� �� ��� ���

��� ��� ���� ���� � !������� !��� ���

� ��4��� ������� ���������5 �� � ���������

� ���� ������� � � ����� �������� � �� �����

����� ����� �����������&% <� ��� ���� � �����

������ ��� �4����*6��5 ������ �� ��� �

������ ���# ) #���� ������� ����� ����� ��������

��� ��� � ��� ��� � �������

%'&%

Page 7: Poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol oxidase immobilisation

Table 1. Half-life (t1/2) and inactivation rate constant (ki) of the free andimmobilised cholesterol oxidase at three temperatures

�����������

°�

���� � ���� ����������� � ����

�� ���� �� � �� ���� �� �

�� ��������� ��� ��������� ��

�� ��������� �� �������� ���

� ��������� �� �������� ��

Figure 10. Storage stability of free and immobilised cholesterol oxidase,stored at 4°C in phosphate buffer (0.1M, pH 7.0).

� $#��%� �� �

Storage stabilityA�� �� ��� ������� �� ����� � ����� ����� ��

#�� �� �� �� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �

(°, �� ������� ���������� ���� �� �

��� � � +0 ��� 4A�� %05� �� ��� ������ � ��

� �������� ��� ������� #����� &0 ���� ��� �������

����� �� � �� '7H ������� ����� ��� ��� ��� ��

��� ������� � ����� ���� � � �� ��� ������ ��

����� � ���� � �� � ���� � � ��� ��� � �������

�� ��� ������� �� ����� � ����� ������� � ��

('H � ��� ������ ������� � ����� ��� +0 ��� �� ��

��� ��

CONCLUSIONS<�� � ��� � �� ��� ��� ��� � ��� ������ �����

%'&&

� � �� �� ��� ���������� � ��� � �� ��� ��

�������� � �������� �� ������ � ��������� �

������� � ��� ������ �������� ��� ��� ������� �

���� ��� �� ���� � ���� �� �� ��� ������ ������

������ �� ���� � ����� ������� �4����*6��5

������ ���� �� #�� ����� �� � � �������

�� � � &���� ������� ��������� #��� ��������

��������� �� ���� � � ����� ��� ������� � �

�� ����� � ������ �� �������� ��� ������ ����

� � �� � ���� � ��1��� �� ���� ��� �

���� ����� � ��� ������� �� ������ �� ����

� ����� ������� �4����*6��5 ������� ��

����� � � � ������ � ������ ���� � ��

�������� )���� � ������ � ��� �� ��� ������� �����

�� ������ ���� #��� �� ���� � �� ������ � �����

��� ������ ������ ���� � #��� �� ������ �� ���

�� ���� ����� � �� � �� � ������ ����� ���

REFERENCES% A�# E� �� ���� ��<� $��� (�� ,9:2'' 4%2.-5�

& ,�� ��6� )�������* � �� �� �� ����� �� �F� 3���� <�� �

4%2205�

' J� � KJG �� ,��� C;� + ���� ,���� :5:+- 4&00%5�

( ����� �E �� , �� ;�6� ,�-�� .� �" � ���� �/:&+

4&0005�

7 6 �$��� � � G ���� � ? �� ;�� � �� + .�" � � 4,�:&'7

4%2225�

+ ��� ,� ���� <� A�������@������ F �� 6���� E��

,�-�� .� �" � ���� �.:702 4&0005�

- G�� �� ��� � F� ��� � =; �� 6 �� !G� $��� (���

$ �� :4::(' 4&0005�

. D�� � �� �� !� ����� / $ �'���� ) ,.:&& 4%2225�

2 ?������ 3 �� J� � � )��� ���� )���� ,-:'2% 4%22-5�

%0 !����� =� F����� � �� ���� 3?� + .�� (����� )* ,�-����� /:.7

4%2225�

%% ��� �L� G�M L� ����� � �� ;������ �� �� �� )�� ��

-.:.(- 4&00%5�

%& ��� �L� + $��� ����� � � //:&000 4&0005�

%' G�����)��G��� � �� G��� ;�� + .�� (���� )* ,�-�����

43:%7- 4&0005�

%( ��$� !G� G �� �� F$� ,F� 3 ����� ! �� !�����

E6� + )��� ���� /,:%% 4&0005�

%7 6 ���� EE �� ��� ��� )������� / )��� ��� 44:%0'%

4%22+5�

%+ 6�� DA� F���� D �� >����� �� �� ���'� ������� ,�

����� /�# L )� �� %(+ 4%22&5�

%- =�� � ��� $����� )�� �� /�:&(. 4%2-+5�

%. ����L� !M���� !� ������� �N�� 6� 3�� ! ��;������ �� + $���

����� � � /,:%+.7 4&0005�

%2 ��� �L� L��� �� 3�� ! �� ;������ �� + .�� (���� )*

,�-����� 44:%&- 4&0005�

&0 ��� �L� ����� ��� :9:--7 4&0005�

&% ��� �L� ;������ �� =� �� ����� ?� ����� ��� :.:'(7

4%22.5�

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5


Top Related