3678
THESETH
Mémoire
Présentée pour l‟obtention du
Diplôme d’Études Approfondies en Biochimie/Biologie Moléculaire
Spécialité : Biologie Moléculaire
Par : GHOMA LINGUISSI Laure Stella
Maître ès Sciences.
SUR LE THÈME :
Diagnostic Moléculaire du VIH par PCR au Centre Médical Saint
Camille de Ouagadougou et au CERBA/LABIOGENE
Soutenu le 04 Janvier 2012 devant le jury :
Président : Pr Odile Germaine NACOULMA, Professeur Titulaire, Université de Ouagadougou
Membres : Pr Jacques SIMPORE, Professeur Titulaire, Université de Ouagadougou
Dr Christelle WM NADEMBEGA, Maître Assistante, Université de Ouagadougou
UNIVERSITE DE OUAGADOUGOU
Unité de Formation et de Recherche en
Sciences de la Vie et de la Terre (UFR/SVT)
Département de Biochimie-Microbiologie
et Bioinformatique (BAEBIB)
BURKINA FASO
UNITE - PROGRES - JUSTICE
CERBA/LABIOGENE
UFR/SVT ********************
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 2
Dédicace… A la mémoire de ma sœur.
Et Rose, elle a vécu ce que vivent les roses, l’espace d’un matin…
François de Malherbe.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 3
Remerciements…
Ce travail a été réalisé au laboratoire de Biologie Moléculaire du Centre Médical Saint Camille
et au Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro ANNIGONI (CERBA/LABIOGENE). Nous
exprimons nos profondes gratitudes.
Au Professeur Odile Germaine NACOULMA, responsable de l‟école doctorale (Département de
Biochimie/Microbiologie) pour avoir accepté de présider notre jury.
Je tiens tout d‟abord à adresser mes plus vifs remerciements au Prof. Jacques Simporé,
Professeur titulaire de Biologie Moléculaire et de Génétique moléculaire à l‟Université de
Ouagadougou, Directeur du Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni, Saint Camille
CERBA/LABIOGENE et Recteur de l‟Université saint Thomas d‟Aquin (USTA). Il a encadré
avec bienveillance ce mémoire de DEA, financé entièrement sa réalisation et donné les moyens
nécessaires pour mener à bien cette étude, dans son centre de recherche. En plus, il m‟a aidé dans
le choix de ce thème. Je lui suis très reconnaissante de m‟avoir fait profiter de la richesse et de la
pertinence de ses connaissances scientifiques. Je suis également sensible à la confiance qu‟il m‟a
témoignée.
Mes sincères remerciements vont au Professeur Francine Ntoumi, Présidente de la Fondation
Congolaise pour la Recherche Médicale (FCRM) et Coordonatrice du projet CANTAM pour
m‟avoir octroyé la bourse qui m‟a permis de poursuivre mes études. Merci également pour avoir
accepté d‟évaluer notre travail et d‟avoir accepté d‟être membre du jury.
Au Dr. W.M. Christelle NADEMBEGA, Maître Assistante en Biochimie Microbiologie,
Université de Ouagadougou, pour avoir accepté d‟évaluer notre travail et d‟avoir accepté d‟être
membre du jury.
Au Professeur Jean-Baptiste NIKIEMA, Professeur Titulaire en Pharmacognosie, Université de
Ouagadougou, DGPML et président du conseil d‟administration du centre Muraz pour son appui
scientifique et technique.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 4
Au Docteur Charlemagne GNOULA, Maître Assistant en chimie thérapeutique et au Docteur
Djeneba OUERMI, Assistante à l‟Université de Ouagadougou pour leurs conseils et pour l‟aide
qu‟iles ont apporté dans la réalisation de ce travail.
A tous les enseignants-chercheurs du département de Biochimie/Biologie Moléculaire
Appliquée/ Substances Naturelles/ Plantes médicinales et Phytothérapie pour la qualité de la
formation reçue.
Je remercie la Conférence Episcopale Italienne (CEI), pour son soutien financier dans la
réalisation de nos travaux de mémoire de DEA.
Je remercie également le projet CANTAM et particulièrement Dr Odile OUWE MISSI OUKEM
pour le précieux appui financier, pour l‟inscription à l‟AEA, qui m‟a permis de continuer ma
formation en DEA.
Je remercie Docteur Cyrille BISSEYE pour l‟aide précieuse au laboratoire et notamment pour
l‟initiation à la RT-Real-time PCR.
Un immense Merci à l‟équipe de Saint Camille CERBA/LABOGIENE avec qui j‟ai partagé mon
quotidien dans la recherche : aux messieurs Bolni Marius Nagalo et Désiré Ilboudo ; aux dames
Florencia Djigma, Tani Sagna, Thérèse Kagoné et Zoenabo Douamba. Soyez rassurez de ma
profonde gratitude.
J‟aimerais remercier chaleureusement et ensuite exprimer ma profonde gratitude à la famille
Simporé (Monsieur François Simporé, sa femme et leurs enfants) pour m‟avoir accueillie comme
membre de leur famille. Je suis particulièrement sensible à la marque d‟hospitalité qu‟ils ont tous
fait montre à mon égard.
Enfin, je voudrais remercier mes parents, mes frères et sœurs qui m‟apportent un grand soutien
depuis plusieurs années. En espérant que le fruit de ce travail traduise en partie la récompense de
tous leurs efforts et leur dévouement.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 5
TABLES DE MATIERES
Tables de matieres........................................................................................................................... 5
Liste des acronymes ........................................................................................................................ 7
listes des Figures ............................................................................................................................. 8
Introduction ................................................................................................................................... 10
Enoncé du problème ..................................................................................................................... 14
Justification de l‟étude .................................................................................................................. 14
Objectifs de la recherche ............................................................................................................... 14
Objectif principal ...................................................................................................................... 14
Objectifs spécifiques ................................................................................................................. 14
Chapitre I. Généralités .................................................................................................................. 15
I.1 – Diversité génétique du VIH ............................................................................................. 15
I.1.1 – Origine du VIH et de sa diversité génétique.............................................................. 15
I.1.2 – Distribution géographique et prévalence des sous-types VIH-1 ............................... 16
I.2 – Structure du VIH .............................................................................................................. 17
I.2.1 – Particule virale ........................................................................................................... 17
I.2.2 – Génome du VIH-1 ..................................................................................................... 18
I.3 – Cellules cibles du VIH et Réservoirs cellulaires .............................................................. 21
I.3.1 – Cellules dendritiques ................................................................................................. 22
I.3.2 – Cellules de la lignée monocytaire .............................................................................. 23
I.3.3 – Lymphocytes T .......................................................................................................... 23
I.3.4 – Organes lymphoïdes : cibles précoces du VIH .......................................................... 23
I.4 – Mécanisme d‟infection par le VIH ................................................................................... 23
I.4.1 – Différents stades de l‟infection .................................................................................. 23
I.4.2 - Cycle de réplication virale......................................................................................... 25
I.5 – Réponse immunitaire de l‟hôte face à l‟infection à VIH .................................................. 29
I.5.1 – Réponse à médiation cellulaire .................................................................................. 29
I.5.2 – Réponse à médiation humorale.................................................................................. 30
I.6 – Mécanisme de transmission du VIH ................................................................................. 30
I.6.1 – Transmission Sexuelle ............................................................................................... 31
I.6.2 – Transmission Sanguine .............................................................................................. 31
I.6.3 – Mécanismes de la transmission mère-enfant du VIH-1............................................. 31
I.6.4 – Moment de la transmission ........................................................................................ 34
1.7 – Evolution des différentes populations cellulaires lors des phases de la maladie ............. 35
I.8 – Traitements ....................................................................................................................... 35
I.8.1 – Principes et définition ................................................................................................ 35
I.8.2 – Moyens de traitement ................................................................................................ 36
I.9 – Prise en charge de la grossesse chez la femme enceinte séropositive .............................. 37
II –Techniques de diagnostic des infections à VIH .................................................................. 38
II.1 – Diagnostic Indirect .......................................................................................................... 39
II.1.1- Tests ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)............................................. 39
II.1.2 – Tests de dépistage dits : « tests rapides » ................................................................. 39
II.1.3 – Méthode de Western blot ......................................................................................... 39
II.2 – Diagnostic direct ............................................................................................................. 40
II.2.1 – Antigène p24 ............................................................................................................ 40
II.2.2 – Techniques de biologie moléculaire ......................................................................... 40
III – Mesure des marqueurs viro-immunologiques ................................................................... 42
Chapitre II. Méthodologies .......................................................................................................... 43
II.1 – Cadre de l‟étude .............................................................................................................. 43
II.1.1 – Centre Médical Saint Camille .................................................................................. 43
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 6
II.1.2 – Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni (CERBA/LABIOGENE) ... 44
II.2 – Protocole PTME au Centre Médical Saint Camille ........................................................ 45
II.3 – Déroulement de l'étude .................................................................................................... 46
II.3.1 – Période et type d‟étude ............................................................................................. 46
II.3.2 – Collecte des données et des échantillons de sang .................................................... 46
II.3.3 – Mode de recrutement ................................................................................................ 47
II.4 – Considération éthique ...................................................................................................... 48
II.5 – Matériel ........................................................................................................................... 48
II.5.1 – Appareils de diagnostic utilisés ................................................................................ 48
II.5.2 – ARV utilisés pour le PTME ..................................................................................... 51
II.6 – Méthodes pour les techniques utilisées ........................................................................... 53
II.6.1 – ELISA indirect ......................................................................................................... 53
II.6.2 – Extraction ................................................................................................................. 54
II.6.3 – PCR qualitative ........................................................................................................ 56
II.6.4 – Statistiques ............................................................................................................... 59
Chapitre III – Résultats et discussion............................................................................................ 60
III.1 – Résultats ......................................................................................................................... 60
III.1.1 – Caractéristiques sociodémographiques des mères, selon l‟âge et la profession ..... 60
III.1.2 – Analyse des tests PCR ............................................................................................ 61
III.1.3 – Analyse des tests pour le Real time-PCR des personnes à sérologie douteuse ...... 64
III.1.4 – Analyse des tests PCR par l‟ADN proviral en utilisant les DBS ........................... 64
III.2 – Discussion ...................................................................................................................... 66
Conclusion et perspectives ............................................................................................................ 71
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 7
LISTE DES ACRONYMES
3TC : Lamivudine
AA : Allaitement artificiel
ADN: Acide Désoxyribonucléique
AM : Allaitement Maternel
ARN: Acide Ribonucléique
ARV : Antirétroviraux
AZT : Zidovudine
BET : Bromure d'éthidium
CERBA : Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro ANNIGONI
CMSC : Centre Médical Saint Camille
CPA : Cellules présentatrices d‟antigène
CREN : Centre de Récupération et d‟Education Nutritionnelle
CRF: Circulating Recombinant Form
DBS: Dried Blood Spot
DO: Densité optique
ELISA: Enzyme Linked Immunosorbent Assay
HAART: Highly Active Antiretroviral Treatment
IF : Inhibiteurs de Fusion
INNTI : Inhibiteurs non Nucléosidiques de la Transcriptase Inverse
INTI : Inhibiteurs Nucléosidiques de la Transcriptase Inverse
IP : Inhibiteurs de Protéase
LABIOGENE : Laboratoire de Biologie Moléculaire et de Génétique Moléculaire
LTR : Long terminal repeat
NSI : Non Sycintium Inducing
NVP : Névirapine
ONUSIDA : Organisation des Nations Unies pour la lutte contre le SIDA
PCR: Polymerase Chain Reaction
PTME : Prévention de la Transmission Mère-enfant
SI : Syncitium Inducing.
SMI : Santé Maternel et Infantile
TDR : Test de Diagnostic Rapide
TME: Transmission mère-enfant
URF: Unique Recombinant Form
VIH : Virus de l'Immunodéficience Humaine
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 8
LISTES DES FIGURES
Figure 1 : Structure du virion VIH-1 ……………………………… ........................................... 18
Figure 2 : Représentation schématique du génome du VIH-1 . .................................................... 19
Figure 3 : Stade de l‟infection par le VIH …………………………............................................ 25
Figure 4 : Représentation schématique du cycle de réplication du VIH. ...................................... 26
Figure 5 : Schéma des étapes de fixation et de fusion du virus et de la cellule hôte . .................. 26
Figure 6 : Mécanismes de transmission du VIH in utero ............................................................. 32
Figure 7. Origine du VIH dans le lait maternel. .......................................................................... 34
Figure 8 : Evolution des marqueurs de la contamination par le VIH .......................................... 38
Figure 9 : PCR en temps réel. ....................................................................................................... 41
Figure 10: Photos de tests rapides VIH ........................................................................................ 48
Figure 11: Thermocycleur 9700 .................................................................................................. 49
Figure 12 : système d‟électrophorèse .......................................................................................... 49
Figure 13 : Appareil 7500 real time PCR ..................................................................................... 49
Figure 14 : Système photo doc. .................................................................................................... 50
Figure 15 : Centrifugeuse réfrigérée ........................................................................................... 50
Figure 16 : Représentation des résultats du Génie II HIV-1/HIV-2 SDBioline ........................... 54
Figure 17 : Electrophorèse sur gel d‟agarose à 2%. ...................................................................... 62
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 9
LISTE DES TABLEAUX
Tableau I : Protocoles ARV de prévention de la transmission mère-enfant du VIH .................... 51
Tableau II : Mélange Réactionnel de la PCR................................................................................ 57
Tableau III : Programme d‟amplification de la PCR .................................................................... 57
Tableau IV : Mélange réactionnel de la DTT ............................................................................... 58
Tableau V : Mélange réactionnel de la RT ................................................................................... 58
Tableau VI : Programme d‟amplification de la RT-PCR en temps réel qualitative. .................... 59
Tableau VII : Répartition du statut sérologique en fonction des groupes d‟âge ........................... 60
Tableau VIII : Répartition du VIH en fonction des professions des mères .................................. 61
Tableau IX : Prévalence des tests PCR positifs en fonction des professions des mères ............. 62
Tableau X : Résultats des tests PCR des enfants en fonction du mode de traitement de leur mère
....................................................................................................................................................... 63
Tableau XI : Résultats des tests PCR des enfants en fonction de leur mode d‟allaitement. ......... 63
Tableau XII : Répartition de l‟allaitement selon les tests PCR. ................................................... 64
Tableau XIII : Résultats de la PCR des personnes au statut sérologique douteux à l‟ELISA ...... 65
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 10
Résumé
Introduction
Cette étude fait le bilan de la prise en charge dans la prévention de la transmission mère-
enfant du VIH/SIDA (PTME) au Centre Médical Saint Camille de Ouagadougou et au
CERBA/LABIOGENE, deux centres de référence en PTME. L‟objectif de cette étude est
d‟effectuer le diagnostic moléculaire du VIH par PCR chez les enfants nés de mères VIH
séropositives et chez les femmes enceintes ayant un statut sérologique douteux.
Patients et Méthode
Une étude longitudinale était conduite sur 1300 femmes venant pour une consultation
prénatale entre septembre 2010 et juillet 2011. La sérologie VIH de ces femmes a été déterminée
par ELISA et les résultats douteux ont été confirmés par PCR en temps réel. Le Diagnostic
moléculaire du VIH par PCR a été effectué sur 378 enfants nés de mère séropositives, en
utilisant du sang séché sur papier Buvard (Dried Blood Spot : DBS).
Résultats
L‟incidence globale de la transmission mère-enfant du VIH était de 4,76% (18/378) :
0,00% (0/114) pour les mères sous HAART et 6,82% (18/264) pour celles sous NPP (AZT +
3TC + NVP). Les mères étaient essentiellement des ménagères (69,69%), leur moyenne d‟âge
était de 28,3± 0,2 ans et 41,5% des mères étaient du groupe d‟âge 26-31 ans. La différence
n‟était pas significative (p= 0,529) en comparant la PCR positive des enfants allaités avec le lait
maternel avec allaités avec le lait artificiel (6,5% versus 4,2%).Le taux de décès chez les enfants
durant le suivi médical était de 1,3%.
Par ailleurs, parmi les 16 échantillons identifiés indéterminés au test VIH par ELISA, chez les
femmes enceintes, la PCR en temps réel a confirmé 2 échantillons (12,5%) VIH positifs.
Conclusion
L‟efficacité de la stratégie nationale de la PTME repose sur le bon suivi de son protocole.
La thérapie antirétrovirale (HAART) des enfants pourraient réduire d‟une manière très
significative la transmission verticale du VIH. En plus, l‟utilisation d‟une technique de
diagnostic précoce du VIH chez les enfants nés de mères séropositives par PCR est nécessaire et
recommandable dans le cadre de la PTME au Burkina Faso. Chez les femmes enceintes, la PCR
est également essentielle pour confirmer leurs tests VIH douteux effectués par ELISA.
Mots clés : VIH – Nouveau né – ARN – DBS - ADN – PCR – PCR en temps réel – PTME –
Femmes enceintes
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 11
Abstract
Aim of the study
The objective of this study was to evaluate the HIV Mother to child transmission and to confirm
by Real-Time PCR HIV infection in pregnant women with dubious serological status.
Patients and Methods
A longitudinal study was conducted among 1300 women attending the antenatal service at Saint
Camille Medical Centre from September 2010 to July 2011. HIV status of mothers was
determined by rapid tests and ELISA. Discordant results were confirmed by real-time PCR. PCR
was used to determine HIV status of children born from HIV-positive mothers.
Results
From 1300 pregnant women tested for HIV, 378 were seropositive. Mothers were predominantly
housewives (69.7%), and mean age was 28.3 ± 0.15 years. The overall prevalence of HIV
transmission from mother to child was 4.8% (18/378). This prevalence differed significantly
from 0.0% (0/114) to 6.8% (18/264) in children born from mothers under HAART and those
with mothers under NPP (AZT + 3TC + NVP), respectively (p = 0.009).
Children‟s mortality rate during the medical follow up was 1.3% (5 /378). Among 16 women
with HIV dubious status by ELISA, the Real Time PCR confirmed 2/16 (12.5%) as HIV
positive.
Conclusion
The protocol of prevention of mother to child HIV transmission (PMTCT) is effective.
The rate of HIV vertical transmission is significantly reduced. Early diagnosis determined by
PCR of children born from HIV- positive mother is necessary and recommended in the context
of PMTCT in Burkina Faso. We also found that PCR is a performant tool to confirm HIV status
in pregnant women.
Keywords: Pregnant women; child; HIV; PMTCT; Real Time PCR; DNA; DBS.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 12
INTRODUCTION
En 2010, selon ONUSIDA, le nombre de personnes nouvellement infectées par le VIH
dans le monde était estimé à 2,6 millions. Près de 33,3 millions de personnes vivent avec le VIH,
avec 15,9 millions de femmes et 2,5 millions d‟enfants de moins de 15 ans (ONUSIDA, 2010).
En effet, dans les pays en développement, le taux élevé de mortalité induit par le VIH a un
impact significatif sur la mortalité infantile globale. En 2009, trois cent soixante dix mille
(370 000) enfants ont été infectés par le VIH à travers la transmission mère enfant (ONUSIDA,
2010).
Un quart des femmes enceintes infectées découvrent leur séropositivité, dans le cadre de
la prévention de la transmission mère enfant du VIH (PTME). Le taux de transmission de la
mère à l'enfant est d'environ 15-20% en l'absence de prévention par traitement antirétroviral
(ARV) (GAY et al., 2010). En Afrique subsaharienne, ce taux peut être réduit de 10,4% à 1,4%
lorsque des mesures préventives sont combinées (SIMPORE et al., 2006; SIMPORE et al.,
2007). Malheureusement, en 2009, dans les pays en voie de développement, seul 53 % des
femmes enceintes vivant avec le VIH ont reçu un traitement antirétroviral pour prévenir la
transmission mère enfant (ONUSIDA, 2010).
Au Burkina Faso, la lutte contre le VIH/SIDA et les IST a commencé depuis une
vingtaine d‟années. Sur la base de la séro-surveillance sentinelle, la prévalence globale du VIH
chez les 15 à 49 ans était à 2,0% en 2008 (UNAIDS, 2010). Les stratégies nationales élaborées
depuis 2000 incluent un programme PTME et la mise en place des protocoles antirétroviraux
(ARV) plus efficaces (Rapport Direction de la Santé et de la Famille Burkina Faso, 2006).
Des progrès considérables ont été réalisés au niveau des programmes nationaux de
PTME/ VIH mis en place, mais, il existe un risque résiduel de transmission chez les enfants nés
de mères séropositives. Entre 14 et 16 mois, les enfants nés des mères VIH séropositives, portent
les anticorps de leur mère et sont toujours positifs au test ELISA bien qu‟ils peuvent ne pas être
infectés par le virus. Seuls les dosages de l‟antigène p24 et le diagnostic moléculaire par PCR
peuvent déterminer la séropositivité de l‟enfant dès la naissance. Ainsi donc, le diagnostic
moléculaire précoce demeure l‟outil incontournable pour mesurer les risques d‟infections durant
la vie intra-utérine, pendant l‟accouchement et durant l‟allaitement.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 13
L‟étude qui a été menée au Centre Médical Saint Camille de Ouagadougou (CMSC) en
2009 a confirmé la baisse de l‟incidence de la TME chez les enfants nés de mères séropositives
qui ont suivi le protocole de la PTME jusqu‟à leur accouchement. Il a été décelé un taux de
transmission verticale de 9,09 % (12/132) chez les mères sous Névirapine ; 4,55 % (4/88) chez
celles sous triprophylaxie (AZT+3TC+NVP) et 0,00 % (0/61) chez celles sous HAART
(SAGNA T. et al., 2008).
La PCR de l‟ADN viral intégré (ADN proviral) est la plus utilisée pour détecter
précocement le VIH chez le nouveau-né. Dans les pays en développement l‟utilisation de ce test
a été facilitée par la technique de « Dried Blood Spot » (DBS).
Le défi médical est d'identifier les enfants infectés par la transmission verticale du VIH
pour leur prise en charge thérapeutique par les ARV. Dans les pays à ressources limitées, il y a
beaucoup d‟avantages à utiliser les échantillons de DBS que le sang total pour la réalisation
d‟une PCR pour détecter l‟ADN (CASTRO et al., 2008). En effet, dans les centres médicaux
ruraux qui n‟ont ni électricité ni congélateur, il est impossible de conserver des échantillons de
sang total ou de sérum.
Le diagnostic précoce et l‟initiation des antirétroviraux chez les enfants infectés par le VIH
sont cruciaux pour diminuer la morbidité et la mortalité chez les enfants nés de mères
séropositives (IVERS et al., 2008). L‟utilisation de la PCR est donc bien indiquée pour le
diagnostic précoce chez les enfants nés des mères séropositives et pour la confirmation des tests
ELISA indéterminés effectués chez les adultes (NAGALO et al., 2011).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 14
Énoncé du problème
A cause de la présence des anticorps maternels chez l‟enfant jusqu‟à l‟âge de 14-16 mois,
les tests sérologiques semblent donc inefficaces dans le diagnostic précoce du VIH. En plus, il
existe des cas de tests ELISA indéterminés qui posent le problème de la positivité de l‟individu.
Dans ces situations, l‟usage de la PCR s‟avère être nécessaire.
Justification de l’étude
Le diagnostic précoce du VIH chez les enfants nés de mères séropositives est nécessaire
pour leur prise en charge médicale adéquate, il est aussi important chez les sujets adultes en
séroconversion qui n‟ont pas encore des taux d‟anticorps suffisants pour être détectés par ELISA.
Chez ces derniers, le diagnostic moléculaire par PCR du VIH pourrait s‟effectuer afin de
confirmer ou clarifier leur statut sérologique.
OBJECTIFS DE LA RECHERCHE
Objectif principal
L‟objectif de cette étude est d‟évaluer la transmission de la mère à l‟enfant du VIH et de
diagnostiquer l‟infection à VIH chez les femmes enceintes ayant un statut sérologique
indéterminé.
Objectifs spécifiques
Les objectifs spécifiques de cette recherche sont :
- Dépister par PCR au 4ème
mois de naissance les enfants nés de mères VIH séropositives ;
- Estimer l‟incidence de la TME chez les enfants sous allaitement maternel et ceux sous
allaitement artificiel.
- Déterminer la mortalité parmi les enfants allaités au sein et ceux allaités au lait artificiel.
- Confirmer par PCR le statut sérologique des femmes enceintes ayant à l‟inclusion dans la
PTME un test VIH indéterminé par ELISA.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 15
CHAPITRE I : GENERALITES
I.1 – Diversité génétique du VIH
I.1.1 – Origine du VIH et de sa diversité génétique
Le VIH présente une très grande diversité génétique. On distingue deux types de VIH :
Le VIH1 et le VIH2. Le VIH-2 est moins pathogène que le VIH-1 et il est confiné en l‟Afrique
de l‟Ouest (FANALES-BELASIO et al., 2010) .
Les études phylogénétiques du VIH-1 chez l‟homme et du SIVCPZ chez les primates suggèrent
qu‟au moins trois événements indépendants de transmission se sont produits entre les années
1910 et 1950 à partir de chimpanzés (KEELE et al., 2006). Ces événements ont conduit à
l‟apparition de trois groupes M (major), O (outlier) et N (non-major et non-outlier).
Plus de 90% des infections sont dues au VIH-1 du groupe M. En 2009, une nouvelle souche
relativement proche du virus de l‟immunodéficience simienne de gorilles a été découverte chez
une femme camerounaise. Il a été désigné par VIH-1 du groupe P (PLANTIER et al., 2009). En
2008, une étude a démontré que le VIH était déjà présent chez l‟homme en 1881 (WOROBEY et
al., 2008). Le groupe M est sous-divisé en 9 sous-types soit : A, B, C, D, F, G, H, J et K. La
variation génétique à l‟intérieur d‟un même sous-type se situe entre 15% et 20% alors qu‟elle
atteint 25 à 35% entre les sous-types.
De plus, certains sous types sont également sous divisés en sous sous-types. C‟est le cas
pour le sous-type A qui est divisé en quatre sous-sous types, A1, A2, A3 et A4 ainsi que pour le
sous-type F séparé en deux sous-sous types soit F1 et F2 (BUONAGURO et al., 2007).
D‟abord, la variabilité génétique découle des taux élevés de mutations
(approximativement 1 par 104 nucléotides) (ELENA et SANJUAN, 2005) et de recombinaison
génétique (3 par cycle de réplication) (ZHUANG et al., 2002) engendrées par la transcriptase
inverse dans le contexte d‟une réplication virale intense, estimée à 1010
virions produits par jour
chez un individu infecté non-traité (PERELSON et al., 1996).
Une telle variabilité rend difficile l'élaboration d'un vaccin. Ainsi, lorsque le système
immunitaire est encore efficace, on observe un grand nombre de variants dû aux mutations : le
virus déborde ainsi le système immunitaire, qui est alors détruit. La variabilité se réduit alors, le
variant le plus efficace prenant le dessus.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 16
Ensuite, l‟évolution se produit en réponse à la pression sélective exercée par le système
immunitaire, plus précisément les anticorps neutralisants, les lymphocytes T CD4+ auxiliaires et
les lymphocytes T CD8+ cytotoxiques (JONES et al., 2009) et par les agents antirétroviraux en
cas de traitement (CASAZZA et al., 2005). Ces facteurs génèrent une population virale
hautement hétérogène dont la diversité s‟intensifie au fur et à mesure de l‟évolution de
l‟infection (SIMON et HO, 2003) .
La recombinaison génétique est un autre processus contribuant à l‟apparition de la
diversité virale. Ce phénomène se produit lorsqu‟une personne est infectée par deux sous-types
différents et que ces deux virus se multiplient dans une même cellule, résultant en un virus
hybride représentant une mosaïque des deux virus présents. Lorsque cette forme recombinante
est retrouvée chez au moins trois autres personnes non épidémiologiquement liées, on la décrit
alors comme étant un CRF (Circulating Recombinant Form), alors que si elle n‟est retrouvée que
chez un seul individu on parle alors de URF (Unique Recombinant Form).
Récemment, l‟accès au séquençage complet des génomes viraux à partir d‟une seule
copie de virus (single genome sequencing) a permis de documenter une panoplie de nouveaux
CRF et URF ainsi que leur distribution géographique, illustrant bien la complexité et la diversité
de l‟épidémiologie du VIH à travers le monde (TAYLOR et al., 2008). À ce jour, plus de 43
CRF ont été décrits (Rapport du groupe d'experts, 2010).
I.1.2 – Distribution géographique et prévalence des sous-types VIH-1
Le sous-type A est présent en Afrique de l‟Est et Centrale ainsi qu‟en Asie de l‟Est et en
Europe occidentale et il est responsable d‟environ 12% des infections par le VIH dans le monde.
Bien que le sous-type B soit le plus répandu géographiquement, il est surtout retrouvé en
Amérique, en Europe ainsi qu‟en Australie et ne représente qu‟environ 10% des cas dans le
monde.
Au contraire, le sous-type C à lui seul, est responsable de la moitié des infections
(TAYLOR et al., 2008) et il se retrouve dans les régions du monde les plus touchées par
l‟épidémie, c‟est-à-dire, l‟Afrique de l‟Est, l‟Afrique du Sud et l‟Inde.
Le sous-type D se trouve principalement en Afrique de l‟Est et serait l‟ancêtre africain du
sous-type B, les deux clades étant génétiquement similaires. Le sous-type D est associé à une
progression rapide de la maladie et ce virus utiliserait le corécepteur CXCR4 très tôt au cours de
l‟infection (HUANG et al., 2007).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 17
Heureusement, la prévalence de ce sous-type serait à la baisse (RAINWATER et al., 2005).
Le sous-type E retrouvé surtout au sud-est de l‟Asie, a été reclassé comme étant plutôt une forme
recombinante AE et non un sous-type pur E après le séquençage complet de son génome. Ce
sous-type est maintenant identifié comme CRF01_AE (GAO et al., 1996). Cette forme
recombinante est relativement répandue et représente 5% des infections VIH dans le monde.
On retrouve le sous-type G en Afrique de l‟Ouest et il représente environ 6% des infections.
La forme recombinante CRF02_AG est également fréquente dans cette région (environ 5% des
cas). Finalement, les sous-types F-H-J-K sont peu répandus et représentent moins de 1% des cas,
alors que les autres formes recombinantes représentent moins de 0,1% des cas chacune.
I.2 – Structure du VIH
I.2.1 – Particule virale
Le VIH-1 est doté d‟un génome ARN simple brin en double copie de polarité positive de
9817 paires de bases protégé par une nucléocapside icosaédrique. C‟est un virus possédant une
enveloppe formée de trimères protéiques.
Le VIH se présente sous forme de particules sphériques d‟un diamètre de 90 à 120 nm. Il
comporte une enveloppe virale constituée d'une bicouche lipidique et de deux glycoprotéines :
gp120 et gp41. La molécule gp41 traverse la bicouche lipidique tandis que la molécule gp120
occupe une position plus périphérique. La gp120 joue le rôle de récepteur viral de la molécule
membranaire CD4 des cellules hôte. La gp41 est responsable de la fusion de l‟enveloppe avec la
membrane cellulaire. Ces deux glycoprotéines sont liées entre elles par des liaisons non
covalentes (PANCERA et al., 2010).
L'enveloppe virale dérive de la cellule hôte, elle contient donc quelques protéines
membranaires de cette dernière, y compris des molécules du Complexe Majeur
d‟Histocompatibilité (CMH) (ALCAMI et KOSZINOWSKI, 2000). A l‟intérieur, le core viral ou
nucléocapside inclut une couche de protéines de matrice p17 et une couche plus profonde de
protéines de capside p24.
La protéine p17 est une protéine renfermant la protéase virale. La polymérisation de p24 conduit
à la formation d‟un cône tronqué renfermant le génome viral (BARRE-SINOUSSI, 1996). Ce
génome est constitué de deux copies d'ARN simple brin associées à deux molécules de
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 18
transcriptase inverse (p64) et à d'autres protéines enzymatiques (protéase p10 et intégrase p32)
(Figure 1).
Figure 1 : Structure du virion VIH-1 (BRIGGS et al., 2003)
I.2.2 – Génome du VIH-1
Le génome viral est transformé dans le cytoplasme de la cellule infectée en une seule
copie d‟ADN double brin grâce à la transcriptase inverse. Cette rétro transcription suit un
mécanisme très complexe qui aboutit à la création des LTR (Long terminal repeat) aux
extrémités de l‟ADN complémentaire (ADNc). Après circularisation ce dernier migre dans le
noyau et intègre le génome cellulaire. Les LTR constitués des régions U3, R, U5 permettent
l‟insertion du virus dans l‟ADN génomique de la cellule infectée. Les LTR contiennent aussi des
séquences nécessaires à la transcription du provirus. Bien que ces séquences soient identiques,
elles jouent différents rôles selon l‟extrémité où elles se retrouvent (5‟ ou 3‟).
- Au niveau de l‟extrémité 5‟, le LTR joue le rôle de promoteur fort de la transcription.
On y retrouve, le site d‟initiation de la transcription (CAAT box) et un « catalyseur »
(TATA box).
- Au niveau de l‟extrémité 3‟ le LTR est un promoteur non spécifique capable d‟activer
tout gène endogène ou non situé à sa proximité.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 19
Figure 2 : Représentation schématique du génome du VIH-1 (PETERLIN et TRONO, 2003).
Le génome du VIH est constitué uniquement de deux molécules d‟ARN monocaténaires de
9,2 kb et de polarité positive, disposant à chaque extrémité d‟une région R identique,
indispensable à la transcription inverse. Les ARN génomiques viraux ont une structure d‟ARNm
(ils possèdent une coiffe en 5‟ et sont polyadénylés en 3‟).
Le VIH possède 3 gènes rétroviraux: codant pour différentes protéines virales :
o Le gène gag (groupe antigène) code pour des protéines internes ("core") : p50 et p40 qui
se cliveront en p13, p18 et p24. Le gène gag est responsable de la synthèse des protéines
qui composeront la structure virale, comme la capside (p24), la nucléocapside (p6, p7)
ainsi que la matrice (p17).
o Le gène pol (polymérase) code pour des enzymes nécessaires à sa réplication :
notamment p68 (transcriptase inverse) et p34 (intégrase). Le gène pol code pour les
enzymes virales : la transcriptase inverse, l‟intégrase, la protéase ainsi que la
ribonucléase.
o Le gène env, (enveloppe) code pour des glycoprotéines (gp120 et gp 41 issues de gp
160), qui entrent dans la composition de l‟enveloppe virale (gp160) contenant les
déterminants interagissant avec le récepteur et le corécepteur, essentiels à l‟entrée dans la
cellule hôte. La gp41 est formée de trois domaines majeurs : l‟ectodomaine responsable
de la fusion, la région d‟ancrage transmembranaire et la queue cytoplasmique.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 20
A la différence des autres rétrovirus, le VIH-1 a une organisation beaucoup plus complexe.
En plus des trois gènes communs aux rétrovirus (gag, pol, env), son ARN code pour 6 autres
gènes permettant la synthèse de seize protéines dont 3 enzymes (transcriptase inverse, intégrase,
protéase) 7 protéines dites protéines structurales (gp41, gp120, matrice, nucléocapside, capside,
p7, p6) et 6 protéines accessoires soit : Rev, Nef, Vpu, Vpr, Tat, Vif (tat qui favorise
l'augmentation du niveau de la synthèse des protéines virales, rev qui favorise l'augmentation des
ARN messagers correspondant aux protéines de gag, pol et env ; ainsi que d'autres gènes tels que
vif qui permet d'augmenter l'infectiosité, nef, vpu ou vpr (vpx pour le VIH-2) (WANG et al.,
2011).
Les gènes tat, rev, vpu, vif, nef et vpr sont dits gènes régulateurs. Ces gènes sont en
charge de régulariser divers aspects de l‟infection virale. La protéine Tat est un activateur de la
transcription virale via le LTR alors que Rev joue un rôle de transport de l‟ARN viral du noyau
vers le cytoplasme. Vpu, Vpr, Nef et Vif sont des protéines dites accessoires et sont, par
conséquent, non essentielles à la réplication virale. Par contre l‟effet de ces protéines sur la
dynamique virale et sur l‟échappement au système immunitaire n‟est pas négligeable. Notons
également que le VIH-2 ne possède pas de protéine Vif.
A coté de ces trois gènes, nous avons un certain nombre d‟autres gènes codant pour les
protéines dites « accessoires ».
Le gène Tat code pour la protéine Tat (Transactivator of Transcription). Cette protéine
par sa fixation sur la séquence Tar va permettre l‟amplification de la transcription des
ARNm.
La protéine Rev issue du gène Rev (Regulatory of Virion Expression) permet la
régulation de l‟exportation du noyau des ARN viraux.
La protéine Nef (Negative regulatory Factor) codée par le gène du même nom a plusieurs
rôles :
o Elle induit une régulation négative de l‟expression des CD4 et du complexe majeur
d‟histocompatibilité de classe 1 (CMH-1) de la cellule infectée (CAI et al,. 2011). Cette
régulation contribue en partie à l‟augmentation de l‟infectivité virale (CAI et al., 2011).
Le gène Vif (Viral Infectivity Factor) codant pour la protéine Vif a été identifié par
FISHER et al.(1987). Vif sera intégré dans le virion et associée à la nucléocapside. A ce
stade elle va inhiber l‟intégration de la protéine APOBEC3G dans le virus (LAVENS et
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 21
al., 2010). Puis Vif envoie la protéine APOBEC3G dans la voie d‟ubiquitination. Ceci
aura pour effet la dégradation d‟APOBEC3G par les protéasomes. APOBEC3G par son
activité antivirale constitue une défense naturelle très efficace contre les rétrovirus HIV-
1, HIV-2 et SIV. Vif est indispensable à l‟infectivité du virus.
Le gène Vpu (Viral Protein U) code pour la protéine Vpu. Cette protéine permet de
diminuer l‟expression des récepteurs CD4 à la surface des cellules infectées. Ce sont
essentiellement les CD4 néosynthétisés dans le réticulum endoplasmique, complexés
avec le gp160 qui sont la cible de Vpu (WILDUM et al., 2006). L‟interaction de Vpu se
fait directement avec la partie C-terminal du domaine cytoplasmique de CD4 (PTAK et
al., 2010).
La protéine Vpr (Viral Protein R) codée par le gène Vpr est indispensable à l‟infection de
cellules qui ne se divisent pas tels que les macrophages (KOGAN et RAPPAPORT,
2011). Dans ce cas, Vpr est étroitement reliée au PIC (viral Pré-Integration Complexe).
En effet, elle présente une affinité forte pour les pores nucléaires ce qui permettra au PIC
de passer le pore.
I.3 – Cellules cibles du VIH et Réservoirs cellulaires
Les cellules cibles du VIH sont caractérisées par la présence, à leur surface du récepteur
CD4, sur lequel viendra se fixer le virus. Deux groupes de cellules ont été répertoriés ; les
lymphocytes T CD4+ et les cellules présentatrices d‟antigène (CPA). La disparition progressive
des lymphocytes T CD4+ est la marque du syndrome de l‟immunodéficience acquise (SIDA).
La grande majorité de la réplication virale (99%) se passe dans ces cellules activées dans les
organes lymphoïdes et les autres tissus libérant dans le plasma des virions dont la demi-vie est
estimée à quelques heures. Les CPA sont les monocytes sanguins, les macrophages tissulaires et
les cellules dendritiques. Ces dernières sont présentes dans le thymus, la peau (cellules de
Langherans), les muqueuses, les organes lymphoïdes, le système nerveux central et le sang
périphérique.
La fixation du gp120 sur le récepteur CD4 entraîne un changement conformationnel qui
permet l‟accessibilité à des corécepteurs, appartenant à la famille des récepteurs chémochiniques.
Ces derniers coopèrent avec le CD4 pour permettre l‟entrée du virus dans la cellule.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 22
On distingue le CCR5 sur le macrophage, le CXCR4 sur les lymphocytes T. D‟autres
corécepteurs jouant un rôle mineur ont été mis en évidence, ce sont le CCR3, le CCR2 et le
CXCR1. Selon leur tropisme pour ces cellules et selon la nature et le type de chémokines, les
isolats viraux peuvent être classés en trois souches :
- les souches M-tropiques, dont le tropisme est restreint aux monocytes macrophages. Ils étaient
auparavant décrits comme des virus NSI : non sycintium inducing, du fait de la faible production
de syncitia in vitro ;
- les souches T-tropiques ou X4, autrefois appelées SI : syncitium inducing, qui reconnaissent la
lignée cellulaire T ;
- les souches M-T-tropiques ou R5X4 ont un double tropisme.
I.3.1 – Cellules dendritiques
Des populations cellulaires sont présentes dans les muqueuses et sont susceptibles à
l‟infection. C‟est le cas des cellules de Langerhans, qui sont des cellules dendritiques cutanées.
Ces cellules sont très nombreuses dans les muqueuses cervicales et vaginales et expriment un
fort niveau de récepteurs CD4 et de CCR5 (HLADIK et McELRATH, 2008).
Les cellules dendritiques, quant à elles, sont des cellules présentatrices d‟antigènes et le
VIH peut s‟y attacher via le récepteur cellulaire DC-SIGN (IZQUIERDO-USEROS et al., 2007).
Les cellules dendritiques sont de grandes voyageuses de par leurs fonctions de présentation
d‟antigène et, vont malencontreusement propager l‟infection vers d‟autres organes lymphatiques
comme les ganglions lymphatiques, le thymus et la rate. Suite à cette dissémination virale, la
virémie devient alors très importante au niveau sanguin et le sujet infecté est fortement
contagieux.
Ce sont des cellules présentatrices d‟antigènes, présentes dans le thymus, la peau (cellules
de Langerhans), les muqueuses ainsi que dans tous les organes lymphoïdes secondaires. Elles ont
un rôle majeur dans la reconnaissance de l‟antigène au cours de la réponse immune primaire
(VAN KOOYK, 2008). Ainsi, les cellules dendritiques des muqueuses génitales transportent le
virus aux organes lymphoïdes voisins où il serait transmis aux cellules CD4 dans lesquelles il se
réplique (PERESSIN et al., 2011).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 23
Les cellules dendritiques expriment la molécule CD4 et il a été montré qu‟elles sont
fréquemment infectées par le VIH in vivo (DUVALL et al., 2007) ; et de plus il semble que la
réplication du VIH dans ces cellules soit particulièrement efficace (PERESSIN et al., 2011).
I.3.2 – Cellules de la lignée monocytaire
Chez l‟homme, les cellules de la lignée monocytaire expriment la molécule CD4, et sont
présentes dans le sang circulant sous la forme de monocytes, et dans tous les tissus sous forme de
macrophages (REDEL et al., 2010). Elles sont chargées de la capture et de la dégradation de
l‟antigène, puis de sa présentation aux lymphocytes T (REUTER et al., 2010).
Dans le cerveau, les cellules microgliales d‟origine monocytaire représentent la principale
population cellulaire infectée par le VIH (POLUEKTOVA et al., 2004).
I.3.3 – Lymphocytes T
Parmi les lymphocytes T du sang périphérique, il existe deux populations : l‟une
exprimant la molécule CD4 et l‟autre la molécule CD8 (MORIS et al., 2006). La plupart des
cellules CD8+ sont des lymphocytes cytotoxiques, tandis que la plupart des lymphocytes CD4+
sécrètent des lymphokines. La réplication virale implique majoritairement les CD4+
(JOSEFSSON et al., 2011).
I.3.4 – Organes lymphoïdes : cibles précoces du VIH
Dès les stades précoces de l‟infection, les ganglions apparaissent contenir 5 à 10 fois plus
de virus associés aux cellules ganglionnaires que les cellules mononuclées circulantes. Les
ganglions ne sont pas les seuls organes lymphoïdes atteints par le VIH ; d‟autres tissus tels que,
la rate et le thymus sont également touchés (ZHANG et al., 2011).
I.4 – Mécanisme d’infection par le VIH
I.4.1 – Différents stades de l’infection
Un contact infectieux avec le VIH se produit généralement au niveau des muqueuses
gastro-intestinales ou génitales. Quoique les corécepteurs CXCR4 et CCR5 soient utilisés par le
VIH pour infecter une cellule, les virus utilisent presque exclusivement le récepteur CCR5 lors
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 24
de l‟infection primaire (LEONARD et ROY, 2006). Au fil de la progression de la maladie,
l‟évolution d‟espèces virales utilisant le récepteur CXCR4 s‟observe chez environ la moitié des
individus (WILKIN et al., 2007). Or, la muqueuse gastro-intestinale est le plus grand organe
lymphoïde du corps humain et environ 70% de la population de lymphocytes s‟y trouve
(VOSSENKAMPER et al., 2011).
Ces cellules expriment fortement les récepteurs CD4 et CCR5 ainsi que les marqueurs
d‟activation HLA-DR et CD69 et sont donc très susceptibles à l‟infection par le VIH
(BIANCOTTO et al., 2008; DAI et al., 2009).
Ce sont les cellules de la muqueuse gastro-intestinale qui sont généralement les toutes
premières cellules qui vont rencontrer les virus transmis. Il va s‟ensuivre une infection massive
et une réplication virale importante et, plus de 50% des cellules exprimant CD4 et CCR5 seront
infectées et détruites dans les deux à trois premières semaines suivant l‟infection.
D‟autres populations cellulaires sont présentes dans les muqueuses et sont susceptibles à
l‟infection. C‟est le cas des cellules de Langerhans, qui sont des cellules dendritiques cutanées.
Ces cellules sont très nombreuses dans les muqueuses cervicales et vaginales et expriment un
fort niveau de récepteurs CD4 et CCR5 (HLADIK et McELRATH, 2008).
Toutefois, l‟infection primaire passe souvent inaperçue. Les symptômes sont souvent
discrets tels que : fièvre, adénopathies, maux de gorge, éruptions cutanées, douleurs musculaires,
diarrhée et maux de tête et se résorbent généralement en quelques semaines. Souvent ces
symptômes vont être associés à tort à une mononucléose ou à une grippe.
Selon la classification de Fiebig, la primo-infection peut-être divisée en six stades
(FANALES-BELASIO et al., 2010): D‟abord le stade I se caractérise par l‟apparition d‟une
charge virale supérieure à 100 copies d‟ARN par ml de plasma et se produit généralement dans
les 10 à 17 jours suivant la transmission. Durant cette période, le virus va se répliquer
massivement et le sujet est alors fortement infectieux. En quelques jours, la détection de
l‟antigène p24 va également être positive (stade II) et la charge virale est nettement supérieure
(parfois jusqu‟à 5-6 log d‟ARN viral). Puis les premières réponses immunitaires de type IgM
vont se produire et pourront être détectées à l‟aide des tests de nouvelle génération dont la
sensibilité est accrue : on parle alors de séroconversion (stade III).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 25
Environ 30 jours après l‟infection, le test western blot, qui met en évidence les protéines
virales, est indéterminé (stade IV). La charge virale est relativement stable durant les stades II à
IV, puis, approximativement 3 mois après l‟infection, on observe une diminution de la charge
virale ainsi qu‟un résultat du test western blot positif (stade V). Le dernier stade peut être
subdivisé en infection récente puis, ultérieurement, en infection chronique (figure 3).
Figure 3 : Stade de l‟infection par le VIH (KEELE et al., 2008).
Cette figure représente les différents stades de Fiebig (FIEBIG et al., 2003) en corrélation avec
les résultats de tests de laboratoire lors du suivi de l‟infection par le VIH.
I.4.2 - Cycle de réplication virale
Tout comme les autres virus, le VIH ne peut se répliquer qu‟en pénétrant dans une cellule
et en utilisant sa machinerie cellulaire. Le cycle de réplication du VIH se divise en deux phases :
une précoce et une tardive (DIDIERLAURENT et al., 2008).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 26
Figure 4 : Représentation schématique du cycle de réplication du VIH(HAN et al., 2007).
Le cycle de vie complexe du VIH-1 offre de multiples moyens d'intervention des ARV. La
thérapie actuelle dirigée contre la transcription inverse et l'assemblage viral induirait à la fois une
tendance à la résistance et une insuffisante de l'éradication du virus. Un troisième axe d‟attaque à
l‟entrée de ce dernier est nécessaire et pourrait provenir des agents ciblant l‟enveloppe virale-
CD4 ou l‟interaction des corécepteurs (CCR5 et CXCR4), R5 et X4 du VIH-1, en utilisant CCR5
et CXCR4 du VIH-1, respectivement (MICHAEL et MOORE, 1999).
I.4.2.1 – Phase précoce
Figure 5 : Schéma des étapes de fixation et de fusion du virus et de la cellule hôte (CLAPHAM
et WEISS, 1997).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 27
Lors de la phase précoce, le virus se fixe sur la cellule cible par reconnaissance entre la protéine
virale gp120 et la protéine CD4 du lymphocyte T ou d‟autres cellules phagocytaires
mononuclées, ainsi qu‟un corécepteur. Le récepteur CD4 est une glycoprotéine monomérique de
58 kDa. Le corécepteur est un membre de la famille des chimiokines à 7 passages
transmembranaires couplés aux protéines G (VENZKE et al., 2006). L‟interaction du cofacteur
au complexe gp120/CD4 induit un changement conformationnel qui permet le démasquage de
gp41 et la fusion des membranes (FENOUILLET et al., 2007).
Après fusion de l'enveloppe virale avec la membrane plasmique de la cellule cible, la
nucléocapside (contenant le génome viral et les enzymes) peut pénétrer dans la cellule cible. Il y
a alors élimination des protéines de la nucléocapside, ce qui libère le génome viral et les
enzymes. La transcriptase inverse virale catalyse la transcription inverse de l'ARN, formant des
hybrides ADN-ARN.
La matrice d'ARN étant ensuite dégradée par une activité RNase de la transcriptase
inverse, il y a synthèse d'un second brin d'ADN. Cette étape est fortement régulée, et est sous le
contrôle des protéines Vif et NC (nucléocapside). Vif a pour rôle de contrôler l‟accrochage de
l‟amorce spécifique, un t-RNALys, qui permettra par la suite de reconnaître le progénome viral
et de l‟adresser au noyau de la cellule.
L‟ADN nouvellement synthétisé (ou pro-génome) migre vers le noyau, grâce à sa liaison
au complexe supramoléculaire protéique : le PIC ou complexe de pré-intégration qui contient
l‟intégrase, la protéine de matrice, la transcriptase inverse et le Vpr qui joue un rôle majeur dans
l‟import nucléaire (FRANCIS et al., 2011). Le pro-génome viral est ensuite intégré dans le
génome de la cellule hôte, grâce à l‟intégrase.
I.4.2.2 – Phase tardive
Cette phase correspond aux étapes permettant d‟obtenir des virions complets, qui seront
capables de bourgeonner et d‟arriver à maturation après leur libération dans le milieu
extracellulaire. Ce sont les enzymes cellulaires qui réalisent la transcription de l‟ADN proviral,
sous l‟influence de facteurs d‟activation environnementaux (cytokines, antigènes) et viraux
propres au VIH.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 28
Les fonctions cellulaires sont détournées au profit du virus. Des ARNs courts et épissés,
codant pour les protéines Tat, Rev et Nef (dites précoces), sont produits.
- Nef est une protéine accessoire.
- Tat est un activateur transcriptionnel qui se fixe sur l‟ARN en cours de synthèse au
niveau de la région TAR (Trans-Activating Response Element), et permet ainsi de
recruter différentes protéines cellulaires favorisant l‟élongation de la transcription.
- Rev permet l‟export des ARNm non épissés via sa fixation sur le RRE (Rev Responsive
Element) des transcrits primaires, et permet le recrutement de l‟exportine-1 (HOFMANN
et al., 2001) et du facteur Ran-GTP (ASKJAER et al., 1998).
Des ARNs non épissés ou simplement épissés, correspondant aux gènes gag, gag-pol
(protéines de structure), env (enveloppe), vif et vpr, sont ensuite produits pour donner des
protéines dites tardives. Une fois traduits, les différents composants viraux sont adressés à la
membrane cellulaire, s‟assemblent pour former un virion qui bourgeonne et finissent leur
maturation dans le milieu extracellulaire grâce à la protéase (DOOLITTLE et GOMEZ, 2011).
Dans les cellules quiescentes, l‟ADN proviral n‟est pas intégré dans le génome de la cellule hôte
(REDEL et al., 2010).
I.4.2.3 – Particularités sur l’évolution de l’infection vers le SIDA
Il n‟y a pas de progression vers le SIDA pour une certaine catégorie de personnes
infectées par le VIH-1. Ce sont des “non progresseurs sur le long terme” (Long Term Non-
Progressors), leur taux de LT CD4+ reste stable pendant de nombreuses années et leur charge
virale cellulaire et plasmatique demeure faible. Ces patients présentent une faible hyperplasie
lymphocytaire et ont de hauts niveaux de LT CD8+ cytotoxiques mémoires anti-VIH-1. Enfin,
l‟apoptose spontanée des LT est réduite chez ces patients.
Par ailleurs, un autre groupe est particulièrement étudié : les exposés non infectés. Il
s‟agit de personnes séronégatives qui sont hautement exposées au VIH-1 et qui demeurent
indemnes de l‟infection. Certaines de ces personnes ont des LT cytotoxiques (LTC) spécifiques
du VIH-1, confirmant que ces personnes ont bien été exposées au virus, et la présence de ces
LTC pourrait expliquer leur statut séronégatif. Elles possèdent également de nombreuses IgA
anti-VIH-1 (SHACKLETT, 2006).
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Ces données confortent le rôle protecteur important des LTC. Parmi ces personnes
exposées et non infectées, certaines portent une mutation défective (délétion de 32 paires de
bases) du gène codant pour le corécepteur CCR5. Cette mutation à l‟état homozygote confère
une résistance à l‟infection, au moins par voie sexuelle.
I.5 – Réponse immunitaire de l’hôte face à l’infection à VIH
Le système immunitaire détecte l‟infection par le VIH et réagir de plusieurs façons soit :
- par le système immunitaire inné constitué des phagocytes et des « natural killers (NK) »,
- par le système immunitaire adaptatif composé des lymphocytes T auxiliaires et des
lymphocytes T cytotoxiques.
L‟infection par le VIH-1 génère une réponse immunitaire qui contient le virus mais qui ne
l‟élimine jamais. Deux types de réponses sont mis en place pour le contrôle de l‟infection : la
réponse à médiation cellulaire et la réponse à médiation humorale.
I.5.1 – Réponse à médiation cellulaire
Réponse CD8
Les lymphocytes T cytotoxique (LTC) sont des effecteurs essentiels de la réponse
immunitaire antivirale. Des LTC spécifiques du VIH-1 ont été trouvés en grand nombre et dans
une multitude de compartiments anatomiques (sang, rate, ganglions lymphatiques, muqueuse
vaginale et gastro-intestinale, peau, espaces broncho-alvéolaires) chez des patients infectés par le
VIH-1. Ces LTC sont dirigés contre des épitopes de différentes protéines du VIH (Gag, Pol, Tat,
Nef, Vif ou Env).
Après l‟infection par le VIH-1 des populations oligo-clonales de LT CD8+ apparaissent
rapidement dans le sang périphérique des individus infectés et lysent les cellules infectées par le
VIH-1 (SIRCAR et al., 2010) avec comme corollaire le déclin de la charge virale en ARN
plasmatique durant la période de primo-infection.
Les LT CD8+ sont également importants lors de la phase asymptomatique (JIAO et al.,
2011). Ainsi, bien que la charge virale soit faible, les réponses LTC se maintiennent in vivo
durant cette phase. Lors d‟un rebond de la virémie ou lors d‟une interruption de la trithérapie
chez des patients infectés, de nouvelles cellules ou des cellules préexistantes T CD8+ spécifiques
du VIH-1 peuvent être activées et s‟épandre. Toutefois, il apparaît que cette réponse n‟est pas
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efficace tant sur le plan quantitatif que qualitatif, car elle ne permet pas l‟éradication du virus et
n‟empêche pas l‟évolution vers le stade SIDA.
Réponse CD4
Les LT CD4+ spécifiques du virus ont aussi un rôle important dans le contrôle de la
réplication du VIH-1 (ZHENG et al., 2009). En effet, l‟amplitude de la réponse lymphocytaire T
CD4+ et le contrôle de la virémie sont en corrélation chez des individus infectés et non
progresseurs.
Toutefois, l‟infection par le VIH-1 conduit à une déplétion sélective de la population
lymphocytaire T CD4+. Or, les LT CD4+ sont un élément essentiel du système immunitaire car
ils permettent le développement et le maintien de la réponse LTC et humoral. Leur déplétion
influe par conséquent sur la capacité d‟élimination du virus.
I.5.2 – Réponse à médiation humorale
La mise en place d‟une réponse à médiation cellulaire est suivie par une forte réponse
humorale (VAN MONTFORT et al., 2011). La séroconversion apparaît 3 à 6 semaines après
l‟infection, mais certaines séroconversions sont plus tardives (au-delà de six mois). Elle suit le
contrôle de la virémie plasmatique. Les anticorps neutralisants sont principalement dirigés contre
l‟enveloppe du VIH-1 et agissent soit en bloquant l‟infection avant l‟attachement du virion à la
cellule, soit en inhibant la fusion membranaire, voire l‟internalisation du virion.
Il existe également des anticorps dits facilitant׃ les virions recouverts de ces anticorps
pénètrent dans les cellules par le biais des récepteurs aux immunoglobulines exprimés à la
surface de ces cellules. Ainsi, bien que la réponse humorale ait un rôle central dans l‟élimination
de nombreuses infections virales, son rôle dans l‟infection par le VIH-1 est plus controversé.
I.6 – Mécanisme de transmission du VIH
Depuis le début de cette pandémie, trois principaux modes de transmission ont été
observés : la voie sexuelle, la voie sanguine et la transmission verticale.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 31
I.6.1 – Transmission Sexuelle
La majorité de la transmission par le VIH soit 75 à 85% s‟effectue par les rapports
sexuels non protégés (BUNNELL et al., 2006).
C‟est le mode de contamination le plus fréquent en Afrique. Les facteurs augmentant le risque de
transmission sexuelle sont les stades de primo-infection et SIDA qui sont les stades où la virémie
est élevée. Les autres facteurs de risque : un taux de CD4 <200/mm3, une antigénemie p24
positive, charge virale élevée non contrôlée ou multi résistance aux anti-rétroviraux. Le risque
est aussi augmenté en cas d'infections génitales, de rapports sexuels pendant les règles, de
violences sexuelles.
I.6.2 – Transmission Sanguine
Elle est observée chez les usagers de drogues par voie intraveineuse, lors de transfusion
sanguine, de transfusion d'extrait de sang à risque. Les contaminations professionnelles se
produisent au cours de piqûres ou de blessures accidentelles avec du matériel contaminé ou
projection de sang sur les muqueuses. Le risque est diminué par le dépistage systématique chez
les donneurs.
I.6.3 – Mécanismes de la transmission mère-enfant du VIH-1
I.6.3.1 – Durant la grossesse
I.6.3.1.1- Rôle du trophoblaste
Le trophoblaste correspond à la couche cellulaire continue formée de fibroblastes qui
limite l'œuf, devenu blastocyste au 6e jour après la fécondation. Tout au long de la grossesse, des
microlésions entaillent la barrière placentaire, qui est plus mince et vulnérable en fin de
grossesse. Il est donc possible que des cellules infectées, provenant de la circulation maternelle
ou de la décidue, ou bien les particules virales libres, puissent directement passer à travers les
brèches pour atteindre la circulation sanguine fœtale (VIDRICAIRE et TREMBLAY, 2004).
L‟entrée du virus dans la cellule cible représente une étape cruciale du cycle de vie viral.
L‟expression de CD4 a été détectée dans les trophoblastes ce qui accrédite l‟idée que l‟entrée du
VIH dans les trophoblastes pourrait se faire via l‟interaction CD4/gp120, une glycoprotéine de
membrane. L‟expression du CD4 et des corécepteurs CCR5 et CXCR4 dans les trophoblastes
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 32
demeurent une controverse. En fait il a été montré récemment que le VIH entrait massivement
dans ces cellules, non par fusion avec la membrane, comme c‟est le cas pour les lymphocytes T,
mais par endocytose (VIDRICAIRE et TREMBLAY, 2004; CAVARELLI et SCARLATTI,
2011) (Figure 6).
I.6.3.1.2 – Rôle de l’environnement placentaire
Il semblerait aussi que les cytokines ou les facteurs de croissance, présents dans
l‟environnement placentaire et dont l‟expression est modulée dans le temps, pourraient favoriser
une infection productive par le VIH ou, au contraire, conférer une certaine protection contre
l‟infection. Dans cette optique, il est intéressant de noter que les cytokines IL-1 et TNF-alpha,
activatrices de l‟expression virale, sont exprimées par le placenta en début de grossesse puis au
moment de l‟accouchement, deux stades correspondant précisément aux périodes où les risques
de transmission mère-enfant sont les plus élevés (VIDRICAIRE et TREMBLAY, 2004).
Figure 6 : Mécanisme de transmission du VIH in utero (VIDRICAIRE et TREMBLAY, 2004).
A et B : des virions libres ou des cellules lymphocytaires infectées (voire des macrophages), présents dans la
circulation maternelle, viennent au contact des cellules trophoblastiques. C : le VIH entre alors dans les cellules
trophoblastiques, par le biais de mécanismes encore hypothétiques : fusion des virions avec la membrane ou
internalisation par endocytose. D : il s‟ensuit alors une réplication virale à l‟intérieur des cellules trophoblastiques et
un bourgeonnement de nouveaux virions au niveau du pôle basolatéral (circulation fœtale). E : le VIH pourrait
également pénétrer dans les trophoblastes par endocytose, et être directement transporté du pole apical vers le pole
basolatéral sans qu‟il y ait infection des cellules trophoblastiques : c‟est le processus de transcytose. F : dans les
deux cas (infection des cellules trophoblastiques ou transcytose), le VIH atteint les cellules sous-jacentes,
notamment les lymphocytes et les macrophages fœtaux pour les infecter (VIDRICAIRE et TREMBLAY, 2004).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 33
I.6.3.2 – Durant l’accouchement
Au moment du passage dans le canal utérin, le nouveau-né serait exposé aux secrétions
vaginales et au sang maternel contaminé par le VIH : on observe ainsi une différence d‟infection
verticale entre le premier (taux de transmission plus élevé) et le second des jumeaux nés par voie
vaginale (ROUZIOUX et al., 2002).
Le virus est présent dans les secrétions génitales maternelles sous forme de lymphocytes
CD4 infectés et sous forme de particules virales libres. Le fœtus est donc exposé par voie
transplacentaire (échanges sanguins Foteo-maternels) ou digestive (du fait de contacts au
moment du passage de l‟enfant dans la filière génitale). Le virus peut être détecté dans les
aspirations gastriques des nouveau-nés, qu‟il s‟agisse d‟une exposition par voie ascendante ou
lors de l‟accouchement par voie basse.
Les principaux facteurs obstétricaux de risque de transmission virale sont les infections
génitales, l‟accouchement prématuré et surtout la rupture prématurée des membranes de plus de
4 heures. Ces facteurs sont liés à la problématique de la chorioamniotite et des infections
bactériennes latentes. Elles doivent faire l‟objet d‟un effort de prévention (VIDRICAIRE et
TREMBLAY, 2004).
Par ailleurs la probabilité de transmission est réduite de moitié, si l‟accouchement est
réalisé par une césarienne programmée pratiquée avant le début du travail. (VIDRICAIRE et
TREMBLAY, 2004).
I.6.3.3 – Pendant l’allaitement
Le risque de transmission est clairement lié à la durée de l‟allaitement, à la charge virale
dans le lait, et à l‟existence d‟une inflammation du tissu mammaire (mastite) ou de crevasse des
mamelons (ROUZIOUX et al., 2002).
Bien que le VIH ait été détecté dans la phase liquide à la fois du lait maternel et dans les
cellules du lait maternel (WILLUMSEN et al., 2003), l'origine du virus dans le lait maternel
reste controversée. Pendant l'allaitement, les nourrissons sont quotidiennement exposés à des
quantités élevées de cellules infectées et aux virus du VIH-1 libre via leur muqueuse buccale et
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 34
gastro-intestinal. Cette exposition est estimée à plus de 700 000 particules virales par jour
(LEWIS et al., 1998).
Le virus libre dérive, au moins en partie, à partir du sang (soit à partir de plasma ou de
lymphocytes infectés / monocytes) et est ensuite libéré dans le lait maternel. Alternativement, les
virus peuvent être produits par une réplication locale dans les macrophages et dans les cellules
épithéliales mammaires (TONIOLO et al., 1995).
Figure 7. Origine du VIH dans le lait maternel. (VAN, 2007)
I.6.4 – Moment de la transmission
Il est proposé une définition distinguant les contaminations in utero où la PCR est
positive dès les 2 premiers jours de vie, des contaminations intrapartum où la PCR ne se positive
que secondairement, à partir de 7 jours de vie (VIDRICAIRE et TREMBLAY, 2004).
La contamination in utero survient le plus souvent dans les dernières semaines précédant
l‟accouchement dans environ un tiers des cas d‟enfants infectés. Elle a lieu le jour de
l‟accouchement dans deux tiers des cas. Toutefois, elle peut intervenir durant les premières
semaines de grossesse. Elle est maximale (70%) à l‟accouchement (ROUZIOUX et al., 2002;
VIDRICAIRE et TREMBLAY, 2004).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 35
1.7 – Evolution des différentes populations cellulaires lors des phases de la maladie
Il y a une relation entre évolution de la maladie, populations cellulaires et charge virale.
Pendant la primo infection, les symptômes se limitent le plus souvent à ceux d‟une
maladie virale bénigne.
A la phase asymptomatique (deux semaines à quelques mois après la contamination), la
présence dans le sang de différents anticorps anti-VIH est décelée, le sujet est dit alors
“ séropositif pour le VIH”. Apparaissent en même temps dans le sang du sujet contaminé des
lymphocytes T cytotoxiques spécifiques dirigés contre les cellules infectées par le VIH. Pendant
cette période asymptomatique de plusieurs années, les défenses immunitaires restent actives mais
les virus continuent à se multiplier et le nombre de lymphocytes T4 à diminuer.
Enfin la phase SIDA ou phase symptomatique, où en absence de traitement, le nombre
des LT4 baisse. Le sida se caractérise alors par diverses maladies opportunistes.
I.8 – Traitements
I.8.1 – Principes et définition
Actuellement, l‟initiation aux antirétroviraux est fondée sur l‟évaluation du risque de
progression de la maladie (niveau et évolution de la charge virale), l‟intensité du déficit
immunitaire (taux et évolution du nombre de lymphocytes T CD4+) et l‟engagement du patient à
suivre son traitement.
En l‟absence de vaccin, la thérapie antirétrovirale constitue aujourd‟hui l‟unique moyen
de lutter contre le VIH. Si elle ne permet pas l‟éradication complète du virus présent dans
l‟organisme, elle diminue néanmoins la mortalité et la morbidité grâce à une prévention et/ou
une restauration du déficit immunitaire.
Ainsi, le commencement d‟un traitement est recommandé chez tous les patients
symptomatiques ou au stade SIDA, et/ou ayant un nombre de CD4+ inférieur à 200/mm3. Chez
les patients asymptomatiques, le traitement est généralement débuté lorsque le taux de CD4+ est
en dessous de 350/mm3.
La première molécule qui fut introduite sur le marché en 1987 fut l‟AZT (POMMIER et
al., 2005). Toutefois, avec son usage en monothérapie, une résistance a rapidement été observée
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 36
(VAN MARLE et al., 2010). Depuis la monothérapie a été abandonnée et la thérapie consiste
maintenant en des associations de plusieurs molécules ce qui, a permis de diminuer
drastiquement la morbidité et la mortalité liées au VIH.
Toutefois, des mutations se produisant dans les gènes codant pour les protéines ciblées
par les médicaments, que ce soit la transcriptase inverse, la protéase, l‟intégrase ou l‟enveloppe
et sont responsables d‟échecs thérapeutiques (FLEXNER, 2007). Des profils de résistance ont été
décrits pour chacune de ces molécules et sont régulièrement mis à jour (JOHNSON et al., 2008).
Le traitement antiviral est maintenant disponible dans presque toutes les parties du monde
où prédomine l‟infection avec des sous-types non-B. Des mutations associées à de la résistance
ont été observées dans toutes ces régions mais les voies de résistance chez les sous-types non-B
sont moins connues. Le traitement vise donc, d‟une part à abaisser la charge virale globale, et
d‟autre part à stabiliser le nombre de lymphocytes T CD4+, favorisant ainsi un équilibre
immuno-virologique.
La stratégie des traitements antirétroviraux est d‟inhiber de façon ciblée les différentes
étapes du cycle de réplication du VIH afin de prévenir l‟infection de nouvelles cellules et la
production de virions. Des traitements complémentaires, dits adjuvants, peuvent s‟ajouter aux
premiers, incluant en particulier l‟immunothérapie.
I.8.2 – Moyens de traitement
Il existe actuellement 7 familles d‟antirétroviraux:
- Les inhibiteurs de la transcriptase inverse :
- Les inhibiteurs nucléosidiques (INTI) et nucléotidiques ;
- Les inhibiteurs non nucléosidiques (INNTI) de la transcriptase inverse ;
- Les inhibiteurs de protéase ;
- Les inhibiteurs de fusion ;
- Les inhibiteurs du corécepteur CCR5 ;
- Les inhibiteurs d‟entrée ;
- Les inhibiteurs de maturation;
- Les inhibiteurs d‟intégrase.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 37
Ces antirétroviraux inhibent la réplication virale à différentes étapes du cycle du VIH. Ils
sont virostatiques et ne permettent donc pas l‟éradication du virus (VIGET et
YAZDANPANAH, 2006).
Ces molécules doivent être utilisées en association pour obtenir un niveau suffisant
d‟efficacité et réduire le risque d‟émergence de mutants résistants (VIGET et YAZDANPANAH,
2006). Cette efficacité est cependant obtenue au prix d‟effets secondaires et de contraintes de
prise de médicaments rendant l‟observance du traitement difficile.
I.9 – Prise en charge de la grossesse chez la femme enceinte séropositive
La prise en charge est multidisciplinaire, elle nécessite les interventions de virologues,
d‟obstétriciens et de pédiatres. Les antirétroviraux utilisables doivent répondre à plusieurs
critères : absence de fœtotoxicité, de teratogénicité et de mutagénicité et avoir une bonne
tolérance à court et à long terme chez l‟enfant (VIGET et YAZDANPANAH, 2006).
Ceci impose une surveillance particulière de la grossesse chez la femme enceinte
séropositive. Ainsi, deux antirétroviraux (l‟efavirenz et la zalcitabine) sont interdits pendant la
grossesse pour leurs effets tératogènes. L‟association stavudine-didanosine est contre-indiquée à
cause du risque d‟acidose lactique chez la mère et doit être remplacée par une combinaison
d‟autres inhibiteurs nucléosidiques de la transcriptase inverse.
I.10 – Cinétique des anticorps anti-VIH
Le virus est décelable après la contamination, sous la forme d'acide ribonucléique (ARN)
à partir du 10-12ème
jour et sous la forme d'antigène p24 représentant juste une fraction du virus,
vers le 12-14ème
jour. Puis apparaissent les anticorps dirigés contre les différentes protéines
structurales et non structurales du VIH.
Les premiers anticorps sont détectables en moyenne vers le 21ème
jour mais le délai
d‟apparition des anticorps après le contact infectant peut varier de 3 semaines à 3 mois. Cette
cinétique peut varier en fonction de chaque patient et aussi de la souche infectante. L'apparition
des anticorps, encore appelée séroconversion, conditionne donc la positivité des tests de
dépistage.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 38
L'utilisation de ces tests de dépistage raccourcit donc la période de « silence »
sérologique ou « fenêtre » immunologique (période pendant laquelle aucun marqueur
sérologique n‟est détectable) lors de la primo-infection.
Une fois produits par la réponse immune, les anticorps anti-VIH persisteront toute la vie
du patient mais sans avoir de rôle immunisant contre la maladie (PLANTIER et SIMON, 2002).
Figure 8 : Evolution des marqueurs de la contamination par le VIH (RESEAU VIH, 2005)
II –Techniques de diagnostic des infections à VIH
Ces tests sont utilisés de façon automatisée en routine dans les laboratoires
d‟analyses médicales.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 39
II.1 – Diagnostic Indirect
II.1.1- Tests ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
Les antigènes viraux, constitués par des protéines virales purifiées du VIH sont fixés au
fond des puits d‟une plaque en matière plastique. Les sérums à tester, les contrôles positifs et
négatifs, sont déposés dans les puits.
Les anticorps anti-VIH éventuellement présents se fixent sur les antigènes viraux.
Après plusieurs lavages des puits pour éliminer tout ce qui n‟est pas fixé, est rajouté un
anticorps anti-immunoglobuline ou immunoconjugué. Celui-ci, reconnait et se fixe sur
l‟anticorps anti-VIH, préalablement marqué par une enzyme.
Les complexes antigènes/anticorps formés seront alors détectés par addition du substrat
de l‟enzyme (ou chromogène), qui donnera naissance à une réaction colorée.
La coloration est traduite en densité optique (DO) par lecture avec un spectrophotomètre.
II.1.2 – Tests de dépistage dits : « tests rapides »
De nombreux tests rapides de type qualitatif ont été mis en place pour la recherche
d‟anticorps anti-VIH-1 et 2. L‟Organisation Mondiale de la Santé recommande particulièrement
leur utilisation dans les pays en voie de développement.
Un test révélant un diagnostic positif pour le VIH devra systématiquement être vérifié par
l‟utilisation d‟un test différent du premier.
Ces tests permettent la détection d‟anticorps anti-VIH en moins de 30 min. Ils font appel
à une agglutination ou à une absorption du complexe anticorps-antigène sur une membrane puis
à une coloration visible à l‟œil nu. La sérologie VIH par la méthode ELISA a une très bonne
sensibilité ; en revanche elle présente un défaut de spécificité de l‟ordre de 0.5% et donc tout
résultat positif obtenu par ELISA doit être contrôlé par une autre méthode.
II.1.3 – Méthode de Western blot
C‟est une technique de transfert par capillarité des protéines. L‟immuno-empreinte qui
sert donc à confirmer les tests positifs en ELISA, utilise des antigènes du VIH purifiés
et séparés par électrophorèse. Elle permet ainsi de déterminer si les anticorps détectés par
ELISA sont spécifiques des antigènes du VIH ou s‟il s‟agit d‟une réaction croisée avec
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 40
d'autres composants, non viraux, du système ELISA. Les antigènes utilisés sont des protéines ou
des glycoprotéines du VIH de poids moléculaire variable.
Pour l‟interprétation, on considère le test (VIH-1) positif uniquement s‟il y a
présence d‟anticorps dirigés contre les protéines d‟enveloppe (gp160, gp120 et gp41),
associés à au moins un anticorps dirigé contre une protéine du virus : gag ou pol. Pour
le test VIH-2 on utilise comme antigènes les protéines et glycoprotéines de VIH-2.
II.2 – Diagnostic direct
II.2.1 – Antigène p24
Le principe de ce test est la recherche de l'antigène de la capside du virus. On utilise un
anticorps primaire qui le reconnaît, puis on utilise un anticorps secondaire, qui reconnaît
l'anticorps primaire. L'anticorps secondaire étant couplé à une enzyme qui va réagir avec son
substrat, cela produit une coloration mesurée par la densité optique. Comme plusieurs anticorps
secondaires se fixent en même temps sur l'anticorps primaire on a une amplification du signal.
II.2.2 – Techniques de biologie moléculaire
Elles permettent la mise en évidence du génome viral. La virologie moléculaire a pris une
place de choix dans l‟arsenal des méthodes de diagnostic direct de l‟infection à VIH.
II.2.2.1 – Amplification par PCR (Polymerase Chain Reaction) ou par RT-PCR
La réaction de polymérisation en chaine dite « PCR » est une méthode d‟amplification
génique in vitro particulièrement sensible, qui permet de mettre en évidence de très faibles
quantités d‟ADN proviral dans un prélèvement biologique. Les régions ciblées sont localisées
préférentiellement dans les gènes les plus stables à savoir gag, pol, env, voire dans les LTRs.
La séquence cible peut être soit une région intégrée (ADN proviral) soit de l‟ARN viral après
rétro transcription.
La technique de PCR-ADN spécifique du VIH est la technique de référence. Elle permet
la détection de l‟ADN pro-viral intégré au génome cellulaire, après amplification enzymatique à
partir de cellules sanguines.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 41
Il peut s‟avérer pertinent d‟extraire les ARNm pour générer ensuite des copies d‟ADNc.
C‟est la technique de RT-PCR (reverse transcriptase) classique de l‟ARN du VIH. Cette réaction
est catalysée par la transcriptase inverse des rétrovirus (reverse transcriptase) qui synthétise une
chaîne d‟ADN à partir d‟une matrice d‟ARN. À l‟issue de la transcription inverse, les ARNm
sont hydrolysés (traitement alcalin, RNase ou température). Les étapes suivantes sont réalisées
dans l‟enceinte du thermocycleur. Les ADNc monocaténaires sont alors répliqués par l‟ADN
polymérase au cours d‟un premier cycle de température. D‟autres cycles sont réitérés afin
d‟amplifier les ADNc bicaténaires en grande quantité.
II.2.2.2 – Diagnostic par PCR en temps réel : la méthode Taqman
La technique de charge virale par PCR-ARN quantitative permet la détection de l‟ARN
VIH plasmatique. La charge virale permet d'évaluer le nombre de copies d‟ARN viraux par
millitre de sérum, mais surtout d'avoir une véritable vue cinétique de la production des virus et,
par là même, d'en déduire la vitesse de destruction des lymphocytes T CD4.
Figure 9 : PCR en temps réel1.
1 http://www.ilm.pf/PCRtempsreel
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 42
En ce qui concerne la méthode Taqman, les sondes sont marquées à leur extrémité 5‟ par
un fluorochrome émetteur (reporter), par exemple FAM, et à leur extrémité 3‟ par un
fluorochrome suppresseur (quencher) fluorescent ou non, par exemple TAMRA, qui inhibe
l‟émission du reporter lorsqu‟ils sont à proximité. Au cours de la PCR, si la sonde est hybridée
sur sa cible, elle est hydrolysée par l‟ADN polymérase. Le reporter ainsi séparé du quencher
émet un signal proportionnel au nombre de sondes hydrolysées, mesurable au moment de
l‟élongation. La spécificité de la réaction est liée à la fois à celle des amorces et à celle de la
sonde réduisant significativement l‟émission de fluorescence non spécifique due à des
mésappariements ou des dimères d‟amorce.
III – Mesure des marqueurs viro-immunologiques
Pour ce qui est des marqueurs immunologique, on distingue donc les lymphocytes porteur de
marqueurs CD3 et CD4 (LT4) et les lymphocytes porteurs de marqueurs CD3 et CD8 (LT8).
L'expansion des lymphocytes CD8+ constitue une des caractéristiques majeures, avec la
déplétion en lymphocytes CD4, des anomalies immunologiques observées au cours de l'infection
à VIH.
Le nombre de lymphocytes T CD4 est le marqueur indirect le plus souvent utilisé en clinique
pour suivre d'une manière quantitative l'évolution de la maladie et le rétablissement de
l'immunité chez les patients vivant avec le VIH/SIDA. Les CD4+ sont utilisés pour mesurer la
capacité de l‟organisme à se défendre contre « l‟envahisseur » qui est le VIH. La numération des
sous-populations de lymphocytes T CD4, CD8 et CD3 permettent de suivre le rétablissement de
l'immunité et l'efficacité thérapeutique, comme la thérapie antirétrovirale hautement active
(HAART). Lorsque le ratio CD4/CD8 tend vers zéro, l‟infection du VIH évolue vers le stade
SIDA, alors que lorsque le ratio CD4/CD8 tend vers un, l‟infection reste latente.
On utilise la technique de cytofluorimétrie (Facs Count, Facs Caliburs, Apogée 40…), pour
leur mesure.
La quantification de la charge virale peut porter sur le virus libre plasmatique (antigénémie,
virémie plasmatique par culture, quantification moléculaire de l'ARN viral) ou sur le virus
intégré dans les cellules sanguines mononuclées (virémie cellulaire par culture, mesure de l'ADN
proviral). Elle est mesurée par une PCR quantitative.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 43
CHAPITRE II : MÉTHODOLOGIES
II.1 – Cadre de l’étude
II.1.1 – Centre Médical Saint Camille
Le Centre Médical Saint Camille est un centre situé à Ouagadougou dans la commune de
Bogodogo au secteur 14, sur l‟avenue Babangida. Ce centre a été crée en 1974 par l‟ordre des
religieux camilliens. C‟est un centre privé qui comporte :
une maternité où 7300 naissances en moyenne ont lieu chaque année ;
un centre de pathologie néonatale qui accueille environ 450 enfants par an ;
un dispensaire comportant une section adulte et une section pédiatrie qui reçoit environ
300 malades par jour ;
un dispensaire mobile qui sillonne deux villages (Boulbi et Kossiam) ;
un centre de Santé Maternel et Infantile (SMI) qui reçoit plus de 4000 femmes enceintes,
administre plus de 3000 doses de vaccins et effectue des milliers de pesées pendant
l‟année ;
un centre de suivi des personnes vivant avec le VIH (PvVIH) ;
un Centre de Récupération et d‟Education Nutritionnelle (CREN) qui fait partie
intégrante de la SMI ;
un laboratoire d‟analyse qui comporte des services de bactériologie, de parasitologie, de
biochimie, d‟hématologie, d‟immunologie et de biologie moléculaire et qui reçoit près de
150 à 200 prélèvements par jour ;
une serre pour la culture de la Spiruline.
Le CREN est un centre qui ne comporte pas de structure hospitalière mais se référant au
service de pédiatrie pour l‟hébergement des mères et enfants admis au CREN s‟ils habitent loin
du centre. Le CREN est une partie du service de soins maternels et infantiles (SMI).
Les activités du CREN sont :
la pesée quotidienne des enfants malnutris ;
l‟inscription de nouveaux cas avec prise de la taille, du poids, du tour brachial et crânien;
le remplissage des fiches du CREN et du registre ;
la pose de la sonde naso-gastrique pour les enfants gravement malnutris qui sont
incapables de s‟alimenter ;
une éducation nutritionnelle des mères sur la malnutrition et l‟hygiène ;
une démonstration culinaire des différents types de bouillies.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 44
Le CREN se réfère au service de pédiatrie du centre situé à quelque dizaine de mètres
pour la consultation et les soins des enfants malnutris. Il accueille en moyenne 700 enfants par an
et obtient un taux de guérison de 36% contre 57% d‟abandon et 6% de décès.
II.1.2 – Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni (CERBA/LABIOGENE)
Le CERBA est un centre de recherche comprenant:
o un laboratoire de biologie et de génétique moléculaires (LABIOGENE) chargé de
l‟extraction de matériel nucléaire, de la PCR simple, de la PCR en temps réel, du
séquençage et du génotypage ;
o un laboratoire de biologie cellulaire chargé des cultures cellulaires et des bio-essais y
afférant notamment les tests de cytotoxicité, les tests anti-protozoaires et les tests
d‟immunomodulation;
o un laboratoire de microbiologie chargé des tests antimicrobiens;
o un laboratoire d‟enzymologie chargé de l‟extraction et de la purification des enzymes et
d‟activité enzymatique;
o un laboratoire de phytochimie chargé de l‟extraction et de la purification des principes
actifs des plantes;
o un laboratoire de biochimie clinique pour les analyses de routine;
o un laboratoire d‟hématologie pour les examens de routine;
o un laboratoire de parasitologie et de bactériologie;
o un laboratoire d‟immunologie et d‟endocrinologie.
Les principaux axes de recherche du CERBA se situent au niveau de la recherche
fondamentale et les sciences du génome, de la mise en valeur de la médecine traditionnelle et
l‟identification des composants actifs des produits naturels et au niveau de la recherche clinique,
notamment dans les essais pharmaco-cliniques. Les PCR et la lecture des résultats ont été
réalisées dans le laboratoire de biologie moléculaire.
Cette étude s‟inscrit dans un cadre global de recherche sur le VIH/SIDA dont les grands
axes sont la diversité génétique du virus, les interactions virus – cellules cibles de l‟hôte, la
génétique de la réponse immunitaire, la génétique de résistance aux ARV et la recherche
vaccinale. Le diagnostic moléculaire est l‟étape initiale d‟un ensemble d‟études qui à terme
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 45
permettront l‟exploration de l‟ARN ou de l‟ADN impliqués significativement dans l‟infection à
VIH/SIDA.
II.2 – Protocole PTME au Centre Médical Saint Camille
Comme dans tous les autres pays africains, le Burkina Faso avait mis en place une
stratégie de lutte contre le VIH/SIDA et les IST de 2001 à 2005. Cette stratégie incluait un
programme national de Prévention de la Transmission Mère-Enfant du VIH (PTME) par
chimioprophylaxie à la Névirapine et allaitement artificiel ou limité aux trois (03) premiers mois
(OMS, 2004). A la période allant de 2006-2010 un autre protocole avait vu le jour, visant d‟une
part à combler les insuffisances constatées lors de la mise en œuvre du premier programme et
d‟autre part à introduire des protocoles ARV plus efficaces. L‟option prise dans ce protocole
était une triprophylaxie à partir de la 28ème
semaine de grossesse pour les femmes non éligibles
au traitement ARV et la trithérapie pour celles qui sont éligible (OMS, 2006).
Toutes les gestantes reçues en consultation prénatale bénéficient du Conseil Dépistage
Volontaire ; celles qui choisissent de se faire dépister sont reçues individuellement par la sage-
femme pour le conseil pré-test. Le dépistage est alors effectué, la sage-femme annonce le résultat
au bout d‟une vingtaine de minutes, au cours d‟un conseil post test. Les gestantes dépistées
négatives sont invitées à reprendre le test trois mois plus tard ; si le résultat est indéterminé, on
fait appel à une méthode spécifique.
Quant aux gestantes dépistées positives, elles bénéficient du bilan biologique standard et
un dossier est ouvert à la « file active » pour le suivi médical. En fonction du terme de la
grossesse, de l‟état clinique et biologique, les gestantes infectées reçoivent le traitement adéquat
pouvant être :
• la prévention des infections opportunistes par le cotrimoxazole (800/160 mg en
prise unique par jour) à partir du deuxième trimestre de grossesse ;
• un rendez-vous à partir de vingt huit semaines d‟aménorrhée pour la remise des
ARV selon le protocole PTME (OMS, 2006);
• la mise sous trithérapie.
Ces patientes poursuivent les consultations prénatales normalement ; elles sont revues
aux dates fixées ou en cas de besoin ; après un choix éclairé du mode d‟allaitement, elles peuvent
accoucher dans le centre de leur choix bien qu‟il soit souhaitable que l‟accouchement se déroule
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 46
au Centre Médical Saint Camille ou au moins dans un centre qui dispose de NVP et d‟AZT pour
nouveau-né. Lors du dernier rendez-vous avant l‟accouchement, la future mère reçoit les ARV
nécessaires pour la PTME du VIH:
• une quantité suffisante d‟AZT comprimés 300 mg, 2x jour à partir de la 28ème
semaine jusqu‟à l‟accouchement ;
• une dose unique de 200 mg de NVP comprimés, 2x jour ;
• les comprimés d‟AZT/3TC 300 mg/150 mg (DUOVIR) en quantité suffisante : la
première prise est faite au moment du travail d‟accouchement et pendant 7 jours
post partum.
Après l‟accouchement, le nouveau-né est conduit au service de néonatologie du CMSC
(si l‟accouchement a lieu à la maternité du Centre Médical Saint Camille ou dans un centre ne
disposant pas de NVP et d‟AZT) où il reçoit la dose de NVP (2mg/Kg PU) et le sirop d‟AZT
(4mg/jour x2). Il est gardé pendant trois jours dans l‟unité de néonatologie (si l‟accouchement a
eu lieu au CMSC) puis il est revu deux fois le premier mois et une fois par mois jusqu‟au
douzième mois de vie.
Au cours du suivi, une PCR est réalisée entre quatre et six mois et la sérologie au
douzième mois. En cas d‟échec de la PTME (PCR ou sérologie positive), l‟enfant est suivi par la
section pédiatrique de la prise en charge des PvVIH au CMSC.
II.3 – Déroulement de l'étude
II.3.1 – Période et type d’étude
L‟étude qui s‟est déroulée sur une période de 11 mois, allant du 1er septembre 2010 au 29
juillet 2011 portait sur le suivi des grossesses et la prise en charge des enfants nés de mères
séropositives au VIH. Il s‟agit d‟une étude prospective à visée descriptive.
II.3.2 – Collecte des données et des échantillons de sang
Les échantillons de sang total de 1300 femmes enceintes de moins de 28 semaines d‟aménorrhée
ont été récoltés dans cette étude pour le dépistage du VIH. Les échantillons de sang séché sur
papier buvard de 378 enfants nés de mères séropositives ont été retenus pour le test de diagnostic
PCR.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 47
Deux étapes de collectes ont été importantes :
1. La sérologie VIH des mères a été effectuée par des tests rapides (Determine et
SDBioline). Le sang a été prélevé sur des tubes imprégnés d‟EDTA. Après détermination du
statut sérologique, le sang est ensuite centrifugé à 4000g pendant 5 mn le plasma a été collecté
dans des cryotubes de 1,5 ml et conservés à -20°C. Les échantillons ayant donnés un résultat
indéterminé (douteux) aux tests rapides (Determine et SDBioline) ont été conservés pour une
confirmation par PCR.
2. À partir de micro-prélèvements de sang veineux (piqûre au bout du doigt ou au talon
des nouveaux nés), des gouttes de sang ont été déposées sur du papier puis séchées. Ces
prélèvements se sont effectués du 1er septembre 2010 au 29 juillet 2011 dans le laboratoire du
Centre Médical Saint Camille. Après séchage, ces papiers imprégnés de sang ont été conservés à
température ambiante.
II.3.3 – Mode de recrutement
II.3.3.1 – Critères d’inclusion
o Femmes enceintes, séropositives au VIH-1, dépistées à l‟issue du Conseil de Dépistage
Volontaire Anonyme (CDVA) ou antérieurement suivies au CMSC;
o Femmes enceintes ayant un résultat VIH indéterminé par ELISA.
II.3.3.2 – Critères de non inclusion
o Femmes séropositives VIH-2 ou co-infectées VIH-1 et VIH2.
o Mères refusant que l‟on fasse le test à leur enfant.
o Femmes enceintes non consentantes.
II.3.3.3 – Recueil des données
Les informations ont été recueillies à l‟aide de fiches standardisées. La source
d‟information a été constituée à partir :
o des dossiers obstétricaux des mères ;
o des registres d‟accouchement du centre ;
o des registres d‟hospitalisation des services de pédiatrie;
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 48
o des registres de consultations externes de pédiatrie des enfants séropositifs.
II.4 – Considération éthique
La réalisation de cette étude a été soumise au comité d‟éthique du Centre Médical Saint
Camille et du CERBA. La confidentialité était primordiale et de rigueur. Le sang des patients
était prélevé avec leur consentement éclairé, pour les adultes et le consentement des parents pour
les bébés. La participation à l‟étude était volontaire et individuelle.
Les parents ont été informés, dès la naissance de l‟enfant, de la consultation possible du
dossier de l‟enfant et de la mère pour réaliser des études à but scientifique. Les enfants nés de
mères séropositives sont suivis au Centre Médical Saint Camille pour une consultation
spécialisée jusqu‟à l‟âge de 18 mois (âge au-delà duquel seuls ceux dont la contamination est
confirmée sont spécifiquement surveillés). Les données recueillies étaient sous le couvert de
l‟anonymat.
II.5 – Matériel
II.5.1 – Appareils de diagnostic utilisés
Figure 10: Photos de tests rapides VIH (à gauche DetermineTM
VIH-1/2 Inverness et à droite SD
Bioline)
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 49
Figure 11: Thermocycleur 9700 (Applied Biosystems) (Appareil- laboratoire CERBA)
Figure 12 : système d‟électrophorèse (Appareil- laboratoire CERBA)
Figure 13 : Appareil 7500 Fast Real Time PCR (Appareil- laboratoire CERBA)
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 50
Figure 14 : Système photo gel doc. (Appareil- laboratoire CERBA)
Figure 15 : Centrifugeuse réfrigérée (Appareil- laboratoire CERBA)
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 51
II.5.2 – ARV utilisés pour le PTME
BURKINA FASO - PROTOCOLES ARV DE PREVENTION DE LA TRANSMISSION MERE ENFANT DU VIH
Tableau I : Protocoles ARV de prévention de la transmission mère-enfant du VIH
Femme sans
indications pour
traitement ARV
Temps d’administration
Pendant la grossesse Pendant le travail En post-partum Pendant l’allaitement
Protocole en
vigueur
(inspiré aux
recommandations
OMS, 2006)
AZT 300 mg x 2/jour à
partir de la 28ème
semaine
de grossesse
NVP 200 mg pu*
+AZT/3TC
300mg/150mg pu
Mère : AZT/3TC 300/150mg x 2/jour
pendant 7 jours*
Enfant : NVP (2mg/kg pu à la
naissance)* + AZT 4mg/kg X 2 /jour
pendant 7jours
La mère choisie entre allaitement par
SLM et allaitement maternel exclusif
avec sevrage précoce entre 4e et 6
e
mois. Après le post-partum, aucune
administration d‟ARV n‟est prévue, ni
pour la mère ni pour l‟enfant.
Nouveau protocole
A (à partir de
janvier 2012 et
inspiré aux
recommandations
OMS, 2010)
AZT 300 mg x 2/j à partir
de la 14ème
semaine de
grossesse
NVP 200 mg pu*
+AZT/3TC
300 mg/ 150 mg pu
Mère: AZT/3TC 300/150mg x 2/jour
pendant 7 jours*
Enfant: commence NVP (4mg/kg
pu/jour) * ou en 2e intension AZT
(4mg/KgX2 jour)
Allaitement maternel exclusif
jusqu‟au 6e mois, suivi d‟allaitement
maternel + introduction de
compléments alimentaires, avec
sevrage à 12 mois**
Enfant: poursuit NVP * ou AZT
jusqu‟à 1 semaine après sevrage
Nouveau protocole
B (toujours inspiré
aux
recommandations
OMS 2010,
remplacera A à
partir de janvier
2014)
Triprophylaxie à partir de
la 14e semaine de
grossesse avec, en 1e
intention :
AZT/3TC 300/150mg x
2/jour + EFV (600 mg
pu/j) ***
Poursuivre
triprophylaxie
Mère : poursuivre tripropylaxie
Enfant: Pendant 6 semaines NVP
(4mg/kg pu/jour) * ou en 2e intension
AZT (4mg/KgX2 jour)
Allaitement maternel exclusif
jusqu‟au 6e mois, suivi d‟allaitement
maternel + introduction de
compléments alimentaires, avec
sevrage au 12e mois**
Mère : poursuivre triprophylaxie,
jusqu‟à 1 semaine après le sevrage
* à ne pas administrer si VIH2 en mono-infection
** si la mère peut financer l‟achat de SLM pendant au moins 12 mois, et si elle vit dans un contexte où les SLM sont acceptables, disponibles et surs, elle
pourra choisir l‟allaitement par SLM. Dans ce cas, administrer à l‟enfant NVP (4mg/kg pu/jour) pendant 6 semaines après naissance, sauf si VIH2 en mono-
infection
***2e intention : AZT+3TC+LPV/r ou AZT+3TC+ABC (notamment si VIH2 en mono-infection ou en infection mixte) ou TDF+3TC(ou FTC)+EFV
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 52
Femme avec
indications pour
traitement ARV
Temps d‟administration
Pendant la grossesse Pendant le travail En post-partum Pendant l’allaitement
Protocole en vigueur
(inspiré aux
recommandations
OMS, 2006)
Trithérapie à partir de la
14ème
semaine de
grossesse : avec, en 1e
intention : AZT (300 mg
x 2/j) + 3TC (150 mg x
2/j) + NVP (200 mg x 2/j)
**
Poursuivre trithérapie Mère : Poursuivre trithérapie
Enfant : NVP (2mg/kg pu à la
naissance)* + AZT 4mg/kg X 2
/jour pendant 7jours
La mère choisie entre allaitement par
SLM et allaitement maternel exclusif avec
sevrage précoce entre 4 et 6 mois.
Mère : poursuivre trithérapie.
Nouveau protocole (à
partir de janvier 2012
et inspiré aux
recommandations
OMS, 2010)
Trithérapie à partir de la
14ème
semaine de
grossesse avec, en 1e
intention : AZT
(300 mg x 2/j) + 3TC
(150 mg x 2/j) + NVP
(200 mg x 2/j) ***
Poursuivre trithérapie Mère : Poursuivre trithérapie
Enfant : Pendant 6 semaines NVP
(4mg/kg pu/jour) * ou en 2e
intension AZT (4mg/KgX2 jour)
Allaitement maternel exclusif jusqu‟au 6e
mois, suivi d‟allaitement au maternel +
introduction de compléments alimentaires,
avec sevrage au 12e mois****
Mère : poursuivre trithérapie.
* à ne pas administrer si VIH2 en mono-infection
** 2e intention : d4t+3TC+NVP (ou EFV) ou AZT+3TC+EFV ou TDF+3TC(ou FTC)+NVP ou TDF+3TC(ou FTC)+EFV ; si VIH2, AZT (ou
D4T)+3TC+LPV/r ou AZT (ou D4T)+3TC+ABC
*** 2e intention : AZT+3TC+EFV ou TDF+3TC(ou FTC)+NVP ou TDF+3TC(ou FTC)+EFV ; si VIH2, AZT+3TC+LPV/r ou AZT+3TC+ABC. Sur
indications de l‟OMS, le D4T n‟est plus utilisé ni en prophylaxie ni en traitement à cause des ses effets secondaires (neuropathies)
**** si la mère peut financer l‟achat de SLM pendant au moins 12 mois, et si elle vit dans un contexte où les SLM sont acceptables, disponibles et surs, elle
pourra choisir l‟allaitement par SLM. Dans ce cas, administrer à l‟enfant NVP (4mg/kg pu/jour) pendant 6 semaines après naissance, sauf si VIH2 en mono-
infection
NB : si femme déjà sous trithérapie avant grossesse, poursuivre trithérapie. En cas de protocole incluant EFV, remplacer cette molécule
embriotoxique au cours du 1er
trimestre, par NVP ou LPV/r ou ABC
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 53
II.6 – Méthodes pour les techniques utilisées
II.6.1 – ELISA indirect
II.6.1.1 – Procédure du test rapide “Determine HIV 1&2”
La technique consistait à :
1. Déposer la bandelette sur une surface plate et horizontale après avoir enlevé sa
protection plastique ;
2. Pipeter 60µl de sang à l‟aide d‟une micro pipette ;
3. Déposer dans la bandelette sur la zone de dépôt du plasma symbolisée par une
flèche ;
4. Attendre 20 minutes ;
5. Lire le résultat ;
6. Interprétation et validation des résultats.
Le résultat du test est validé et interprété de la manière suivante :
a- résultat positif
Apparition de bandes rouges dans la fenêtre-contrôle et dans la fenêtre-patient (une bande
par fenêtre).
b- Résultat négatif
Apparition d‟une bande rouge dans la fenêtre-contrôle.
c- Résultat non valide ou indéterminé
- Absence des bandes rouges dans la fenêtre-contrôle et dans la fenêtre-patient ;
- Absence de bande rouge dans la fenêtre-contrôle et présence de bande rouge dans la
fenêtre-patient.
- Enregistrement des résultats.
Les résultats ont ensuite été enregistrés dans le registre PTME.
II.6.1.2 – Procédure du test rapide “SDBioline HIV 1&2”
Ce deuxième test ne concerne que les échantillons jugés positifs et indéterminés au
premier test rapide. C‟est un test de discrimination qui permet de déterminer le type de VIH du
patient. Il a l‟avantage d‟être rapide et de spécifier les types de VIH. Il existe rarement de faux
positifs.
Le test ELISA Genie II HIV-1/HIV-2 Bioline est un test immunoenzymatique de double
reconnaissance car basée sur la détection spécifique des anticorps anti-VIH-1 et anti-VIH-2. Le
support de réaction est constitué de deux puits: le premier puits «A» de forme circulaire est
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 54
destiné au dépôt de l‟échantillon. Le deuxième puits «B» de forme rectangulaire elliptique est le
puits de réaction, pour le dépôt des réactifs. Ce dernier puits est sensibilisé en deux spots de
réaction séparés par les antigènes dérivés du VIH-1 et VIH-2. Il y a un troisième spot de contrôle
«contrôle interne» qui permet de valider ou non le test. Le test est résumé en cinq étapes, la
première se déroule seulement dans le puits «A» et les quatre dernières dans le second puits.
Le mélange de trois gouttes (150 microlitres) du diluant échantillon et de 20 microlitres
d‟échantillon de sang a été transféré dans le puits A du support de réaction. On a attendu
l‟absorption complète de la solution du puits A du support de réaction avant de passer à la lecture
visuelle. La figure montre des exemples de cas de résultat positif et négatif.
Contrôle interne Contrôle interne
VIH-2
VIH-1
Patient positif VIH-1 et VIH-2 Patient négatif
Figure 16 : Représentation des résultats du Génie II HIV-1/HIV-2 SDBioline
II.6.2 – Extraction
L‟ARN a été isolé du plasma selon le protocole décrit dans le kit d‟extraction d‟ARN, kit
Qiagen (Qiagen Hilden, Allemagne).
L‟ADN a été isolé à partir du sang total sur papier séché selon le protocole décrit dans le kit
d‟extraction d‟ADN, kit Qiagen (Qiagen Hilden, Allemagne).
B
A
●
●
●
B
A
●
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 55
II.6.2.1 – Protocole d’extraction de l’ADN proviral en utilisant le DBS
Préchauffer les deux plaques chauffantes : l‟une à 85°C et l‟autre à 56°C.
1. Sortir les différents réactifs ;
2. Préparer les tampons AW1 et AW2 en suivant les instructions du fabricant ;
3. Couper des pastilles de 3 mm de diamètre à partir d‟une goutte de sang séché, à l‟aide de
ciseaux ;
4. Transférer les bouts de pastilles provenant du papier buvard contenant le sang séché dans
un tube de 1,5 ml et y ajouter 180 µl de tampon ATL ;
5. Incuber 10 min à 85°C. Centrifuger brièvement, afin de récupérer les gouttelettes
accumulées dans le capuchon ;
6. Ajouter 20 µl de solution de Protéinase K, mélanger en vortexant puis incuber 1h à 56°C.
Centrifuger brièvement afin de récupérer les gouttelettes accumulées dans le capuchon ;
7. Ajouter 200 µl de tampon AL à l‟échantillon, mélanger vigoureusement en vortexant puis
incuber 10 min à 70°C. Centrifuger brièvement;
8. Ajouter 200 µl d„éthanol absolu à l‟échantillon et mélanger vigoureusement en vortexant.
Centrifuger brièvement;
9. Déposer avec précaution le mélange obtenu à l‟étape 6 dans la colonne QIAmp sans en
mouiller le bord. Fermer le capuchon et centrifuger 1 min à 8000 rpm.
10. Transférer la colonne QIAmp dans un tube collecteur de 2 ml et jeter le tube contenant
l‟effluent;
11. Ajouter 500 µl de tampon AW1. Centrifuger 1 min à 8000 rpm.
12. Transférer la colonne QIAmp dans un collecteur de 2 ml et jeter le tube contenant
l‟effluent.
13. Ajouter 500 µl de tampon AW2. Fermer le capuchon et centrifuger 3 min à 14 000 rpm.
14. Mettre l colonne QIAMP dans un nouveau tube collecteur de 2 ml et jeter l‟ancien tube
collecteur contenant l‟effluent. Centrifuger 1 min à 14000 rpm ;
15. Transférer la colonne QIAmp dans un tube propre de 1,5 ml. Jeter l‟ancien tube collecteur
contenant l‟effluent;
16. Ajouter 70µl de tampon d‟élution. Incuber 1 min à température ambiante puis centrifuger
pendant 1 min à 8000 rpm.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 56
II.6.2.2 – Protocole d’extraction de l’ARN viral dans le plasma
Pour augmenter la sensibilité de la PCR en temps réel, 300 µl de plasma recueilli pour
chaque échantillon ont été centrifugés à 24 000g à 4°C pendant une heure.
Nous avons prélevé 200 µl de surnageant et récupéré 100 µl de culot plasmatique pour faire
l‟extraction de l‟ARN.
1. Préparer le tampon ATL en suivant les instructions du fabricant ;
2. Préparer les tampons AW1 et AW2 en suivant les instructions du fabricant ;
3. Pipeter 560 µl de tampon ATL dans les tubes contenant les 100 µl de culot d‟ARN
plasmatique;
4. Incuber 10 min à température ambiante. Centrifuger brièvement;
5. Ajouter 630 µl d„éthanol absolu à l‟échantillon et mélanger vigoureusement en vortexant.
Centrifuger brièvement;
6. Déposer avec précaution le mélange obtenu dans la colonne QIAmp. Fermer le capuchon
et centrifuger 1 min à 8000 rpm ;
7. Transférer la colonne QIAmp dans un tube collecteur de 2 ml et jeter le tube contenant
l‟effluent;
8. Ajouter 500 µl de tampon AW1. Centrifuger 1 min à 8000 rpm ;
9. Transférer la colonne QIAmp dans un collecteur de 2 ml et jeter le tube contenant
l‟effluent ;
10. Ajouter 500 µl de tampon AW2. Fermer le capuchon et centrifuger 3 min à 14 000 rpm.
11. Mettre l colonne QIAMP dans un nouveau tube collecteur de 2 ml et jeter l‟ancien tube
collecteur contenant l‟effluent. Centrifuger 1 min à 14000 rpm ;
12. Transférer la colonne QIAmp dans un tube propre de 1,5 ml. Jeter l‟ancien tube
collecteur contenant l‟effluent;
13. Ajouter 70µl de tampon d‟élution. Incuber 1 min à température ambiante puis centrifuger
pendant 1 min à 8000 rpm.
II.6.3 – PCR (Polymerase Chain Reaction)
Après avoir effectué les deux types d‟extraction : extraction d‟ADN par sang séché sur papier
et l‟extraction d‟ARN sur du plasma.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 57
a. PCR qualitative
Nous avons premièrement fait une PCR, en utilisant les échantillons d‟ADN. Nous avons
utilisé le kit Generic DNA cell (Biocentric, Bandol, France), tel que utilisé dans l‟étude mené par
AVETTAND-FENOEL et al. (AVETTAND-FENOEL et al., 2009).
Une deuxième PCR de l‟ADN sur spot DBS a été effectué pour confirmer les résultats de la
PCR en temps réel, pour les échantillons au statut sérologique indéterminé (douteux), qui se sont
révélés négatifs à la PCR en temps réel qualitative. Le mélange réactionnel de l‟amplification est
décrit dans le tableau II ci-dessous :
Tableau II : Mélange Réactionnel de la PCR
Constituants du MIX Volume μl
Mix qPCR avec platinum Taq 60U/ml + Rox 25
Amorce A 1
Amorce B 1
Sonde C 1
Eau stérile 2
Total 30 μl
La PCR a été faite dans un thermocycleur 9700 (Applied Biosystems, USA) dans un
volume réactionnel de 50 µl comprenant 30 µl de mixe et 20 µl d‟ADN selon le programme
d‟amplification décrit dans le tableau III.
Tableau III : Programme d‟amplification de la PCR
Etapes Temps Température
Dénaturation initiale
Activation de l‟enzyme
Dénaturation 50 cycles
2 min 50°C
10 min 95°c
15 s 95°C
Hybridation 1 min 60°C
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 58
b. Détection du VIH-1 par PCR en temps réel qualitative
Le VIH-1 a été détecté dans les échantillons de plasmas en utilisant le kit HIV Real-TM
Qual (Sacace Biotechnologies, Como, Italie) qui combine Rétrotranscription et PCR en une seule
étape (RT-PCR one step). La RT-Real Time PCR a été faite dans un appareil 7500 Fast Real
time PCR (Applied Biosystems, USA).
Pour un volume de 25 réactions, nous avons mélangé, dans un tube DTT fourni dans le
kit, les mixes 1 et 2 (Tableau IV).
Tableau IV : Mélange réactionnel de la DTT
Tube Réactifs Volume
DTT
RT-PCR-mix-1 300 μl
RT-PCR-mix-2 200 μl
Le mélange réactionnel de chaque RT-PCR est résumé dans le tableau V ci-dessous :
Tableau V : Mélange réactionnel de la RT
Réactifs Volume
Mix DTT 8 μl
TaqF polymerase 0,5μl
M-MLV 0,25μl
La réaction est faite dans un volume final de 18 µl comprenant 8 µl de mélange réactionnel et 10
µl d‟extrait d‟ARN et de contrôles positifs et négatifs fourni avec le kit HIV Real-TM Qual.
Le programme d‟amplification de la RT-Real Time PCR est résumé dans le tableau VI ci-
dessous :
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 59
Tableau VI : Programme d‟amplification de la RT-PCR en temps réel qualitative.
Etape Température Temps Répétition
(cycles)
RT (reverse
transcriptase)
Synthèse de l‟ADNc
50°C
30 min
1
Real time PCR
Synthèse de
l‟ADN
Activation de la Hot Start
Taq F polymerase
95°C
15 min
1
Dénaturation
Hybridation
Elongation
95°C
55°C
72°C
20 sec
40 sec
30 sec
45
II.6.4 – Statistiques
Nous avons utilisé le logiciel Microsoft Word version 2000 pour le traitement de texte,
des tableaux et des graphiques. La saisie des données a été faite sur le logiciel SPSS version
17.0, certaines analyses statistiques ont été faites en utilisant Epi info 6.4.
Les statistiques usuelles (moyenne, écart-type, proportion) ont été utilisées pour la
synthèse de nos données, selon le caractère quantitatif ou qualitatif. Les tests statistiques ont été
utilisés en vue de comparer les variables catégorielles (test chi2 de Pearson et le test exact de
Fisher) avec un seuil de signification ≤ 5%. Les variantes étudiées dans le modèle étaient celles
liées au paramètre d‟intérêt (PCR positif). Les résultats ont été présentés sous forme de tableaux.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 60
CHAPITRE III : RESULTATS ET DISCUSSION
III.1 – Résultats
Du premier septembre 2010 au 29 juillet 2011, 1300 femmes âgées de 18 à 49 ans
enceintes ont accepté librement de suivre le programme de prévention de la transmission mère-
enfant du VIH (PTME) au Centre Saint Camille de Ouagadougou et au CERBA/LABIOGENE
qui prévoit : un counselling pré-test du VIH, un test VIH par ELISA, un counselling post-test,
une prise en charge thérapeutique pour les mères et leurs enfants par les antirétroviraux (ARV) et
enfin, au quatrième mois de la naissance de leurs enfants, un test PCR.
III.1.1 – Caractéristiques sociodémographiques des mères, selon l’âge et la profession
La moyenne d‟âge des femmes enceintes qui ont suivi le programme PTME étaient de 28,32
± 0,15 ans. Le tableau VII décrit la prévalence du VIH suivant les tranches d‟âge que nous avons
établit. Nous remarquons qu‟il y a une progression de la prévalence selon les classes d‟âge. Le
groupe d‟âge le plus représenté était celui des 32-37 ans composé de 115 femmes soit 43,7%.
Nous notons qu‟au niveau des classes d‟âge 1 à 3, nous avons une progression de la
prévalence : 16% (classe 1) ; 21,8% (classe 2) et 29% (classe 3). A partir de la classe 4, nous
avons une régression : 43,7% (classe 4) puis 34,1% (classe 5), tableau VII.
Tableau VII : Répartition du statut sérologique en fonction des groupes d‟âge
Classe Groupe
d‟âge (ans)
Total Test VIH Types de VIH
VIH- VIH+ VIH-1 VIH-2 VIH-1&2
1 <20 87 73 14 /87 (16%) 14 0 0
2 20-25 320 250 70/320 (21,8%) 70 0 0
3 26-31 551 391 160/551 (29%) 158 2 0
4 32-37 263 148 115/263 (43,7%) 111 3 1
5 >37 79 52 27/79 (34,1%) 25 2 0
Total 914 386/1300 (29,69%) 378 7 1
1300 386
p (1) → (2) < 0,001 ; p (1) → (3) < 0,001 ; p (1) → (4) < 0,001 ; p (1) → (5) = 0,004 ; p (2) → (3) < 0,001 ;
p (2) → (4) < 0,001 ; p (2) → (5) <0,001 ; p (3) → (4) < 0,001 ; p (3) → (5) < 0,001 ; p (4) → (5) < 0,001.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 61
Tableau VIII : Répartition du VIH en fonction des professions des mères
Classe Profession Total VIH- VIH+ VIH-1 VIH-2 VIH-1&2
1 Ménagères 767 498 269/767 (35,1%) 264/378
69,84%
4/7
57,14%
1
2 Secteur
informel
312 228 84/312 (26,9%) 82/378
21,69%
2/7
28,57%
0
3 Elèves-
étudiantes
119 110 9/119 (7,5%) 9/378
2,38%
0/7
0,00%
0
4 Fonctionnaires 102 78 24/102 (23,5%) 23/378
6,08%
1/7
14,29%
0
Total 1300 914 386 378 7 1
p (1) → (2) < 0,001 ; p (1) → (3) <0,001 ; p (1) → (4) <0,001; p (2) → (3) < 0,001; p (2) → (4) <0,001; p (3) → (4) = 0,008.
Le tableau VIII montre la répartition du VIH au sein des groupes cibles comme : ménagères,
élèves, commerçantes, artisanes (secteur informel), fonctionnaires de l‟état. Le groupe ayant la
prévalence la plus élevée du VIH est celui des ménagères (35,1%), viennent ensuite le groupe du
secteur informel (26,9%) puis les fonctionnaires (23,5%).
Parmi ces 1300 femmes enceintes, 378 femmes ont été dépisté VIH-1 séropositives, soit
une prévalence de 29,1% (378/1300). Cette prévalence ne reflète aucunement la prévalence du
VIH sur le plan national. En effet, les CMSC et le CERBA qui sont des centres de références du
VIH, reçoivent des femmes qui cachent leur séropositivité à leur dépend afin de pouvoir
bénéficier de la prise en charge gratuite dans ces deux structures sanitaires. Ces femmes ont eu
un suivi médical du temps de leur dépistage jusqu‟à leur accouchement et un diagnostic précoce
du VIH, par PCR, a été effectué sur leurs enfants.
III.1.2 – Analyse des tests PCR
La PCR terminée, les amplicons étaient séparés par électrophorèse sur gel d'agarose 2,0%
et leur révélation était faite sous ultra violet (UV). La figure 17 montre le profil électrophorétique
des amplicons.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 62
PMPM
3
12
21
22 246
1
2
25
1614
10 000 pb
20
13
2000 pb
200 pb
100 pb
8
151197 17
10
19
18
235
200 pb
200 pb
200 pb
124 pb
Figure 17 : Electrophorèse sur gel d‟agarose à 2%.
Légende : PM = Marqueur de poids moléculaire (Fermentas: GeneRuler™ DNA Ladders
« GeneRuler™ DNA Ladder Mix », ready-to-use, ≠ SM 0333; 100-10,000 bp).
Puits 24 = contrôle positif ; Puits 25 = contrôle négatif
Au niveau des puits 1, 2, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 13, 14, 15,16, 17, 18, 19, 20, nous avons des
bandes visibles: ces échantillons sont positifs à la PCR. Les puits 3, 6, 12, 21, 22, 23,
correspondent à des échantillons négatifs à la PCR. Les bandes d‟ADN attendues se sont formées
entre 100 et 200 paires de bases (pb) ; ce qui correspond à la taille du fragment attendu d‟environ
110 à 120pb. C‟est la région 5‟LTR du génome du VIH-1 qui a été amplifiée, en se basant sur
l‟étude d‟AVETTAND-FENOEL et al. (2009). Tous les échantillons qui ont montré des bandes
visibles sur le gel étaient donc infectés par le VIH-1 et les enfants correspondants ont été
déclarés VIH-1 positifs.
Tableau IX : Prévalence des tests PCR positifs en fonction des professions des mères
PCR Total
Total Négative Positive
Profession
Ménagère 264 249 15/264 (5,7%) 264
Secteur informel 82 79 3/82 (3,6%) 82
Fonctionnaire 23 23 0/23 (0,0%) 23
Élèves-étudiantes 9 9 0/9 (0,0%) 9
Total 378 360 18 (100,0%) 378
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 63
Le tableau IX nous indique les résultats des tests PCR des enfants en fonction de la
profession des mères. Nous avons identifié par PCR 18 enfants VIH positifs (18/378) soit une
prévalence de 4,76%. Nous avons trouvé la plus haute prévalence chez les enfants des mères
ménagères (5,7%), tableau IX.
Tableau X : Résultats des tests PCR des enfants en fonction du mode de traitement de leur mère
Total PCR
Négative Positive Total *p-value
HAART1 114 114 0 /114 (0,0%) 114/378 (30,16%)
NPP2
264 246 18/264 (6,82%) 264/378 (69,84%) 0,009
Total 378 360 18/378 (4,76%) 378
* p corrigé de Yates
1HAART : AZT/3TC+NVP ou D4T/3TC+NVP ou 2INTI+1INNTI ou 2INTI+1IP
2NPP = Nouveau protocole prophylactique (AZT+3TC+NVP)
Dans notre étude, 69,84% (264/378) des mères étaient sous le nouveau protocole
prophylactique (AZT+3TC+NVP). A la naissance, leurs enfants ont été mis sous ARV (NVP
prise unique (PU) + AZT pendant une semaine en prophylaxie).
Au niveau du traitement HAART, nous avions 114 mères soit 30,16% (114/378).
Comme décrit dans le tableau X, aucun enfant né du groupe des femmes sous HAART, n‟a été
positif au test de la PCR (0/114) soit 0,00%. La différence était très significative avec une p-
value < 0,01.
Tableau XI : Résultats des tests PCR des enfants en fonction de leur mode d‟allaitement.
Total PCR négative PCR positive p-value
Allaitement maternel 92 86 6/92 (6,52%)
Allaitement artificiel 286 274 12/286 (4,20%) 0,53
Total 378 360 18/378 (4,8%)
Le tableau XI nous présente la répartition des enfants diagnostiqués VIH positifs par PCR
en fonction de leur mode d‟allaitement. Nous observons que 6,52% des enfants positifs à la PCR
ont été nourris au sein contre 4,20% enfants allaités artificiellement (Tableau XI).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 64
Tableau XII : Répartition de l‟allaitement selon le nombre de décès.
Nombre de décès Total p-value
Oui Non
Allaitement au sein 3 280 283
Allaitement artificiel 2 93 95 0,8
Total 5 373 378
Même si la différence n‟est pas significative (p-value= 0,8), le tableau XII nous présente
5/378 (1,32%) enfants décédés au cours de leur suivi. Deux enfants avec test PCR positif étaient
allaités artificiellement contre deux autres enfants PCR négatifs allaités au sein (Tableau XII). Le
tableau XII montre que 98,68% (373/378) des enfants inclus dans le programme sont restés
vivants durant le suivi médical.
III.1.3 – Analyse des tests pour le Real time-PCR des femmes enceintes à sérologie douteuse
Après la PCR en temps réel (Real Time PCR), les courbes de fluorescence ont été
analysées en utilisant le logiciel 7500 Fast Sequence Detection Software Version 2.1.
Le tableau XIII nous présente les analyses sérologiques ELISA, confirmées par des tests
RT-PCR. Des tests positifs à l‟ELISA 5/5 ont tous été confirmés positifs par la RT-PCR. De
même, les échantillons négatifs à l‟ELISA 4/4 ont tous été confirmés négatifs à la RT-PCR. Par
contre les tests indéterminés à l‟ELISA ont donné des résultats suivant : 2/16 (12,5%) étaient
positifs à la RT-PCR et 14/16 (87,5%) étaient négatifs (Tableau XIII).
III.1.4 – Analyse des tests PCR par l’ADN proviral en utilisant les DBS
Les échantillons à sérologie indéterminée qui se sont révélés négatifs à l‟ELISA et à la
Real Time PCR ont ensuite été testés par PCR sur les échantillons de sang séché sur papier
Buvard (DBS). Ce qui a permis de lever définitivement tout équivoque sur les résultats des tests
des échantillons.
Parmi les échantillons indéterminé (douteux), 87,5% (14/16) qui étaient négatifs à la RT-
PCR en temps réel, ont été confirmés encore négatifs par la PCR (système DBS) 14/14
(100,0%). Tous les échantillons négatifs pour le VIH par ELISA (4/4) ont été tous confirmés
négatifs par RT-PCR en temps réel et par PCR (Tableau XIII).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 65
Tableau XIII : Résultats de la PCR des personnes au statut sérologique douteux à l‟ELISA
ELISA RT-Real-time-PCR
PCR
Négatif Positif Négatif Positif
Indéterminé 16/25
(64,0%)
14/16
(87,5%)
2/16
(12,5%)
14/14
(100,0%)
0/14 (0,0%)
Negatif 4/25 (16,0%) 4/4 (100,0%) 0/4 (0,0%) 4/4 (100%) 0/4 (0,0%)
Positif 5/25 (20,0%) 0/5 (0,0%) 5/5 (100,0%)
Total 25 18 7 18 0
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 66
III.2 – Discussion
Notre travail de DEA avait pour objectif principal l‟usage des outils moléculaires (PCR
classique et PCR à temps réel) dans le diagnostic du VIH chez les enfants nés de mères VIH
séropositives et chez les femmes en visite prénatale ayant une sérologie indéterminée (douteuse).
Notre étude prospective portait sur 378 femmes enceintes VIH-1 séropositives. Parmi les
264 femmes sous NPP (AZT + 3TC + NVP), 6,82% (18/264) ont transmis le VIH à leurs enfants
contre une transmission de 0,0% (0/114) chez les 114 femmes sous HAART.
Le Centre Médical Saint Camille est situé dans un quartier populaire de Ouagadougou,
Secteur 14. La plupart des femmes fréquentant le centre sont prises en charge dans le cadre du
programme de la PTME mise en place depuis 2002 et appuyée par les recommandations de
l‟OMS au gouvernement burkinabé.
La plupart des patientes sont issues des zones indigentes de la ville où la promiscuité et le
manque d‟hygiène conduisent à la prolifération de toutes sortes d‟infection dont le VIH. La
prévalence du VIH chez les mères suivies dans cette étude était de 29,1% et ne reflète pas la
prévalence de 2% sur le plan national (Rapport Direction de la Santé et de la Famille Burkina
Faso, 2006). La problématique de l‟augmentation de la prévalence peut avoir une explication
socioéconomique. Dans le contexte de notre étude, le centre Saint Camille et le CERBA, sont des
centres de références, qui participent pleinement à l‟exécution des programmes de lutte contre le
VIH, mise en place par le gouvernement burkinabé. De ce fait, les femmes qui se présentent pour
la première fois au centre pour un premier dépistage, peuvent le faire en connaissant déjà leur
séropositivité. Du fait, de la prise en charge gratuite des mères séropositives, elles cachent leur
sérologie VIH et y viennent pour bénéficier du programme. Elles fournissent dans ce cas des
fausses informations qui peuvent conduire à un biais au niveau de la prévalence du VIH chez les
femmes enceintes.
En comparant à un autre pays africain, la Tanzanie ; où la prévalence globale du VIH est
d'environ 6%. Une prévalence du VIH chez les femmes enceintes de 14,5% a été trouvée dans
une étude menée dans un cadre sociodémographique identique à celui du centre médical et du
CERBA, portant sur 1395 femmes (KIRSTEN et al., 2011).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 67
De nos jours, la tendance de la transmission est à la baisse dans presque tous les pays. Ceci
est dû aux comportements sexuels à moindre risque, à la sécurité transfusionnelle et à
l‟introduction des trithérapies, les antirétroviraux de plus en plus puissants et très actifs, mais qui
font surgir un autre problème tout aussi important en santé publique qu‟est la résistance aux
ARV.
Les nouvelles stratégies de prévention contre le VIH préconisent un diagnostic précoce du
VIH chez l‟enfant né d‟une mère séropositive. La RT/PCR a été initialement standardisée
comme technique de diagnostique de l‟infection à VIH (SIMPORE et al., 2006). Le diagnostic
par RT/PCR a montré ces limites, avec l‟apparition de faux positifs à cause du temps de
destruction de l‟ARN messager par les phosphodiestérases. En 2005, une étude a montré que les
résultats de RT-PCR faite chez les enfants ont donné de faux négatifs au 45ème
et 90ème
jour de
vie, la RT-PCR s‟est avérée positive au 20ème
mois (COULIBALY et al., 2005).
Contrairement aux études menées précédemment, sur le diagnostic moléculaire par RT-PCR,
nous avons mené une étude de diagnostic précoce par PCR en utilisant l‟ADN proviral (en
utilisant le DBS). L'ADN intégré sert de modèle principal pour la transcription des gènes et la
réplication virale (AGOSTO, 2010). Cette caractéristique permet au provirus d‟être exprimé de
manière stable par les cellules hôtes et de persister dans la cellule infectée indéfiniment
(AGOSTO, 2010). Une mesure précise de l'ADN intégré du VIH est un meilleur indicateur de la
taille du réservoir que la mesure de l‟ADN total du virus (AGOSTO, 2010).
Le DBS est utilisé pour la détection du VIH-1 du génome par PCR avec une bonne sensibilité
et spécificité. La méthode d'extraction de l'ADN à partir des DBS permet un diagnostic fiable de
l'infection à VIH-1 (FISCHER et al., 2004). Nous avons identifié par PCR 18 enfants VIH
positifs (18/378) soit une prévalence de 4,8%. Cette prévalence est inférieure aux prévalences de
10,4% obtenue par RT-PCR chez les enfants âgés de 5 à 6 mois, dont les mères et les enfants
recevaient uniquement de la Névirapine (SIMPORE et al., 2006) ; et de 9,2% obtenue dans
l‟étude de DESCHAMPS et al. (2009), dont les mères avaient reçu soit de l‟AZT (73,3%), de la
Névirapine (2,9%) ou une trithérapie (10,1%).
Chez l‟enfant, le résultat n‟est pas définitif car il peut y avoir aussi des transmissions (5 à
20%) en cas d‟allaitement maternel (HORVATH et al., 2009). Nous observons une prévalence
de 6,52% parmi les enfants positifs à la PCR, qui ont été nourris au sein contre 4,20% enfants à
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 68
l‟allaitement artificiel. Dans l‟étude de SIMPORE et al, des enfants séropositifs 5/53 (9,4%)
étaient en allaitement maternel pendant 4 mois, tandis que le reste 15/140 (10,7%) étaient en
allaitement artificiel (SIMPORE et al., 2006). Ces différences statistiques étaient dans les deux
cas, non significatives, probablement à cause de la taille réduite de l‟échantillon.
La différence n‟était pas significative (p= 0,8) en ce qui concerne la mortalité des enfants au
cours de leur suivi étaient de 1,32% (5/378). Deux enfants décédés infectés par le VIH étaient
allaités artificiellement contre deux autres enfants confirmés PCR négatif allaités au sein. Dans
l‟étude de SIMPORÉ et al, les bébés décédés, nourris artificiellement et ceux nourris aux seins
étaient respectivement de : 2,1% (3/140) et 1,9% (1/53) (SIMPORE et al., 2006). Les décès
semblaient tout aussi bien être dus à différentes pathologies infectieuses ou liées au VIH.
Comme l‟ont montrées les précédentes études menées au Centre Médical Saint Camille, le
protocole de la transmission mère-enfant du VIH, basé sous la monoprophylaxie à la Névirapine
a permis de réduire sensiblement le taux de transmission du VIH à 10,36% (SIMPORE et al.,
2006) et 9,09% (SAGNA et al., 2008). Une autre étude antérieure a montré un taux plus élevé de
transmission à la névirapine 15,0% (ROLLINS et al., 2007).
Parmi les mères de notre étude qui étaient sous le nouveau protocole prophylactique
(NPP) AZT+3TC+NVP, le taux de transmission verticale était de 6,82%, (18/264) tandis que
celui de l‟étude de SAGNA et al., 2008 étaient de 4,55%. Ainsi, l‟efficacité de la Zidovudine en
association avec la Lamivudine + Névirapine pour la prévention de la transmission mère enfant
du VIH a été démontrée également par SUKSOMBOON et al. (2007).
L'efficacité de la thérapie HAART dans la prévention de la transmission verticale du VIH a
été confirmée dans plusieurs études. Les HAART donnent des meilleurs résultats et le test de
RT-PCR pour le VIH a montré un taux de transmission verticale de 0,0% chez les enfants nés de
mères séropositives (SIMPORE et al., 2007; SAGNA et al., 2008; ILBOUDO et al., 2010).
Malheureusement, ce protocole est financièrement coûteux (SIMPORE et al., 2007).
Depuis 2010, une nouvelle recommandation révisée de l‟Organisation Mondiale de la Santé
(OMS) est appliquée dans les programmes de la PTME des pays en voie de développement, le
protocole de traitement antirétroviral hautement actif (HAART: Highly Active Antiretroviral
Treatment), la combinaison : Zidovudine-Lamivudine-Névirapine est la plus utilisée. Les lignes
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 69
directrices nationales sur la PTME s‟inspirant du guide de l‟OMS 2010, sont progressivement en
train d‟être mises en place. Elles ramènent la prophylaxie de la mère de 28ème
semaine à la 23ème
semaine et propose de faire la PCR au 2ème
mois de naissance, où le calendrier de la PCR
correspondra avec le calendrier lié à la prise des vaccins. Le protocole suivant les directives de
l‟OMS sera introduit progressivement au Burkina Faso à partir de 2012 (Tableau XIV :
Protocoles ARV de prévention de la transmission mère-enfant du VIH).
.
Avec l‟évolution des ARV et la mise en place des différentes combinaisons, il est sans doute
admis que la prévention de la transmission mère-enfant connait un nouveau dénouement. Le taux
de transmission régresse concomitamment à l‟introduction de nouvelles combinaisons
thérapeutiques qui sont beaucoup plus efficaces contre les résistances aux ARV, mais surtout
limitent la transmission verticale. En 1997 l‟utilisation de l‟AZT comme monoprophylaxie
donnait déjà un taux de transmission de 7,6% ; l‟administration de la triprophylaxie dans l‟étude
de SAGNA et al. (2008), à donné un taux de transmission de 4,55%. La prise des HAART donne
un taux de 0.0% confirmé par plusieurs études récentes (SIMPORE et al., 2007; SAGNA et al.,
2008; ILBOUDO et al., 2010).
Dans notre étude, les tests de diagnostic ont été effectués à 4 mois de naissance. Les tests
devraient être offerts aux nourrissons exposés au VIH le plus tôt possible après l'âge de 6
semaines et devrait être répétée chaque trimestre tant que les enfants sont encore exposés via
l'allaitement.
L'utilisation systématique de tests de diagnostic par PCR lors du dépistage des femmes
enceintes contribuerait à accroître l‟efficacité du programme de TME. Les femmes qui sont
renvoyées pour un contrôle trois mois après leur premier test de diagnostic par ELISA devraient
très tôt être fixées sur leur séropositivité moyennant un test PCR. Ce qui augmenterait la qualité
de leur prise en charge.
Une étude menée pendant une longue période (2000 à 2006), sur 30 854 femmes enceintes a
donnée une prévalence de 0,44% (137) de femmes infectées par le VIH et le taux de transmission
verticale était de 9,7% (VIEIRA et al., 2011). Ces taux ont été associés à la qualité urbaine des
quartiers résidentiels. L‟étude a conclu que les quartiers avec une qualité urbaine plus faible
devrait être prioritaire dans les actions pour réduire la transmission verticale (VIEIRA et al.,
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 70
2011). Une grande priorité devrait être donnée dans les centres qui reçoivent un nombre
important de femmes venant de quartiers défavorisés.
Il y a des preuves croissantes que le sevrage précoce ou l'absence d'allaitement au sein
augmenterait la morbidité et la mortalité des enfants nés de mères séropositives. Les nouvelles
recommandations de l‟OMS pour les mères séropositives sont d'allaiter exclusivement au sein
leurs enfants infectés ou non du VIH les 6 premiers mois de vie. L'introduction des aliments
complémentaires appropriés pourrait se faire par la suite, mais il faudrait poursuivre l'allaitement
pendant les 12 premiers mois de vie (VORA et al., 2010).
L‟un des objectifs de cette étude était de confirmer la sérologie indéterminée au VIH chez les
femmes enceintes par RT-PCR et PCR pour deux principales raisons : 1) garantir un risque
minimale de transmission ; 2) lutter contre le VIH/SIDA par la mise en place d‟une stratégie
efficace de diagnostic moléculaire de l‟infection chez les femmes enceintes au CMSC en vue de
leur prise en charge médicale rapide.
Les résultats de la Real Time-PCR, montre une confirmation du diagnostic pour tous les
échantillons dépistés positifs (100%) ou négatifs (100%) par tests rapides (Determine et
SDBioline). En ce qui concerne les échantillons à sérologie indéterminée (douteuse), 12,5%
(2/16) se sont avérés être des échantillons positifs au VIH. L‟étude faite précédemment par
NAGALO et al, avait montré que 1 sur 2 pools d‟échantillons indéterminés était positif à la RT-
PCR (NAGALO et al. 2011).
Généralement, lors du dépistage sérologique des femmes enceintes, quand un échantillon
est indéterminé après utilisation des deux tests utilisés, il est recommandé aux femmes de répéter
15 jours après un contrôle sérologique. En cas d‟un nouveau résultat indéterminé, il est
recommandé d‟acheminer le prélèvement au laboratoire de référence pour un western blot.
D‟où l‟importance de systématiser le diagnostic moléculaire par PCR chez les femmes
enceintes à sérologie indéterminée.
Comme dans l‟étude de Nagalo et al (NAGALO et al., 2011), la stratégie de tester
uniquement les échantillons dont le statut est indéterminé au VIH par ELISA, un effectif réduit
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 71
sera obtenu, et les femmes pourraient être rapidement prises en charge. Le manque de ressources
technique à la réalisation de ce diagnostic constitue un frein à la vulgarisation de la PCR qui
actuellement est uniquement réservée au diagnostic précoce des enfants.
CONCLUSION ET PERSPECTIVES
Cette étude nous a permis de diagnostiquer chez 1300 femmes enceintes, 386 individus
séropositifs au VIH, dont 29,07% (378/1300) de VIH-1 ; 0,54% (7/1300) VIH-2 et 0,08%
(1/1300) de VIH1/2. Par la technique de la PCR, 18 enfants positifs au VIH-1 ont été détectés sur
trois cent soixante dix huit (378) soit 4,76% de cas de transmission. La technique de la PCR en
temps réel (Real Time-PCR) nous a permis de détecter parmi les échantillons douteux par
ELISA, 12,5% (2/16) d‟échantillons positifs.
Les résultats de ce mémoire contribueront à vulgariser le diagnostic précoce chez les
enfants nés des mères VIH séropositives. Ils contribueront également à promouvoir le test PCR
chez les femmes enceintes ayant des résultats d‟examens douteux du VIH.
Un défi à relever : le diagnostic du VIH parmi les enfants est l'existence des différents sous-
types de VIH. Le sous type B étant le plus répandu, certaines analyses moléculaires virologiques
n‟ont été développées que pour la détection du virus VIH de ce sous type, qui n‟est pas le plus
répandu en Afrique.
Dans les perspectives, il serait intéressant de :
- Détecter les résistances aux ARV chez les mères et leurs enfants ;
- Identifier la diversité génétique du VIH circulant dans nos régions ;
- Rechercher chez les femmes VIH séropositives, celles qui sont co-infectées par
Mycobacterium tuberculosis afin de déterminer les multi résistances (MDR).
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 72
Références bibliographiques
AGOSTO, L. M. (2010) Patients on HAART often have an excess of unintegrated HIV DNA:
implications for monitoring reservoirs. Virology, 409, 46-53.
ALCAMI, A. & KOSZINOWSKI, U. H. (2000) Viral mechanisms of immune evasion. Immunol
Today, 21, 447-55.
AVETTAND-FENOEL, V., CHAIX, M. L., BLANCHE, S., BURGARD, M., FLOCH, C.,
TOURE, K., ALLEMON, M. C., WARSZAWSKI, J. & ROUZIOUX, C. (2009) LTR
real-time PCR for HIV-1 DNA quantitation in blood cells for early diagnosis in infants
born to seropositive mothers treated in HAART area (ANRS CO 01). J Med Virol, 81,
217-23.
BARCELOS, W., MARTINS-FILHO, O. A., GUIMARAES, T. M., OLIVEIRA, M. H.,
SPINDOLA-DE-MIRANDA, S., CARVALHO, B. N. & TOLEDO VDE, P. (2006)
Peripheral blood mononuclear cells immunophenotyping in pulmonary tuberculosis
patients before and after treatment. Microbiol Immunol, 50, 597-605.
BARRE-SINOUSSI, F. (1996) HIV as the cause of AIDS. Lancet, 348, 31-5.
BIANCOTTO, A., IGLEHART, S. J., VANPOUILLE, C., CONDACK, C. E., LISCO, A.,
RUECKER, E., HIRSCH, I., MARGOLIS, L. B. & GRIVEL, J. C. (2008) HIV-1 induced
activation of CD4+ T cells creates new targets for HIV-1 infection in human lymphoid
tissue ex vivo. Blood, 111, 699-704.
BRIGGS, J. A., WILK, T., WELKER, R., KRAUSSLICH, H. G. & FULLER, S. D. (2003)
Structural organization of authentic, mature HIV-1 virions and cores. Embo J, 22, 1707-
15.
BUNNELL, R., EKWARU, J. P., SOLBERG, P., WAMAI, N., BIKAAKO-KAJURA, W.,
WERE, W., COUTINHO, A., LIECHTY, C., MADRAA, E., RUTHERFORD, G. &
MERMIN, J. (2006) Changes in sexual behavior and risk of HIV transmission after
antiretroviral therapy and prevention interventions in rural Uganda. Aids, 20, 85-92.
BUONAGURO, L., TORNESELLO, M. L. & BUONAGURO, F. M. (2007) Human
immunodeficiency virus type 1 subtype distribution in the worldwide epidemic:
pathogenetic and therapeutic implications. J Virol, 81, 10209-19.
CAI, C. Y., ZHANG, X., SINKO, P. J., BURAKOFF, S. J. & JIN, Y. J. (2011) Two sorting
motifs, a ubiquitination motif and a tyrosine motif, are involved in HIV-1 and simian
immunodeficiency virus Nef-mediated receptor endocytosis. J Immunol, 186, 5807-14.
CASAZZA, J. P., BETTS, M. R., HILL, B. J., BRENCHLEY, J. M., PRICE, D. A., DOUEK, D.
C. & KOUP, R. A. (2005) Immunologic pressure within class I-restricted cognate human
immunodeficiency virus epitopes during highly active antiretroviral therapy. J Virol, 79,
3653-63.
CASTRO, A. C., BORGES, L. G., SOUZA RDA, S., GRUDZINSKI, M. & D'AZEVEDO, P. A.
(2008) Evaluation of the human immunodeficiency virus type 1 and 2 antibodies
detection in dried whole blood spots (DBS) samples. Rev Inst Med Trop Sao Paulo, 50,
151-6.
CAVARELLI, M. & SCARLATTI, G. (2011) HIV-1 co-receptor usage: influence on mother-to-
child transmission and pediatric infection. J Transl Med, 9 Suppl 1, S10.
COULIBALY M., NOBA V., REY J-L., MSELLATI P., EKPINI R., CHAMBON J-F. &
MALKIN J-E. (2005) Evaluation d‟un programme de prévention de la transmission mère-
enfant du VIH à Abidjan (Côte d‟Ivoire/1999-2002). Médecine Tropicale. , 66, 53-58.
DAI, J., AGOSTO, L. M., BAYTOP, C., YU, J. J., PACE, M. J., LISZEWSKI, M. K. &
O'DOHERTY, U. (2009) Human immunodeficiency virus integrates directly into naive
resting CD4+ T cells but enters naive cells less efficiently than memory cells. J Virol, 83,
4528-37.
--------------------------------------------------------------------
Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 73
DESCHAMPS, M. M., NOEL, F., BONHOMME, J., DEVIEUX, J. G., SAINT-JEAN, G., ZHU,
Y., WRIGHT, P., PAPE, J. W. & MALOW, R. M. (2009) Prevention of mother-to-child
transmission of HIV in Haiti. Rev Panam Salud Publica, 25, 24-30.
DIDIERLAURENT, L., HOUZET, L., MORICHAUD, Z., DARLIX, J. L. & MOUGEL, M.
(2008) The conserved N-terminal basic residues and zinc-finger motifs of HIV-1
nucleocapsid restrict the viral cDNA synthesis during virus formation and maturation.
Nucleic Acids Res, 36, 4745-53.
DOOLITTLE, J. M. & GOMEZ, S. M. Structural similarity-based predictions of protein
interactions between HIV-1 and Homo sapiens. Virol J, 7, 82.
DUVALL, M. G., LORE, K., BLAAK, H., AMBROZAK, D. A., ADAMS, W. C., SANTOS, K.,
GELDMACHER, C., MASCOLA, J. R., MCMICHAEL, A. J., JAYE, A., WHITTLE, H.
C., ROWLAND-JONES, S. L. & KOUP, R. A. (2007) Dendritic cells are less susceptible
to human immunodeficiency virus type 2 (HIV-2) infection than to HIV-1 infection. J
Virol, 81, 13486-98.
ELENA, S. F. & SANJUAN, R. (2005) Adaptive value of high mutation rates of RNA viruses:
separating causes from consequences. J Virol, 79, 11555-8.
FANALES-BELASIO, E., RAIMONDO, M., SULIGOI, B. & BUTTO, S. (2010) HIV virology
and pathogenetic mechanisms of infection: a brief overview. Ann Ist Super Sanita, 46, 5-
14.
FENOUILLET, E., BARBOUCHE, R. & JONES, I. M. (2007) Cell entry by enveloped viruses:
redox considerations for HIV and SARS-coronavirus. Antioxid Redox Signal, 9, 1009-34.
FIEBIG, E. W., WRIGHT, D. J., RAWAL, B. D., GARRETT, P. E., SCHUMACHER, R. T.,
PEDDADA, L., HELDEBRANT, C., SMITH, R., CONRAD, A., KLEINMAN, S. H. &
BUSCH, M. P. (2003) Dynamics of HIV viremia and antibody seroconversion in plasma
donors: implications for diagnosis and staging of primary HIV infection. Aids, 17, 1871-
9.
FISCHER, A., LEJCZAK, C., LAMBERT, C., SERVAIS, J., MAKOMBE, N., RUSINE, J.,
STAUB, T., HEMMER, R., SCHNEIDER, F., SCHMIT, J. C. & ARENDT, V. (2004)
Simple DNA extraction method for dried blood spots and comparison of two PCR assays
for diagnosis of vertical human immunodeficiency virus type 1 transmission in Rwanda.
J Clin Microbiol, 42, 16-20.
FLEXNER, C. (2007) HIV drug development: the next 25 years. Nat Rev Drug Discov, 6, 959-
66.
FRANCIS, A. C., DI PRIMIO, C., ALLOUCH, A. & CERESETO, A. (2011) Role of
Phosphorylation in the Nuclear Biology of HIV-1. Curr Med Chem.
GAO, F., ROBERTSON, D. L., MORRISON, S. G., HUI, H., CRAIG, S., DECKER, J., FULTZ,
P. N., GIRARD, M., SHAW, G. M., HAHN, B. H. & SHARP, P. M. (1996) The
heterosexual human immunodeficiency virus type 1 epidemic in Thailand is caused by an
intersubtype (A/E) recombinant of African origin. J Virol, 70, 7013-29.
GAY, C. L., MWAPASA, V., MURDOCH, D. M., KWIEK, J. J., FISCUS, S. A., MESHNICK,
S. R. & COHEN, M. S. (2010) Acute HIV infection among pregnant women in Malawi.
Diagn Microbiol Infect Dis, 66, 356-60.
HAN, Y., WIND-ROTOLO, M., YANG, H.C., SILICIANO, J.D., ET SILICIANO, R.F. (2007).
Experimental approaches to the study of HIV-1 latency. Nat. Rev. Microbiol. 5, 95-106.
HLADIK, F. & MCELRATH, M. J. (2008) Setting the stage: host invasion by HIV. Nat Rev
Immunol, 8, 447-57.
HORVATH, T., MADI, B. C., IUPPA, I. M., KENNEDY, G. E., RUTHERFORD, G. & READ,
J. S. (2009) Interventions for preventing late postnatal mother-to-child transmission of
HIV. Cochrane Database Syst Rev, CD006734.
HUANG, W., ESHLEMAN, S. H., TOMA, J., FRANSEN, S., STAWISKI, E., PAXINOS, E. E.,
--------------------------------------------------------------------
Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 74
WHITCOMB, J. M., YOUNG, A. M., DONNELL, D., MMIRO, F., MUSOKE, P.,
GUAY, L. A., JACKSON, J. B., PARKIN, N. T. & PETROPOULOS, C. J. (2007)
Coreceptor tropism in human immunodeficiency virus type 1 subtype D: high prevalence
of CXCR4 tropism and heterogeneous composition of viral populations. J Virol, 81,
7885-93.
ILBOUDO, D., SIMPORE, J., OUERMI, D., BISSEYE, C., SAGNA, T., ODOLINI, S.,
BUELLI, F., PIETRA, V., PIGNATELLI, S., GNOULA, C., NIKIEMA, J. B. &
MUSUMECI, S. (2010) Towards the complete eradication of mother-to-child HIV/HBV
coinfection at Saint Camille Medical Centre in Burkina Faso, Africa. Braz J Infect Dis,
14, 219-24.
IVERS, L. C., SMITH FAWZI, M. C., MANN, J., JEROME, J. G., RAYMONVILLE, M. &
MUKHERJEE, J. S. (2008) Overseas processing of dried blood spots for timely diagnosis
of HIV in Haitian infants. Rev Panam Salud Publica, 24, 331-5.
IZQUIERDO-USEROS, N., BLANCO, J., ERKIZIA, I., FERNANDEZ-FIGUERAS, M. T.,
BORRAS, F. E., NARANJO-GOMEZ, M., BOFILL, M., RUIZ, L., CLOTET, B. &
MARTINEZ-PICADO, J. (2007) Maturation of blood-derived dendritic cells enhances
human immunodeficiency virus type 1 capture and transmission. J Virol, 81, 7559-70.
JAIN, V., LIEGLER, T., VITTINGHOFF, E., HARTOGENSIS, W., BACCHETTI, P., POOLE,
L., LOEB, L., PILCHER, C. D., GRANT, R. M., DEEKS, S. G. & HECHT, F. M. (2010)
Transmitted drug resistance in persons with acute/early HIV-1 in San Francisco, 2002-
2009. PLoS One, 5, e15510.
JIAO, Y., HUA, W., ZHANG, T., ZHANG, Y., JI, Y., ZHANG, H. & WU, H. (2011)
Characteristics of CD8+ T cell subsets in Chinese patients with chronic HIV infection
during initial ART. AIDS Res Ther, 8, 15.
JOHNSON, V. A., BRUN-VEZINET, F., CLOTET, B., GUNTHARD, H. F., KURITZKES, D.
R., PILLAY, D., SCHAPIRO, J. M. & RICHMAN, D. D. (2008) Update of the drug
resistance mutations in HIV-1: Spring 2008. Top HIV Med, 16, 62-8.
JONES, R. B., YUE, F. Y., GU, X. X., HUNTER, D. V., MUJIB, S., GYENES, G., MASON, R.
D., MOHAMED, R., MACDONALD, K. S., KOVACS, C. & OSTROWSKI, M. A.
(2009) Human immunodeficiency virus type 1 escapes from interleukin-2-producing
CD4+ T-cell responses without high-frequency fixation of mutations. J Virol, 83, 8722-
32.
JOSEFSSON, L., KING, M. S., MAKITALO, B., BRANNSTROM, J., SHAO, W.,
MALDARELLI, F., KEARNEY, M. F., HU, W. S., CHEN, J., GAINES, H., MELLORS,
J. W., ALBERT, J., COFFIN, J. M. & PALMER, S. E. (2011) Majority of CD4+ T cells
from peripheral blood of HIV-1-infected individuals contain only one HIV DNA
molecule. Proc Natl Acad Sci U S A, 108, 11199-204.
KEELE, B. F., GIORGI, E. E., SALAZAR-GONZALEZ, J. F., DECKER, J. M., PHAM, K. T.,
SALAZAR, M. G., SUN, C., GRAYSON, T., WANG, S., LI, H., WEI, X., JIANG, C.,
KIRCHHERR, J. L., GAO, F., ANDERSON, J. A., PING, L. H., SWANSTROM, R.,
TOMARAS, G. D., BLATTNER, W. A., GOEPFERT, P. A., KILBY, J. M., SAAG, M.
S., DELWART, E. L., BUSCH, M. P., COHEN, M. S., MONTEFIORI, D. C., HAYNES,
B. F., GASCHEN, B., ATHREYA, G. S., LEE, H. Y., WOOD, N., SEOIGHE, C.,
PERELSON, A. S., BHATTACHARYA, T., KORBER, B. T., HAHN, B. H. & SHAW,
G. M. (2008) Identification and characterization of transmitted and early founder virus
envelopes in primary HIV-1 infection. Proc Natl Acad Sci U S A, 105, 7552-7.
KEELE, B. F., VAN HEUVERSWYN, F., LI, Y., BAILES, E., TAKEHISA, J., SANTIAGO,
M. L., BIBOLLET-RUCHE, F., CHEN, Y., WAIN, L. V., LIEGEOIS, F., LOUL, S.,
NGOLE, E. M., BIENVENUE, Y., DELAPORTE, E., BROOKFIELD, J. F., SHARP, P.
M., SHAW, G. M., PEETERS, M. & HAHN, B. H. (2006) Chimpanzee reservoirs of
--------------------------------------------------------------------
Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 75
pandemic and nonpandemic HIV-1. Science, 313, 523-6.
KIRSTEN, I., SEWANGI, J., KUNZ, A., DUGANGE, F., ZISKE, J., JORDAN-HARDER, B.,
HARMS, G. & THEURING, S. (2011) Adherence to combination prophylaxis for
prevention of mother-to-child-transmission of HIV in Tanzania. PLoS One, 6, e21020.
KOGAN, M. & RAPPAPORT, J. (2011) HIV-1 accessory protein Vpr: relevance in the
pathogenesis of HIV and potential for therapeutic intervention. Retrovirology, 8, 25.
LAVENS, D., PEELMAN, F., VAN DER HEYDEN, J., UYTTENDAELE, I., CATTEEUW, D.,
VERHEE, A., VAN SCHOUBROECK, B., KURTH, J., HALLENBERGER, S.,
CLAYTON, R. & TAVERNIER, J. (2010) Definition of the interacting interfaces of
Apobec3G and HIV-1 Vif using MAPPIT mutagenesis analysis. Nucleic Acids Res, 38,
1902-12.
LEONARD, J. T. & ROY, K. (2006) The HIV entry inhibitors revisited. Curr Med Chem, 13,
911-34.
LEWIS, P., NDUATI, R., KREISS, J. K., JOHN, G. C., RICHARDSON, B. A., MBORI-
NGACHA, D., NDINYA-ACHOLA, J. & OVERBAUGH, J. (1998) Cell-free human
immunodeficiency virus type 1 in breast milk. J Infect Dis, 177, 34-9.
MICHAEL, N. L. & MOORE, J. P. (1999) HIV-1 entry inhibitors: evading the issue. Nat Med,
5, 740-2.
MORIS, A., PAJOT, A., BLANCHET, F., GUIVEL-BENHASSINE, F., SALCEDO, M. &
SCHWARTZ, O. (2006) Dendritic cells and HIV-specific CD4+ T cells: HIV antigen
presentation, T-cell activation, and viral transfer. Blood, 108, 1643-51.
NAGALO, B. M., BISSEYE, C., SANOU, M., NEBIE, Y. K., KIBA, A., KIENOU, K.,
ZONGO, J. D. & SIMPORE, J. (2011) [Molecular diagnosis of acquired human
immunodeficiency virus (HIV) in pooled plasma from blood donors at the Regional
Blood Transfusion Center in Ouagadougou, Burkina Faso]. Med Trop (Mars), 71, 137-
41.
NDUATI, R. W., JOHN, G. C., RICHARDSON, B. A., OVERBAUGH, J., WELCH, M.,
NDINYA-ACHOLA, J., MOSES, S., HOLMES, K., ONYANGO, F. & KREISS, J. K.
(1995) Human immunodeficiency virus type 1-infected cells in breast milk: association
with immunosuppression and vitamin A deficiency. J Infect Dis, 172, 1461-8.
OMS (ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE), 2004a. Étude de cas: Prévention de la
Transmission Mère Enfant du VIH/SIDA au Burkina Faso: une démarche contractuelle
originale. www.emro.who.int/aiecf/web8.pdf.
OMS (ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE), 2006. Rapport sur l‟épidémie
mondiale de SIDA : résumé d‟orientation. http://www.unaids.org.
ONUSIDA (2010) RAPPORT MONDIAL: RAPPORT ONUSIDA SUR L‟ÉPIDÉMIE
MONDIALE DE SIDA | 2010. ONUSIDA.
PANCERA, M., MAJEED, S., BAN, Y. E., CHEN, L., HUANG, C. C., KONG, L., KWON, Y.
D., STUCKEY, J., ZHOU, T., ROBINSON, J. E., SCHIEF, W. R., SODROSKI, J.,
WYATT, R. & KWONG, P. D. (2010) Structure of HIV-1 gp120 with gp41-interactive
region reveals layered envelope architecture and basis of conformational mobility. Proc
Natl Acad Sci U S A, 107, 1166-71.
PERELSON, A. S., NEUMANN, A. U., MARKOWITZ, M., LEONARD, J. M. & HO, D. D.
(1996) HIV-1 dynamics in vivo: virion clearance rate, infected cell life-span, and viral
generation time. Science, 271, 1582-6.
PERESSIN, M., HOLL, V., SCHMIDT, S., DECOVILLE, T., MIRISKY, D., LEDERLE, A.,
DELAPORTE, M., XU, K., AUBERTIN, A. M. & MOOG, C. (2011) HIV-1 replication
in Langerhans and interstitial dendritic cells is inhibited by neutralizing and Fc-mediated
--------------------------------------------------------------------
Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 76
inhibitory antibodies. J Virol, 85, 1077-85.
PETERLIN, B. M. & TRONO, D. (2003) Hide, shield and strike back: how HIV-infected cells
avoid immune eradication. Nat Rev Immunol, 3, 97-107.
PHILPOTT, S., BURGER, H., TSOUKAS, C., FOLEY, B., ANASTOS, K., KITCHEN, C. &
WEISER, B. (2005) Human immunodeficiency virus type 1 genomic RNA sequences in
the female genital tract and blood: compartmentalization and intrapatient recombination.
J Virol, 79, 353-63.
PLANTIER, J. C., LEOZ, M., DICKERSON, J. E., DE OLIVEIRA, F., CORDONNIER, F.,
LEMEE, V., DAMOND, F., ROBERTSON, D. L. & SIMON, F. (2009) A new human
immunodeficiency virus derived from gorillas. Nat Med, 15, 871-2
POLUEKTOVA, L., GORANTLA, S., FARACI, J., BIRUSINGH, K., DOU, H. &
GENDELMAN, H. E. (2004) Neuroregulatory events follow adaptive immune-mediated
elimination of HIV-1-infected macrophages: studies in a murine model of viral
encephalitis. J Immunol, 172, 7610-7.
POMMIER, Y., JOHNSON, A. A. & MARCHAND, C. (2005) Integrase inhibitors to treat
HIV/AIDS. Nat Rev Drug Discov, 4, 236-48.
PTAK, R. G., GENTRY, B. G., HARTMAN, T. L., WATSON, K. M., OSTERLING, M. C.,
BUCKHEIT, R. W., JR., TOWNSEND, L. B. & DRACH, J. C. (2010) Inhibition of
human immunodeficiency virus type 1 by triciribine involves the accessory protein nef.
Antimicrob Agents Chemother, 54, 1512-9.
RAINWATER, S., DEVANGE, S., SAGAR, M., NDINYA-ACHOLA, J., MANDALIYA, K.,
KREISS, J. K. & OVERBAUGH, J. (2005) No evidence for rapid subtype C spread
within an epidemic in which multiple subtypes and intersubtype recombinants circulate.
AIDS Res Hum Retroviruses, 21, 1060-5.
RAPPORT DIRECTION DE LA SANTÉ ET DE LA FAMILLE BURKINA FASO (2006)
PROGRAMME NATIONAL DE PREVENTION DE LA TRANSMISSION MERE
ENFANT DU VIH 2006- 2010., MInistere de la santé
RAPPORT DU GROUPE D'EXPERTS, S. L. D. D. P. P. Y. (2010) Prise en charge médicale des
personnes infectées par le VIH : enquête périnatal française , ANRS. IN FRANCE, F. M.
S. (Ed.) Paris, Ministère de la santé et des sports.
RAPPORT DU GROUPE D'EXPERTS, S. L. D. D. P. Y. (2010) Prise en charge médicale des
personnes infectées par le VIH. Chapitre 12: Infections par les sous-types non-B de VIH-
1, VIH-1 groupe O et VIH-2 IN FRANCE, F. M. S. (Ed.) Paris, Ministère de la santé et
des sports.
REDEL, L., LE DOUCE, V., CHERRIER, T., MARBAN, C., JANOSSY, A., AUNIS, D., VAN
LINT, C., ROHR, O. & SCHWARTZ, C. (2010) HIV-1 regulation of latency in the
monocyte-macrophage lineage and in CD4+ T lymphocytes. J Leukoc Biol, 87, 575-88.
RÉSEAU VIH, R.-H. (2005) Dépistage du VIH : rappel sur la technique.
REUTER, M. A., PECORA, N. D., HARDING, C. V., CANADAY, D. H. & MCDONALD, D.
(2010) Mycobacterium tuberculosis promotes HIV trans-infection and suppresses major
histocompatibility complex class II antigen processing by dendritic cells. J Virol, 84,
8549-60.
ROLLINS, N., LITTLE, K., MZOLO, S., HORWOOD, C. & NEWELL, M. L. (2007)
Surveillance of mother-to-child transmission prevention programmes at immunization
clinics: the case for universal screening. Aids, 21, 1341-7.
ROUZIOUX, C., CHAIX, M. L., BURGARD, M. & MANDELBROT, L. (2002) [HIV and
pregnancy]. Pathol Biol (Paris), 50, 576-9.
SAGNA T., BISSEYE C., SANOU D. S., DJIGMA F., OUERMI D., ZEBA M., PIETRA V.,
PIGNATELLI S., GNOULA C., SIA J. D., NIKIEMA J.-B. & J., S. (2008) Diagnostic
--------------------------------------------------------------------
Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 77
précoce, par RT/PCR, du VIH-1 chez les enfants nés des mères séropositives. Science et
technique, Sciences de la santé, 31, 29-36.
SEMBA, R. D., KUMWENDA, N., HOOVER, D. R., TAHA, T. E., QUINN, T. C.,
MTIMAVALYE, L., BIGGAR, R. J., BROADHEAD, R., MIOTTI, P. G., SOKOLL, L.
J., VAN DER HOEVEN, L. & CHIPHANGWI, J. D. (1999) Human immunodeficiency
virus load in breast milk, mastitis, and mother-to-child transmission of human
immunodeficiency virus type 1. J Infect Dis, 180, 93-8.
SEPOU A., YANZA M.C., NGUEMBI E., BANGAMINGO J-P. & NALI M.N. (2000) Les
consultations prénatales en zone sémi-urbaine centrafricaine :fréquence, facteurs
influençants, pronostic maternel et néonatal. . Médecine Tropicale. , 60 257-261.
SHACKLETT, B. L. (2006) Understanding the "lucky few": the conundrum of HIV-exposed,
seronegative individuals. Curr HIV/AIDS Rep, 3, 26-31.
SIMON, F. (2008) Les tests rapides pour le dépistage VIH. . Laboratoire de Microbiologie CHU
Saint Louis de Paris. .
SIMON, V. & HO, D. D. (2003) HIV-1 dynamics in vivo: implications for therapy. Nat Rev
Microbiol, 1, 181-90.
SIMPORE, J., PIETRA, V., PIGNATELLI, S., KAROU, D., NADEMBEGA, W. M.,
ILBOUDO, D., CECCHERINI-SILBERSTEIN, F., GHILAT-AVOID-BELEM, W. N.,
BELLOCCHI, M. C., SALERI, N., SANOU, M. J., OUEDRAOGO, C. M., NIKIEMA, J.
B., COLIZZI, V., PERNO, C. P., CASTELLI, F. & MUSUMECI, S. (2007) Effective
program against mother-to-child transmission of HIV at Saint Camille Medical Centre in
Burkina Faso. J Med Virol, 79, 873-9.
SIMPORE, J., PIETRA, V., SAVADOGO, A., PIGNATELLI, S., NIKIEMA, J. B.,
NADEMBEGA, W. M., YARA, J., ZOUNGRANA, N., BAKOUAN, D., COLIZZI, V.,
CASTELLI, F. & MUSUMECI, S. (2006) Reduction of mother-to-child transmission of
HIV at Saint Camille Medical Centre in Burkina Faso. J Med Virol, 78, 148-52.
SIMPORE, J., ZONGO, F., KABORE, F., DANSOU, D., BERE, A., NIKIEMA, J. B.,
PIGNATELLI, S., BIONDI, D. M., RUBERTO, G. & MUSUMECI, S. (2005) Nutrition
rehabilitation of HIV-infected and HIV-negative undernourished children utilizing
spirulina. Ann Nutr Metab, 49, 373-80.
SIRCAR, P., FURR, K. L., DOROSH, L. A. & LETVIN, N. L. (2010) Clonal repertoires of
virus-specific CD8+ T lymphocytes are shared in mucosal and systemic compartments
during chronic simian immunodeficiency virus infection in rhesus monkeys. J Immunol,
185, 2191-9.
SUKSOMBOON, N., POOLSUP, N. & KET-AIM, S. (2007) Systematic review of the efficacy
of antiretroviral therapies for reducing the risk of mother-to-child transmission of HIV
infection. J Clin Pharm Ther, 32, 293-311.
TAYLOR, B. S., SOBIESZCZYK, M. E., MCCUTCHAN, F. E. & HAMMER, S. M. (2008)
The challenge of HIV-1 subtype diversity. N Engl J Med, 358, 1590-602.
TONIOLO, A., SERRA, C., CONALDI, P. G., BASOLO, F., FALCONE, V. & DOLEI, A.
(1995) Productive HIV-1 infection of normal human mammary epithelial cells. Aids.
UNAIDS (2010) Suivi sur la déclaration d'engagement sur le VIH/SIDA. Rapport UNGASS
2010 du Burkina Faso. UNAIDS, CNLS-IST.
VAN KOOYK, Y. (2008) C-type lectins on dendritic cells: key modulators for the induction of
immune responses. Biochem Soc Trans, 36, 1478-81.
VAN MARLE, G., CHURCH, D. L., NUNWEILER, K. D., CANNON, K., WAINBERG, M. A.
& GILL, M. J. (2010) Higher levels of Zidovudine resistant HIV in the colon compared
to blood and other gastrointestinal compartments in HIV infection. Retrovirology, 7, 74.
VAN MONTFORT, T., MELCHERS, M., ISIK, G., MENIS, S., HUANG, P. S., MATTHEWS,
K., MICHAEL, E., BERKHOUT, B., SCHIEF, W. R., MOORE, J. P. & SANDERS, R.
--------------------------------------------------------------------
Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 78
W. (2011) A Chimeric HIV-1 Envelope Glycoprotein Trimer with an Embedded
Granulocyte-Macrophage Colony-stimulating Factor (GM-CSF) Domain Induces
Enhanced Antibody and T Cell Responses. J Biol Chem, 286, 22250-61.
VAN, P. D. P. (2007) Pathogenic Mechanisms of HIV Transmission by Breastfeeding. the 4th
IAS Conference on HIV Pathogenesis, Treatment and Prevention. Sydney, Australia.
VENZKE, S., MICHEL, N., ALLESPACH, I., FACKLER, O. T. & KEPPLER, O. T. (2006)
Expression of Nef downregulates CXCR4, the major coreceptor of human
immunodeficiency virus, from the surfaces of target cells and thereby enhances resistance
to superinfection. J Virol, 80, 11141-52.
VIDRICAIRE, G. & TREMBLAY, M. J. (2004) [For a better understanding of the mechanisms
involved in vertical transmission of HIV]. Med Sci (Paris), 20, 784-7.
VIEIRA, A. C., MIRANDA, A. E., VARGAS, P. R. & MACIEL, E. L. (2011) HIV prevalence
in pregnant women and vertical transmission in according to socioeconomic status,
Southeastern Brazil. Rev Saude Publica, 45, 644-651.
VIGET, N. & YAZDANPANAH, Y. (2006) [When to initiate antiretroviral therapy and what to
start with?]. Rev Prat, 56, 953-63.
VORA, N., HOMSY, J., KAKURU, A., ARINAITWE, E., WANZIRA, H., SANDISON, T. G.,
BIGIRA, V., KAMYA, M. R., TAPPERO, J. W. & DORSEY, G. (2010) Breastfeeding
and the risk of malaria in children born to HIV-infected and uninfected mothers in rural
Uganda. J Acquir Immune Defic Syndr, 55, 253-61.
VOSSENKAMPER, A., MACDONALD, T. T. & MARCHES, O. (2011) Always one step
ahead: How pathogenic bacteria use the type III secretion system to manipulate the
intestinal mucosal immune system. J Inflamm (Lond), 8, 11.
WANG, J., REUSCHEL, E. L., SHACKELFORD, J. M., JEANG, L., SHIVERS, D. K., DIEHL,
J. A., YU, X. F. & FINKEL, T. H. (2011) HIV-1 Vif promotes the G- to S-phase cell-
cycle transition. Blood, 117, 1260-9.
WILDUM, S., SCHINDLER, M., MUNCH, J. & KIRCHHOFF, F. (2006) Contribution of Vpu,
Env, and Nef to CD4 down-modulation and resistance of human immunodeficiency virus
type 1-infected T cells to superinfection. J Virol, 80, 8047-59.
WILKIN, T. J., SU, Z., KURITZKES, D. R., HUGHES, M., FLEXNER, C., GROSS, R.,
COAKLEY, E., GREAVES, W., GODFREY, C., SKOLNIK, P. R., TIMPONE, J.,
RODRIGUEZ, B. & GULICK, R. M. (2007) HIV type 1 chemokine coreceptor use
among antiretroviral-experienced patients screened for a clinical trial of a CCR5
inhibitor: AIDS Clinical Trial Group A5211. Clin Infect Dis, 44, 591-5.
WILLUMSEN, J. F., FILTEAU, S. M., COUTSOUDIS, A., NEWELL, M. L., ROLLINS, N. C.,
COOVADIA, H. M. & TOMKINS, A. M. (2003) Breastmilk RNA viral load in HIV-
infected South African women: effects of subclinical mastitis and infant feeding. Aids,
17, 407-14.
WOLF, D. & GOFF, S. P. (2008) Host restriction factors blocking retroviral replication. Annu
Rev Genet, 42, 143-63.
WOROBEY, M., GEMMEL, M., TEUWEN, D. E., HASELKORN, T., KUNSTMAN, K.,
BUNCE, M., MUYEMBE, J. J., KABONGO, J. M., KALENGAYI, R. M., VAN
MARCK, E., GILBERT, M. T. & WOLINSKY, S. M. (2008) Direct evidence of
extensive diversity of HIV-1 in Kinshasa by 1960. Nature, 455, 661-4.
ZHANG, L., JIANG, Q., LI, G., JEFFREY, J., KOVALEV, G. I. & SU, L. (2011) Efficient
infection, activation, and impairment of pDCs in the BM and peripheral lymphoid organs
during early HIV-1 infection in humanized rag2-/-{gamma} C-/- mice in vivo. Blood,
117, 6184-92.
ZHANG, Q., WANG, L., JIANG, Y., FANG, L., PAN, P., GONG, S., YAO, J., TANG, Y. W.,
VERMUND, S. H. & JIA, Y. (2008) Early infant human immunodeficiency virus type 1
--------------------------------------------------------------------
Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 79
detection suitable for resource-limited settings with multiple circulating subtypes by use
of nested three-monoplex DNA PCR and dried blood spots. J Clin Microbiol, 46, 721-6.
ZHENG, N., FUJIWARA, M., UENO, T., OKA, S. & TAKIGUCHI, M. (2009) Strong ability of
Nef-specific CD4+ cytotoxic T cells to suppress human immunodeficiency virus type 1
(HIV-1) replication in HIV-1-infected CD4+ T cells and macrophages. J Virol, 83, 7668-
77.
ZHUANG, J., JETZT, A. E., SUN, G., YU, H., KLARMANN, G., RON, Y., PRESTON, B. D.
& DOUGHERTY, J. P. (2002) Human immunodeficiency virus type 1 recombination:
rate, fidelity, and putative hot spots. J Virol, 76, 11273-82.
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Mémoire de DEA – GHOMA LINGUISSI Laure Stella 80
Le Serment éthique pour les chercheurs en sciences de la vie, adapté et inspiré du Serment d'Hippocrate médical,
(Science Vol. 286, 19 Nov. 1999, p.1475).
"Je jure d'être fidèle à l'éthique du respect des personnes et des vies humaines et de contribuer au
développement de la connaissance et à la plus large diffusion du savoir.
Je respecterai toutes les espèces dans leur biodiversité : ce respect inspirera mes actes et mes
projets, notamment au cours de mes expérimentations sur les animaux ou les tissus humains.
Je m'efforcerai de soulager les souffrances de tous les êtres vivants.
Admis(e) à avoir accès à l'intimité tissulaire ou génétique des personnes, je tairai leur identité et
m'astreindrai au secret médical.
Même sous la contrainte, je ne ferai pas usage de mes connaissances contre les lois de
l'humanité.
Je préserverai l'indépendance nécessaire à l'accomplissement de ma mission.
Je m'informerai et réfléchirai au sens de mes expérimentations et à leurs conséquences.
Je veillerai à ce que mes travaux et recherches ne soient pas utilisés à des fins de destruction ou
de manipulation.
Je respecterai les savoirs des ethnies et des sociétés traditionnelles.
Je n'aurai garde d'oublier mes responsabilités à l'égard des générations présentes et futures.
Je n'accepterai pas que des considérations de nationalité, de culture, de politique ou d'avantages
matériels me détournent de mes devoirs.
J'interviendrai pour défendre, s'il m'en est donné l'occasion, l'ensemble de ces règles.
Que les hommes et mes confrères m'accordent leur estime si je suis fidèle à mes promesses.
Que je sois déshonoré(e) et méprisé(e) si j'y manque."