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Technique d’antibiogrammedes Staphylocoques
(Staphylococcus aureus)
Dr H.TALI-MAAMAR – EHS MAOUCHEINSP – 12 AVRIL 2006
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Principaux caractères bactériologiques
Espèce type: S.aureusCocci à Gram positifAéro anaérobie facultatif, non exigeantCatalase +, oxydase –, O129 RCoagulase, dégradation du mannitol,
production d’hémolyse, novobiocine. Milieux sélectifs: Chapman, Baird Parker
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3Culture sur milieu solide
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Infections communautaires et nosocomiales
Infections cutanéo-muqueuses (folliculite, furoncule, anthrax)
Septicémies Intoxications alimentaires Infections urinaires
• Pus divers• Hémoculture• Prélèvements nasaux• Prélèvements cutanés• Urines• LCR• Aliments
Pouvoir pathogène - Prélèvements
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Sensibilité aux antibiotiques
• 194…: apparition des premières souches de S.aureus résistantes à la pénicilline
• 196…: apparition des souches résistantes à la méthicilline
• 199… : Souches de sensibilité intermeédiaire à la vancomycine
• SARM et résistances associées aux aminosides, macrolides, fluoroquinolones.
• 200… :Plus récemment caractériseation de souches de SARM, virulentes, responsables d’infections communautaires.
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Antibiotiques à tester (Liste standardisée, spectre d’activité, disponibilité, indication clinique)
• Bêtalactamines:– Pénicilline G– Oxacilline
• Aminosides:– Amikacine (H)– Gentamicine
• Macrolides:– Erythromycine– Clindamycine– Pristinamycine
• Glycopeptides– Vancomycine (H)
• Autres:– Ofloxacine– Acide fusidique– Chloramphénicol– Tétracyclines– Cotrimoxazole – Fosfomycine (H)– Rifampicine
• Cefoxitine: pour rechercher la résistance à l’oxacilline
• Novobiocine: diagnostic
• Composé vibriostatique O129: diagnostic
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Test de sensibilité aux antibiotiques (Technique standardisée – normes NCCLS)
• Milieu: Mueller Hinton• Inoculum: 0,5 Mc
Farland• Disques
d’antibiotiques (cf liste)
• Interprétation: valeurs critiques
• Contrôle de qualité: S.aureus ATCC 25923
• Screening test à l’oxacilline
• Recherche de la PLP2a• Détermination de la CMI• Recherche de la
pénicillinase: en cas de problème d’interprétation à l’ATBgramme
• Recherche de la résistance aux glycopeptides.
Antibiogramme ppt dit Tests complémentaires
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Staphylocoques et bêtalactamines
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Phénotypes de résistance aux bêtalactamines
Mécanisme
Pénicilline G
Pénicilline A
Carbox/ Uréido
ATB + inhibiteur de bêtalactamase
Pénicilline M Céphalosporines
Carbapénèmes
Phénotype sauvage
S S S S
Pénicillinase R S S S
Modification de PLP2a
gène mecA
R R R R
BORSA
Pase hyperproduite
Souches borderline
R R R S
MODSA
Modif. PLP (non 2a)
Absence de Pase
S S r S
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Recherche de la méthicillino-résistance
Technique Contrôle de qualité
Observation
Test à la cefoxitine (30µg)
-Antibiogramme
-MH
-0,5 Mc Farland
S.aureus ATCC 25923 Normes NCCLS:
S.aureus: R si ≤ 19mm
SCN: R si ≤ 24mm
Screening test MRSA
-MH 4% NaCl
-Oxacilline à 6µg/ml
-0,5 Mc Farland
-Ensemencement / spot
S.aureus ATCC 29213
S.aureus ATCC 43300
S.aureus ATCC 43866
Test peu reproductible pour les SCN
Recherche de la PLP2a
-Agglutination Contrôle selon Kit Technique rapide, recommandée en cas de diagnostic d’urgence et ou d’infection grave.
CMI à l’oxacilline -MH 2% NaCl
-0,5 Mc Farland
S.aureus ATCC 29213 Technique de référence
Obligatoire pour la confirmation des SCN MetiR.
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Recherche des MRSA screening test
S.aureus ATCC 43300
S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 43866
Souche à tester
Screening test
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Recherche des MRSA Recherche de la PLP2a
Souche MRSA + Souche MRSA -
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Staphylocoques et macrolides
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Phénotypes de résistance aux macrolides
Mécanisme Phénotype ErythroAzithromycine
Linco Clinda SA
(SB)
Pristina
Phénotype sauvage
Sensible S S S S S
Modification de la cible
MLSbi R S S S S
MLSbc R R R S S
Inactivation enzymatique
L S R s S S
LSa S s/R S R ?
Sa S S S S
(R)
?
Efflux LSa S S/I/R S/I/R R S/R
E R S S S S
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S.aureus MLSb inductible
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S.aureus MLSb constitutive
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Staphylocoques et aminosides
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Phénotypes de résistance aux aminosides
Phenotype MécanismeKanamycine
AmikacineTobramycine Gentamicine
Sauvage
Inactivation enzymatique
S S S
K R S S
KT R R S
KTG R R R
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Règles générales d’interprétation de l’antibiogramme
ANTIBIOTIQUES OBSERVATIONS
Bêtalactamines:
Pénicilline G
Oxacilline
Réponse valable pour: pénicilline A, carboxy et uréido-pénicilline
Résistance croisée à toutes les bêtalactamines
Macrolides:
Erythromycine
Clindamycine
Pristinamycine
Si phénotype MLSBi: résistance croisée avec azithromycine
Si phénotype MLSBc: résistance croisée avec azithromycine, spiramycine et lincosamides
Réponse valable pour la lincomycine *
Réponse valable pour les synergistines
Aminosides:
Amikacine
Gentamicine
Résistance d’expression faible in vitro, tenir compte du diamètre de la kanamycine
Résistance croisée à tous les aminosides utilisés en thérapeutique
Glycopeptides:
Vancomycine Tout diamètre <17mm est une indication à la CMI
*: Si phénotype L, résistance à la Lincomycine avec diminution de l’activité de la Clindamycine.