![Page 1: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/1.jpg)
Odabrati model sistem (npr. Leydig-ove ćelije testisa pacova)
![Page 2: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/2.jpg)
Odabrati signalni put od interesa i sakupiti dovoljno literaturnih podataka o njegovim komponentama
![Page 3: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/3.jpg)
Koju ćemo osobinu i/ili funkciju odabranog model sistema da posmatramo pod uticajem datog signalnog puta (npr. uticaj NO-cGMP puta na biosintezu testosterona).
![Page 4: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/4.jpg)
Krenuti od genske ekspresije datog signalnog puta (ako se geni za komponente nekog signalnog puta ekspresuju u odabranoj ćeliji, zasigurno imaju i FUNKCIJU... Koju?)
METODE: izolacija DNK i RNK RT-PCR RQ-PCR agarozna elektroforeza...
![Page 5: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/5.jpg)
Ekspresija proteina (za komponente signalnog puta ILI proteine na koje dati signalni put eventualno ostvaruje svoj uticaj)
METODE: liza ćelija i izolacija proteinaBradfordova metoda imunoprecipitacija SDS-PAGE elektroforeza Western blotting
![Page 6: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/6.jpg)
Ispitivanje nivoa sekrecije hormona ili sekundarnih glasnika, od strane ćelija gajenih u primarnoj kulturi
METODE:RIA za merenje nivoa hormona (T+DHT, PROG i
E2)ELISA komercijalni kit za odredjivanje nivoa
produkcije cAMP-a i cGMP-a
![Page 7: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/8.jpg)
Priprema ogledaAutoklavirati sisteme za filtriranje medijuma i
boce za čuvanje medijumaNapraviti medijume po standardnoj recepturi i
profiltrirati ih kroz prethodno autoklavirane sisteme za filtriranje (sve se izvodi u strogo sterilnim uslovima, u vertikalnom laminaru (hood-u)). Do početka ogleda ovako sterilisane rastvore čuvati u frižideru, a pred početak ogleda izvaditi ih da se temperiraju na sobnoj temperaturi (kako se ćelije ne bi „stresirale“ od hladnoće).
U hood postaviti svo plastično posudje, mrežice i ostalo što nam je potrebno za sutrašnji eksperiment. Uključiti UV lampu u hood-u!
Uključiti UV lampu, koja steriliše čitavu prostoriju u kojoj će se izvoditi ogled.
![Page 9: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/10.jpg)
![Page 11: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/11.jpg)
![Page 12: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/13.jpg)
![Page 14: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/21.jpg)
![Page 22: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/23.jpg)
DOPUNJAVANJE FALKONA OD 50ml MEDIJUMOM (ISPIRANJE)
CENTRIFUGIRANJERESUSPENDOVANJE TALOGA U MEDIJUMU BROJANJE PURIFIKOVANIH LC
![Page 24: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/24.jpg)
SAĐENJE STIMULACIJA
![Page 25: Šta je sve neophodno za ispitivanje jednog signalnog puta???](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062423/56814726550346895db45f5f/html5/thumbnails/25.jpg)