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TÉCNICAS CITOQUÍMICAS UTILIZADAS NO ESTUDO DAS
GLÂNDULAS ACESSÓRIAS MASCULINAS DE CHIROPTERA
(MAMMALIA)Disciplina: Microscopia e Microanálise Docente: Profa. Dra. Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira Discente: Cíntia Cristina Isicawa Puga
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SUMÁRIO Projeto de Pesquisa
Técnicas Citoquímicas
Resultados Preliminares
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PROJETO DE PESQUISA
Morfofisiologia da Próstata de Morcegos: Estudosnas espécies Artibeus planirostris e Platyrrhinus
lineatus (Phyllostomidae: Chiroptera)
Cíntia Cristina Isicawa Puga Prof. Dr. Sebastião Roberto Taboga (Orientador) – IBILCE/UNESP Profa. Dra. Patricia Simone Leite Vilamaior (Co-orientadora) - UNIRP
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INTRODUÇÃO Ordem Chiroptera 2ª maior dos Mammalia
200 gêneros e 1000 espécies;
Regiões tropicais e temperadas, com exceção de algumas ilhas oceânicas remotas e a Antártica (REIS et al., 2006)
Ampla radiação + avanços nos estudos com enfoques evolutivos Aspectos relativos à biologia reprodutiva pouco
explorados glândulas acessórias do sistema genital e às relações
funcionais dessas glândulas com as variações sazonais
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Ampla distribuição geográfica influência de fatores abióticos estratégias reprodutivas Detectadas através de comportamento ou
da avaliação funcional das gônadas e das glândulas anexas (SWAMI & LALL ,1982)
Morcegos hibernantes de zonas temperadas reprodutores sazonais
Zonas tropicais padrão reprodutivo complexo Influências Variações da temperatura, Pluviosidade, Disponibilidade de recursos alimentares -FLEMING et al., 1972;-FLEMING et al., 1972;
-TADDEI, 1976.-TADDEI, 1976.
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OBJETIVO
Avaliar as glândulas sexuais acessórias masculinas, com ênfase à próstata de morcegos representantes da família Phyllostomidae (Artibeus planirostris e Platyrrhinus lineatus).
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Platyrrhinus lineatus
http://www.flickr.com/photos/11412389@N05/2676572439/
Artibeus planirostris
http://www.morcegolivre.vet.br/artibeusplanirostris.html10
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Método de Coleta Redes de Neblina Coletas seriadas
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Hematoxilina-Eosina: estrutura glandular, quantificações celulares, reconstrução tridimensional e densidade de volume dos componentes prostáticos (avaliação estereológica);
Método do P.A.S: atividade secretora geral da glândula;
Método da Reticulina de Gömöri: elementos do estroma glandular.
Análise Imunocitoquímica para Receptor Androgênico (AR): expressão de receptores androgênicos (AR) durante os meses do ano.
Fosfatase ácida: Para a detecção da atividade de fosfatase ácida prostática
MICROSCOPIA DE LUZ
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Microscopia Eletrônica de Transmissão e de Varredura
Dosagens hormonais: punção endocárdica Testosterona
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FixaçãoRetirada do material
Inclusão em Resina/ParafinaSecções no Micrótomo
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TÉCNICAS CITOQUÍMICAS Hematoxilina & Eosina
Hematoxilina (basófila) → substratos básicos → fosfato do DNA e RNA → núcleo e o Retículo Endoplasmático Rugoso, locais onde há grande quantidade de proteínas (básicas pelo seu grupamento amina)
Eosina (acidófila) → cora citoplasma tonalidade rósea, atua sobre citoplasma, fibras colágenas e outras substâncias ácidas das células.
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5’ 10’
1’5’
8’ 1’
1’
1’ 1’ 1’
ÁGUA ÁGUA ÁL 80%
ABS III
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5.0 µm
5.0 µm
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REAÇÃO DO PAS (ÁCIDO PERIÓDICO/REATIVO DE SCHIFF)
Um pré tratamento determina a especificidade da coloração quando se utiliza o Reativo de Schiff
Reação de Feulgen → hidrolise acida com HCl Reação do PAS → oxidação com o ácido periódico
Reação do PAS Secreção Epitélio
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ETAPAS 1. Oxidação do material com ácido periódico
produção de radicais aldeídos nas moléculas de carboidrato
2. Estes radicais aldeído vão se ligar ao leucoderivado da Fucsina básica restaurando o grupo cromoforico e produzindo um composto corado
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5’ 40’
1’
8’ 60’
1’
1’ 1’ 1’
ÁGUA ÁGUA
ABS III
3x 5’
Metabissulfito de Sódio
10’
ÁGUA
2’ 10’ÁGUA
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