Sergio Wehinger WehingerLínea Alimentación y EnvejecimientoSub Línea Enfermedades Cardiovasculares, Dislipidemias y E.O.Tercera Jornada PIEI-ES, noviembre 2015
Efectos Biológicos del propóleos en líneas celulares beta pancreática, tumorales y
fibroblastos
PROPÓLEOSProducto resinoso recolectado por las abejas. Lo obtienen a partir de yemas, brotes y heridas de arboles de hoja caduca y se mezcla con secreciones de la glándula mandibular
Barrientos, Herrera et al. 2013, Kurek-Górecka, Rzepecka-Stojko et al. 2013
Algunos compuestos fenólicos y flavonoides típicos presentes en el propóleos
Toreti V. et al 2013
EFECTO DEL CONSUMO DE PROPÓLEOS SOBRE STRESS OXIDATIVO EN ADULTOS DE TALCA
Objetivo general Evaluar el efecto de Propóleos sobre marcadores de estrés oxidativo en adultos de la ciudad de Talca
Investigadores: Elba Leiva, Verónica Mujica, Roxana Orrego, Luis Guzmán, Sergio Wehinger Alumnos: Paula Romero, Felipe Muñoz, Jorge Pérez, Jeanette San Martín
Proyecto FIC-Región del Maule 2013-2016
Métodos
Muestra voluntaria a 80 sujetos de 30 a 60 años. Selección aleatoria doble ciego: Propóleos-Placebos. Consumo durante 90 días, 30 gotas diariasEvaluaciones 45 y 90 días : Parámetros Metabólicos: Glicemia, HbA1c y lípidos. PCR y Stress Oxidativo. Análisis estadístico :Test de Shapiro-Wilk para distribución normal de las variables. T test paread o para variables paramétricas . Mann-Whitney test para variables no paramétricas. Se consideró un valor p<0,05 como estadísticamente significativo. El estudio contó con aprobación del Comité de Ética de la Universidad de Talca.
Propóleos indujo un aumento significativo del cHDL
Voluntarios
Lípidos(mg/dl)
Pre-tratamiento
Post-tratamiento
Valor p
Col T 187,8+33,1 198,6+41,9 0,0051
Col LDL 108,1+41,63 113,8+33,2 0,0820
Triglicéridos 116,7+58,5 126,5+71,6 0,1704
Col HDL 56,4+16,4 60,7+19,5 0,0064
Propóleosn = 35
Placebo n= 33
Edad (años) 48+12 44+14
Peso (kg) 73,8+16,6 74,1+14,5
IMC 27,9+4,8 28,3+4,7
CC (cm) 91,7+13,9 92,8+12,2
PAS (mmHg) 125,2+10,6 123,1+13,1
PAD (mmHg) 79,6+10,1 77,8+8,1
Propóleos redujo los niveles de TBARS y
aumentó el GSH, sugiriendo una
disminución en el estrés oxidativo en los
voluntarios
Propóleos Placebo
Propóleos Placebo
Efecto protector del propóleos sobre la célula beta pancreática sometida a estrés
oxidativo
Obesidad
Ácidos grasos libresLipotoxicidad
AdipoquinasInflamación
Estrés oxidativo Insulinoresistencia
HiperglicemiaGlucotoxicidad
Otros factores
Fisiopatología DIABETICA
Maritim, Sanders et al. 2003
β↑ROS
↓Antiox
La oxidación excede las defensas antioxidantesYoshikawa and Naito 2002
Lenzen 2008
Giacco, F. and M. Brownlee, Oxidative stress and diabetic complications. Circulation research, 2010. 107(9): p. 1058-1070.Baynes, J.W. and S.R. Thorpe, Role of oxidative stress in diabetic complications: a new perspective on an old paradigm. Diabetes, 1999. 48(1): p. 1-9.Baynes, J.W. and S.R. Thorpe, The role of oxidative stress in diabetic complications. Current Opinion in Endocrinology, Diabetes and Obesity, 1996. 3(4): p. 277-284.
Objetivo general Evaluar el efecto de un extracto de propóleos frente al estrés oxidativo inducido por H2O2 y t-BOOH en células β pancreáticas de la línea MIN-6 y β TC-6.
Investigadores: Sergio Wehinger, Elba LeivaAlumno: Sebastián Zagmutt
RESULTADOS
A B
Ensayo de Viabilidad en células MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.En A se presentan los resultados de viabilidad celular de la línea celular MIN-6 (barras negras) y β TC-6 (barras grises) utilizando H2O2 como oxidante y en B se presenta los resultados de la viabilidad celular de la línea MIN-6 (barras negras) y β TC-6 (barras grises) utilizando t-BOOH como oxidante . Los resultados se presentan como promedio ± DS. (n = 3). ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001
Los EP protegen a las células β frente al E.O. in vitro
VIABILIDAD CELULAR
LIPOPEROXIDACIÓN
Concentración de TBARs en la línea MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.En A se presentan la concentración de TBARs en la línea celular MIN-6 a las 24 (barras blancas) y 48 (barras grises) horas de incubación y en B se presenta presentan la concentración de TBARs en la línea celular β TC-6 a las 24 (barras blancas) y 48 (barras grises) horas de incubación, bajo las condiciones de estudio. Los resultados se presentan como promedio ± DS. (n = 3). ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001
A B
La incubación con EP disminuyen la lipoperoxidación en células β expuestas a E.O. in vitro
GLUTATIÓN REDUCIDO
A B
Concentración de GSH reducido en la línea MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.En A se presentan los resultados de la concentración de GSH reducido en la línea celular MIN-6 expuestas a H2O2, (barras oscuras) y t-BOOH (barras grises) y en B la línea celular β TC-6 expuestas a H2O2, (barras oscuras) y t-BOOH (barras grises). Los resultados se presentan como promedio ± DS. (n = 3) ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001
La incubación con E.P. restablecen los niveles de GSH en células β expuestas a E.O. in vitro
ENSAYO DE APOPTOSIS POR ANEXINA V
A B C
Porcentaje de células β TC-6 marcadas con Anexina V y Yoduro de propidioEn A se presentan las células β TC-6 viables (anexina V y IP negativas) en B se presentan el porcentaje de células β TC-6 anexina V positivas (apoptóticas) y en C se presentan las células IP positivas (necróticas). Las barras negras representan la incubación con H 2O2 y
las barras plomas representan la incubación con t-BOOH Los resultados se presentan como el porcentaje promedio ± DS. (n = 3) ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test * p < 0,05, *** = p < 0,001
Viables Apoptóticas Necróticas
Propóleos inhibe la apoptosis inducida por estrés oxidativo in vitro en células β-TC6
RESUMEN
H2O2t-BOOH
Lipoperoxiación MDA
2 GSH
GS-SG
H2O2
t-BOOH
APOPTOSIS
PROPÓLEOS
Efecto de extractos de propóleos sobre la migración y proliferación de fibroblastos in vitro
Investigadores: Sergio Wehinger, Elba LeivaAlumno: Felipe Romero
CICATRIZACIÓN DE HERIDA
INTRODUCCIÓN
Existen efectos anómalos en la cicatrización de herida, los cuales son
provocados por desórdenes fibroproliferativos en la dermis. (8)
Formación de queloide (Tejido fibroso de color rosado)
Cicatrización hipertrófica (Lesión fibrosa eritematosa)
PROLONGACIÓN FASE INFLAMATORIAFactor de crecimiento transformador β 1 y β 2 (TGF β 1 y β 2)
Factor de crecimiento epidérmicos (EGF)
PROPÓLEOS EN CICATRIZACIÓN ANÓMALA
Actúa restableciendo la acción del Interferón I y II (INF I y II), produciendo una inhibición en la
proliferación y migración de fibroblastos evitando una formación excesiva de colágeno. (9)
QUELOIDE CICATRIZACIÓN HIPERTRÓFICA
Evaluar los efectos cicatrizantes de extractos de propóleos a través de ensayos de cierre de herida y proliferación en una línea celular de fibroblastos de ratón NIH-3T3 in vitro.
Objetivo general
Proliferación de fibroblastos NIH-3T3 en presencia de extractos de propóleos
Proliferación Celular de Fibroblastos NIH-
3T3 mediante el ensayo de MTT.
Comparación de la velocidad de
proliferación de las células NIH-3T3 en
presencia de extractos de propóleos.
Vel
ocid
ad d
e p
roli
fera
ción
(p
end
ien
te)
20 μg/ml
20 μg/ml
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
1 2 3
Series1
Series2
Series3
Abs
orba
ncia
a 5
70 n
m
(vec
es e
l tiem
po in
icia
l)
3 h 24 h 48 h
E1
E2
Control
RESULTADOSEnsayo de cierre de herida in vitro
*p<0,05**p<0,001
***p<0,001
Los extractos de propóleos inhibieron la
proliferación y migración de fibroblastos
Evaluación del Efecto antitumoral de dos Extractos de Propóleos de la Región Centro Sur en Líneas Celulares
de Cáncer
Investigadores: Sergio Wehinger, Elba LeivaAlumno: César Sepúlveda
Evaluar los efectos citotóxicos y pro-apoptóticos de extractos de propóleos en células de líneas celulares tumorales humanas de colon HT-29 y de mama MCF-7
Objetivo general
Líneas Tumorales
• MCF-7• Carcinoma de células
epiteliales de glándula mamaria
• Sobreexpresión oncogén WNT7B
Líneas tumorales
• HT-29• Adenocarcinoma de
colon• Sobreexpresión de p53
no funcional
Viabilidad en presencia de propóleos
HT-29
MCF-7
*p<0,05**p<0,001
***p<0,001
Los extractos de propóleos disminuyeron la viabilidad
HT29 y MCF-7 de manera significativa desde los 30 μg/ml
Proliferación celular en presencia de propóleos
HT-29
MCF-7
vs tiempo 3 h*p<0,05
**p<0,001***p<0,001
20 μg/ml
20 μg/ml
•vs E1p<0,05
#vs E2p<0,05
Los extractos de propóleos inhibieron la proliferación de
HT29 y MCF-7 de manera significativa
GRACIAS