Transcript
Page 1: Voltage-induced release of nucleic acids from palaeontological samples

���������� �� ������� �� � �� � �� ��������������� �� �������

���� �� ��� ������� �� ��� ���� �� ������ ��� ��� ��������������� ���������� ������������� ��� ���� �� ���� ����������� ��� ����� ���� ������ ������������ � ������������� ������! �� � ����� ��� ���� ������ �� ��� �"������ �������� ���� ����� ���� �� ����� ������������ ��� �� ��#�� ������ ������ ��� ���� �������� $��� �����%�� �� ��� ����� ���� ���� ������� �� #��� �������&�� ������ ������������ �������� ������������� ��� � ��� ������ $�� �������������� ���� �� '() �� $�� ����*���� �� ��� �������������� ������ ������ #����������� * ��� �������� ��� ���� �� ���� +����������� �� ��� ����� ���� ���������, �������, ��� ������, ��� ���� * ������ ��� ������������ �� ��� ��������� ��-�� �� ����� �������� ./ ��� .0� 1� ����� �������������� ������ �� ���%����� ���� ������*���� ������� ��� �"����� ����� ��� �������������������� #�� ��� �������� �� ��� �������������, #��� �� *� ����*���� �� ��� ��������� ������ �� ��� ����*�����

��������� ����� ��� ����&����� 2 ������ ��� 2 ��� �"������ 2 3����������� 2 �������

������� 3+ 400/

���� �� ����

� ���� � �����

����� �����������

� !����"

#����� �$ %�� ��

.���&-� +�*���� ��������� 5 �������� ���3��������, $�� 6����������, ������, 7+, 85�97�������� �� ����� ���������� , ��������� �������*����� , 8������� �� $:*�����, ;���� 4������� ;������+�*���� , 8������� 3 �<������� 77, 8������� ��$:*�����, $:*�����,;���� =������� ������������7�������� �� ����������, <����#+�*�������, 5�����,5�� , 8>

� ����� ��

7� ��� *��� ���#� ���� ������ ���������� �� ������ ����� ��� ���� ������� ���� �����*�� ��������� �� ����������� �� � ���� ����� �� ����� $#� ��?� ��*���� ����#��� #�-��� �� ������ ��� ������@ ��� ���� �� �������� ������� ��� �������, ��� ���� ��� ���������� �������� ���� ���� *� ������� �� ��� ������ $�� �����"������ ������ �� ���� �� ���� ����"�� 7� ��� ��������&� ��� ��- �� ������������ ��� ������ #��� ��������� ���, �� ������� �"������ ������ �� ���������� ������� �� ��# ����� ��� ������� �� �����*����� �� ������ *� �����

$�� ��?��� �� ������� ���� �� ��� ���� �� ������� ��������������� ������� �� %���� ������ A.(.BC� �� ���� ���� �"������ ������ �� *� ������� ���� ��"������� ������D ��� �������2��������� �� ��� ������2������� ���, ���� ������&����� �� ��� ����� ������, ����� ���� � ��� ���� �� ������ ��� ����, ���� ���������� ����� � ����, ��� ���������� �� ��� ��� �������, ������� ����� ���������� ������� �� ����� ��������

��������� ���� ����� ������ ��*��%���� �����%��� ����� ���� 1���� ����� ��� ��� ���� �� %��- �.(9 ��, ����������� ���� �� �������*� ��� ��������������9(= �� ��� $��� �� �������� ��� �� ��� ��� � �������� �����

1� ������� �������������� ������ � 7�� �� � ���������� �� ��� ��������� �� ����, �� #��� ����� �����(������ �������� ��*������ ������� �� ������ * �� ��������������*���� ������� $�� ����� ��������� ������������ 7�, �������� ����� �� ��� ��� ��-�� ����"������� '() �� 7� �����&�� ��� ��*���� �� ����� ����#����� � ��� ������� ����", ���� ������ ��� �� *������������ �� ��� � ���� ������� $�� ������2*��� ��#��� �� ������ ���� ��� ����� �� � ��� ������� ���, ������ * � ������� ��������, ��� ���� �������������5�*��%����� , ��� ��� �� ������ * ��� �"������,����������, ��� ��������� ���� �� ��������� *���� ������� ���� ��� ��� �� ��*������ � ����

� ������� �� �������

�$� ������� �� ������ ��� ����

$�� ������ *��� ������� ��� ���� ��������� ������������� �� ��� ��� ����"������ '9BB *���� �������E�� �� ��� ���� .)�� ���� #�� ���� �� ��� ���� ����$�*�� .�� 5������ #�� ������� ���� ������ ���������� �� � ������ ���# �*���� �� � ��*���� �������� ������ #�-� E����� ��� �%������� �����, ������������� �%�������� #�� #����� #��� 'F ������ � ������

#��������� �� �� +��& E������, ���&-� +�*���� ��������� 5 �������� ��� 3��������, $�� 6���� ������, .=BB5���� +�-� 5��� ����, ������, 7+ )B)B'�9=G), 85�&����� *������H������������'�(� I4.9�))'�//'=

)**��+����� ),, ���� ������D �,-), ������ ���D �%,*���� ������DD � ., �������������� ������

.=00 ���������� � 9BBB, ��, .=00(.=G9

J 17+3K� �< ���� ;�*<, )G='. 1�������, 9BBB B./4�B04'2BB2B0B0�.=00 L./�'BI�'B2B

Page 2: Voltage-induced release of nucleic acids from palaeontological samples

���� 5������ ���������, ��� �� ��� ��� �� ������� �������� ���� ��� 8 ��������� �.) �� ��������� ��� ������*�����, #�� ��-�� �� ��� �� ����� ������������ #������� ����� ��� ����� *��� �������� A/, 0C� E������� �� ��� �"������ #�� �������� #��� � ���� ������E� 5���, >�����*�� ��� ����, E�*���, ;���� ����� #�� �%������ #��� � ������� ��������� ��� �M����������, 8������" G.9�36�� 8���� � ����� ��� �M����������, )04BD ������� ���� �� ������ ������� #��� 4��� � ������ ������� ����"������ 9(4 �� #�� ��������� ��� ����� �� ��� ������ �������� �� ��� �� ���������������� ��� ��� ���� ����� �� ��� ����� 5������� #�� ���� ��������� ����� ���� � ���� ��#��#��� � ��*����� ���� ��� ������ ����� ������ 5��� ������������� #�� �"����� ��� ��� ������� #��� ������������� ��� ��*��%����� �������� ���� ��%��� ��������� ������ ������&������

�$� )�� � � �� ������

$�� ��� �� ����� ��� ����&����� �� ������ ��������, ������� ����� ��� ������ �+��� �� ��� ������� #��������� �� �������� ��� ������� ��� ������������ ����� ������ #��� ����������� ��� A..C� M�� �� �� ����������&�� ������ #�� � ��� &�� ��� ����� ������������#��� <����� ��� 5���� A.9C� ���� ������ �� �"�������������� ��� ����, ��� ����� ��� ���������� #����������� �� 9B �+ ������� ��� ���� &�� * �����������

��� ���������� �5 �� � �������� �� ������ $������ ��� .=B, .09 ��� .') ���������� �� ���, +��, ������, ��������� , #�� �������� ��������� �

�$� !�� ��� ����������

1� ����� �� � ��# ����5�*$� ��� ��� �E������, ��������, ��, 85�� ������������ ���*� ���� �� , .B �/ �� ���� ��� ��� *��� ���� �� ��� �"�������� ��������� � $�� ���*� #�� ������ ������ #��� ����#� �������� E���������, 5�� �����, ��, 85��D ��*���%���� 8 ���������� �� 9 � *��#��� �"�������� ������� �� ��� ���2� ������ � ��* #��� � ����� ��&� �� '� .B � 9 �� #�� ������� �� ����# � ������� ������ ���*��� 'B �+ �� ��� ����� . � $���*�����3�$� �$E3����� #�� ��� ����� 5�������$� �;�*� E�+ +��� $�����������, ;������*��, ��, 85��, � ��� ����" ���������� ��������� ����� ���*���������� ��� ���������5������8N ��� �� ������*�� ������������ ������ ����������� * ��� ��-��� ���� �� � 9F #2� ��� ����"#�� ����, �� �� ������� ���� ��������� �� ��� ��������� �� 'B('BB *�� 3������� *����� �.BB ��2�+� #������� �� ��� ��� ��� �� ������� � . � $E;3 *�����0G �� $��, 0G �� *� ���, '�/9 �2+ �� ���, ��� 9�'�� 3�$�D �< 0�B� #�� ���� �� ��� ������ *����� ����� ������������ " ���� ����2*��������� *��� #������� �� �� ���� ���� *�� ��� ����� �� ��� ������� ������� ���-��� ��� ����� ��������� �� ����� � .�' �

���������� � 9BBB, ��, .=00(.=G9 ������������� ������ �� ����� ���� .=0G

/�*�� �$ 5����� ���*�, ����, ��� ��� �� ��� ������� ���� �� ���������� �� 7�

�� 5��� 5����� ��� ������� ������� 5$� ��-���� ��� ��� +�� ��� �./5G90 �.05'/ �.05/B �.05'95������ )/(GG *� 00(..9 *� .BG(.9/ *� ..=(.4B *�

7� 5*� 7� 5*� 7� 5*� 7� 5*�

O. 1�*��, ;���� E��� P' 9BB E� B�BB= B�BB9 B�B4' I I I I I ( I (O9 1�*��, ;���� E��� P' 9BB E� B�BB' B�BB9 B�B40 I I I I I ( I (O4 1�*��, ;���� E��� P' 9BB E� B�BB= B�BB4 B�B=/ I I I I I I ( (O= 1�*��, ;���� E��� P' 9BB E� B�BB4 B�BB9 B�B4. I I I I I I I (O' 1�*��, ;���� E��� P' 9BB E� B�BB4 B�BB9 B�B4G I I I I I I I IO) ��*�����, ;���� E��� P9 4BB E� B�BB9 B�BB9 B�B'B I I I I I ( I (O/ ��*�����, ;���� E��� P9 4BB E� B�BB9 B�BB4 B�B=G I I I I I I I (O0 ��������, ;���� E��� =4B('=B �� B�BB. B�BB. B�B== I I I I I ( I (OG ��������, ;���� E��� =4B('=B �� B�BB9 B�BB9 B�B=B I I I I I ( ( (O.B ��������, ;���� E��� =4B('=B �� B�BB/ B�BB= B�B'9 I I I I I I I (O.. 5��� ����, 1��� ��"�� ����� .=�� ���� B�BB4 B�BB= B�B'B I I I I I ( I (O.9 ����, ��� ����� .'�� ���� B�BB' B�BB= B�B4G I I I I I ( I (O.4 ���������, ;���� ����� .)�� ���� B�BB. B�BB. B�B40 I I I I I I I (���, ����� ���� E��� 9 ��� B�BB9 B�BB. B�BB0

����, ��� ��������� 7�, 7� ������5*�, ������*���� ������$�� ������ ������� ����� �� ���� +������������ �� ��� ����� ���� ���, +�� ��� ��� �� ���#�� $�� �������� ������������� �� ��������� 5$� ��-�� ��� ��� �"����� * ����� 7� � � ������*���� ������ �� ������� * I�

-�

��

��

Page 3: Voltage-induced release of nucleic acids from palaeontological samples

����������� *���� #�� ������ * ��*����� .' �+ ��'BF #2� �� ��� �������� ������ .'F�, /�' �+ �� � 9BF#2� 5�5 ���- �������� ������ 4FD ������������ �����,��� 9�' �+ �� � . � $���<�� ��������, �< /�' ������'B ���� ������������� ��$$D .'B ��� #�� ����� ?��� ����� ���� ;���������� *���� ��-��� �$$ �� *� ����� ����� ���������� 6�� �+ �� ����������� �������� #��������� �� ��� ����, ��� ��� ��� #�� ���� �� .' ��� ��9 2� ��� �� ������ ������� �� ����# �� ��� �%����*������ �� ��� 5�������$� ����" ��"� �� ��� ������

�$" � .

� ��"���� �� 9'(4B �� �� ��� ������ #�� ������ ������� *����� �� � #��� ����� � ������������ M�� ���� #�� �������� *��#��� �������� �� �%��� ������ �P9' �+� ��.�'����� ������� *���� #�� ����� �� ��� ����, ����������� ���� ������ ���� �������, ��� ��"��� #�� ����� ����� #��� � ������ ���� ���� $�� ������������ #���� �� / 2�� ���� ��� � � ���� ��� ����� ���� ��� ���,��� #�� �������&�� �� � �����#��� �4B= ��� 8 ���������������� �E�����, ����������, ;���� �� $�� ���#�� %��-� ������ ��� ��� ��� �����#��� ��� ������%�� �� ���� A.4C, �� �������� ������*�� ���� ������� �� ��� ��������� �� ��� ���� �� 7�������� ��� ����� *����� �� ��� ����� ���������� �����-��� �� ����� 6� �������� ���� �� ���� %����� ����, ��� ��� �"������ �������� #�� ������ * <9M�

�$0 �� ��*���� �(��� �� �� �,-)

6� ��������, ���� #�� �"����� ������ �� ��������� �� <Q�� ��� �RR*� A4C, #��� #� ��� �� ��� ����� �������*���� ������!� E��� ��#�� �B�' �� �� ������� . �+ �� �"������ *���� ��������� �� .B � ��������������� �����, B�. � $���<��, �< )�=, B�B9 � 3�$�, �< 0�B,��� .�4F $���� S�.BB ��� ��*��%����� ���*���� �������� ���� �� �� ������ �� � �� )B��� 'BB �+ �� ������������� ������ ���� ������������ �� ' ��� ��'BBB �� �� ����� �� 'BB �+ �"������ *���� ��� =B �+����� ����������� 6����#��� ���*����� �� .B ��� �� ������������, ��� ����� �� #����� �#�� #��� .B � ������������ ���� �����, B�. � $���<��, �< )�=, ��� �#�� #���/BF �������� ���� � ��� ��� ������, ��� ��� �� ������#��� #��� ��� ����� �� (9B���

�$1 %#. �(�������

6�� ���� ������ ������ �5$��� �� ��� ����� ����������� ��./5G90, )/(GG *�D �.05'/, 00(..9 *�D�.05/B, .BG(.9/ *�D ��� �.05'9, ..=(.4B *�� #����������� * ��� ������ �� ��� ���������T� ���������� ��E7 ��75� +��-��� ������� 5��, ������ 94 ��� 9=D�3 E��� �����, 6���� ��� , ��, 85��� $� ������ ���

���������� ��������� ��� ������, �#� *���- �"�������� ��� ��� �� ������*���� �"������� � ��� ����� ����� ���� ���� ��� ��� �� 7�� ��� ��� #��� ����� #����*?���� �� ��� ���� �����

�$2 /���� ��� �� ������ �� %#. �*����

$�� ������� ��� ����� �� ������ ��� ��� 5$�� �����.B �� �������� ����� ��� �� � �������� #�� ������������ #��� . �+ ���� �"����� �����#��� ����� ��� 7� ������ � ��� ������*���� ������ A4C� 5�*���%����� , ��� ������������ ������� �� ��� ������� #�������� �� ���� �� � ������ #������ ���������� ���� * ������ ��������� �� ��� �������� �������� �� � .' �+ ���%����� � 9�BF ������ ���� 7� ��� ���� �� #��� �� ������������� �� ��� 5$� ��-�� #�� �*�����, ��� ��������� �������*���� #�� ������� * ����� �������� ����� ���� �����& �� ������ ���� *� �������

� .������ �� �� ����

������ �� ����� �� ��� A..C ��� �"���� �� ����&����� �������� ���, ������� ��� ������ �� ���� ����� �������� #����� ����������� ��� ������� �� �������������� 7� ���� #��� ��� �2+ ���� �� ������ ��� ������� �"��� 0B � .B(4 �� �� ��-�� ���� ��� �� *� �"�������� � ���� ���� �� ��� ����������� #��� �"������� ������ ���� ��� ����� *� �����*�� �� ��*��%���� ���������������� 6�������, ��� �2+ ���� �� ������ ��������� *� ����� ���� ���� �� ������� ��� ������*����� ��� ����&����� �� ������ ��� �� ����� �������� �� ���� ����� ����� $�� �2+���, �2+���, ��� �2+��� ������� �*������ �� ��� ������� ���� �� ���� ���� �$�*�� .����� ��� ����� �� ����� �� ��� A..C� $���, #� �������� ���� ����������� ��� ������� �� ��� ���������� ���� ���� �� �� ������*�� ������������ #��� �"�������� ���� 6� ��������, � 9� ������ *��� �� � ���#�� ���� ������� �$�*�� .��

$� ���� ��� %����� �� ��� ���� �� ���� �� �����*���� ����*��%���� ��� �"��������, ��� ��� 5$�� �� �������� ����� ������ ��./5G90, �.05'/, �.05/B,��� �.05'9� #�� ���������� $�� ������ �� ��� �"�������� ������ ����� ��� )/(GG *� �� �./5G90, 00(..9 *� �� �.05'/, .BG(.9/ *� �� �.05/B, ��� ..=(.4B *� �� �.05'9 ������ �� ��� �������� �E7��75� +��-��� ������� 5��� ������ 94, ����� 9=D �3E��� ������� ��� ������ �*������ #��� ���� �"�����* ��� 7� ������ #�� ������ �� ����� �*������ #������� �"����� ������ �� � ������*���� ������ A4C�1� ������� �� ������ ��� ��� ��� 5$�� #��� ������ ������� ������� �"����� ������ �� ��� ������� 7������� ��"������@ ������ O4 ��� OG ����� ��-��.05'9�� 7� ������, �� ��� ������� �"����� ����� ���

.=GB +� E������ �� ��� ���������� � 9BBB, ��� .=00(.=G9

Page 4: Voltage-induced release of nucleic acids from palaeontological samples

������*���� ������ A4C ����� ������� ������ �� ���� ���� ����� �� ��� ��-� �.05/B ��� .9 ������� ����� ��-� �.05'9 �$�*�� .�� $�� ��� ������ �� �#�������� �� ���#� �� 6��� ., ��� ������ ��� � ���� �2+���

����� �O.BD B�B'9�, ��� ��� ���� #��� � ��# ������ �O=DB�B4.�� $� ����� ���� �� ������� #�� ���� ��� ��������������� �������� ��� �������� * ���������� ����� ��� �"������ ������, ��� ������ ��� �� ��� �"��������� #�� ���� ��������� �� ���5$� � ����� ����� 5��� #� ��� ��� ����� �� ��������� ������ ������ �����*����� #� �� �"���� ���� ���� ����� �������������

M� ���� ���� ���# ���� 7� �� � ���� ��� �������������� �� �"������ ���� ��� �������� ��������<�#���, ��� ���� ���� �� �� ���� ��� �� �������� *� ���� ��� ����� ��� �� ��������� $���, 7� ����� *� ������ ��� ���� ������� #��� ��� ��- �� ������������� �� ��� ������ #��� ����������� �������� ��� �� ��� ����� $�� 7� ������ �� �� ��� �������*���� ������������ ���� ��� ������ ������*���� �������� ���� �"������ A4C �� ��� �����#��� ������� 6���,��� �*������ ����� ��� �� ��� ������� ��� ��� �������������� �� ��� ������ �������� $�� ������� �� �������� ��� #�� ������� * ��� ������ ��� ������������,

���� ��������� �������������� ���� ��� ����� �� �E74/4� ��%���� �%������ #��� ;���5�� ����#��, �������� 5������ *��� � *���&����� ����� 5$�������� ���������������� �� ��*��� 5����, ��� �������� ������ ������ ��� �"�������� �� ��� ������������� �� �������������� ������������ #�� �������� #����� � ��� ������� #�� �"����� ������ �� ��� 7� ������ � ��<Q�� ��� �RR*� A4C� $���, ���� ������� �� �����"����� ������������ * �������� ������� ��� ��������� 7� �� *� ����� ���� ��� ������������ ���*������ �� 7� ������ *� ��������� �������������, ������� �� � ����� ��#*�- �� ��� ������� <�#���, #� ������ �*���� �� ������������ ����� �� �"����������� *����� ���� �� ���� ����� �������� �� ��� 7� ������� ���� �� ���� �������, ���� �� ���� ���� �� ��������������

5��� �� �� ������ �������*�� �� ����� ��� �������������%��� ����� , #� ����� ������ #� ���� �� 7���"����� ��� ����� ��� ��%����� ���� ���� ����� �"����� * ��� ������*���� ������� <�#���, #������ ���� 7� ������ � ��� ���� �"��� ���� ���������*���� ������� $�� ����� ���� �� �����"����� * 7� �� *� �"������� * ��� ���� �� ������������ ����*���� ������ ������������� 6� �"�����,

���������� � 9BBB, ��, .=00(.=G9 ������������� ������ �� ����� ���� .=G.

'���� �$ 5$� � ���� �� �#� ����� ������������ M�� ���������� �� ��� � �������� �P'9BB E�� ���� ���� �� 1�*��� ;����� ����� .D O=�, ��� ��� ���� �� ��� �� ��� �������� �P='B ���� ������ ���� *���� ���� �� �������, ;���� �����9D O.B�� ��� ����� ������ �� ��-�� �./5G90 �)/(GG *��, �.05'/ �00(..9 *��, �.05/B �.BG(.9/ *��, ��� �.05'9�..=(.4B *��� E���- �"������ ������ #�� ����� �� ��� ������������ ����� 4�� ���, �E� ������������ ������ ������� ��� �"���� �*������ ����� 7� ��� � ������*���� ���� �"������ ������ A4C, ��������� � 5�&�� �� �S./=2���777�������� �������� ������ �� �� ����� �� *��� ����� $�� =F #2� $�3 �=B �� $���������, . �� 3�$�, �< 0�B� ��������� ���5����25��>��D 4@.� #�� ������� #��� �������� *�����, �������� ���� 9'= �� 8 ������������, ��� � ������������� #�� ������ �3�5K <����*�� ���� ���� 5$� �.05'9, ��������� ��� ������ �������, �� ����� �� ������������ ��*��� �������� ������ ����� ��� ��� �"����� ������ �� ��� ������*���� ������ A4C� ������������ ���������� #��������� ����� #��� ���� #�� ������� ����� ��� 7��������� ����

Page 5: Voltage-induced release of nucleic acids from palaeontological samples

����*��� ������� ������� �*��� ���������� �*������� ��� ���� �"���� A9, .=C ���� � ����� ��*���� ���� ��� #����� ����, ��� �� ���� ����������� �"����� �� ��� ��*��%���� ��� �"������� M��� ���������� ��� �� ��� #����-��#� *�#���� ��� A9, ', .=(.)C������� �� *� ������� ������ �� ������ ����� A9,'C, ����� �� ���� ������ �� ��*���� �� ���� ��� �� ����*� �"������ $���� ��*������ ��, ��#���, ��%����� �*����� �� ��� �"���� ������ * ������*���� ������%���� 7� =)�'F �� �� �"��������, ��� ������������������� #�� ����������� ����� #��� ���� �"����������� �� ��� ������*���� ������ #�� �����, #������ � ������� �� ������������ ������� #�� ��� �*������ �� 4�/F �� ��� ���� #��� 7���������� ����#�� ������ � �������� �� ��� ��� ����*���� ��"���������� #��� ���� #�� ������� �� �#� ������� �O4 ���OG� ���� #�� ����� �� ��� ������������ �� ����.05'9 5$� �..= *�(.4B *��� 7� *��� ����, ����"���� �������� ������ �� ��� 7� ������ �%�������� �������� ���� ����� �������� ������ �� ��� ������*���� ������ �� ���� ����� ��� ��& �� ������ �$�*��9�� �� �� 7�, � ��� �������� ������ �� ��� ����*�������� ��� ������*���� ������ �� <Q�� ��� �RR*� A4C #��

���� ������ �� ���� �"������ �����%��� ��� �� ������������� �� ������*���� ���� ������ �U7�%��-D U������, 5���� ������, ��, 85�� A.BC� <�#���, 7� ��� ������������ �� *���� ��� ��� ���� ���� ����� ��*������� �����%����

�� ��� �������� � �� ��������� �� ��� � �� � ��� ��� ������ � ������� �� ���� ��� !��� � ����� "� #� $ ���%�� �� �&��� ��� ! �� �� � �� � ���� ��� ��� �� ��#���� �� '����(�� ������� � ��� ������� �� )� *���������� ����!������ ���� ��� ��� +� ����� ���!%���� �� * � ������ � ,������� � ��� - ��� .�����/�+� ����� )�(���� � .������� 0 ������ �� ��� �'��%� ��

������� M��*� 9=, .GGG

" .����� ��

A.C ��������, ��, ����, M� 3�, V����, �� $�, 5�-��, �� V�,#� -����� 0� � .GG/, 1�, ..9)(..4'�

A9C <R���, ��, E�������, $�, +�����, �, 5��������, ��, $���� ��� �� ,��� .GG', �2, 00.(009�

A4C <Q��, ��, �RR*�, 5�, $���� � �� �� ,��� .GG4, ��,4G.4(4G.=�

A=C ���?�, <�, ���&�����, 1� ��, ;������, V� ��, * ����� * %� �� ,��� ������ .GG9, �32, 4)/(4/=�

A'C �RR*�, 5�, +��� $���� ����� 0� � 40� .G0G, 3, .G4G(.G=4�A)C ���������, � ��, >������, �� E�, � �-��, ;�, "���� ��

.GG4, �5, )GB()G4�A/C ����, �� ��, 5���&, ��, ������ "����� .GG/, �2, =./�A0C 5���&, ��, ����, �� ��, ������ "����� .GG/, �2, 9=G�AGC $����, ��, �&�� ��� � .GG=, 67, '4B('4'�A.BC K���, �� K�, 3��, E�, 1� �, V� 5�, ����, V� ��, 5������,

5� ��, ��� #� +� �� ������� .GG0, �76, '4G('=4�A..C �����, <� ��, <Q��, ��, E���, V� +�, �RR*�, 5�, 0� ����

.GG), �8�, 0)=(0))�A.9C <�����, �� 5�, 5����, V� ��, +�� ���9 ���� ��� � 0��������

��� * �� , 3���, +����� .GG=�A.4C ����, �� ��, ���������� � .GG/, �3, ..B4(..B=�A.=C 5���&, ��, ;�������, 7�, ����, �� ��, ����� * �����

.GG0, �65, 904(90)�A.'C <R���, ��, +����, �, 5�--�, ��, E����, ��, 5��������, ��,

�� ,� ����� 0� � .GGB, 2�7, 4)'(4/B�A.)C �RR*�, 5�, <�����, �� ;�, 1�����, �� ��, #� * �� �����

.G0G, �:1, G/BG(G/.9�

.=G9 +� E������ �� ��� ���������� � 9BBB, ��� .=00(.=G9

/�*�� �$ $������� �� .' �+ ������� ��� ���� � �������-� �.05'9 �..=(.4B *�� ��� .B �� ��������� ����� ���

3"������ 5������ ��������������

.@. [email protected] .@9B .@4B .@=B .@'B .@)B .@/B 7� O4 ( I I I I I I I

OG ( ( I I I I I I5*� O4 ( ( ( ( I I I I

OG ( ( ( ( ( ( I I

7�, 7� ������5*�, ������*���� ������5���� ��������� �� ���� �������� #�� ����� �� ��� ������ ����� ���� ��� ��& �� ������ � 5������ O4 ��� OG#�� ���� �� ���� ����, ���� ��� #�� ����� �� ������������� ����� ����� ��� 7� ������ � ��� ������*���������� ���� $�*�� .�� 6��� ��� ��& �� ������ ��������� * I�


Top Related