Download - Teknik Analisis Berbagai Vitamin
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
1/33
Teknik Analisis Berbagai
Vitamin
Anton Apriyantono
Universitas Bakrie
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
2/33
Analisis Vitamin
• Secara umum ada dua golongan vitamin:vitamin larut lemak (Vit A, D, E dan ! danvitamin larut air (Vit ", Vit B#, B$, %iasin, B&,
'olat dan Asam'olat, B#$, Biotin, Asamantotenat!
• ili)an metode analisis sangat bervariasi,dari yang klasik sampai yang moderen dan
canggi)• ili)an tergantung pada ketersediaan alat, *enis ba)an, SD+, biaya analisis, ketepatan,ketelitian dan kecepatan
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
3/33
Vitamin A
• +etode analisis: kolorimetrik klasik,spektrootometrik, -uorometrik,kromatogra.kolom, T/"0
• Sekarang banyak menggunakan /",kadang$ digabung dg +S, terutama utkretinoid dan karotenoid (terutama dgberkembangnya reverse1p)ase column "23!
• 4egulatory and )andbook met)od:kebanyakan spektrootometrik dan /"
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
4/33
• US )armacopeia ($33&!:
– 4etinol: Vitamin A in oil1soluble menggunakan/"
– Vitamin A in oil1 and 5ater soluble vitaminmenggunakan /", retinol 2$6 nm
• A7A" ($336! – 4etinol: vitamin A in margarine menggunakan
spektrootometrik
–
4etinol: vitamin A in milk1based inantormula menggunakan /" 283 nm
– 4etinylpalmitate in orti.ed -uid milkmenggunakan /" 2$6 nm
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
5/33
• AA"" ($333! – 4etinol: vitamin A in enric)ed -our (ree
o carotene!, "arr1rice met)od,kolorimetrik &$3 nm
•
European "ommittee orstandarisation ($333! – All trans1retinol, #21cis1retinol in ood:
saponi.kasi, normal p)ase /",
spektrootometrik 2$6 nm, -uorometrik,eksitasi 2$6 nm, emisi 896 nm
• engembangan baru: /",
terutama /"1+S
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
6/33
• +etode kolorimetrik "arr1rice
didasarkan pada pembentukankompleks biru )asil reaksi antaraantimonitriklorida atau T'A dengan
retinol dalam kloroorm, 5arna diukurpada &$3 nm
• Suda) )arus diganti dengan metode
/"• +etode "arr1rice kurang spesi.sitas,
5arna yg terbentuk tidak stabil, )rssegera diukur, penggunaan pereaksi
korosi dan karsino enik
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
7/33
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
8/33
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
9/33
Vitamin E
• +etode analisis: spektrootometrik,kolorimetrik dan kromatogra.k
• Spektrootometrik: UV, -uorometrik
• romatogra.k: kromatogra. kolom,;", /"
• erkembangan baru: /", /"1+S
• 4egulatory and )andbook met)od: – A7A"
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
10/33
– Alp)a1tocop)erol, alp)a1tocop)erylacetate in oods and eeds: colorimtericmet)od 628 nm
– Vitamin E activity (all1rac1=1tocop)erol!in milk1based inant ormula: /" $>3
nm• European committee or
standardisation –
4441tocop)erol in ood: /" 5it)-uorescence detector, eksitasi $?6 nm,emisi 223 nm
• A7"S – 4441tocop)erols and 4441tocotrienol in
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
11/33
• erkembangan baru: – +enggunakan ;" dengan kolom kapiler
spt SB1@, pan*ang 23 m, melibatkansaponi.kasi ekstrak lipid, perlakuan
ekstrak dg diaomet)ane untukmenguba) asam lemak men*adi metilasam lemakC dan silanisasi (men*aditurunan T+S!
– +enggunakan ;"1+S untuk turunan T+S dari tocop)erol dan tocotrienol
– /": kolom "#>, deteksi pd $68 nm
–
/"1+S+S, lebi) cepat dan lebi) sensiti
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
12/33
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
13/33
Vitamin
• +enggunakan ;" '
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
14/33
Vitamin "
• +etode analisis: titrimetri,spektrootometrik, -uorometrik,kromatogra. (/" dan "E, capillary
electrop)oresis!• 4egulatory and andbook +et)od:
– US )armacopeia dan Britis) )ramacopeia• pada vitamin, armasi: titrasi dg D"
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
15/33
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
16/33
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
17/33
• erkembangan baru: Analisis Vitamin
" menggunakan "apillaryElectrop)oresis, "E – Untuk produk armasi dan untuk bua)
dan sayuran – Teknik yang diterapkan "GE dan +E""
– +asing1masing teknik penggunaannyaluas, cepat, lebi) e.sien, relati lebi)mura) dari teknik tradisional(operasionalnya!
– Bisa melakukan multianalisis
– elema)an: kurang sensiti
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
18/33
Vitamin B# (Tiamin!
• +etode analisis umumnya secara:
– -uorometrik (t)ioc)rome -uorescence, eksitasi2&6 nm, emisi 826 nm! dan
–
/" (derivatisasi pra atau pasca kolom, eksitasi2&& nm, emisi 8$3 nm!, ada *uga /" dengandetektor UV pada $>6 atau $68 nm
• 4egulatory and )andbook met)od untuk
ba)an pangan umumnya t)ioc)rome-uorescene atau /" dg detektor -uoresens,derivatisasi pra atau pasca kolom
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
19/33
• Ta)apan analisis (A7A"!: )idrolisis
asam, )idrolisis enim, etract cleanup, pembentukan tiokrom,pengukuran
•+etode a5al: secara mikrobiologidengan menggunakan bakteri L.viridescens, S. cerevisiae, L.
fermenti, Ochramonas malhamensis• engembangan baru: menggunakan
/", "E dan '
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
20/33
Vitamin B$ (4ibo-avin!
• +etode analisis berdasarkanregulatory and )andbook met)od: – 'luorometrik
– +ikrobiologi
– /"
– Spektrootometrik
• Direct -uorometry: pengukuran-uoresensi ribo-avin (A7A"!
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
21/33
•
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
22/33
%iasin
• enentuan secara kolorimetrik dan assaymikrobilogis masi) yg utama
• /" ms) mengalami kendala sensiti.tas danselekti.tas
• engembangan baru: "E dan /"1+S
• enentuan secara kolorimetri didasarkan padareaksi onig dimana asam nikotinat dannikotinamida bereaksi dengan sianogen bromidameng)asilkan senya5a piridinium, melaluirearrangement yg couple dg amin aromatikmembentuk senya5a ber5arna, Hma 82& nm
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
23/33
• Assay mikrobiologi
– +enggunakan bakteri L. plantarum danL. mesenteroides, *uga protooaTetrahymena thermophila
•
"E digunakan utk analisis niasin dlmba)an biologis, makanan danminuman
• /"1+S mampu mendeteksi niasin danmetabolitnya
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
24/33
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
25/33
Vitamin B&
• +asi) ditetapkan utamanya utk pangansecara mikrobiologi (A7A"!
• +etode lain: -uorometrik (A7A"! dan /"
(ini yg paling disukai• Assay mikrobiologi
– +enggunakan: Saccharomyces carlsbergensis,Streptococcus faecalis, Lactobacillus helviticus
– +asing1masing memiliki masala)nyatersendiri
• engembangan baru: elektrokimia dan "E
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
26/33
'olat dan Asam 'olat
• +etode analisis olat dan asam olat dalam ba)anpangan yaitu assay mikrobiologis (A7A", AA""!,pada armasi kebanyakan dengan /"
• /"1+S paling akurat dalam menentukan pro.l
olat dalam sampel biologis• Assay mikrobiologi menggunakan: L. casei ssp.
Rhamnosus AT"" %o 98&?, Enterococcus hiraeAT"" no >382, Pediococcus acidilactici AT"" %o
>3>#• /ebi) optimal dlm ekstraksi digunakan enim (=1
amilase danatau protease, *uga pancreascon*ugase!
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
27/33
Vitamin B#$
• Analisis vit B#$ dalam milk1based inantormula dan vitamin preparation dilakukansecara mikrobiologis (A7A"!, pada armasi
dengan /" dan spektrootometrik• +etode A7A" 230
• engembangan baru: metodec)emiluminescense, "E, /"1+S
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
28/33
Asam antotenat
• Dalam vitamin preparation dan milk1based inant ormula ditentukan secaramikrobiologis (A7A"!, pada armasi
secara mikrobiologis dan /"• Ig paling banyak digunakan L. plantarum AT"" >3#80
• Dikembangkan pula radioimunoasay(4
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
29/33
• engembangan baru: "E, ;"1+S dan
/"1+S• "E mampu menentukan & vitamin
larut air dalam sot drink, *uga
mampu memisa)kan enansiomerasam pantotenat
• /" terkendala ole) sensiti.tas
detektor UV pd $23 nm, dapat diatasidengan adanya detektor +S
• Dengan /"1+S 5aktu analisis lb)
singkat, lb) seder)ana dan )asil
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
30/33
+etode +ultianalat
• ebanyakan dilakukan denganmenggunakan /" dan "E
• Vitamin A dan vitamin E
• Vitamin A dan D
• "ampuran vitamin B (B#, B$, B&!
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
31/33
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
32/33
-
8/16/2019 Teknik Analisis Berbagai Vitamin
33/33