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MD. Galo García Ordóñez.
CATEDRA DE MICROBIOLOGÍA.
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PRUEBAS BIOQUÍMICAS
DE IDENTIFICACIÓ
N DE LAS ENTEROBACTE
RIAS
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* Identificar los diferentes tipos de pruebas bioquímicas de reconocimiento de Enterobacterias.
* Determinar los fundamentos de cada prueba.
* Realizar una correcta lectura e interpretación de lo que se observa.
OBJETIVOS:
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ENTEROBACTE
RIAS
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* Clasificación de Murray: - Bacilos Gram Neg. - Fermentación de Lactosa: FRL, FLL, NFL. * Saprófitos: E. coli.* Patógenos: Salmonellas y Shigellas.* + 25 grupos y 110 especies.
FAMILIA ENTEROBACTEREACE
AE.
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Características Específicas:* Mayoría móviles: flagelos perítricos.* Fermentación de glucosa: ácido y gas o
solo ácido.* Oxidasa –* Reducen Nitratos a Nitritos.* Catalasa +
FAMILIA ENTEROBACTEREACE
AE.
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CULTIVOS:
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*Medios de Cultivo.*Agar de MacConkey:
*Medio diferencial.*Peptona: nutrientes*Lactosa: E. coli (FRL) – diferencial.*Sales biliares y Cristal violeta: restringe Gram Positivo
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*Medios de Cultivo.*Peptona: nitrógeno y carbono para las
Lac -.*Lactosa :fuente de carbono para las Lac +.*Sales biliares :inhibe Gram +.*Cloruro sódico : mantener la tonicidad* Rojo neutro : indicador *Cristal violeta :la selectividad del* medio.*Agar-agar : da consistencia
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*Medios de Cultivo.*Agar de MacConkey:
* Cultivo: - FRL: 18- 24hs a 37°C. - FLL: 36- 48hs a 37°C. *Lac +: ácidos derivados de la fermentación: rosáceo *Lac -: el medio se basificará por uso de la peptona : amarillo.
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Colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentación de la Lactosa). Salmonella, Shigella, Pseudomonas
Colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. E. coli (rosa/roja), E. aerogenes (rosa y mucosa)
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*EMB:Las cepas que utilizan la lactosa = centro oscuro con periferia azulada o rosada, las que no lo hacen son incoloras. Escherichia coli.( FRL) presentan un característico brillo metálico verdoso.
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Pruebas Bioquímicas Sirven para:
*Identificación de características metabólicas.*Identificación de movimiento.*Identificación de enzimas.*Identificación de productos del metabolismo.
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PRUEBAS BIOQUIMICA
S.Kligler
Hierro Agar
Simmons Citrato Agar
Medio de Urea
SIMLISINA
RM VP
MIO
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Kligler Hierro AgarFUNDAMENTO:*Diferencia fermentación (rojo de fenol: pH)*Glucosa: botón*Lactosa: pico de flauta
*Producción de H2S*Tiosulfato de sodio, citrato de hierro y amonio*Produce sulfuro de hierro : NEGRO
*Producción de GAS*Incubar durante 24 horas a 37°C
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L
g gGG H2S H2S
L LL
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Simmons Citrato AgarFUNDAMENTO:
*Bacterias: citrato permeasa.*Contiene: citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH.
LECTURA:*Positivo: Azul (pH alcalino).*Negativo Verde
*Incuba a 37°C por 48 horas
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Medio de Urea*Medio Nutritivo contiene Urea (H2N-CO-NH2) *Indicador pH el rojo de fenol.*Identifica la hidrólisis de la urea (Ureasa).*LECTURA:*Positivo: rosado (medio alcalino)*Negativo: amarillo
*Incubar a 37°C hasta por 72 horas
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SIM:*Sulfuro de Hidrógeno*Indol*Producen triptofanasa:convierte el Trp en indol*Reactivo de Kovacs o de Erlich: dimetilaminobenzaldehído.* Movilidad (turbidez).
*Incubar por 18-24 horas a 35-37 °C
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M
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MIO*Movilidad*Indol*Ornitina*Presencia de ornitina descarboxilasa.*Indicador: púrpura de bromocresol : - medio alcalino: púrpura. - medio ácido:amarillo.
*Incubar por 18-24 horas a 35-37 °C
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+ -
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RM VP Medio:*Rojo de metilo*Glucosa productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico)* Indicador de pH: producción Ac: vía de fermentación Ac-mixta.
*Voges Proskauer:*Vía Fermentación Glucosa: Butanodiol: Acetoína: diacetilo: rojo.*Incubación en aerobiosis, a 35-37°C por 3 días
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Lisina.*Descarboxilación de lisina:* Descarboxilasas: diferenciación de enterobacterias.* aa pierden el grupo carboxilo convierten en aminas.* Indicador: púrpura del bromocresol: vira a violeta,
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* Se debe realizar una correcta lectura e interpretación de las pruebas para poder precisar cual es el agente causal más probable.
* Cada bacteria tiene características de identificación propias y también otras comunes que las hacen únicas.
CONCLUSIONES:
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BIBLIOGRAFÍA:• Madigan M.T., Martinko J.M. y
Parker J. (2004) Brock: Biología de los• Microorganismos – 10ma Edición –
ISBN:84-205-3679-2 Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003) Microbiología – 4ta Edición – ISBN:84-486-0261-7.• http://edicion-micro.usal.es/web/
identificacion/AyudaPruebas.html
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GRACIAS
POR SU
ATEN
CIÓN.