Download - Técnicas para Química sanguínea
( POINT )
MÉTODO ENZIMÁTICO
Blanco Standard Muestra
Reactivo 1ml 1ml 1ml
Incubar 5 - 10 min. a 37ºC
Standard 10 µl
Muestra 10 µl
Mezclar e incubar 10 min. a 37ºC y leer 505 nm.
VALORES DE REFERENCIA: 70 – 105 mg/dl
LINEARIDAD: 0 – 500 mg/dl
(BIOCYSTEMS)
MÉTODO ENZIMÁTICO
PROCEDIMIENTO: ( STAR DUST MC 15)
MUESTRA: Suero
Blanco Standard Muestra
Reactivo 500 μl 500 μl 500 μl
Incubar 5- 10 min. a 37 ºC
Agua Des. 5 µl
Standard 5 µl
Muestra 5 µl
Mezclar e incubar 5 min. a 37 ºC y leer a 500 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Suero o plasma: 70 – 105 mg %
LINEARIDAD: 0 - 500 mg% > Dil con soluc. Fis. (1+4)
( HUMAN )
METODO ENZIMATICO COLORIMÉTRICO
PROCEDIMIENTO: ( STAR DUST MC 15)
MUESTRA: Suero
Blanco Standard Muestra
Reactivo 500 μl 500 μl 500 μl
Incubar 5- 10 min. a 37 ºC
Agua Des. 5 µl
Standard 5 µl
Muestra 5 µl
Mezclar e incubar 5 min. a 37 ºC y leer a 500 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Suero o plasma: 75 – 115 mg %
LINEARIDAD: 0 - 700 mg% > Dil con soluc. Fis. (1+1)
(WIENER)
MÉTODO ENZIMÁTICO: (Uremia calorimétrico).
MUESTRA: suero /plasma
PROCEDIMIENTO:
Blanco Standard Muestra
Agua dest. II gotas II gotas II gotas
Stándard 20 µl
Muestra 20 µl
Ureasa I gota I gota I gota
Mezclar por agitación suave e incubar 5 min. a 37°C.
Reactivo 1 1 ml 1ml 1ml
Reactivo 2 1ml 1ml 1ml
Mezclar por agitación suave e incubar 5 min. a 37°C.
Agua dest.10ml 10ml 10ml
Mezclar por inversión y retirar del baño después de 10 min. Leer frente a blanco de reactivo a 540 nm.
VALORES DE REFERENCIA: suero / plasma 20 – 45 mg/dl
LINEARIDAD: 0 – 150 mg/dl
(BIOSYSTEMS)
MÉTODO COLORIMETRICO
PROCEDIMIENTO: (STAR DUST MC 15 )
MUESTRA: suero
Blanco Stándar Muestra
Reactivo1. 500 μl 500 μl 500 μl
Stándard 5 µl
Muestra 5 µl
Mezclar por agitación suave e incubar 5 min. a 37°C.
Reactivo 2 500 μl 500 μl 500 μl
Mezclar por agitación suave e incubar 5 min. a 37°C.
Leer a 600 nm.
VALORES DE REFERENCIA: suero 15 – 39 mg/dl
LINEARIDAD: 0 – 300 mg/dl > Dil con H2O destil. (1+4)
(HUMAN)
MÉTODO CINÉTICO
PREPARACIÓN:
1. Preparación de reactivo 1: En un frasco medir 1 cc de OH Na + 4 cc de agua destilada mezclar en vortex.
2. Preparación del reactivo de trabajo: Medir 500 μl de reactivo 1 y 500 μl de ácido pícrico
PROCEDIMIENTO:
Rvo. de trabajo 1ml.
Realizar la lectura del blanco con el reactivo 490 – 510 nm
Standard 100 µl
Mezclar en vortex por 10-15 min. Y leer a 490 - 510 nm.
Rvo. De Trabajo 1ml.
Muestra 100 µl
Mezclar en vortex por 10-15 min. Y leer a 490 - 510 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Mujeres 0,5 - 0,9 mg/dl
Varones 0,6 – 1,1 mg/dl
LINEARIDAD: 0 – 13 mg/dl
( POINT )
MÉTODO ENZIMÁTICO
PROCEDIMIENTO:
Blanco Standard Muestra
Reactivo 1ml 1ml 1ml
Incubar 5- 10 min. a 37 ºC
Agua Des. 25 µl
Standard 25 µl
Muestra 25 µl
Mezclar e incubar 10 min. a 37 ºC y leer a 520 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Suero o plasma: 2.5 – 7.7 mg/dl
LINEARIDAD: 0 – 20 mg/dl
PROTI 2
PROTEINAS TOTALES (WIENER)
PROCEDIMIENTO:
Blanco Standard Muestra
Rvo.EDTA/Cu 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml
Agua destilada 50 µl
Standard 50 µl
Muestra 50 µl
Mezclar con varilla e incubar a 37 ºC por 15 min. leer a 540 nm.
.
VALORES DE REFERENCIA: Proteínas totales: 6.1 -7.9 g/dl
(Wiener)
PROCEDIMIENTO:
Blanco Standard Muestra
Rvo. BCF 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml
Agua destilada 10 µl
Standard 10 µl
Muestra 10 µl
Mezclar con varilla e incubar a Tº ambiente por 10 min. leer 625 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Albúmina: 3.5 - 4.8 g/dl
Rel. Alb/Glob: 1.2 - 2.2
PREPARACIÓN DEL REACTIVO PRECIPITANTE:
En un frasco medir 2.5 ml de reactivo dextran Añadir 2.5 ml de reactivo magnesio Mezclar por inversión
PROCEDIMIENTO:
En un tubo medir 500µl de muestra Agregar 50µl de reactivo precipitante, homogeneizar por rotación o
con golpes suaves en la palma de la mano por 20 seg. Dejar 30 a 40 min en refrigerador a 4 a 10 ºC Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m.
Blanco Estándar Muestra
Rvo. Trabajo de Col.
1 ml 1 ml 1 ml
Preincubar 5 – 10 min a 37 ºC
Standard de Col. 10 µl
Sobrenadante 50 µl
Mezclar e incubar 5 min a 37 ºC y leer a 505 nm.
VALORES DE REFERENCIA: 40 – 60 mg/dl
LINEARIDAD: 0 – 500 mg/dl
(WIENER)
PROCEDIMIENTO: En un tubo medir 100 µl de muestra Agregar 50µl de reactivo precipitante, homogeneizar con movimientos
suaves por 20 seg. Dejar 15 min. en baño de agua de 20 – 25 ºC Centrifugar 15 min. a 3000 r.p.m.
Blanco Standard Muestra
Rvo. Trabajo de Col.
1 ml 1 ml 1 ml
Incubar 5 – 10 min a 37 ºC
Standard de Col. 10 µl
Sobrenadante 50 µl
Mezclar e incubar 5 min a 37 ºC y leer a 505 nm.
VALORES DE REFERENCIA: menor de 129 mg/dl
LINEARIDAD:
CALCULO MANUAL LDL:
LDL = Colesterol total – HDL- Triglicérido
5
(WIENER)
GPO /PAP
PROCEDIMIENTO:
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO: Disolver el vial con el buffer. (Según inserto)
Blanco Standard Muestra
Reactivo 1ml 1ml 1ml
Incubar 5- 10 min. a 37ºC
Standard 10 µl
Muestra 10 µl
Mezclar e incubar 5 min. a 37 ºC y leer a 505 nm.
VALORES DE REFERENCIA: menor a 150 mg/dl
LINEARIDAD: 0 - 1000 mg/dl
(WIENER)
PROCEDIMIENTO:
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO: Disolver el vial con el buffer. (Según inserto)
Blanco Standard Muestra
Reactivo 1ml 1ml 1ml
Preincubar 5 a 10 min. 37 ºC
Standard 10µl
Muestra 10µl
Mezclar e incubar 5 min. 37 ºC y leer 505 nm.
VALORES DE REFERENCIA: menor a 200 mg/dl
LINEARIDAD: 0 – 500 mg/dl
(WIENER)
PREPARACIÓN:
Sustrato: Transferir el contenido del frasco de NaFF directamente en el frasco de Buffer, mezclándolo hasta su completa disolución Rvo. De color: disolver el contenido del envase en 500ml de agua destilada y dejar a Tº ambiente en frasco ambarado y protegido de la luz.
PROCEDIMIENTO:
Blanco Standard Muestra
Sustrato 0.5ml 0.5ml 0.5ml
Incubar en baño de agua a 37 ºC unos minutos
Standard 50 µl
Muestra 50 µl
Mezclar e incubar 10 min.
Rvo. de Color 2.5ml 2.5ml 2.5ml
Mezclar cada tubo y retirar del baño y leer a 520 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Adultos: 68 – 240 UI/L Niños: 100 – 400 UL/L
LINEARIDAD: 0 – 800 UI/L
(HUMAN)
MÉTODO CINÉTICO
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO: se mide 2cc de sustrato (GOT) y se transfiere al frasco de buffer (GOT) que contiene 8 cc. Mezclar y rotular
PROCEDIMIENTO:
Rvo. de trabajo 1ml.
Realizar la lectura del blanco con el reactivo 340 nm
Muestra 100 µl
Mezclar y leer a 340nm.
VALORES DE REFERENCIA: Varones 0 – 37 U/L Mujeres 0 – 31 U/L
LINEARIDAD: 0 – 350 U/L Diluir con soluc. Fis. ( 1+9 )
(TECO DIAGNOSTICS)
METODO CINÉTICO
PROCEDIMIENTO: ( STAR DUST MC 15)
MUESTRA: suero
Reconstituir el reactivo.
Blanco Muestra
Reactivo GOT 500 μl 500 μl
Incubar 5 min. a 37ºC
Muestra 50 µl
Mezclar y leer a 340 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Suero hasta 40 UI/ L
LINEARIDAD: 0 – 500 UI/L
(HUMAN)
MÉTODO CINÉTICO
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRAJAJO: se mide 2cc de sustrato (GPT) y se transfiere al frasco de buffer (GPT) que contiene 8 cc. Mezclar y rotular
PROCEDIMIENTO:
Rvo. de trabajo 1ml.
Realizar la lectura del blanco con el reactivo 340 nm
Muestra 100 µl
Mezclar y leer a 340nm.
VALORES DE REFERENCIA: Varones 42 U/L
Mujeres 32 U/L
LINEARIDAD: 0 – 350 UI/L > Diluir con soluc. Fis. (1+9 )
(TECO DIAGNOSTICS)
METODO CINÉTICO
PROCEDIMIENTO: ( STAR DUST MC 15)
MUESTRA: suero
Reconstituir el reactivo.
Blanco Muestra
Reactivo GPT 500 μl 500 μl
Incubar 5 min. a 37 ºC
Muestra 50 µl
Mezclar y leer a 340 nm.
VALORES DE REFERENCIA: suero hasta 38 UI/ L
LINEARIDAD: 0 – 500 UI/L
(WIENER)
BILIRRUBINA COLORIMETRICO:
Muestra: Suero, plasma heparinizado no hemolizado o liquido amniótico (proteger de luz natural o artificial).
INSTTRUCCIONES: Desarrollador listo para usar. Reactivo Sulfanilico listo para usarAmbos estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada. Diazoreactivo mezclar una parte de nitrito de sodio mas 21 partes de reactivo sulfanilico.Estable en frasco de vidrio color caramelo de 2 – 10 ºC 3 meses a partir de la fecha de su preparación.
SUEROS ICTERICOS:
De acuerdo a la severidad de la ictericia: Para una ictericia moderada se uso 50 µl de suero y multiplicar el resultado obtenido por
3.79. Para una ictericia intensa se requiere solo 20 µl de suero y multiplicar el resultado por 9.38.
Blanco Directa Total
Muestra (suero) 200 µl 200 µl 200 µl
Agua destilada 2.5 ml 2.5ml
Desarrollador 2.5 ml
R. sulfanilico 200 µl
Diazoreactivo 200 µl 200 µl
Mezclar de inmediato cada tubo por inversión, antes de los 5 minutos se realiza la lectura del blanco a 530 nm. Las lecturas pueden efectuarse entre 5 – 15 min., EXCEPTO para la bilirrubina directa que deben leerse a los 5 min. Exactos.VALORES DE REFERENCIA
Suero / plasma adultos: Total hasta 1.0 mg/dl Directa hasta 0.2 mg/dlSuero/ plasma recién nacidos a termino: Total hasta las 24 hrs = 6.0 mg/dl Hasta las 48 hrs. = 7.5 mg/dl Del 3º al 5º dia = 12.0 mg/dlSuero / plasma recién nacidos prematuros: Total hasta las 24 hrs = 8.0 mg/dl Hasta las 48 hrs = 12.0 mg/dl Del 3º al 5º dia = 24.0 mg/dl
Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del adulto al mes de nacimiento. En los prematuros, los niveles de bilirrubina tardan mas en alcanzar la normalidad, dependiendo del grado de inmadurez hepática.
(TECO DIAGNOSTICS)
METODO CINÉTICO
PROCEDIMIENTO: ( STAR DUST MC 15) MUESTRA: suero
Blanco Muestra
Reactivo 500 μl 500 μl
Incubar 5 min. a 37ºC
Muestra 12,5 µl
Mezclar y leer a 405 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Suero hasta 96 UI/ L
LINEARIDAD: 0 – 1500 UI/L
RPR TEST:El reactivo se conserva de 2 – 8˚C. no congelar. Proteger de la luz.Muestra: suero o plasma
PROCEDIMIENTO:
En una placa de fondo blanco colocar: (50 µl de suero o plasma).
Extender el suero sobre toda la superficie del círculo. Agitar el reactivo antes de usar para lograr una completa homogeneización.Dejar caer las primeras tres gotas para eliminar el aire de la aguja en un extremo de la cartilla Poner la gota del antigeno no mezclar, luego absorber las gotas eliminadas antes del procedimiento.Inmediatamente agitar durante 8 minutos lentamente en un rotador automático a 100 r.p.m.
INTERPRETACION: No reactivo: suspensión homogénea, sin floculación Reactivo: floculación gruesa en el centro y en la superficie del círculo,
entonces realizar prueba cuantitativa.
PRUEBA CUANTITATIVA:
Realizar diluciones de la muestra con solución salina (0.9%) (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.)Muestras reactivas calificar por diluciones.
Nota: cuando la dilución es mayor a 1/16 se recomienda preparar una dilución en tubo. Que se realiza colocando 150 µl de Soluc fisiológica y 10µl de suero del paciente
(HUMAN)
CRP:
Prueba rápida para determinación de proteína C reactiva en suero.El reactivo se conserva hasta su fecha de vencimiento cuando se mantiene entre 2 – 8 ºC. Proteger de la luz. Agitar el reactivo antes de usar para lograr una completa homogeneización.
MUESTRA: suero
En una placa de fondo negro colocar:
Extender el fluido sobre toda la superficie, mezclar inmediatamente durante 2 minutos lentamente en un rotador automático a 100 r.p.m o manual.INTERPRETACION:
Negativo: suspensión homogénea. Positivo: aglutinación que aparece dentro los 2 minutos entonces
realizar la prueba semi-cuantitativa.
PRUEBA SEMI CUANTITATIVA:
Realizar diluciones de la muestra con solución salina (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.)Para la concentración se multiplica la última dilución positiva por el factor de conversión 6 y reportar el resultado en mg/dl.
VALORES DE REFERENCIA: Menor a 6 mg/dl
(WIENER)
PROCEDIMIENTO:
40 μl de muestra + I gota reactivo PCR
PREPARACION DE ERITROCITOS:
- Lavar los glóbulos rojos O Rh (+) 3 veces con solución fisiológica a 3000 rpm, los 2 primeros por 5 minutos y el último a 15 minutos.- En el sobrenadante no debe aparecer hemólisis- Con los eritrocitos lavados una vez descartado el sobrenadante preparar una suspensión del 3 al 5 % con buffer PH 6.5 (según inserto del kit).
ESTREPTOLISINA – O:
Disolver cada vial con el volumen de Buffer indicado en el rotulo mezclando por inversión hasta su disolución completa
PREPARAR DILUCIONES: En 3 tubos
1:10 = 0.2 ml de suero + 1.8 ml Buffer 1:100 = 0.5 ml de dilución (1:10) + 4.5 ml Buffer 1:500 = 1 ml de dilución (1:100 )+ 4 ml Buffer
Dilución del suero 1:10 1:100 1:500 controles
Tubo nº 1 3 5 7 9 12- 13+
Suero diluido (ml) 0.2 0.8 0.4 1 0.6 - -Buffer ml 0.8 0.2 0.6 - 0.4 1.5 1
EstreptolisinaO (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 - 0.5
Mezclar y mantener a baño Maria a 37 ºC por 15 min.
Eritrocitos 3 – 5% (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 - 0.5
Mezclar agitando ligeramente y mantener en baño Maria a 37ºC durante 15 min. Agitar nuevamente y continuar en baño Maria 30 min. Posteriormente centrifugar 3 min. a 1500 rpm y leer
Unidades Todd /ml 50 125 250 500 833 (-) (+)
Se expresa mediante la inversa de la mayor dilución en la cual se observa hemólisis
VALORES DE REFERENCIA: 0-200 Unidades Todd/ml
LATEX FR- HUMAN
El reactivo se conserva de 2 a 8 ºC. No congelar, proteger de la luz.
MUESTRA: Suero, no utilizar plasma ni sueros bemolizados ni lipémicos.
Agitar el reactivo antes de usar para lograr una completa homogeneización.
En la placa de fondo claro colocar:
Extender el fluido sobre toda la superficie, mezclar inmediatamente durante 2 minutos lentamente en un rotador automático a 100 r.p.m o manual.
INTERPRETACION:
Negativo: suspensión homogénea. Positivo: aglutinación que aparece dentro los dos minutos entonces
realizar la prueba semi-cuantitativa.
PRUEBA SEMI CUANTITATIVA:
Realizar diluciones de la muestra con solución salina (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.)Para la concentración se multiplica la última dilución positiva por 12.
VALORES DE REFERENCIA: Menor a 12 mg/dl
PROTI U/LCR (WIENER)
40 µl de muestra + I gota reactivo látex
PROCEDIMIENTO:
Orina de 24 hrs. medir el volumen, tomar una muestra representativa. Centrifugar por 5 min. a 2000 r.p.m. (en caso de orinas turbias u
opalescentes)
Blanco Standard Muestra
Rvo. Rojo Pirogalol 1ml 1ml 1ml
Incubar 5 – 10 min. a 37 ºC
Standard 20 μl
Muestra 20 μl
Mezclar e incubar durante 10 min. a 37 ºC y leer a 600 nm.
Para obtener el resultado multiplicar la lectura obtenida por el volumen en litros
Lectura x Vol. L
VALORES DE REFERENCIA: Orina 24 hrs. 30-140 mg / 24hrs. Ocasional: 25 mg / dl
Nota. Mujeres embarazadas V R = 30-160 mg /24 hrs.
LINEARIDAD: 150 mg/dl
(WIENER)
MÉTODO CINÉTICO
PROCEDIMIENTO: (STAR FAX)
Preparación del reactivo de trabajo: Se mide 200 ml de sustrato (Fosfatasa Alcalina) y se transfiere al frasco de buffer (Fosfatasa Alcalina) que contiene 800 ml mezclar y rotular.
PROCEDIMIENTO:
Reactivo de trabajo 1 ml
Preincubar 5 min. Realizar la lectura del blanco con el reactivo a 405 nm
muestra 10 ul
Mezclar 10 a 15 seg. En vortex y leer a 405 nm.
VALORES DE REFERENCIA: Adultos: 65 – 300 UI /L
Niños: Hasta 645 UI /L
LINEARIDAD: 0 – 1500 UI /L