efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
TRANSCRIPT
![Page 1: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/1.jpg)
Efecte de les nanopartícules cisplatí
i doxorrubicina en cèl·lules tumoralsAida Giol Castro, Ignasi Solé Clua, Manel Queral Martínez
Tutors: Julia Lorenzo i Javier García
IBB: Departament d’enginyeria de proteïnes i proteòmica
Programa Argó 2016
![Page 2: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/2.jpg)
1. Introducció 2. Cèl·lules Hela 3. Preparació de portaobjectes per comprovar la
internalització de NPs en cèl·lules Hela 4. Observació de la incorporació de les NPs en microscopi
confocal 5. Proves de citotoxicitat en NPs amb cisplatí i/o doxorrubicina
◦ 5.1 Gràfiques IC50
Sumari
![Page 3: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/3.jpg)
Càncer: Conjunt de patologies relacionades amb la divisió descontrolada de cèl·lules d’un teixit.
Tumor: Massa amorfa de cèl·lules , símptoma del càncer.◦ Benigne◦ Maligne (Metàstasi)
1. Introducció
![Page 4: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/4.jpg)
Una nanopartícula càpsula amb fàrmacs a l’interior d’un tamany que oscil·la entre 80-120nm de diàmetre.
Ddiàmetre més gran que les partícules de fàrmac + elevadaelectronegativitat Aconsegueix superar les defenses i els filtres delcos
NPs contra el càncer
Venes i capil·lars defectuosos en un tumors Coàguls, major concentració de NPs en cèl·lules cancerígenes (menys danys a les cèl·lules no tumorals)
![Page 5: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/5.jpg)
Cisplatí i doxorrubicina fàrmacs per combatre les cèl·lules tumorals.
Objectiu Veure si encapsulant aquests fàrmacs, s’augmenta l’eficiència en vers els fàrmacs lliures.
Pt
O
O
NH3Cl
NH3Cl
OOH
O
O
O
HO
DoxorrubicinaCisplatí
![Page 6: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/6.jpg)
2. Cèl·lules Hela Cèl·lules de cultiu cel·lular utilitzades en investigació científica
Pertanyen a Henrietta Lacks (HeLa) pacient de càncer cèrvix-uterí
Línia de cèl·lules tumorals molt duradora i prolífera
![Page 7: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/7.jpg)
3. Preparació de portaobjectes per comprovar la incorporació de NPs en
cèl·lules Hela
![Page 8: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/8.jpg)
Nivell 2 de seguretat biològica
![Page 9: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/9.jpg)
Bany tèrmic 37ºC Netejar en PBS i tripsinitzar Centrifugar a 1400 rpm
Preparar les càpsules de Petri
amb cobreobjectes
1,5 ml dissolució / càpsula
![Page 10: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/10.jpg)
Tota la nit incubadora 20 μl NPs doxo+cis 2 plaquetes 1 plaqueta control
2 h incubadora
Aspirar medi Posem 1ml PBS, agitem i
aspirem
Posem 500 μl metanol/càpsula fixar les cèl·lules al cobreobjectes
![Page 11: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/11.jpg)
15min. congeladorTraiem metanol
Posem 0,5ml PBS Dissolució 1:500 Dapi+PBS (1,5 ml
total)
Aspirem PBS i afegim 0,5ml
dissolució Dapi+PBS
15min. agitador Traiem Dapi+PBS, netejem amb PBS i ho aspirem
Posar els cobreobjectes del fons de les plaquetes en un portaobjectes
![Page 12: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/12.jpg)
MICROSCOPI DE FLUORESCÈNCIA
![Page 13: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/13.jpg)
CPPs Cis Doxo 6,58 μg/ml
![Page 14: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/14.jpg)
4. Observació de la incorporació de les NPs en microscopi confocal
![Page 15: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/15.jpg)
• NPs cis (50 μg/ml)
•NPs cis + doxo (50μg/ml)
(10 μg/ml)
3h incubadora
Raigs ultraviolats esterilitzar
![Page 16: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/16.jpg)
Posar el marcador Hoescht
MICROSCOPI CONFOCAL
![Page 17: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/17.jpg)
CPPs Cis Doxo 10 μg/ml
![Page 18: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/19.jpg)
NPs Cis Doxo 50 μg/ml
![Page 20: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/21.jpg)
CNT
![Page 22: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/22.jpg)
CNT
![Page 23: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/23.jpg)
5. Proves de citotoxicitat en NPs de doxorrubicina i cisplatí
![Page 24: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/24.jpg)
Cèl·lules sobrants del dia anterior
Netejar en PBS i tripsinitzar Centrifugar a
1400 rpmPreparem una dissolució 1:13
Pipeta multicanal sembrem
les cèl·lules
96 pouets (200μl)60medi+cèl·lules+fàrmac
36 medi
![Page 25: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/25.jpg)
CisplatíCNT150 μg/ml24 h
![Page 26: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/26.jpg)
Doxorrubicina0,5 μg/ml 30 μg/ml
![Page 27: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/27.jpg)
Doxorrubicina0,5 μg/ml 30 μg/ml
![Page 28: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/28.jpg)
NPs Cisplatí125 μg/ml 250 μg/ml
![Page 29: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/29.jpg)
NPs Cisplatí + Doxorrubicina0,5 μg/ml 125 μg/ml
![Page 30: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/30.jpg)
Neuroblastoma cells
0 1 11 27 54 108
188
269
538
0
20
40
60
80
100
120
DOXO-CPPs Concentration (Pt M)
Cell
viab
ility
(%)
Neuroblastoma cells
0 1 11 27 54 108
188
269
538
0
20
40
60
80
100
120
PtIV Concentration (Pt M)
Cel
l via
bilit
y (%
)
IC50 > 500 µM IC50 ~ 7 µM Pt- 175 ng/ml Doxo
5.1 Gràfiques IC50
![Page 31: Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062523/58eea8df1a28abd16e8b4679/html5/thumbnails/31.jpg)
Gràcies per la vostra atenció