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ROL DEL TÉCNICO EN EL LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN
Instituto de Investigaciones Médicas“Alfredo Lanari”
Laboratorio de Neurofisiología
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INVESTIGACIÓN BÁSICA INVESTIGACIÓN CLÍNICA
- Efecto de las purinas (adenosina y ATP) sobre la liberación espontánea de Acetilcolina (ACh) en sinapsis neuromuscular de mamífero .
- Estudio y diagnóstico de las enfermedades neuromusculares con componentes autoinmunes (Miasthenia Gravis, Síndrome de Eaton Lambert, Sindromes Miasténicos Congénitos).- Se han aplicado los conocimientos de la investigación sobre purinas en el diagnóstico de enfermedad bipolar .
LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN
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Animales de Laboratorio
- Dentro de la Facultad de Medicina funciona el Comité Institucional para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (CICUAL) , cuyo objetivo es establecer pautas y normas para un adecuado uso de los animales de experimentación.
- Los proyectos de investigación en los cuales se utilicen animales, deben contar con la aprobación de este comité.
- Considerando a los animales como seres sensibles, se debe evitar o minimizar su sufrimiento.
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Ratones de Laboratorio
Genoma, sistema inmune, metabolismo, anatomía y fisiología muy similares a los de los seres humanos
Tamaño apropiado para la crianza y manipulación
No requieren de demasiados cuidados
Alto número de críasBreve período de gestación (19-21 días) y destete rápido
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Ratones cepa CF1
- Adultos, ambos sexos, peso corporal: 25-30 g.
- Bioterio: criados y mantenidos bajo normas adecuadas.
- Alimento y agua a voluntad.
- Ciclos de 12 hs de luz artificial y 12 hs de oscuridad.
- Temperatura ambiente entre 19-22ºC
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OBTENCIÓN DE LAS PREPARACIONES
- Para realizar la disección del músculo, se
anestesia el ratón con Tiopental sódico (50
mg/kg) en forma intraperitoneal.
- Los estudios electrofisiológicos se realizan en preparaciones de
hemidiafragma izquierdo obtenidas de los ratones. Se elige este
músculo porque posee pocas capas de células de espesor,
permitiendo por trans-iluminación la visualización de los axones
terminales.
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PREPARACIÓN DE MICROPIPIPETAS
- Se obtienen a partir de capilares de borosilicato de paredes finas, con filamento interno.
- Sus extremos se estiran con un Puller (estirador de pipetas).
- Se llenan con ClK (3 M).
- El registro intracelular de la frecuencia de los potenciales de placa miniatura (fMEPPs) se realiza con técnicas convencionales con micropipetas en distintas condiciones experimentales.
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Puller
Estiramiento de capilares
Llenado de micropipetas
Micropipeta en holder
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PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
- La solución base que se utiliza es Ringer Krebs (Ringer Normal).
- Su composición en sales es similar a la de la sangre (ClNa, ClK, Cl2Mg, Cl2Ca, Glucosa, Hepes)
- Se lleva a pH 7.2-7.4
- Se modifica agregando diferentes reactivos, según el protocolo experimental (agonistas, antagonistas, bloqueantes, inhibidores)
- Para la ejecución de los experimentos, las soluciones se colocan en la cámara de registro en cantidad suficiente como para que la preparación se encuentre inmersa en el líquido.
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Investigación Clínica
- En el suero de los pacientes con Enfermedades Neuromusculares se
encuentran anticuerpos (IgG) dirigidos contra componentes esenciales en
la secreción del neurotransmisor (ACh).
- Para investigarlos, se utiliza el modelo de transferencia pasiva de esos
sueros a ratones, y el posterior estudio de la transmisión neuromuscular
en los diafragmas de los animales receptores.
- El diagnóstico de los pacientes fue realizado clínicamente por
neurólogos idóneos.
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1- Extracción de 20 ml de sangre del paciente
4- Disección del hemidiafragma izquierdo al 3° día
3- Inyección ip 1ml/día durante 2 días
Transferencia pasiva de suero al ratón
5- Registro de amplitud de MEPP
2- Se separan los sueros y se conservan en el freezer a -20ºC hasta su utilización
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MUCHAS GRACIAS