Download - Tinción de gram
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Tinción de Gram
Instituto Politecnico NacionalEscuela Nacional de Ciencias
Lab. De Microbiología General Gpo: 3QM1Eq: 2Lab: 4
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Introducción La tinción de Gram
o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938).
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Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.
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Tinción de Gram Es una tinción
diferencial . Según el resultado
pueden ser Gram + y Gram -. Debido a la estructura de la pared celular
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Pared celular de la Gram (+)
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Pared Celular Gram (-)
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Bacillus subtilis y Escherichia coli
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Objetivo Realizar la técnica de coloración de
Gram con especies bacterianas conocidas.
Observar el efecto de algunas variaciones en la técnica de coloración.
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Microorganismos Utilizados Bacillus megaterium. Escherichia coli. Staphylococcus aureus.
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Tinción de Gram Hacer el frotis
de cada bacteria y fijar
con calor
Colocar el frotis de manera
vertical y dejar caer las gotas de alcohol-acetona hasta que dejen de caer hilos de
colorante
Lavar con agua y dejar secar al aire
Cubrirlos con cristal violeta y dejar por 1 min. Lavar con agua
Cubrir con Lugol y dejar
por 1 min. Lavar con
agua
Lavar inmediatamente
al chorro de agua y cubrir con safranina
por 1min.
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Influencia de la edad de los cultivos bacterianos
De cada cultivo bacteriano (96 horas) realizar un frotis y fijar al calor
Teñir frotis con la técnica de tinción de Gram
Realizar observaciones y
concluir
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Técnica de Gram por pasos.
Realizar cuatro frotis
con la mezcla de E. coli y B. megaterium y
fijarlos al calor.
Iniciar la tinción de Gram y separar un frotis después de cada uno de los pasos de la técnica.
1) Cristal violeta2) C.V.+lugol
3) C.V.+ Decoloración
4) Tinción completa
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Influencia del tiempo de decoloración en la técnica de Gram.
Hacer dos frotis con una mezcla de E. coli y B. subtilis
Teñir los frotis con la técnica de Gram dejando actuar el alcohol-acetona tres segundos en uno y tres minutos en el otro.
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Colorantes Cristal violeta Lugol
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Safranina
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Resultados obtenidos 1. Tinción de Gram
Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo NegativoBacillus megaterium Staphylococcus aureus Escherichia coli
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Tinción de Gram
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Influencia de la edad sobre los cultivo bacterianos
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Técnica de Gram por pasos
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Influencia del tiempo de decoloración en la técnica de Gram.
3 segundos 3 minutos
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Conclusiones Esta tinción nos permite dividir a los
microorganismos en dos grandes grupos y nos ayuda a:
Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo diferenciar varios tipos morfológicos. Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana, tales como paredes celulares, vacuolas o cuerpos celulares.
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Bibliografia Brock “Biología de los
microorganismos”10ª Ed. M.T. Madigan J. Martinko 2003
http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.mx/p/tincion-de-gram_20.html
Microbiología y parasitología medica 2ª Ed. Pumarola-torres J.A. Garcia R. 1995