Download - Ppt Isolasi DNA
ISOLASI DNA PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI PERTANIAN
Nofita Ayu Ning Fias (105040200111101) Kelompok : Jumat, 09.15 wib Asisten: Mbak Icha
UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2011
Praktikum Bioteknologi Pertanian
Perusakan dinding sel
Isolasi DNA
Lisis membran sel
Pemurnian
Presipitasi
Isolasi DNA adalah pemisahan DNA untuk mengetahui sifat dari suatu tanaman dan untuk melakukan rekayasa genetika
Universitas Brawijaya Malang
Praktikum Bioteknologi Pertanian
Tahap Isolasi DNA
0.5 g daun + PVP Digerus sampai menjadi bubuk dengan bantuan nitrogen cair Masukkan bubuk ke dalam eppendorf berisi buffer CATB
Diisi dengan 1 ml buffer ekstraksi (CATB) + 5 l mercaptoethanol
Eppendorf
Inkubasi dalam waterbath Selama 30-60 menit T=650 C
Universitas Brawijaya Malang
Praktikum Bioteknologi Pertanian
Tahap Isolasi DNA
700 l CHISAM Kecepatan 6000 rpm selama 10 menit Ambil supernatant, pindahkan ke effendorf baru
Ditambahkan dalam sample Dihomogenisasi menggunakan vortex
Sentrifugasi
700 l CHISAM
Ditambahkan pada sampel
Universitas Brawijaya Malang
Praktikum Bioteknologi Pertanian
Tahap Isolasi DNA
Kecepatan 6000 rpm selama 10 menit Ambil supernatant, pindahkan ke effendorf baru
Sentrifugasi Ditambahkan pada sample Bolak-balik perlahan Inkubasi dalam freezer 30 menit
Kecepatan 6000 rpm selama 10 menit Ambil pellet, supernatant dibuang
Isopropanol dingin 1 ml
Sentrifugasi
Universitas Brawijaya Malang
Praktikum Bioteknologi Pertanian
Tahap Isolasi DNA
DNA Pellet
Dicuci dengan 200 l buffer pencuci 2x Endapan di keringkan
Resuspensi dengan 500 l buffer TE Inkubasi T=370 C selama 30 menit Dinginkan sebentar
Ditambahkan RNAse 1 l
Universitas Brawijaya Malang
End Show