PROSDOCIMI, Francisco C. S.; ZUCCONI, Eder; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; ANDRADE, Renato (c); GODINHO, Hugo (c);
GODINHO, Alexandre (c)
Departamento de Farmacologia e Departamento de MorfologiaICB-UFMG
As construções de barragens hidrelétricas nas grandes bacias fluviais do país, apesar de reconhecidos aspectos utilitários, causam impactos sobre a ictiofauna, como a interrupção de vias migratórias de peixes. Nesses casos, segundo a legislação vigente, é obrigatória a construção de mecanismos – altamente dispendiosos – de transposição de peixes, a não ser que seja comprovado que tal medida é desnecessária. Para verificar a necessidade de construção desses mecanismos em barragens do Rio Grande (MG), deve ser feito um estudo de variabilidade genética entre populações de peixes locais. Com esse objetivo estão sendo isolados e caracterizados locos de microsatélites da espécie Prochilodus scrofa, conhecida popularmente como curimbatá. Para o isolamento desses locos foi construída uma biblioteca de DNA genômico do peixe, que foi hibridizada com seqüências de oligonucleotídeos repetitivas marcadas radioativamente. Os clones positivos estão sendo seqüenciados para a confirmação das regiões de microsatélites e para o reconhecimento das regiões flanqueadoras. Primers complementares às regiões flanqueadoras estão sendo encomendados e está sendo caracterizada a reação de PCR a ser utilizada no estudo genético de populações desses peixes.
Crescimento populacional
Maior demanda de energia elétrica
Construção de represas
Interrupção de vias migratórias
Biblioteca Genômica Isolamento dos clones Hibridização Sequenciamento
Escolha da enzima apropriada para a montagem da biblioteca
Sítio de corte da enzima utilizada deixando extremidades coesivas
Mapa do vetor utilizado
Corte do DNA total com Sau3A
Divisão das frações da biblioteca
Resumo da técnica de montagem de biblioteca genômica
Técnica de transformação bacteriana utilizada (eletroporação)
Isolamento dos clones da biblioteca seguido de PCR ou mini-prep para a posterior aplicação na membrana
Oligonucleotídeos utilizados como sonda: CA, TC, CTT,
ACGA, TA, GGA, AAAG,TATC
Hibridização com sondas radioativas
Uma das membranas utilizadas. Pode-se perceber que os clones foram aplicados em duplicata.
Equipamento de Sequenciamento
automático utilizadoSeqüência de um dos microsatélites encontrados
Seqüência de outro dos microsatélites encontrados
Teste de paternidade
Novos sequenciamentos
Coleta de peixes
PCR dos loci de microsatélite de cada indivíduo.
Gel de poliacrilamida dos produtos de PCR Montagem de tabela com nº e freqüência de MS.
Cálculo da heterozigosidade observada e esperada.
Definição da distância genética e fluxo gênico entre as populações. Verificação da necessidade de construção
de mecanismos de transposição.