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Replicación ADN
jvillarreal
• Durante la replicación cada hebra de ADN es usada como molde.
• Por eso se dice que es semiconservativa, cada duplex posee una hebra original.
• Esta característica es universal.
MULTIFOCAL
• En ADN lineal (eucariota), ocurre en varios puntos llamados burbuja de replicación.
• En ADN circular (procariota), ocurre en un solo punto, llamado Ori C.
BIDIRECCIONAL
FRAGMENTOS DE OKASAKI
• Como las hebras estan orientadas antiparalelamente, solo una hebra puede ser procesada en direccion 5´3´.
• Entones la otra hebra también es procesada de igual manera pero como fragmentos discontinuos, llamados fragmentos de Okasaki.
• Las helicasas separan a la doble hebra usando energia de la hidrolisis del ATP.
• La estructura cristalina de revela que hay seis subunidades asimétricas.
• AND polimerasa, ADN dependiente, añade nucleotidos, alargando la cadena, guiada por la secuencia de la otra hebra de ADN que sirve como molde. Los nucleótidos entrantes son añadidos al extremo C 3´ OH libre, es decir, en dirección 5´ a 3´.
• El extremo 3´OH libre es colocado en el sitio activo de la enzima ADN polimerasa, ADN dependiente. La catálisis es llevada a cabo por dos residuos de aspartato (aminoacido), altamente conservados también iones de Mg. De esta manera un enlace fosfodiester es formado y la ADN polimerasa ADN dependiente se mueve al siguiente extremo libre y el proceso se repite.
DAÑO Y REPARACIÓN ADN
• EL DAÑO PUEDE SER TAN SIMPLE COMO UN NUCLEOTIDO ERRONEO.
• PUEDE SER DAÑINO (muerte) O POSITIVO (evolución).
MUTACIONES ESPONTANEAS
• PERDIDA EN LA INCORPORACION DE dNTP´S, ESTO ES RARO EN E. coli. (un error cada 1010 pb)
• MODIFICACIONES EN LAS BASES CAUSADAS POR REACCIONES HIDROLITICAS.
ERRORES EN LA REPLICACIÓN
• Mutación puntual: – Substitución: cuando se cambia un pb por otra pb.
Es la mas común.– Inserción.– Delección.
REPARACIÓN
• EN E. coli.– HIDRÓLISIS DEL ENLACE FOSFODIESTER POR UNA
ENDONUCLEASA.– REMOCIÓN.– INCORPORACIÓN DEL NUCLEOTIDO CORRECTO.– RESTITUCION DEL ENLACE POR UN LIGASA.
MUTACIONES INDUCIDAS
• RADIACION: Rayos X, radiaziones ionizantes como rayos γ. Radiaciones no ionizantes como UV.
• AGENTES INTERCALANTES:– COLORANTES: Bromuro de etidio.– FORMAMIDA, FORMALDEHIDO.