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Mayela Estivalis Vega Rivera
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
TÉCNICA HISTOLÓGICA• Serie de métodos y técnicas utilizados para poder estudiar las
características morfológicas y moleculares de los tejidos.
1.- Obtención de muestra
2.- Fijación
3.- Deshidratación
4.- Aclaramiento
5.- Inclusión
6.- Corte
7.- Baño de flotación
8.- Tinción
1.- OBTENCIÓN DE MUESTRA
• Biopsia• Necropsia• Frotis de células superficiales• Frotis de células sanguíneas• Aplastados celulares
2.- FIJACIÓN
• Con un fijador simple (Formaldehido) o mezcla de fijadores (liquido de Bouin o Helly).
• Conservar la morfología y la composición de los tejidos.
• Se puede clasificar en 3 métodos:o Por inmersión o Por perfusión o Por vapores
3.- DESHIDRATACIÓN• Con Alcohol etílico
• Eliminar el agua de los tejidos.
• Evita la deformación de la a morfología del tejido, debido a la rápida salida del agua.
4.- ACLARAMIENTO
• Se sumerge el tejido en un liquido que sea miscible tanto en el medio de inclusión como en el medio de deshidratación.
• Xilol
• Benzol
• Tolueno
Confección del taco:
Es la inclusión definitiva del trozo de tejido. Se utiliza un molde metálico especial denominado barras de Leuckart, donde se vierte parafina liquida (60°C).
• Los tejidos deben ser sumergidos en una sustancia de consistencia firme, la cual puede ser hidrófila o hidrófoba.
• Parafina
• Paraplast
5.- INCLUSIÓN
6.- CORTE• Se debe cortar el taco obtenido
en secciones muy delgadas que permitan el paso de luz, utilizando el micrótomo.
• Con un grosor de 6 a 8 µm.
• Tipo Minot
7.- BAÑO DE FLOTACIÓN
• Se coloca la muestra sobre el agua tibia y se retira con un portaobjetos.
8.- TINCIÓN
• Colorantes básicos: Basófilos. Hematoxilina Azul de toluidina Azul de metileno
• Colorantes ácidos: Acidófilos. Eosina Naranja G Fucsina ácida
Hematoxilina – EosinaHematoxilina
Azul: Núcleo, regiones ácidas del citoplasma
Eosina
Rosa: Regiones básicas del citoplasma, fibras de colágena
Tricrómetrico de MassonNegro: NúcleosRojo: Músculo, queratina, citoplasmaAzul o verde: Colágena
Ácido periódico de Schiff (PAS)Magenta: Glucógeno y moléculas ricas en carbohidratos
MICROSCOPIO ÓPTICO
Pie: Sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de iluminación.
Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones.
Tubo: Cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio.
Brazo: Une al tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el microscopio para mover de lugar.
Macrométrico: Sirve para tener un primer enfoque de la muestra al utilizarse el objetivo de menor aumento.
Micrométrico: Sirve para dar un enfoque preciso de la muestra.
Ocular: sistema de lentes más cercanos al ojo observador, situados en la parte superior (10x).
Revolver: estructura giratoria que contiene los objetivos.Objetivos: Sistema de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del tubo.
Condensador: Sistema de lentes convergentes que captan los rayos de luz y los concentra sobre la preparación.
Fuente de luz: Lámpara halógena de bajo voltaje (12V).