Subpopulace B lymfocytů v klinické imunologii
Marcela Vlková Ústav klinické imunologie a alergologie, FN u sv. Anny v Brně
B lymfocyty základními buňkami specifické humorální imunity primární funkce - produkce protilátek – imunoglobulinů (Ig) Ig- zaměřeny proti mikroorganismům nebo jejich toxinům
působících v tělních tekutinách či dutinách tj. mimo buňky
Tucker W. LeBien and Thomas F. Tedder. Blood 2008; 112: 1570-1580
Vývoj B lymfocytů
Tucker W. LeBien and Thomas F. Tedder. Blood 2008; 112: 1570-1580
BCR receptor Coombs RR, Feinstein A, Wilson AB. Immunoglobulin
determinants on the surface of human lymphocytes. Lancet 1969;2:1157-1160
Molekuly Ig přítomny na povrchu B lymfocytu jako součást specifického receptoru pro antigen – BCR komplexu:
Ig + transmembránové molekuly Igα, Igβ (CD79α, CD79β)
Povrchové znaky B lymfocytů CD19 - celá vývojová linie B lymfocytů CD20 - maturované B lymfocyty CD21 - C3d a EBV receptor CD22 – lektin pro α2,6-sialicylovou kys. CD23 – nízce afinitní receptor pro IgE CD24 – GPI glykoprotein s neznámou funkcí CD27, CD38, CD72, CD80, CD40….
CD znaky a vývoj B lymfocytů
T1 B T2 B FO B MZ B P-SW PLB
CD21 - +++ + +++ + -
CD24 +++ +++ + +++ ++ -
CD23 - +++ +++ -/+ - -
IgM +++ +++ + +++ - +/-
IgD + ++++ +++ + - +/-
CD27 - - - + + +++
CD38 +++ +++ + - +/- +++
I.přep. B
Plasmatické bb.
Paměťové B lymfocyty
T1 T2
MZ
FO
IgMhigh
IgDlow
CD21-
CD23-
IgMl low
IgD high
CD21+
CD23+
IgMhigh
IgDlow
CD21high
CD23-
IgG,IgA or IgE
IgMhigh
IgD+
CD21+
CD23+
(Modified from C. Schiff)
AFC
Transientní B lymfocyty
Sledování subpopulací B lymfocytů v periferní
krvi
IgG,IgA or IgE
CD27
IgD
CD38
IgM
CD19+ CD20+ CD27-
CD21+/- CD38+/- s IgM+ s IgD+
CD19+
CD20-/+ CD27+ CD21+ CD38- s IgM+ s IgD+
CD19+ , CD20-/+ CD27+, CD38-/+
s IgM-, s IgD-
CD21+
CD23+
IgD
PE
CD27 FITC
Naivní
IgM paměťové
Paměťové IgG, IgA, IgE
Plasmablasty CD19+/- CD20 -- CD27++ CD21 -
CD38++ s IgM + s IgD-/+
Loder J et al J Exp Med 1999;190:75-89 Klein U et al J Exp Med
1998;188:1679-89
Agematsu K et al Immunol Today 2000; 21:204-206
Protilátkové imunodeficity
Zvýšená náchylnost k bakteriálním infekcím, zejména respiračního systému.
Jako infekční agens dominují opouzdřené baktérie- Haemophily, pneumokoky, St aureus
Infekce mají tendence ke komplikacím – objevují se pneumonie, sinusitidy, otitidy.
Pacienti mohou trpět meningitidami, chronickými průjmy, artritidami….
Nástup příznaků po vymizení mateřských protilátek. Ale primární humorální imunodeficit -CVID se může manifestovat v kterémkoliv věku pacienta!
10
Nejčastější typy primárních humorálních imunodeficiencí
11
12
Běžný variabilní imunodeficit CVID heterogenní skupina onemocnění, vyznačující se
porušenou schopností tvorby protilátek produkovaných B lymfocyty: snížené hladiny sérového IgG, IgA; hladina IgM bývá variabilní
patogeneze těchto chorob nebyla dosud až na některé výjimky objasněna ( např. deficit ICOS, BAFF-R, TACI CD19, CD20….)
popsány B i T lymfocytární defekty vedoucí k neschopnosti kooperace mezi B a T lymfocyty ⇒ porucha v produkci protilátek
Běžný variabilní imunodeficit CVID
13
patogeneze těchto chorob nebyla dosud až na některé výjimky objasněna
v příbuzenstvu častý výskyt selektivního deficitu IgA!!!
14
Selektivní deficit IgA
nejčastější porucha tvorby protilátek s frekvencí 1:400 v ČR postižení jedinci - minimální nebo žádné příznaky
imunodeficitu prokázán zvýšený výskyt autoimunitních chorob, snad i
alergií laboratorní definice - hladina IgA menší než 0.05g/l při
nesnížených hladinách IgG a IgM může se jednat o lehčí fenotypovou manifestaci stejného
genetického základu vedoucího k závažnějšímu onemocnění CVID (přechod IgAD – CVID)
možný výskyt anti-IgA protilátek
Vyšetření počtu B-lymfocytů
15 15
Vyšetření počtu B-lymfocytů
16
Absence B-lymfocytů pacienti s X-vázanou agamaglobulinémií autosomálně recesivními agamaglobulinémiemi asi 10% pacientů s CVID Goodův syndrom X-LP
Normální počet B-lymfocytů CVID IgAD hyper-IgM syndromy přechodná hypogamaglobulinémie kojenců
Vyšetření zastoupení B-lymfocytárních subpopulací
17
18
Pupečníková krev
Transientní B-lymfocyty Zdravý dárce
19
CD19+ CD20+ CD27- CD38l+/- s IgM+ s IgD+
CD21+/-
CD23+
CD19+ CD20-/+ CD27+ CD38-/+ s IgM+ s IgD+
CD21+
CD23+
CD19+ , CD20-/+ CD27+, CD38-/+ s IgM-, s IgD-
CD21+
CD23+
IgD
PE
CD27 FITC
Naivní IgM paměťové
Paměťové IgG, IgA, IgE
Vyšetření zastoupení B lymfocytárních subpopulací
20
IgD
IgD
CD27 CD27
Pacient CVID Zdravá kontrola
21
CD21low B lymfocyty
Vyšetření zastoupení B lymfocytárních subpopulací
Výsledky vyšetření B-lymfocytárních subpopulací u pacientů s CVID
22
Pokles: Plazmablastů (CD27++ CD38++IgM+/-) Izotypově přepnutých paměťových B lymfocytů
(CD27+IgM-IgD-)
Vzestup: naivních (CD27-IgD+), transientních (CD24++IgM++CD38++) „CD21low“ (CD21-CD38-) B-lymfocytů
Pacienti s IgA deficitem
23
24 24
Pacienti s IgA deficitem
Výsledky vyšetření B-lymfocytárních subpopulací u pacientů s IgAD
U části pacientů nalezen pokles izotypově přepnutých
paměťových B-lymfocytů vzestup CD21low B-lymfocytů korelace mezi % i absolutním počtem
izotypově přepnutých paměťových B lymfocytů a hladinou IgG
25
Poděkování Prof. MUDr. Jiří Litzman, CSc. MUDr. Dagmar Štikarovská MUDr. Zdeňka Pikulová MUDr. Dana Bartoňková Sestřičky ÚKIA Mgr. Jana Nechvátalová Mgr. Olga Tichá, Ph.D. RNDr. Martina Štouračová
Kolektiv laborantů ÚKIA!!!!
26
Děkuji za pozornost
27