-
Mechanismypaměti
Cosedozvímednes?
•Behaviorálníkonceptpaměti
•Fyziologiesynaptickéhospojení
•Mechanismyjednoduchéhoučeníumodelovéhoorganismu(Aplysie)
•Synaptickáplasticita
•Dlouhodobápotenciace– LTP
•VztahLTPapaměti
-
Koncepcepamětijakoschopnostimodifikovatsvéchovánínazákladě
zkušenosti
Weconsiderlearningtobeanadaptivechangeinbehaviorcausedbyexperience
Memoryreferstotheinternalstorageandrecallofpreviouslylearnedbehaviors.(Forgettingisthelossofstorageorrecall.)
Modifikacechovánímásvůjzákladvplastickýchzměnáchvčinnostinervovýchspojů(synapticképlasticitě),kteréjsoupodklademzměnvchování.
-
Synapse
-
Synaptickáspojení
Chemickásynapse‐ příkladnervosvalovéspojení– docházízdekvýlevuneuropřenašeče
Elektrickásynapse– gapjunction – elektrickýsignálpřecházízjednébuňkynadruhou‐konexinové můstky,vCNSnaneuronech,glii,hojněubezobratlých
Synaptickáplasticita– dobředoloženánachemickýchsynapsích.
-
Elektrickásynapse– gapjunctionštěrbinovitéspojení
-
Elektrickásynapse– štěrbinovitéspojení
Příménízkoodporovéelektricképropojenídvoubuněk– H2O,ionty,malémolekuly
‐ ztohovyplývá– absencesynaptickéhozpoždění,typickéhoprochemickousynapsi.
Méněmechanismůproplasticitu– Avšakexistujíusměrňujícígapjunctions,prokteréjevodivostvjednomsměrupodstatněvyššínežvdruhém
-
Chemickásynapse
Obecněvzatosejednáospojeníjednénervovébuňkysjinou,popř.sjinouefektorovoubuňkou(svalovou,žlázovou)
Lidskýmozekobsahujeřádově1014 synapsí(100‐500triliónů)
Ch.S.Sherrington – autortermínusynapse(řecké„syn“‐spoluahaptein“– obejmout,stisknout).
Typickýneurontvořířádovětisícesynapsí.– Axodendritické,axo‐axonální,axosomatické,atd.
Synaptickézpoždění(cca1ms)– dobapotřebnákevtokuvápníkudozakončeníakfůzi synaptickýchvezikulů smembránou
-
Chemickásynapse
-
Chemickásynapse
Akčnípotenciálnapresynaptickémneuronu‐>depolarizacenervovéhozakončení,vstupCadozakončení
Neuropřenašeč skladovánvsynaptickýchváčcích(vesicles)
Výlevneuropřenašeče – fůze membrányvezikulu smembránouterminály(SNARE,SNAPproteinyatd.)
Kvantovýobsah(uvolněnýpočetkvant), Kvantovávelikost(početmolekulvkvantu) Difúzeneuropřenašeče skrzeštěrbinu,vazbana
postsynaptickéreceptory. Odpověd
-
Nervosvalovéspojeníjakomodelováchemickásynapse
Nervosvalovéspojení,ploténka(motorendplate,neuromuscular junction)– klasickýpreparátstudovanýtéměřodpolovinyminuléhostoletí.
Motorickýaxontvořísynapsinakosternímsvalovémvlákně.
Přenašečemjeacetylcholin,kontrasnmiter ATP,poststynapticky vázánnaacetylcholinovéreceptorynikotinovéhotypu(nAChR)
Tentopřenosjepostsynapticky inhibovánpomocíkurare
VýlevAchblokovánnapř.botulotoxinem(enzymatickýjed),interferujesmechanismemvýlevu
nAchR – ionotropní receptor– tvoříkationtovýkanál
-
Nervosvalovéspojení
Výlevacetylcholinu– 1váčekodpovídájednomukvantu–obsahujecca30000molekulAch
Evokovanýploténkovýpotenciál>výlev mnohakvant
Spontánníminiaturníploténkovýpotenciál(miniatureendplate potential ‐MEPP)– občasnýspontání výlevjednohokvanta– vyvolánasvalupodprahovoupřechodnoudepolarizaci
Achuvolňovántakénekvantově,(non‐quantal release)–objeviteléKatz aMiledi asoučasněVyskočilaIllés.JednáseokontinuálnísekreciAch,patrněpřesacetylcholinovývezikulárnítransportér.
-
Synapse
-
ChemickésynapsevCNS
Nachemickésynapsinajdemeřaducílovýchstrukturnakterýchlzezesilovatsílupřenosu(synaptickáplasticita)
Např.zesíleníodpovědireceptorůjejichfosforylací,insercínovýchreceptorůdomembrány,desenzitizace receptoru,popř.zvětšenímkvantovéhoobsahupresynapticky – retrográdnímsignálem
-
Synaptickéspojení
Excitační–ainhibičnísynapse
Postsynaptickýpotenciál
Sumacečasováaprostorová
A population field potential (“EPSP”) evoked in the dentate gyrus
Stimulus artefact
Population spike
EPSP
-
Synaptickáplasticita
Jepravděpodobněmechanismem,jakýmjsouuchováványinformacevpaměti.
Mohlabybýtpodklademnejenučeníapaměti,aleidlouhodobějšíchvzorcůchování.
Plasticitamávýznampatrněivdrogovézávislostianapř.idlouhodobéaneuropatickébolesti
Jepřístupnáexperimentálnímuzkoumání,dáseměřitnapř.elektrofyziologicky
-
Synaptickáplasticita
Synaptickáplasticitajedefinovánajakoschopnostsynapsezměnitsvojisynaptickousílu(synapticstrength)vzávislostinavlastníaktivitě
Synaptickásíla– jemírazměnypostsynaptickéhopotenciáluevokovanéhoaktivacípresynaptickéhozakončeníanáslednýmvýlevemneuropřenašeče.
– Defacto,účinnost,efektivitasynaptickéhopřenosu
Změnadráždivostipostsynaptickémembránydanáopakovanouaktivacípresynaptickéhoapostsynaptickéhoneuronu– (tatodefiniceseblížípojetíHebba).
-
Synaptickáplasticita
SantiagoRamónyCajal(1852‐1934)bylvroce1894prvním,kdonavrhlpředstavu,žeučenínenízprostředkovánopřírůstkempočtuneuronů,alekezměněsilspojenímezitěmitoneurony.
Aždodruhépoloviny20.stoletínemělivědcinástroje,jaktytozměnyměřit
-
Hebbůvzákon
Cellsthat fire toghether,wire together“
– Hebbův zákon
(Hebb,D.O.(1949)TheOrganizationofBehavior,JohnWiley&Sons,Inc.,N.Y)
„WhenanaxonofcellAisnearenoughtoexciteacellBandrepeatedlyorpersistentlytakespartinfiringit,somegrowthprocessormetabolicchangetakesplaceinoneorbothcellssuchthatA'sefficiency,asoneofthecellsfiringB,isincreased.“
Hebbovská synaptickáplasticitabylastudovánačastounižšíchživočichů,např.Aplysie (E.Kandel)‐ Velkéneurony,definovanáspojení,apod..
-
Marrův modelformacearchikortikálních stop(1971)
"Simple memory: a theory for archicortex." Phil. Trans. Royal Soc. London, 262:23-81 (1971)
DavidCourtnayMarr (1945‐1980) – britskýneurobiologapsycholog,zabývalsepředevšímviděním.
Vr.1971navrhnulautoasociativnímodelarchikortikální(hipokampální)reprezentacepaměti,kdyaktivovanéneuronyvytvářelyvzájemnáspojenínazákladězvýšenísynaptickéúčinnostianásledněpovytvořenísítěstačilaaktivacečástibuněkkobnovenífunkcecelésítě.
Modelzaložennamodifikacisynaptickýchspojenípomocízkušenosti,umožňovalvybavenípaměťovéstopyinazákladěčástečnéinformace.
Modelsestalvýchodiskempromnohohypotézofunkcihipokampu,znichžněkterébylypotvrzeny.
-
Mechanismysynapticképlasticity
Mechanismů,kterévedouksynapticképlasticitě,jemnoho.
např.
• fosforylacereceptorů,
• zvýšeníintracelulárníhoCa2+,
• vkládáníreceptorůdosyn.štěrbiny,
• syntézanovýchbílkovin,
• zvýšenípočtusynaptickýchknoflíků,
• rašeníkolaterálníchvláken(sprouting)
• zvýšenívýlevuzpresynaptickéterminályprostřednictvímretrográdníhosignálu
-
Studiumsyn.plasticityujednoduchýchorganismů‐ Aplysiacalifornica
• Několiktisícsnadnoidentifikovatelných,poměrněvelkýchneuronů.
• Zpravidlasestudujeodpověd žaber(gill)napodrážděnísifonu(siphon),kterýmzvířenasáváafiltrujemořskouvodu.Někdyvědcistudujíizatahovánísifonu
• Sifonjeinervovánsenzorickýmneuronem(LEmechanosenzorem),kterýjesynaptickyspojenspostsynaptickýmmotorickýmneuronem(L7)inervujícím žábry
-
Mechanismyjednoduchéhoučeníumořskéhozeje(Aplysia)
Eric Kandel – Nobelova cena za lékařství a fyziologii (r. 2000)
-
HabituacezatahovacíhoreflexužaberuAplysie
Přiopakovanémdrážděnídošlojakkesníženíbehaviorálníchodpovědí,takkesníženíamplitudypostsynaptickéhopotenciálu.
-
Klasické(pavlovovské)podmiňovánízatahovacíhoreflexusifonuuAplysie
-
SynaptickézměnyvdůsledkuučeníuAplysie
Kandelzjistil,ževdůsledkudlouhodobéhabituace(opakovanoutaktilnístimulací)nebosenzitizace(opakovanýmšokovánímdoocásku)docházíuzejekezměněpočtusynaptickýchspojení– vdůsledkutohoikezměněúčinnostisynaptickéhopřenosu
=jedenzpříkladůSYNAPTICKÉPLASTICITY
Avšakzvýšenípočtusynapsíjepouzejedenzmechanismů...
-
OperantnípodmiňováníuAplysie
Hawkins,R.D.,Clark,G.A.,&Kandel,E.R.(2006).OperantConditioningofGillWithdrawalinAplysia.TheJournalofNeuroscience,26,2443‐2448.
PokudAplysie povolilažábrypourčitouhranici,byla„potrestána“mírnýmšokemdoocásku.
Zvířatasenaučilaoperantnězatahovatžábry,abysevyhnulapotrestání.
Vzhledemktomu,ženeuronyinervující struktury,kterésetohotochováníúčastní,jsoujižidentifikovány,otevřelotocestukestudiumechanismůtohototypuučení.
– MichelM,GreenCL,Eskin A,LyonsLC. PKG‐mediatedMAPKsignalingisnecessaryforlong‐termoperantmemoryinAplysia.LearnMem.2011;18(2):108‐17.
-
Nynípřejdemeodbezobratlýchksavcům,předevšímlaboratornímhlodavcům
Synaptickáplasticita jepozorovatelnásamozřejměiuvyššíchobratlovců,adlouhosepředpokládalo,žebymohlabýtpodklademuchovávánípaměťovýchstop.
Dlouhodobápotenciaceadlouhodobádeprese– LTPaLTD– horcíkandidátinaneurálnísubstrátučeníapaměti
-
EPSP
EPSP(intracelulárně– uvětšíchvláken,popř.pomocítechnikyterčíkovéhozámku
fEPSP(field‐EPSP)– extracelulárně,připadávúvahuustrukturspravidelnýmuspořádánímneuronůdovrstevčilamin– např.hipokampus
-
LTPaLTD
Dlouhodobézvýšení,resp.sníženíodpovědí,neboliamplitudyEPSPpropředchozítetanickéstimulaci
Mádvěfáze:časnou(E‐LTP)apozdní(L‐LTP)
Časnáfázejenezávislánaproteosyntéze,pozdnínanízávisí
-
Vrámciplasticityexistujevícemožnostízasílení synaptickéúčinnosti
Inzercenovýchreceptorůdopostsynaptickémembrány – většíodpovědínastejnémnožstvíneuropřenašeče
Zvýšenívýlevu prostřednictvímretrográdníhosignálu– nejasné,uvažujeseoNO,popř.extracelulárníchadhezníchmolekulách
Rašenínovýchsynaptickýchknoflíků
Ztenčeníkrčkudendritickéhotrnu– změnaelektrickýchvlastností– vyššíexcitabilita
-
Dlouhodobápotenciace‐ LTPDlouhodobé zvýšení synaptických odpovědí post synaptického neuronu (=amplitudy EPSP) po tetanickém dráždění presynaptické terminály
Velmi často se měří v hipokampu a přilehlých strukturách.
A population field potential (“EPSP”) evoked in the dentate gyrus by stimulating the perforant path.
Stimulus artefact
Population spike
EPSP
-
Dlouhodobápotenciace(LTP)
Bliss and Lømo (1973) J. Physiol. 232: 331-356- LTP poprvé popsána v gyrus dentatus králíka
Tim Bliss Terje Lømo
Dlouhodobézvýšenísynaptickýchodpovědípostsynaptickéhoneuronu(=amplitudyEPSP)potetanickémdrážděnípresynaptickéterminály.Někdysevykládájakozesíleníkomunikacemezipresynaptickýmapostsynaptickýmneuronem,nazákladěaktivaceoboutěchtoneuronů.
-
LTP
-
Dlouhodobápotenciace(LTP)vs.dlouhodobádeprese(LTD)
-
Dlouhodobádeprese‐ LTD
Opakdlouhodobépotenciace,jdeodlouhodobésníženíúčinnostisynaptickéhopřenosunásledkemrepetitivnístimulace presynaptickýchvstupů
JetovlastněprotějšekLTP,zfyziologickéhohlediskasezdábýtintuitivněnezbytný(„whatgoes up,must godown“)
Vyskytujesenapř.vhipokampu(nízkofrekvenčnístimulace)nebovPurkyňovýchbuňkáchmozečku (silnástimulace)
-
Dlouhodobádeprese‐ LTD
LTD je podmíněna zpravidla aktivací NMDA receptorů (ne vždy),ale o nižší hodnotě, a zvýšením intracelulárního vápníku, avšak na nižší hladinu, než jaká je pozorována u LTP.
Někdy se LTD mohou účastnit také metabotropní glutamátové receptory (mGluR), popř snad i kanabinoidní receptory (také spřažené s G-proteinem)
Indukce LTD zahrnuje aktivaci fosfatáz (defosforylující enzymy), které následně sníží citlivost glutamátových receptorů a tím redukují postsynaptickou odpověď na neuropřenašeč.
Může zahrnovat také internalizaci AMPA receptorů z postsynaptické membrány do intracelulárních kompartmentů.
-
Dlouhodobádeprese‐ LTD
Na synapsích Schafferových kolaterál (spojení hipokampálních oblastí CA3 a CA1) lze vyvolat LTP i LTD tetanickým dráždění, klíčovým faktorem pro to, který fenomén bude indukován, je frekvence dráždění (viz obrázek).
Nízkofrekvenční stimulace vede ke vzniku LTD.
LTD je odlišná od tzv. synaptické depotenciace, což je de facto návrat LTP na klidovou hladinu.
V mozečku se LTD účastní motorického učení.
-
LTPvykazujespecificitu
Běhemdrážděníurčitéhovstupudocházíkpotenciacipouzeutohotostimulovanéhovstupu,aneusousedníchvstupů (pakliženejsoutytovstupyfunkčněspřaženy,popř.stimuloványsoučasně– vizasociativitaakooperativita)
-
LTPvykazujeasociativitu
Associativita představujefenomén,kdyrelativněslabástimulacenajednomvstupunenídostatečnáabyvyvolalaLTP,současnésilnástimulacenajiném,funkčněasociovanémvstupuvyvoláLTPnaobouvstupech.
Častojepozorovánanapř.nasynapsíchSchafferových kolaterálzhipokampálníoblastiCA3doCA1
-
LTPvykazujekooperativitu
LTP může být indukována buď silným tetanickým drážděním jednoho vstupu, nebo kooperativně slabším drážděním více vstupů současně. Pokud je stimulován slabě jen jeden vstup, nedosáhne depolarizace hodnoty potřebné k indukci LTP. Pokud je však takovouto slabší stimulací drážděno více konvergujících vstupů, může dojít k sumaci těchto efektů a následné tvorbě dlouhodobé potenciace.
Někteří autoři zastávají názor, že rozdíl mezi kooperativitou a asociativitou je pouze sémantický
-
ČasnáapozdnífázeLTP(earlyLTP,lateLTP)
Časnáfáze– nezávislánaproteosyntéze
– Induction phase
– Maintainance phase
Pozdnífáze– závisínasyntézenovýchbílkovinaremodelaci synapse.
– Induction
– Maintainance
-
ČasnáapozdnífázeLTP‐mechanismy
•Iniciacečasnéfáze– zvýšenáaktivaceAMPAreceptorů– depolarizace– odblokováníNMDAreceptorů– vtokCa2+‐ Ca‐calmodulin kinázaII– PKC– MAPkináza (MAPK)
•Udržováníčasné‐ CMKIIaPKCztrácízávislostnaCa– perzistentníaktivita>fosforylace AMPAreceptorů,inzercerezervníchAMPAreceptorů (bezprotesyntézy)
•Indukcepozdní– MAPK(ERK)vykazujeprezistentní aktivitu
•Udržovánípozdní– ERKfosforyluje řadycytosolických ajadernýchmolekul,kterénakonecvedouksyntézespecifickýchproteinů,kteréudržujílate‐LTP,předevšímPKMζ
J Neurochem. 2001 Jan;76(1):1-10. The neuronal MAP kinase cascade: a biochemical signal integration system subserving synaptic plasticity and memory. Sweatt JD.
-
UdržovacífázepozdníLTP– hotspotsoučasnéneurochemiepaměti
BěhemudržovacífázedocházípřeskinázyatranskripčnífaktoryksyntézePKMζ (zeta),cožjepodtypPKC,kterájeposvésyntézekonstitutivněaktivníaregulujetrafficking asyntézuAMPAreceptorů,reorganizacisynaptickýchproteinůaremodelaci synapse.
Patrněijinékinázy,alenedávnástudieukázala,žesyntézaPKMζ udržujespecifickypozdníLTP.
Zvýšeuvedenéhovyplývá,ževindukciaudržováníčasnéLTPavindukcipozdníLTPhrajerolímnohoregulačníchkináz,alenaPKMζ sepatrněsignálsbíhá
-
Retrográdnísignalizace
Nicméně,běhempozdníLTPdocházítakékekomunikacispresynaptickýmzakončením,neboťbyloprokázáno,žesezvyšujezásobasynaptickýchváčkůvtermináleadocházíkdalšímzměnámnapresynaptickýchproteinech,mělabytedyexistovatretrográdnísignalizace(uvažujeseoNO,neboproteinechextracelulárnímatrix– vizbiologiebuňky)
-
Zkušenost Změna synaptické účinnnosti(přirozená plasticita)
Paměť
Tetanizace Změna účinnosti synaptického přenosu
(LTP)
Zvýšení evokované odpovědi (EPSP)
Teoretická koncepce studia vztahu “LTP-paměť”
Typy studií zabývajících se vztahem LTP - paměť:
• Vliv učení na synaptickou sílu a LTP• Vliv tetanizace (saturace LTP) na učení• Vliv manipulace (např.blokády) synaptické plasticity na učení paměť
-
UčenípřímoindukujeLTP WhitlockJR,Heynen AJ,ShulerMG,BearMF. Learninginduceslong‐termpotentiationin
thehippocampus. Science.2006; 313(5790):1093‐7
-
UčenípřímoindukujeLTPII
Whitlockaspol.ukázali,žetréninkpotkanůvúlozepasivníhovyhýbání(otésipovímevkapitoleupaměťovýchúlohách)způsobujeuněkterýchneuronůindukciLTP.
UmnohazměřenýchneuronůvšakLTPindukovánanení,atobylopatrnědůvodem,pročsenaobjevčekalotakdlouho.
Jetorovněžpodpůrnýmdůkazempro„distributedmemory encoding“– vizobecnýmodul
-
InhibicePKMζ vedekvymazáníjižustavenépaměťovéstopy
PastalkovaE,SerranoP,PinkhasovaD,WallaceE,FentonAA,SacktorTC. StorageofspatialinformationbythemaintenancemechanismofLTP. Science.2006;313(5790):1141‐4
SpecifickýblokátorPKMζ bylaplikovándohipokampuazablokovaljakpozdníLTP,takvybavenínaučenéinformaceavšakneovlivnínovéučení,tzn.žePKMζnehrajepatrněrolivindukcičasnéLTP
Prokázánobylo,žesyntézaPKMζ jenezbytnouproudržovacífázipozdníLTP
-
ZIP,inhibitorproteinkinázyMζ,mažepaměťovoustopu,alenebránínovémuučení.
-
Problematickéotázky
JeLTPindukovánatakéjinýmitypyučenínežpasivnímvyhýbáním? MažeinhibicePKMζ pomocípeptiduZIPtakéjinédruhypamětinežplace
avoidance,cožjekognitivníúlohavysocezávislánahipokampu? Jetotovymazánípamětipatrnéivjinýchstrukturáchvmozkunežje
hipokampus?
– Některéurčitě,např.chuťovouaverzivkortexu,viz:ShemaR,Sacktor TC,Dudai Y. Rapiderasureoflong‐termmemoryassociationsinthecortexbyaninhibitorofPKMzeta. Science; 317(5840):951‐3
– Byloprokázáno,žeuřadytypůpamětitentomechanismusfunguje Serrano P,Friedman EL,Kenney J,Taubenfeld SM,ZimmermanJM,Hanna J,Alberini C,Kelley AE,Maren S,RudyJW,Yin JC,Sacktor TC,Fenton AA.PKMzeta maintains spatial,instrumental,andclassically conditioned long‐termmemories.PLoS Biol.2008Dec23;6(12):2698‐706.
-
NegativnídůkazoPKMzeta aLTP Letosvyšlaprácepopisujícítransgennípotkanyskonstitutivnía
podmíněnoudelecíPKMζ aunichnebylopozorovánížádnézhoršenípamětianiLTP.
NaopakaplikaceZIPtěmtopotkanůmvedlakvymazáníLTP,zdásežeZIPtedyblokujedoposudneznáméprocesy,kroměaktivitynaPKMζ
Volk LJ,Bachman JL,JohnsonR,Yu Y,Huganir RL.PKM‐ζis notrequired for hippocampalsynaptic plasticity,learning andmemory.Nature.2013;493(7432):420‐3
KlíčovákompenzacepomocíPKCι/λ
-
„The storycontinues“
-
Shrnutí
Napaměťjemožnéaužitečnénahlížetjakonazměnyvchovánívyvolanépředchozízkušenostísubjektu
Takovétozměnyvchovánídanézkušenostíjemožnépozorovatiuevolučně„primitivních“organismů
TytozměnychováníjsouzpůsobenyzměnamivčinnostiCNS,předevšímzměnouvsílesynapsívmozku
Dlouhodobápotenciace(LTP)jakopříkladsynapticképlasticitybymohlaneuronálnímpodklademalespoňněkterýchtypůpaměti,jejízablokovánítutopaměťvyruší,alePKMzeta nemusíbýtonou„memorymolecule“
Stélezůstávámnohonevyjasněnýchotázek