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Du peptide P140 au Lupuzor®,
un futur médicament pour le lupus?
Sylviane Muller, CNRS StrasbourgImmunologie & Chimie Thérapeutiques
► Manifestations multiples
peau (rash)
articulations
reins (glomérulonéphrite)
cerveau, coeur
système immunitaire
Epidémiologie Europe US
Prévalence/100 000/an 25-68 24-50
Incidence/100 000/an 2-5 7
Total: ~1.4 M
80 000 en France
90% sont des femmes
Lupus érythémateux disséminé (LED)
► Etiologie multiple
► Multigénique
90% sont des femmes
Equipe Immunologie et immunomodulation du lupus
Nos objectifs:
Comprendre les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqué s dans l’induction (rupture de
tolérance au soi) et le développement du lupus.
Etudier les mécanismes moléculaires liés à la physiopatholo gie de certaines formes de lupus
(identification de cibles; diagnostic) (identification de cibles; diagnostic)
Proposer de nouvelles stratégies thérapeutiques capables de cibler spécifiquement les cellules
délétères impliquées dans la pathologie lupique
Thérapies du lupus
Thérapies actuelles• Immunosuppresion
• Corticoïdes• Cyclophosphamide• Mycophenolate mofetil
Effets indésirables• Infections• Risque de cancer
Stratégies futures• Molécules visant des cibles spécifiques impliquées dans la
physiopathologie de la réponse autoimmune
anti-BAFF
anti-IFN-α
Cellule présentatrice d’Ag
Panoplie de stratégies thérapeutiques en cours d ’év aluation dans le lupus
B7CD28
CD40L CD40CD20
CD22
CTLA4-Ig
LJP-394
anti-CD20 (ADCC,
apoptose, complément)
anti-CD22Peptides
immunomodulateurs
LTCD4+ LB
d’Ag
anti-CD40L
Modèles murins spontanés de lupus
MRL-lpr/lpr mice (H-2 k)Mutation lpr mutation + Fas
½ vie 4-5 mois
Syndrome lymphoprolifératif
Lymphocytes T CD4 -/CD8-/B220+
Néphrite à CI, vasculite
AAN, Ac anti-ADN, FR
Peptides de la protéine nucléaire U1-70K
Fanny MonneauxDoctorat 2001
pept
ides
Peptide 131-151- Reconnu par les Ac et les lymphocytes T CD4+ de souris lupiques (prolifération + IL2)- Motif RNP1- 2 sites potentiels de phosphorylation
R I H M V Y S K R S G K P R G Y A F I E Y
Index de prolifération
L’administration iv du peptide P140 à des souris MR L/lpr
- réduit la vasculite (moins d’infiltrat inflammatoire pé rivasculaire)
NaCl P1400
1
2
3 ***
vasc
uliti
s gr
ade
Saline P140
- ralentit l’apparition de la dermatiteNaCl P140
- améliore la survie des souris lupiques
60
80
100NaCl (n=33)P140 (n=29)non phosphorylé (n=9)
% s
urvi
e
Médiane de survie(semaines)
2446
26,5
MRL/lpr
-100 µµµµg P140 en NaCl /injection/souris- Voie iv- 4 injections : semaines 4, 6, 8, 12
↓ Protéinurie : 25% vs 75%
↓ Ac anti-ADNdb : 29% vs 75% (24sem)
0 10 20 30 40 500
20
40
% s
urvi
e
semaines
p=0,0017
0
2
4
6
8
10
12
x10
6 cel
ls/m
LMRL/lpr
ganglion
rate
CBA/J5 jours après injection
-réduit l’hypercellularité périphérique
MAIS
- les lymphocytes restants se comportent normalement lors d’une stimulation
- les souris MRL/lpr traitées résistent normalement à une infection par le v. de la grippe
le peptide P140 n’est pas un immunosuppresseur !
MRL/
lpr N
aCl
MRL/
lpr P
140
CBA/J N
aCl
CBA/J P
140
0
Monneaux et al. Eur. J. Immunol. 2003; Monneaux et al. ART 2007; Page et al. PloS ONE 2009; Page et al. ARD 2010
Chez l’homme , le peptide P140
-se lie à un grand nombre de molécules HLA - dans une étude longitudinale, est reconnu par les cellules T de 50% de patients lupiques
Monneaux et al. J Immunol 2005
HLA
lymphocyte T CD4+
cellule présentatrice d’antigènes (CPA)
●
●
●● ● ●
● ●● ●● ●
↑ IL-10
Essais cliniques peptide P140(Lupuzor®)
- Brevet CNRS 2001- Start-up ImmuPharma 2002- Recherche de fonds ( ► UK)- Licence du CNRS à ImmuPharma 2005- Peptide GMP / NeoMPS 2005- Tox: rats, lapins, chiens Sept. -Déc. 2005- Tox: rats, lapins, chiens Sept. -Déc. 2005- Phase I: 24 individus sains; 2 mg s.c. Fév.-Mai 2006- Phase IIa: 20 patients LED Juin-Oct. 2006- Phase IIb : 134 patients LED Janv.-Nov. 2008
Essai de Phase IIb
- double-aveugle, randomisée, multicentrique (1)- administrations sc- 3 groupes:
1. 200µg 1x/mois 2. 200µg 2x/mois3. placebo
- traitement 12 semaines + observation 12 semaines(1) Argentine, Bulgarie, Roumanie, Espagne
134 patients avec un lupus modéré à sévère (SLEDAI cl inique ≥ 6)
A 24 semaines:
� 62% de patients répondeurs dans le groupe 1 contre 41% dans le groupe placebo
[ baisse de ≥ 4 points du SLEDAI]
� aucun effet adverse significatif
2èmephase IIb USA et Europe 2010
Phase III 2011
Séquence 131–151 de la protéine U1-70K phosphorylée sur le résidu Ser140 (conservée)
pS10 pS10K
P13
R14
G15
Y16
A17
F18I19
E20
Y21
Y21E20
I19
F18
A17
Y
G15
R14
P13
K12G11 MT Cung, ENSIC Nancy
Peptide P140
S7
S7
Y6
V5M4
H3
R1I2
I2
R1
H3V5
M4
Y6
K8
K8
R9
pS10
G11
K12
Y1619F18Y16
G11
R9
La séquence est phosphorylée in vivo en position Ser140 dans les cellules apoptotiquesDieker et al. Cell Death Diff 2008
MT Cung, ENSIC Nancy
0’ 4’ 8’
Biodistribution du peptide P140
high
2’
4’
6
8’
P140
1h post -injection iv souris MRL/lpr
15’ 20’ 30’
low
6
’
15’ 30’
Accumulation dans la rate:zone marginale et dumanteau du follicule
P140-rhodamine et DAPI
Confirmation chez le rat normal avec du peptide P14 0 14C
► sur le récepteur des cellules T CD4?
Mécanisme d’action du P140 ?
lymphocyte T CD4+
cellule présentatrice d’antigènes
► sur certaines sous-populations régulatrices ou cytotoxiques ?
► sur un autre récepteur qui influence une cascade d'activation intracellula ire ?
Mécanisme d’action du P140
P140 lie une protéine de choc thermique constitutiv ement exprimée, HSC70(précipitation, ELISA, BIAcore, microscopie flurore scence et microscopie électronique)
DAPI P140 MHCII P140 + MHCII HSC70 P140 + HSC70
Lymphocytes B spléniques
Modélisation HSC70-peptide P140
P140 inhibe la capacité de HSC70
à renaturer la luciferase dénaturée
P140 µM
Dans le lupus, HSC70 est surexprimée:
- P140 ↓ surexpression- P140 interfère avec les propriétés de HSC70
P140
Mécanisme d’action du P140
Lymphocyte T CD4+
HSC70
Page et al ARD 2010
Cellule présentatrice d’antigènes
HLA-DR Dimer
HLA-DRα
actin β
P140 (µM) 20 40-
En résumé,
P140 est un immunomodulateur de la réponse autoimmu ne dans le lupus murin
- Régule l’hypercellularité du sang périphérique par un effet pro-apoptotique
- Se localise dans la rate et module des processus c ellulaires gouvernant la présentation
peptidique par les molécules du CMH (vu aussi sur d es cellules Raji humaines)
réactivité des LT CD4 + autoréactifs, en respectant les autres sous-populat ions lymphocytaires
- Nombreuses questions fondamentales à approfondir e t d’études pharmacologiques à réaliser!
2èmephase IIb USA et Europe en cours
Phase III pour 2011