ensayo de un medio con cianuro de sodio para investigar
TRANSCRIPT
Di r ecci ó n:Di r ecci ó n: Biblioteca Central Dr. Luis F. Leloir, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Intendente Güiraldes 2160 - C1428EGA - Tel. (++54 +11) 4789-9293
Co nta cto :Co nta cto : [email protected]
Tesis de Posgrado
Ensayo de un medio con cianuro deEnsayo de un medio con cianuro desodio para investigar estreptococossodio para investigar estreptococos
en aguas : Estudio bioquímico deen aguas : Estudio bioquímico delos cultivos aislados con miras alos cultivos aislados con miras a
establecer el origen humano oestablecer el origen humano oanimal de la contaminaciónanimal de la contaminación
Deyheralde de Rossi, Alina María F.
1959
Tesis presentada para obtener el grado de Doctor en CienciasQuímicas de la Universidad de Buenos Aires
Este documento forma parte de la colección de tesis doctorales y de maestría de la BibliotecaCentral Dr. Luis Federico Leloir, disponible en digital.bl.fcen.uba.ar. Su utilización debe seracompañada por la cita bibliográfica con reconocimiento de la fuente.
This document is part of the doctoral theses collection of the Central Library Dr. Luis FedericoLeloir, available in digital.bl.fcen.uba.ar. It should be used accompanied by the correspondingcitation acknowledging the source.
Cita tipo APA:Deyheralde de Rossi, Alina María F.. (1959). Ensayo de un medio con cianuro de sodio parainvestigar estreptococos en aguas : Estudio bioquímico de los cultivos aislados con miras aestablecer el origen humano o animal de la contaminación. Facultad de Ciencias Exactas yNaturales. Universidad de Buenos Aires.http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_1015_DeyheraldedeRossi.pdf
Cita tipo Chicago:Deyheralde de Rossi, Alina María F.. "Ensayo de un medio con cianuro de sodio para investigarestreptococos en aguas : Estudio bioquímico de los cultivos aislados con miras a establecer elorigen humano o animal de la contaminación". Tesis de Doctor. Facultad de Ciencias Exactas yNaturales. Universidad de Buenos Aires. 1959.http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_1015_DeyheraldedeRossi.pdf
'35
in
ENSAYO DE UNMEDIO CON CIAHURO QEÍSODIO PARA INVESTIGAR ESTRFPTO
COCOS EN AGUAS.
ESTUDIO BIOQUIMICO DE LOS CULTIVOS A SLADOS CON HIBÁS A ESTABLE
CER EL ORIGEN HUMANO O ANIMAL DE LA CONTAMINACIÓN.
B B B U M B H
Balcazar de Aztegui y colaboradoras publicaron en 195%un
métodopara el aislamiento selectiüo de estreptococos de la nasofgringe, materias fecales y leche.
ESCeste trabajo, el que ha inducido a ensayar medios a
base de cianuro de sodio para la investigacion de estreptococos en
aguas de diferente origen.
Se ha ensayado la edicion de cianuro de sodio a diversos
medios apropiados para el desarrollo de estreptococos, determinando la sensibilidad de los mismosfrente a diluciones de cultivos
puros de estreptococos.
Los medios probados fueron, el caldo glucosado y el caldo
de Todd y el medio de Rothe y otro denominado "A", que es una mod;
ficaéián del medio "S.F." de Hajna y PerrV, cn lOs cuales se reemI 1.. . , -.rls7o la azifla SOQlCQpor el Cianuro oe socio.
{o se observó diferencias marcadas en la sensibilidad Ce¡A_¡
. Ilos medios for lo que se ag09+o for su simulicidad, el caldo
glucosado adicionado con 25 mgflde cianuro de sodio para emplearlo
en la investigación de estrcptococos en aguas.
Se estudió la eficacia del medio glucosado cianurado com
parativamente con la del medio "A" examinando 20 nuestras de agua
del Rio de la Plata,56 de rozos semisurgentes y 65 de natatorios.
El medio glucosado cianurado resultó ser alco más sensible
aunque menos selectivo que el medio "i" con 31562,Ïrente a agvas de
rio y pozos y menos sensible y selectivo frente a eflLas de natato
rios. Hose aconseja por lo tanto emlearlo en sustitución de losnedios a base de azida bien conocidos.
Se determinó paralelamente la presencia de bacterias-coliformes en todas las muestras examinadas hallandose con relación al
numero de muestras estrcptococos positivas igual cantidad de mues
tras de Ï“ríóï coliformcs positivas, un número algo mayor de muestras
de pozos coliformes positivas y considerablemente menos aguas denatatorios coliformes positivas. Ademásen aguas de pozos y natato
rios el %de muestras con Esch.coli resultó muy inferior al de muegtras con estreptococos.
La segundaparte del trabajo, consistió en la clasificaciónde los estreptococos aislados en muestras de aguas de diversa pro
cedencia tendiente a establecer el origen de la contaminación, siendo esta una cuestión de verdadero interés sanitario.
Siguiendo las técnicas propuestas por Cooper y Ramaqan, se es
tudiaron 128 cultivos puros de estreptococos aislados de las
diversas muestras examinalas, con el objeto de establecer el ori'lren humanoo animal de los mismos. Los cultivos de estrertococos2o
aislados, fueron clasificados : a) por identificacion de copas
y b) por origen de la contaminación.Los resultados alcanzados por los ensayos bioquímicos
en la clasificacion de estreptococos jor identificacion de cepas
(a),no concordaron totalmente con los hallados por Cooper y Rama
dan; algunas cepas se apartaron en una o más reacciones de su cogportamiento normal.
Distribuidas las cepas identificadas por (a) de acuerdo
a su origen se observó un predominio en aguas de río, de estreptg
cocos de origen animal, en aguas de pozos, de origen humano y en
aguas de natatorios igual porcentaje de cepas de origen humanoy
animal.1 . . on los resultados alcanzados en la clas1f1cacion de es
(.31
treptococos por origen de contaminación (b) se obtuvo también un
predominio, en aguas de río de estreptococos de origen animal;en
aguas de pozos y natatorios predominaron las contaminaciones de
orígen humano. '
Comgaradas ambas clasificaciones (a) y (b) se obscrvá
un resultado aproximado en cl orígen de las ceras, en aguas dc río
y pozos. En aguas de natatorios hubo una mayor discrepancia;
Dadala simplicidad de] :étoCo para estableeer el origeno u -. . . 'de la contamlnacñán (b) v el paralellsmo ootenldo en relac1on a
\ .
r .‘r
\. mmm . masImFW?” m emm: mara Í IÁMM'TG
mua se m mozoeauemma ni 80510mas mmnnan*mm m mms
mmm ¡mataron nn rm com-¡vw¡trauma cm uma
4 ¡mmmïm su mmm mano o mmmnlu manuach
0-1....
Mi...mummarlmumnmm
Tim/5: 1015
IIIII
VI
VII
3 U g A R I O
Antecedentes
Ensayo de 1a sensibilidad de medios,con cianuro de sodio
Estudio comparativo entre el medio glucosado cianurado
y el medio "A" eo el aislamiento de estreptococos
Clasificacion de las cepas de estreptococos aisladas
a) - Por identificacion de cepas
b) - Por origen de contaminacion
Resumeny conclusiones
Ap¿nd1ce
Bibliografia
Agradezco la amplia colaboracifin que en todo‘
momento me han dispensado. el Dr. RamonH.
Leiguarda y el Dr. Osvaldo Peso.
Agradecimiento que hago extensivo a las autgridadea del Laboratorio de las Obras Sanita
rias de la Nacián, que mehan permitido la
realizacion de 1a parte experimental corre;pendiente
-nu . o...
I.ANTECEDENTHS
La determinacion de bacterias coliformes para establecer la
pureza bacteriologica de un agua. continúa siendo el métodomás se
guro y sencillo de que se dispone para determinar contaminaciones
de origen fecal.
Presenta sin embargoalgunos motivos de critica que impiden
consideratlo comoun métodoideal. Entre ellos: el discutido signi
ficado sanitario de algunos organismos del grupo coliforme comoel
Aerobacter aerágenes y los bacilos intermediarios cuyo habitat "no;mal" no es la materia fecal.
Uhresultado negativo en la investigaciSn de bacterias co
liformes. tal comoactualmente se realiza. no constituye de acuerdo
con la experiencia recogida en los ultimos años la prueba absoluta
de ausencia en el agua, de bacterias nocivas para la salud. Se ha
observadocon frecuencia trastornos intestinales originados por la
ingestión de aguas sin bacterias coliformes en las cuales se pone
de manifiesto la existencia de fermentadores lentos de lactosa.bac
terias anaerobias esporuladas, organismos del genero Pseudomonasetc.
Es asi que, desde hace años y en repetidas oportunidades,
divarsos autores han considerado a los estreptococos comoposiblessustitutos de las bacterias coliformes comoindice de contaminacion
del agua o simplemente comocomplementodel análisisbacteriologico
a fin de facilitar su interpretacion. Ello se debe a que los estreptococos se encuentran siempre en el intestino normal humanoy animal
no hallandose en cambio en lugares fuera del contacto con la vida
animal
El criterio de pureza bacteriolágica del agua.bnsadoen la
investigacion de bacterias intestinales, segun los inVestigadores
Mallmann,Calvert. France y Fuller. deberia modificarse cuando se
trata dc la calidad de aguas de natatorios. En efecto, el uso cada
Vez mayor de los natatorios. ha aumentadola posibilidad de contraer
infecciones originadas por bacterias patogenas provenientes de los
bañistas sean estos enfermos o portadores. Las infecciones produci
das pueden ser de diferente indole,siendo las más comunes:otitis.
amigdalitis, conjuntivitis. forunculosis, micosis, antrax. fiebresintestinales etc. y dentro de los agentes causantes de los mismos.
los cocos Gran positivos ocupan un lugar destacado. Ello impone por
lo tanto una revision de las normas actuales de pureza.
Hallmann (l) en 1928 y luego Hallmann y Gelpi (2) en 1930
ensayaron los primeros metodos para 1a detcrminación de estreptoco
cos en piletas de natacion. usando caldo lactosado standard.
Otro medio usado, no selectivo. fué el medio de Todd Hewitt
(3) empleadocn el estudio de las propiedades morfolágicas y bioqu;micas de los estreptococos.
Los métodos de enriquecimiento de estrcptococos a base de
telurito de potasio aparecieron depues de los trabajos de Fleming
(h) del año 1932. en el que se demostro que algunas bacterias no inhg
bidas por la penicilina lo son por el telurito y fueron Perry y Petran (5) en 1932 quienes lo incorporaron a un medio de enriquecimieg
to. El poder inhibidor de la droga sobre bacterias coliformes fue
constatado por Fleming y Youn:(6) en 19H0 y Chapman(7)en l9hh lo
-2
probo para el aislamiento de estreptococos hemoliticos y no hemoliticos.
En 1937 Hartman (8) empleo un medio con azida sódica pa
ra suprimir el desarrollo de bacterias Gramnegativas permitiendo
el crecimiento de estreptococos. Snyder y Lichstein ( 9-10 ) lo aplicaron para el aislamiento de cocos Grampositivos en presencia de
bacterias del genero Proteus. Con una concentracián de 0.01 %evi
taban el extendido característico de dicho microorganismofrenando
al mismotiempo el crecimiento del Esch.coli y gstzphi. Con una
concentracion mayor ( 0.05 %) no obtenían un crecimiento abundante
de estreptococos y algunos grupos podian no desarrollar. InVersa
mente una concentracion menor (0.008%) traia aparejado un extendido
de bacterias del género Proteus y reproduccion moderada de Esch.co11.
Mallmann (10) en 19k0 propuso un medio liquido con azida
s‘dica para la determinacion de estreptococos.
Conocida la propiedad de la azida sodica. son varios los
autores que la incorporan a medios liquidos y silidos. Paker (12)
en 19H3ideÉ un medio para el desarrollo de los estreptococos y del
Egysipelotrix rhusiopathiae,aconsejando una concentracion de la drgga de 0,05 % sola o con 0.0002 % de violeta cristal.
Hajna y Perry (13) hicieron un estudio comparativo entre
las bacterias del grupo Coli y el estreptococo fecal.incubando a
temperatura de #5,5QC.a la cual desarrolla el Strentococcus faeca
lis y no los otros. En efecto el desarrollo y la formabián de ácido
- 3
en el llamado medio "S.F.".os confirmatorio de la presencia del es.
treptococo fecal. Puede usarse inoculandolo directamente con agua.
leche o liquido cloacal o bien sembrándolocon un cultivo.desarro
llado en un medio presuntivo. comopor ejemplo, caldo lactosado.
White y Sherman (1h) en_l9hh ensayaron un medio para el
aislamiento de enterococos de la leche a base de 0.03 fi de azida
y dg 325 U 0x. de penicilina_por litro. Neuman(15) en el mismoaño
propuso usar la azida en concentraciones de 0.0% - 0,06 % para ais
lar enterococos en los quesos. Pike (16517) en 1Qk5. estudio la bog
dad de dos métodos a base de 0.006 % de azida. con el agregado de
0.0002 fi de violeta cristal uno de ellos y sin este colorante elotro.
Winter y sandhozer (18) en 1946, modificaron el medio de
White y Sherman mediante el agregado de azul de metileno un conconn
tracion de 0,001 fi, el aumento de las unidades de penicilina a 6500
Oxoporlitro, el empleo de ClNa en la elevada concentracion de 6.5!
y el ajuste del pHa un valor cercano a 9.6. Este medio fue aolicado exitosamente en la investigacion de enterococoe en agua. liquido
cloacal. heeos etc.
En 19H? Leiguarda, Peso y Kempny(19) ensayaron comparati
vamentetécnicas para investigar estreptococos en aguas,trabajando
con un medio conteniendo telurito de potasio y con otro a base de
azida sodica preconizado por Hajna y Perry y aplicado por Ostrolenk
y Hunter (2!) en 1946 al estudio de enterococos en heces.En 19h8 Rothe (21) propuso una formula nueva para un medio
- h 9
con azida. el cual es una modificacion de los medios de Mallmanny
Hajna y Perry, en 1950 Mallmann y Seligmann (22) lo ensayaron com
parativamente para ol desarrollo de estreptococos en agua de rio y
de natatorios. con caldo lactosado.medio azida (Hallfiann) y caldo"S.F." obteniéndose los resultados más eficientes con medio de Rothe
En 1953 Litsky. Mallmanny colaboradores (23) obtuvieron
resultados satisfactorios ensayandouna modificacion del medio "S.F"
de Hajna y Perry.
El efecto toxico del cianuro de sodio en las celulas vege
tales y animales se conoce desde hace tiempo¡
Claudio Bernard (2h) estudiá la accion de los cianuros so
bre la respiracián celular.En 1927 Burnet (25) señalo que los estreptococos podian
ser cultivados en medios solidos conteniendo 0.05 í de cianuro de
potasio que actúa comoinhibidor del desarrollo de otras bacterias.
Braun-Guggenhein (26) en 1932 y Braun (27) en 1938-39 no
taron que cultivos del grupo Klebsiella-Aerobacter se desarrollabanen medio con concentracion de cianuro que inhibian el desarrollo
del Esch.coli.Buttidx (28) en 1953 empleando el medio de Braun. estudio
cultivos de salmonelas y en 195HMoller (29) ideo un medio con cia
nuro para determinar bacterias del mismogenero.obteniendo resultados favorables.
Balcazar de Aztegui y colaboradoras (3) en 195%. publica
ron un métodopara el aislamiento selectivo de estreptocococ de na
¿.5
sofaringe. materias fecales y leche.
De acuerdo a este trabajo. el empleo del cianuro de sodio
en una concentracián de 35 mg fi. añadido a un medio adecuado (cal
do glucosado, caldo infusidn dc corazán).permite el aislamiento en
2h horas, de estreptococos de diversas fuentes, siendo recomendable
su empleopara el aislamiento rutinario de estreptococos de la ri
nofarinae,especialmcnte. cuandose lleva a cabo un estudio epidemioldgico.
Este trabajo es el que ha inducido a ensayar medios a ba
se se de cianuro de sodio pana la investigacidn de estreptococos en
agua. Además. dado que durante el transcurso de este ensayo se eran
minarian distintos tipos dc aguas con el consiguiente aislamiento
de estreptococos. se penso en completar el estudio efectuando la
clasificacidn de los cultivos aislados mediante las pruebas propueatas por Cooper y Ramadan(31) con miras a establecer si los mismos
eran de origen humanoo animal; una cuestidn de verdadero interés
sanitario ya que contribuye a aclarar el significado higdenieo dela contaminacion. t
Este problema existe desde que Andrcwes (32) en1906 da ¡1
Enterococcus descripto morfoldgicamente por Ihiemelin en 1899 el
nombre especifico de gtggzjggggggg_ggggglig.
Dible (33) en 1921 contribuyá al estudio de las cepas de
origen fecal considerando.;entre otras reacciones, comofundamenta
les. la resistencia al calor a 60°C. durante 15 minutos y la fermeg
Cóc'
tacion del manitol.
En 1933 Lancefield (3h) agrupo serolágicamente los dire.
rentes estreptococos. observando que su grupo "D" de estreptococos
hemoliticos presentaba caracteristicas semejantes a los llamadosenterococos.
Algunos investigadores. entre ellos. Sherman (35) 1937
uso el término de enterococo para designar un'grupo de estreptooo
cos el cual incluía cepas hemoliticas. no hemoliticas y licuadoras
de gelatina.SStr.ngogenes¡ durans I liguefaciens)
En 19b3 Shattock y A.Mattick (36) consideraron el_g;g¿¿¿r
guefgciens comouna variedad del Str.faecalis;también quedo perfectamentediferenciado el Str.lactis del Str. faecalis.
Dentro de las heces humanas. bovinas y ovinas. es común
. encontrar diferentes grupos de estreptococos que difieren del gtrgg
tococcus faecalis tipico en uno o más criterios esenciales y usualmente en otros secundarios.
Puesto que el objeto del trabajo de Óooper y Ramadan(31)
consist15 en clasificar los estreptococos según su origen. se considero conveniente agruparlos, ampliandosu c1asificacián.bajo el
nombrede fitnfaocalis atigicos variedad I. II. III. Iv y v. aplicándose este nombre a las cepas que difieren en dos o tres caractg
ristiCas standards del Str.faecalis tioico. Esta clasificacián 13cluye a los estreptococoe agrupados como"variantes" del Str,fae
cglis. así denominados,por algunos investigadores.El aislamiento de estreptococos a partir de materia fecal
- 7
y la clasificación de los mismos. demostro que la variedad de las
cepas aisladas depende en parte del métodode aislamiento utilizadoP por ejemplo: el uso de dos métodos de aislamiento de estrep
tococos.altamente recomendados. tales comoel método del calenta
miento o el del telurito, usados comparativamente.acusaronla praSencda de diferentes cepas de estreptococos.
Investigadores tales como; Cooper. Baker. Elliot yWIood
(37) en 19h2 estudiaron otros métodos de aislamiento, recomendan
do el uso de un medio con tetrationato. Cooper y Linton (38) en
l9k7, demostraronla resistencia de los estreptococos al acetato
de talio. Además. comoya vimos. se estudiaron medios con azida ’
s6dica.
Cooper K.E. y Ramadan(31) en 1955 aislaron estreptococos
a partir de excrementos humanos. vacunos j ovinos,comparando ditg
rentes metodosde aislamiento . a) tetrationato. b) telurito y d)sales de talio.d) calentamiento.
El métododel telurito demostrfiposeer alta eficiencia.
aislándose el 97 % de las cepas de origen humano, vacuno y ovino;
Fué realizado un estudio de las propiedades de las cepas aisladas,
basado en pruebas de resistencia al calor y pruebas bioquímicas.
clasificándose luego las copas.
De acuerdo con este método,H0 fi de los estreptococos de
origen humanofueron agrupados comoStre tococcus faecali ;no se
halld Streptococcus faecalis entre muestras de vacunas u ovinos,El Str. durans fue aislado tambien exclusivamente de heces humanas
y represento el h %de las cepas. El gtg¿_ggggglig_gggigggghligggr_____ac1ensyel hanáronseenun29 fl en heces de origen humano.-8
La variedad liguefgciens representa el 1k z de origen bg
vino y el 18 % de cepas ovinas. La variedad zzgogenes no se encqg
trd entre los estrcptococos bovinos, pero forma un 6 5 de estregtococos de origen ovino.
Conrespecto a las cepas clasificadas comovariedades del
Strofaecalis se observÉque el Str. fnecgiis atinico I se identif
fic6 en heces dc origen humanoy bovino; la variedad ggigigg_;;
en excrementos humanosy ovinos y las variedades III. :1. x 1 demuestran origen exclusivamente animal. I
El trabajo realizado por Cooper y Ra‘adan. fue completa
do luego de seleccionado el medio del telurito de potasio. como
el más conveniente,aislando cepas de estreptococos a partir de
350 muestras de materia fecal de diferente origen t 130 humanaS.
110 vacunas y 110 ovinas. Luego. las cepas aisladas fueron culti
vadas en caldo bacto peptona (16 horas a 37°C.)-para su examinacián
La'diferenciacion entre las cepas de origen humanoy en;
mal es de naturaleza cuantitativa y queda demostrada realizando
los siguientes tests! Resistencia c lor: por calentamiento a
609G. durante media hora y sub-cultivo en agar sangre al 10 Z.
asistencia calor a1 telurito: las mismasmuestras usadas en
el ensayo anterior. fueron sub-cultivadas en mediotelurito deMmmm<3!) .Luegode realizado el ensayo de standarlizaciSn del colorante con
varias partidas de diferente origen. se utilizfi una denominada
Gurr N9thl.Los resultados obtenidos permitieron reunir las cepas en
-9
6 grupos. Dentro de los grupos I y II. quedan incluidas las cepde origen humano. 98,5 fl de las cepas de origen animal se situa
ron dentro del grupo III ( 50.% fl vacunas y_h8.l g ovinas) y 9L
en el grupo IV ( 37.6 fl vacunas y 53,k fl ovinas). las cepas con
las caracteristicas de los grupos V y VI carecieron de una fuen1
específica de origen.
De acuerdo a lo expresado anteriormente, la segunda pa:
del presente trabajo trata.con una tecnica similar al la utilizgda por Cooper y Ramadan.de establecer una clasificacion comparativa entre los cultivos de estreptococos aislados a partir de
aguas de diferente procedencia de acuerdo a la identificacián de
las cepas aisladas y de acuerdo a su origen.
Basado en el paralelismo de ambasclasificaciones podri
aplicarSQ ese método sencillo usado por Cooper y Ramadanpara di
fercnciar en agua9¡ la contaminacián de origen humanoo animal
.—-- o o u--
-10
'II-EHSAYOS DE LA SEHSIBILIDgQ DE MEDIOS CON CIANURO DE SODIQ
Se comenzóel estudio haciendo una serie de enSayos.tenp
dientes a seleccionar entre varios medios adicionados con 25 mg.%
de cianuro de sodio, el más sensible,para la apreciacifin de estregtococos.
Medios estudiadogo
a).- Medioglucosado (apándice)
b).- Medio Rothe 2
c).— Medio Todd "
d).- Medio "A" (moduicacisn del medio "sm." de
Hajna y Perry)
De acuerdo al trabajo de Balcazar de Aztegui y colaboradg
ras se procedi5 al agregado de cianuro de sodio en el medio glucg
sado y en el medio de Todd. en tanto que en los medios de Rothe y
medio "A" se hizo el reemplazo de la azida sodica por el cianurode sodio en la concentracion antes mencionada.
Qultivos de pruebe.So aislaron estreptococos a partir de muestras de agua
de río.9embr5ndose en un medio con azida sSdica (Rothe). Se real;
26 una serie de pases. a placas con agar azida. y agar inclinado
tendientes a la obtencián db un cultivo puro. Se ratificó final
mente la pureza del mismopor una coloracion de Gram.
Iácnicg seguiga.' Se partio de una suspension del cultivo puro del estrep
tococo elegido, en agua estéril, realizándose luego sucesivas di
luciones al dácimo; simultáneamente. se sembraron placas con agar
-11
nntritivo,dentro de/Éiertas diluciones. con el objeto de conocer
el número de bacterias por ml. contenidas en cada dilucion . _
Lïs ensayos realizados, se efectuaron con aquellas diluciones que contenían de 2 a 20 bacterias por ml. según lo demues
tren los cuadros NDl. 2. 3 y H. Se sembraron tubos de cada medio
con 1 ml. de las diferentes diluciones. incubándose a 37cc. y rea
lizándoso la lectura de los mismosa las 2k y #8 horas de incuba
ciSn. So ratifico el desarrollo de estroptococos de los tubos positivos mediante una coloracián de Granu
Resultados:
Los resultados logrados Se consignan en los cuadros'NQ l.
2. 3_y h y la observacion de los mismos.permite apreciar los siguientes hechos:
El reemplazo dc 1a azida sodica en el medio de Rothe y en
el medio "A" por el cianuro de sodio, no produfio una major sensi
bilidad. en el medio,por el contrario. parecia inhibir algo 91 desarrollo del cultivo.
El agregado de cianuro de sodio al medio glucoeadoprodujo
un mayor desarrollo. InVcrsamente,o1 medio de Todd cianurado. seg
55 un retardo. Con una concentraciÉn de 15 - 20 bacterias, el de;
saiiollo es perfecto para cualquiera de los mediosutilizados.Cuandode trabaja con una concentración de h bacterias
promedio, el resultado ya no ee ta1.como 1o demuestra el fl de de
sarrollo que aparece en le última columna de los cuadros. .
Los resultados obtenidos son más o menos concordantes pgre los diferentes medios ensayadosgno encontrándose una evidente
-120
superioridad en_ningunode ellas. No obstante. se ha elegido para
el pfesente trabajo. el medio.glucosadoc1anurado,por la simpli
cidad de su fármula y menor costo. pudiendo ser empleado en análisis do rutina y"el medio "A". uno de los medios úíüimamente es.
tudiados (1953). que comparado con los demás medios. evidenciá un
desarrollo supnfior (mayordep5sito y turbiedad) dentro de las 2hhoras de incubacian.
-13.
CUADRQ fl! 1
ENSAXOS DE SENSIBILIDAD DE MEDIQS QE QULTIVO CON X Sln CIANURO
m. somo
Médica mn bact N0 tub. Desarrollo h Colorac. Desarrollpor tub sembr. 4 3‘7 Greg:
«í 2131. _ Q DOS itiVOS p fi
Todd 15.2o 2o 15 ”* 20 Ha. 20 1005 ++
Todd Ciamu'. 15-20 20 1° M 20 H4. 20 10010 ++
Glucosado 15-20 20 20 H4- 20 +H+ PO 100
G1uc.Cian. 15-20 20 20“H - 20 100
Toda 11-8 20 20 H' 20 H+ 20 100
Ol‘oddCianur. M 20 ig Y 20 +H- 2o 100
Glucosa-1do tha 20 12 204+» 20 100
Gluc. Gian. 14.8 20 12?: 201w» 20 100
4+" n I‘mnmau«¿sus y emanaw a 3an n n«H o Juán»ó l Turháadnd
CUADRO E9 g
DE SODIO
NQbact. N9 tub . CCloraB.DesarrolloMedio. por tub. sambr. 37 Gram negaron
. 2¡+h . l+8h á positivos . fl
1.. 10+ M“ MH- unTodd 12 ¿ k‘+* 4+ 100
Todd Cianur. u.12 un 3211* kh+++ un 100
Glucosado h-12 l+’+ lili-mr“ 1M- 100
Gluc.Cianur. 4-12 un Nh#++ N4+‘++ un 100
++++ a Excelente depásito y turbiedad
H-f a Buen " "
+4 a Depásito
Q a Turbiedad
QUÁDRO HQ 3
DE SODIO
.NDbact. N0 tub. . Desarrollo \Colorac. Desarrollpor tub. senbr. 37o Gram
. ahh . h8h .posifiivos fi
Glucosado 6 5 20 12 11* 2o a+«: 20 100
Gluc.Cianur. 6 20 lï :** 20+++. 20 100
Rothe 6 20 20 +r+ 20+++# 20 100
Rothe Cianur. 6 20 12*:2 20+++á 20 100
19‘9++Medio fl A " 6 20 1 *++ 20++++ 20 100
Medio "A"Cian. 6 20 13*:*‘ 12*:** 20 100
Glucosado 3-k ho 3;::* 37+4+. 37 92,53+
I 35+rr+ 33#+++Gluc.C1anur. 3-” “o 24+* 1k+ 39 97';
Rothe 34+ 1+0 a; 11" 33*3" 38 95
l 284+h 38+e+Rothe Cianur. 3-h no lo ‘* 2 * 38 95
Medio n A n 3-h no 32‘**‘ 3g**** ko 100. - - v
Medio "A"Cian. 3-k ho 3g*:** 3Ï‘II* 39 97.5
+4++ a Excelente defiásito y turbiedad 4+ a Depásito
+,+ t Buen ” " + a Turbiedad
CUADRO no 1+
ENSAYOS .l
DE SODIO
oNobact. Ï'ÏQtub. Desarrollo Colorao .Dggarroll‘Medios por tub sembr. . 37o Gram
o 211-11 . l+8h . pos it ivos %
Todd 10-15= 20 2Qg++ 20+++ i 20 5 100
Todd Cianuro 10-15 20 20 +# 20 ++4 20 100
Glucosado 10-15 20 20 +++ 204-0“ 20 100
G1uchianur. 10-15 20 20+H 20++4# 20 100
Rothe 10-15 20 20+“ 20-M": 20 100
Rotne Ciandro 10-15 20 20r-+ 20+++« 20 100
Medio " A " 10-15 20 20+“.- 20++o+ 20 100
Medio “A"Ciano 10-15 20 lïtï‘ 20+44ó 20 100
Todd 2-h ho 351:“ 3É::** 37 92.5
Todd Cianuro 2-h no Ïg;;* 3g::* _36 9o8o
Glucosado 2-¡+ l+0 3 3gr.“ I 36 90
Glucos. Cianur. 2-’+ 1l-O 3 38-Hfl‘ 38 9.5
QUAQHOun h Scontinuacián)
.NQbact. Nntub Desarrollo Colorac. Desarrol"adios por tub. sembr. . 379 Gram
o o l+8ho eDOSitiVOS í
' hó++ h++ eRothe 24+ 1+0 32‘, 31H," 38 95
24 I
' 2 oRothe Cianur. 2-k HO lg:;* 3QIÏÏ+ 33 82,5
' 8+
Medio w A w 24+ no 316;“ 3g?“ 38 95
Medio "A"Cia.n. 24+ tro 32:“ 3g?” 37 92.5
++++ s Excelente depásito y turbiedad+++ z Buen " N
++ z Depásito
4» l Turbiedad
El estudio comparativo entre el medio glucosado cianurgdo y el medio "A" con el objeto de determinar sus cualidades para la
investigacion de estreptococos en agua. se efectuü examinandodire;
tamente muestras de agua del Río de la Plata (20). de pozos semisu;
gentes de BuenosAires y poblaciones vecinas (56) y de natatorios(65]
En total le examinaronlhl muestras y en todas ellas también se determin6 el contenido en bacterias colirormes.
Aislamiento de esgreptococos en agua de río.
Por tratarse de aguas muycontaminadas se efectuaron dilup
ciones decimales, sembrándoseen este caso. tres tubos por cada di
lucion comose indios en el esquemasiguiente:
3 tubos sembrados con 10 ml. de muestra
q n a I 1 u n
a n n n o. 1 s n
n n n n o. 01 w In
e II n e o. 001 u I
n n u n o. 0001 o II
Se sembraron en total 60 tubos de cada diluci5n y de cada
medio. que se incubaron a 3790. durante h8_horas. Con material de
todos aquellos tubos considerados positivos (deposito y turbiedad)ser realizo una coloracidn de Gram.a fin de confirmar la presencia
de estreptococos, procediendoss a aislar ds'algméozde estos culti
vos. cepas de estreptococos mediante siembras en estría sobre pla
cas de agar nutritivo. una colonia aislada de cada placa fu‘ sombra
-1“
da en caldo glucosado cianurado y luego de ratificar su pureza por
una coloracifin de Gram. se procedifi a conservar las cepas sembran
dolas en tubos de agar inclinado y guardándolas en la cámara fria
para su posterior clasificacionrLos resultados alcanzados; que se presentan en el cuadro
No 5,muestran una mayor sensibilidad y selectividad del medio glucgsado oianurado, cuando se examinan aguas marcadamente contaminadas.
En efecto. sobre el total dem360tubos. el medio cianurado indica
un 67.7 5 de tubos positivos comparado con un 63 fl del medio "A".
El fi de tubos confirmados fue de 58.9 fl para el medio glucosado cia
nnrado mientras que para el medio "A" no paso de 52.5 fi.
Aislamiento de estreptococog en aguas ge-pozos X natatorios.Se procedio'a 1a siembra de estas muestras empleíndose las
siguientes diluciones: .
3 tubos sembrados con 10 ml. de muestra
I I I W 1 R I I
n n II e 0.1» .n a
La confirmacion de los tubos positivos. el aislamiento de
cepas y su conservacionpara la posterior clasificacion. se llevnron a cabo con una técnica similar a la utilizada con las aguas derío.
Losresultados relativos a le sensibilidad y selectividadde los medios empleados frente a las muestras de pozos y natatorios
estan consignados en el cuadro No 6 Y de su observacion se estable
ce que en aguas de pozos el medio cianurado posee una mayor sensi
bilidad. no obstante acusar un 1 mayorde tubos falso positivos que
-15
el medio "A".
En muestras de natatorios ocurre lo contrario. el medio "A"
demuestra mayor sensibilidad que el medio cianurado. dando un menor
fi de tubos falsos positivos.
En cuanto a la selectividad de los medios. en ambostipos
de agua, la coloración de Gramrevela una mayor pureza en cultivosdel medio "A".
Comoya se mencionó. en toda! las muestras examinadas se
determiná el númeromás probable de bacterias coliformes por 100 ml.
y se hizo la diferendiacifin de los mismosen los grupos Esch.coli
y bacdlos intermediarios. aerokenes y cloacal; ee procedid para ello
de acuerdo a la tecnica del Ministerio de Salud Publica de Inglate
rra modificado por Wilson (39) y adoptado por los laboratorios de
0.3.I. desde hace muchosaños. cuyo fundamento es el siguiente:
Porciones determinadas del agua en examen, se siembran en tubos con
caldo Mac Conkey, que se Sncuba a 37°C. durante H8 horas. La forma
cidn de ácido y de gas indica la existencia de bacterias coliformesLos tubos positivos se utiliZan en su totalidad. para realizar pa
ses; 1) tubos con caldo Mac Conkey que se incuba en baño de agua
regulado exactamente a hhflc. (i0.5) temperatura en la cual solo el
B.coli fecal produce ¿cido y gas y 2) a tubos con medio citrato de
Roser. que se incuban a 38°C. durante 72 horas..ESte medio tiene
comoúnica fuente de carbono, citrato de sodio, y en ¿l se desarrg
llan las bacterias coliformes del grupo I.A.C¡
Uh cálculo permite determinar el numero más probable (N.M.P.) de
-16
bacterias coliformes totales. B. coli fecal tipo I y bacterias coliformes del grupo I.A.C¡
Todoslos datos referentes a la presencda de estreptococos
y bacterias coliformas en los diversos tipos de aguas examinadosse
condenean en el cuadfio N9 7.
En aguas de rio, tocas las muestras analizadas han acusado
la presencia de contaminacion tanto de estreptococos comode Eggg¿c
coli existiendo por lo tanto un paralelismo en ambostipos de contaminacion.
En aguas de pozos, si bien se trabajá con aguas que.habian
dado ensayo presuntivo positivo de coliformes, solo se observo en
un 8h fl de los casos paralelismo entre la contaminacion por colifornes y estreptococos. E1 fi de muestras con Each coli results mg
nor que el de muestras con estreptococos.
En aguas de natatorioe 1a falta de concordancia es mayor.
ya que estreptooocoa y coliformes fueron hallados solo en el 80 fi
y 52 fi respectivamente de las muestras examinadaa. alcanzando ape
nas 15.h 5 las muestras con Each. coli.Es evidente por lo,tanto el mayorvalor del indice de es.
treptococos sobre el de coliformes para Juzgar la calidad bacteria
logica de aguas de natatorioao
-17
CUADROEQE
Mediocianurado
Medio
"A"
ir
sembr.:
+
confir.fals.
r
sembro;
+
confirfals.
Tubos
sembrados
con
lOml.
60
60
.582
60.
60
573
Tubos
sembrados
con
1ml.
60
60
su6
60
60
519
Tubos
sembrados
con
0.1ml.
60
56
#6lo
60
52
38
Tubos
sembrados
con
0.01ml.
60
39
327
60
39
327
Tubos
sembrados
con
0.001ml.
60'
21+
177
60
12
Tubos
aembrados
con
0.0001ml.
60
5
50
60
Total
detubos
360
2H4
21232
360
227
18938
Resultadostotales
fi
67.7'
58.98.3
63
52.510.5
CUADROga6
PSTUDICOMPARATODELASÜHEIBILIDADYSULECTIVIDADDELMEDIOCIANURADOYDELMEDIO"A"
FRENTEAMUSSTRASDEAGUASDEPOZOSYWATATOBIOS
AguadepozosSemisur.
7
Aguadenatatorios| Ambasprocedencias
MedioCNNa total%
total
fl
Médio"A"lMediocuna
total%
Med10"A"
totalfl
MedioCNNa
totalfl
Medio"A"
totalí
Tubossembradoscon10m.
168
-168
180
6180
-3h8
3h8
gubospositivos
156
92.8137
77:3161
89.h1h6
81,1317
91
283
31.3
Tubosconfirmados
127
75.5116
69
100
55.5129
71.6227
65.2
216
70.“
Tubosfalsospositivos
29
17.221
12.5
61
33.817
9.“9D
25
38
10.9
Tubossembradoscon1ml.
56
60
660
-116
116
Tubospositivos
25
kh,622
39.2
30
so2h
l+055
¡mu
39.6
Tubosconfirmados
18
3218
32.1
19
31.619
31.637
31,8
37
31,8
Tubosfalsospositivos
7
12,54
7.1
ll
18.35
8.3ll
15.5
7.7
UADROn
N9muestrasEstreptococosCaliformeaEach.Coll
positiv.Spositivfpositivfl
Tipodeagua
I
Rio2o20100201002o.100 szos(x)56u783.9561001730.3 Natatorioa6552803k52.31015o1+
(x):SepartiádemuestrascuyoensayopresuntivodeB.coliformes.dióresul
tadopositivo
IY - CLASIFICACION DH LAS CEPAS D? ESTEEPQOQOCOS
La clasificacion de las diferentes cepas aisladas se llevo
a cabo de acuerdo con las tecnicas seguidas por K.C. Cooper y Ramadan.
De las cegrs de estreptococos aisladas y conservadas en
tubos de agar inclinado, se efectuaron pases a tubos de caldo bacto
pcptona y luego de una incubacion de 16 horas a 37°C..se efectuaron
las siembras en los siguientes medios diferenciales (ver apéndice)
Los ensayos realizados fueron los siguientes:
1).- Licuacio'IIde la gelatina.Se sembrá cada una de las cepas aisladas por puncicn en
tubos conteniendo un medio con gelatina, luego de una incubacion le
1h días n la temperatura ambiente se efectu3 la observacion, habieg
do desarrollo filiformc en todos los tubos y licuaciÁn de la gelatina solo en algunos de ellos.
2).- Eermentacion de azúcares.Dc cada uno de los tubos de bncto-peptona a clasificar seg
broae un anna (Mmm)en tubos conteniendo 5 ml. de los diferentes
a: carest lactosa. manitol. sacarosa. refinosa. inulinn. glicerina
y sorbitol,realizándose la observacion luego de 2h y #8 horas de
1ncubaci5n a 37°C. La mayoría de los tubos que dieron reaccion po
sitiva lo hicieron dentro de las yrimoras 2h horas. Los tubos sem
brados con lactosa dieron todos reaccion positiva.
-18.
3).- Leche gzul de metilenoo
l Se sembro un ansa de los cultivos a clasificar. en tubos
conteniendo h ml. de leche azul de metileno. Se incubó éstos en ogño de agua a 379G. durante 24 horas. La reaccion fue considerada
positiva cuandolos tubos presentaron reduccion parcial (color ce
leste) o reduccion total (color blanco)
A1 igual que en el ensayo realizado con la leche azul de
metileno, se sembr6 un ansa de cada uno de los cultivos en tubos
conteniendo N ml. de leche tornasolada. Luego de incubado en baño
de agua a 37°C. durante 2h horas. se hizo la lectura. considerándo
positivos aquellos tubos que dieron reducción parcial (color rosa)o reduccion total (blanco).
s).- gidrolisis del ggpiaSn.El ensayo para la hidrálisis del almidán se llevo a Gabo
sembríndose en superficie. placas de agar con 0.2 fi de almidon so
luble. Las placas se incubaron a 37°C. durante 5 días; a1 cabo de
ese tiempo se efectuá la reaccion para determinar la hidráiisis cgbriendo la superficie de la placa con solucion de Lugol. En ningún
caso se observo reaccion positiva.
6).- Qesargo¿;o gg 6.5 z ge ggfigodLa siembra se realizo en superficie. incubándose las pla
cas conteniendo 6.5 fi de ClNa durante #8 horas a 37°C. En la ma
yoría de las muestras se observo desarrollo de colonias.
7).- gom511315.—
Se procediá de acuerdo con la tecnica de Brown. Be sembr6
-19
en profundidad, colocando l m1. del cultivo de bacto poptona de 16
horas de incubacion, en placas y luego se agrego a cada una de ellas
el agar fundido al que previamente se agrego 5 % de sangre de caba
llo; se mezc15el cultivo con el medio y se dejá enfriar. Las pla
cas secas se incubaron en posicion invertida a 37°C. durante 2k ho
ras; luego de examinados se dejaron 2k horas más. efectuándose la
lectura final. Se consideraron positivos todas aquellas placas cu
yas colonias preoentaron hemfilisis a su alrededor.
8)o- te c o 6 9 .
De acuerdo coo la tecnica seguida en el trabajo de Cooper
y Ramadan, se colocaron 0.5 ml. de cada cultivo en pequeños tubos
de ensayo.manteniéndose durante media hora a una temperatura de 609
C. en baño maria y llevándose luego a un baño de 3790. durante 2
horas. Se comprobosu resistencia al color sembríndose en estria en
placas de agar Sangre al 10 fi e incubando a 3790.durante H6horas.9)o- Qesarrollo en bilis.
l Se sembrtgen caldo bilis al lO fi incubándose a. 37126.de
te #3 horas. Fueron considerados positivos aquellos tubos que presentaron turbidez y precipitado.
1o).- Hiaro‘nsis gel hinurnto de sodio.Los estreptococos hidrolizan cl hipurato de sodio transfer
mándolo en ácido benzoico y glicocola.
La presencia de ácido benzoico en cl medio, puede ser de
mostrada realizando el ensayo del Cl3Fe o de un ¿cido inorgánico.
Sc efectuá el del Cl3Fe por ser el más sensible de los dos.
-29
I
Se sombrá un ansa de cada cultivo on bacto peptona en un
medio conteniendo hiyurato de sodio y luego de incubado durante #8
horas a 3790. se }rocod15 al ensayo del C13Fe.
Se agrego a le. dél medioutilizado.0.5 ml. de solucion
de Cl3Fe al 7 fl y se agito enéígicumente. La permanencia de un D23
cipitado en la mezsla. significa que el hipurato se desdoblá en
benzoato y glicocola. mientras que si la mezcla qued5 clara dentro
de los 5 a 10 minutos. al hipurato no ha sido hidrolizado.
11).- Crecimiento g ÉH?¡6.- .
El medio correspondiente fuí inoculado con dos ansas de
cada uno do los cultivos on basto pectona. Se incubodurante 2h ho
ras a 3090y se realizo la lectura correspondiente. El pHinicial
del medio debe ser 9,6 (z 0.02) y no debe variar durante la incubgcion en (1-0.0h unidades). Dobeasegurarse que la temperatura del
medio a1 detorminar el pH son de 1890.
Se sembraron tubos controi con caldo dextrosa y "buffer"
ajustando a pH 7 incubándose con cada una de las cepas examinadas.. QTambifinso incluyeron en cana ensayo controles negativos.
La clasificacion de las diversas Copas de estreptococos
estudiadas con las técnicas moncionadas. so consigna en los cuadros
No 8, 9 y 10. Estos resultados no concuerdan en su totalidad con
los obtenidos por Cooper y Ramadan.
La determinacion de algunas cepas variá en una o dos reac
ciones, Se observS un comportamiento anormal, por ejemplo. en va
-2},
rias cepas que se consideraron pertenecientes a los St; atigieo I;LLH, conrespecto al tomasol. sorbitol y resistencia a 609G.es
pecialmente en las aguas de río y nntatorios. Similarmente. el fi;;¿qgïüico V sa presento anormal a la reacoi5n de hidrálidis del hi
purato en los tres tigos de agua y el étr.durggg en el desarrolloa pH9.6 y la prueba de hemálisis.
En agua: de pozos. varias cepas no respondieron satisfac
toriamente a las reacciones del azul do netileno. Por el contrario
en aguas de rio y natatorios. las reacciones fueron normales.
Afin de establecer en base a esta clasificacion, el origen posible de las.ceyas estudiadas.de acuerdo a lo establecido por
Cooper y Ramadanse conseder5 al Str.fgecn;is gipicu y al 33;. ág
Egggde origen exclusivamente humano.al Str.atíp1co ¿1;¡;!¡ I y_s_rzbovis,¿eorigenanimalexclusivoyallïaucfgcicnn de origen humano-an'° o
Con los datos obtenidos se construyá el cuadro N9 11 en
el que aparece la distribucion de las cepas de acuerdo a su origenq 0 . o _ oEn Si se observo que -' «¿un de rio presentaron una contaminacion
do origen animal muy superior a la humana.en ggggs dg 20205 predo
minála contaminacion de origen humano. En cuanto a las ggugs de
natatorios presentaron igual fi dc contaminacián de origen humano
y animal
-00
.2?
A - T NT
Simultáneameáfo con los onsayoá realizados con el objeto
-de clasificar las diferentes ¿spas de estreptooocoa aisladaS. socfectuïron otros destinados a determinar el origen. humanoo animal
de la contaminacián de las muestras en estudio,conrormo a las prue
bas propuestas también por Cooper.y Hamadancon el mismofin.
8a utilizaron los tubos de cultivos en bacto peptona de
16 horas de incubaciáh. nandos para la clasificaciÉn an3erior.roalizándose los'siguiontos ensayos:
mega de someter 0.3 m1. dgal cultivo de 16 horas. de cada
una de las cagas a clasificar. a la tenperatura'de 63°C. durante30 minutos y dos horas a 3790. en baño maría.ae Sambrá un anna del
cultivu.en ostría an placas de agar sangre 31.10'fi y_oo.efectu6 laobservacion luego de una incubacián do #8 horas a 1a temperatura de
379C
2).- Resistencig nl cala; x a; telurito.—i De los tubos expuestos a la temperatura de 6390..ao sen
br5 an estria en placas con medio de Todd 551140 (se ufilizo medio
de Toddsilido,en reemplazo del medio_deMc.Leod'a utilizado en el
trabajo du Cooper y Ramadan),con 0.0%Zhetelurito de potasio. se 1
incubo a 3790. durante #8 horas. La presencia de colonias negras
indicá reaccion positiva.
3)o- Epacciáh Verde Q. de ¿anns,'Úú'ansa (É moi del cultivo en caldo bacto poptona de 16
.23-‘
horas de incubacifin, se sombrfi un el medio verde Jahns con una coa
centracián de 1/10.000. Se incub5 durante 16 horas en baño de 37°C.
Se estableció que el Verde Janus se reduce en el siguieg
te crían da coloraci5n; azyl. malva. violeta, rojo oscuro, rojo Y;
no (quinánico) rosa, rosa pálido a incoloro. En este ensayo Se coasideran comotubos positivas aquellos en los cuales se observa el
color rojo qulnánico (forma semireducída) o cualquier otro color
que siga a la obtencián del compuestoleucoïormegsiondo el colorrosa el n55 a menudo observado.
Los tubos tendrán rcacciÉfi negativa cuando el color ests
comprendidoentre el azul y el rojo oscuro. Para evitar confusián
entre el rojo oscuro y elrrojo quinánico, los cultivos son agitados antes de examinarse, puesto que 01 02 atmosfÉrico devolverá
ol color violeta al colorante si no_so halla en la forma quinÉnica
En las observaciones efectuadas en este trabajo. se con
sidurá positivos los tubos con coloruaián; rasa, rosa claro.e 1ncoloro.
Los resultados alcanzados tamïicn se representan en los
cuadros N9 S, 9 y lo. En ellos, de acnerde a Conper y Ramadanse
claSiÍ105 a las cepas en 6 grugos :ansiderando:
Los grupos I y II .áe exigen exclusivamente humano
" " III y IV " " " animal
" " V y VI " " " humano y animal
En el cuadro N9 12 se ¿resentan estos mismos resultados
en relación con ol ti¿o d? agua, pudiendo ohservarsa en las aguas
-21..
do rio una lavar óbntaninaoifin de origen anima]. 0+2 fi) qu. humano
(5.3 fi) y un elevado percentage ¿e cepas a las que se asigna ambos
origenes (52.7 96), En cambio en aguas de pozos senha-gente! y nata
torios predomina la conteminacián do origen humano.
«pp-O."
-25
bkn-8219*.
CIC“Lu:CUL'ILV'¡JE.T.‘¿.u..TJL¿C«bAI.,.Lz.n.-D.aDial.AGUA¡JuánMOjj;¿LLISA¡enIDJ’L‘IFICALIGHnscum(a)mammm(b)
humanooali-nl
“11'37"!” “JW
IIïtNITscoutxva
catan
'vermont-Uta
no c30%6
agravan-rms
BRUBf°A CHOUÏ
.59 norma
¡HIJOOTID
WMP-rpmtosau¡o¿ 0908
nato °3It008
uevwmOUOIIQOH’V
BI'TTFH’H
¿ 0:03
Soatlpico
4.
1:an * *9.01.099 +> 4
9‘6 nd 039-00 1- -+
team-ros + *'
5.at1picoII oGrupo
.09 “3810.8 .0 f 4'
l
-# -& -#
Í
+l*l©
4.
l
l
O
O
I
S.dura-I+-GrupoV
¿_'
¡3.at1piooIII<
Grupo
-r av «t 4- -r
4.
O
I
I
3.atip1coII+-Grupov
o
© Q
u
I
o
o
o
4- -+
a
a
S.¡tipicoII-Grupo
i
-L 4L 4.
B.¡tipicoIIIooGrupo
atipico11
“tipo
.n.ïgt¡n r4 iv ¡fl C’ U\ \D 0- GI 0|
u
a
-r -+ 4.
GD í- —+
o
o
‘f
(D4
a
a
¡tipicoIIo-Grupo
.7H
111O-GH».
o
¡tipico
31
n
G) ‘69 GD
+u
l
l
Q)
¡tipicoII-Grupo
SÍ
s.atipiooII]o-GrupoIV
NW0-0
-r 4- -r 4’ -r 4- -+ 4‘ -r 1
4- 4- -+ -r -r 4h 1- -rr 4- 1‘
sm 04mm 'f + + 4- + 'O' + ‘f + + + + 1‘“¡cam + 4- + + f 4- + + + + + + 4
I
o
+++++
O«a
-& -+ 4- «L 4h 4- 4- 4- ‘F -&
o u
I 6)
.+ 4. -+- 4.
o
u
o
i
a
o
a
¡319100IIIf -GrupoV
.1
.v¡.2
_-‘C
¡”JBIuï'flïlllüáülifl¡SiQE.“(l)
.I
humanoo
¿“Jl71511353(b
¡NITROW‘H‘ÍÏOÜ ’37!
103m?”
C:
"TIM!muïJB’a-Y
'Bïaeottflto QÏQIC'
mtïivz"!vent-tv'ïiïtQBDn
009 '491303
'HÍ’) 'WW’“
IOGÚUJOJI'IOH
'8059'7CTIïE 'JUGUJ
'Oï’ÜOïIï"ID
.{9 warm
surco testa”; nov
á
4.
Soüt1pl.°
III
Gnro-nm? É
VL
d\Fi
.¿
SoltlpiCo
III
4.
GrupoI
2
-¿- L J
4.
5.at1piso
111
GrnpoVI
3
dol‘lpi‘.
ll
GrupoVI
flF1
ü.ntlgico
11
1
GrupoVI
EL
3.a‘191c0
IIi
GrupoV
2)
l 4 4 4
5.-tipioo
11
I
¿.4
Gl'ugoV
a
4
111
Ninf'AWm441LLLLL
GrupoVI.
‘93
¿o
¡tipico
111
¿o
¡tipleo
111
¿»4‘a“
Grupo1V Grupov
¿ofltlptflO
III
I
4-4»
GrupoVI
¿o¡tipico
Grupo¡v
¡tipico
GrupoI
¿«LJ-¿4.0
4;.4.¿14.0.LLL44;¿4.¿¿L14.4.¿LL
¿4114¿4¿¿La.4.4.4.
¿JittltlfiilFO-L¿44.4‘tlLL4-LLLL9‘.W°8‘1905‘44—¿144&L¿+L&+J_
aglpicoI
1
;4.4.
Grupo17
B°Amno 99. a: R a sx a a
CUADRON98
PORIDENTIFICACICRDECEAS(a)
PORORIGEN(b)
humanooanimal
rasca-Bons
009
WI
WIOBWFIFBFÏO
IO4TQIOS
nanny»!
' 4812893
neuquenFQP’flITV 'H
oí9 °qsïsoH
ngïonouïmo
WT4'9I99 '01?! J
aeoutm 4,.
01191346! °v 4
oav-tndm'apm Q)
manana 4.
.4.
4.
l
O
4.
IS.liquefaciens
GrupoV
4.
SatípicoIII
sanar; eqoo'I ¿ 4.
4-4.
GrupoV
SatipicoII
Grupo
I04m4+4-+
FRIO “1.91398 4. + 4 4.
9‘6H1’HBSOCI 4. 4 .5 +
+4.n
l
l
4-®n
O
Soatipico
Grupo
n
@@¿
bovia
n
¡
l
Q)
l
O
l
(D
S.
GrupoV
8.
¡típicoV
4-1.
GrupoI
S oatipicoV
GrupoIV
I.“n
S.
®®®u
¿0-4l
n¿+4.l
a
n
atipicoV
4.a.+++
GrupoV
R
4.4.4—+4.4.+4_¿.
44.4.4S.atipiooIII
a
Q9
GrupoIII
R
(«eS.duran:
GrupoVI
R
BTI‘H’HBBQGJ-¿¿-L-L&4—4—4—.L4—
4-4-¿++4—I
l
l
I
l
l
l
S.duran!
GrupoVI
oResultadosapuesto!alosdeltipocorrespondiente.
fi
+
+f
arrasan;-gITTBoea:'S
+
ü++
SITRoen:’Senvase;’s
CultivosLic.Gelatina.
ImitolSacarosa
ReinosaInulina
Glicerinasorbitol
A.¡etilenoH.Almidbn
Hemólisis
Resist.60°
Reaiat.Clfla
Red.TermalHidr.H1purato
Lactosa
Desarr.BililDosarr.pH9,6
Clasificación
IBChO
ReS‘Btï65.
Res.I
(v)svaaosummvommma:ma
masooumnnq
(tt)mmmHoa
OHOHCWflO
ÍTIOïÏn-ïï)
{b
TIT001‘731"*
1-1-1+1r-r--e1-+na1«meÏ+Ï+ÏInmoqu+1'1'+r+1-++1-1-+á’m06m9o+BUWOHJOMH1-+í+1-++o<1»+ï-1»1'e?no‘run«1»mmovxom‘n1'1>+++++e++ï+«1»6?I0mm+mm":+1+(-3+1+a11++uz1'11o”’na:g+¡ITUMY-‘I+1‘1’++1’+T+1‘4’1'9?TIown--acalm++++-+<1-1-1-e?A«mas+«1¡una-=1=---------.I?1'05m9f+iwarm;o1.++-.1..1.-.1...CeIorïmo1'«1»1'“Ivanov:+++11+++e+++6TrMmm45f.1Itcarino+-*+-e++<1«1+81:Iarmo1-++4armonia:+'r<1í<1+ev+«4¿IM0m?)-+Jmnor-’12"+++-41---++9!rafin-m1-+atraco”:iá1-r++41-«1'4«1-+4-GIa1%; e55%EÉEíéïïééïfiïgEéEme-q;5'Efigg'zrsgéxgEE-gfl'gE51559::É41°555995á5555s23132
s¿ÉQEa:3sggsüsea3‘8'É'í.5“88nE
muaouna“
(a)ns(i)maz-:1":maIfivaïanemrme
mr:9,.'1.¿musasr:1119201112120
CUADROH"2
'nILF'ICACIOE‘IDECUIÍI‘IVOSDEESTREPTOCOCOSAISLADQ‘SDEAGU
PORIDENTIFICACICNDECERES(a)
PORORIGEN(b)
humanooanimal
WTQBIGQ WTI
ugIaBoïITBÜIO
9904091
o09 ‘43 TSOH
s Is 119m3};
099W? 'IDTN
“GUM! 'V
T0net-109
W'FJWOTID
WÏU‘UI
059 '4915993
¡01:13: tcum-[3.]; 0393
ugTOPOTJTSBID
nam‘gm "’
.5
1
i
4
u.
magenos
n
|
"I,
faecalis mogenes
l
l
43)
faecalis
toqm+44++
9‘6 Hd'msoa 4. + + -} 4
'[OSEU-IOJQ ‘POE —L + 4 —+ 4
e)- 4. 4 ..L +
i
I
Cb
faecalia durans
OO)
0
a»
I
l
l
Smmoaraammaa
camdïn 'IPTH 4. 4 4| 4 4 4» 44.
fuecalis
+44++04+l
n
faecalia
Cl;
.g
4444.4444
oCD
U
I
l
l
l
I
4
atlpicoIII
44++44444
44++
l
l
l
4
i
oo)
atipicoII
Grupo
dnrans
¡D
I
u
a
I
l
I
RRRS
Bsmoïlsnr44++444+444
STTTE°GTB5°G+ü+4+co44444+
9‘0'49139344444454-L4444
4+444>4+44+4
4+44+t4+Q4+4l
I
4+"D
4444®4
4.4
4‘
u
44|
.4.
l
l
szynogenes
Smr'AOTIOO'I44¿++-++44444
0tResultados0121105170!alosdeltipocorrespondiente
Cultivos
Lico Manitol
Sacarosu
Rafinosa
InulinaGlicerina
SorbitolA.Metileno
H.Almid6n
Eemólisis
Resist.60°
Resist.Clfia
Red.Tornasol
Hdr.Hipurato
Lactosa
DGSBIT.Desarr.pH9.6
Clasificación
LecheV.Janus
ReSi‘Jto63°
Res.Teluritoycelor
Clasificación
(B)SHE!)zaAmovommmmn03
QSOGVTSIVSODOOOJHHH
TPNTuBoouvmnq
(a)molanHOcï
g
l
É
baü¿a
ISE'EUSOAIMTHDHU
SOIHO
0TOHOHFVHO
CUADROno10
CLASIFICACIONDe:=CULTIVOSmeEmmmxmcosAISLADOSmn,AGUADE¡”amamos
——_
v
PORIDENTIFICACIQYDECEPAS(a)PORORIGEN(b)
huflanooanimal
nsoanoug
BUTQ'ÜTQO.OTI
SOATQÏTÍO
99040BT
.Io ‘29 Xoqugtom osea
¡1910901318310
o€9 '491898
anuar'n evae'ï
ugra'eotnsüto
oavm'ïm'apm
108121110.}.Tau
emo 'tmsaxo09 mueca
aunque};“991m 'H
castigan °V
tant-leona
PVEI'UUI
vsomm
d“
hupOI
*
HHO013.
33'dO
q.
3E!
¡lupaI GrupoL
#4‘9‘1
.faeculisGrupoI
+4+14
.fuecalis
4
33
TJ03H
m&@+ma-r + w -+ 4
GrapeI
-++++-’i+i 4'
4' .fueculisGrupoI
44+4
+++++4+--r++—|-+
4- .faecalin
l
n
u
ÏWTQ‘IC’S (D -+ + + + 4- 4
n
n
I
+-r-+«+-+4¡
l
GrupoVI
444+++44
Í
u
l
C0
.atipicoIII
GrupoIII
U) B.fueculis4-i‘GrupoI
¡394+4
SoÍaecalis
«1+
GrpoI
4
+++4
-++—+
|
r3)
S.atipicoII-oGmpoTI
+++4+-+44+<+++a
l+++++++++
+++++S.atipicoIII-4»I-GrupoII
104m“+++—+-+=r«+—+-+-t4+¿.-+-l>+-++44-++-+J-*.J
SITIH'Hüsafl++++++.L-r++a—++44+«r«++*+l
n++4+
4-S.atipicoIII4-4-¿-GrupoI
H910\
¡DHLI l
¡EUADEHA‘AÏ'ORI0.5
nr'n1‘‘I'F
U-L'LLI
AIN"'
“J¡u1I\JD
"OC
'firm:Top
DE
PCRIDENTIFICACIONDECEPAS(a)
.EI:CULTIVOS.1
CIAQIF‘I‘LiACI‘CE
¡cmo Kputa]. “¿GH
.í'ó’ ‘491983
¿"A 91103!
atipicoIIzymogenee
’."OO
‘6 ¡{d'asïïmoa++'JJÉSGO
4.4.4ne o49m:
’úÏPT-Ïí
“931i
emo ways-63
«09 'ífiïflafl
BIBïTQWQH
mi?er 'Houaïïqew‘v
mnmwmmaoflí)
W'FTÑUI
ns OUIIBH
BSOJUDÉS
toatmvn
manteswnaun-1m
1’c'JXLïíEIcami)ITIcimanemi,IIcam-9Ioda-¡5;
sunnmfidmuo«¡JnIcy¡a1u¡142422591270matanza);1
«mamasncow-"nnrn00?anneoïfinnWÏVNÚI
#‘f
..
¿torna t¿gn-gara; '20."
¡MT’WÜ
06311335'?
renace"
¡3031:1111!
.- .59 1'481803
009 names
s,
umnr'; om!
9.6 minimum
una 01:31:80:!
osmndïmmntoa-wm;W
(D)mv"!Y"?!{ETT'FÏWILWT"CJ
=Hut.'.-"'31i'í.AÏL’Íi‘}71'"Ti"TÏ»'="7T.ÉÏÏ'AJ'}
tosïnunmarcaron
CUADRON911
Origen
38cepasdeRio
1
cepas
hocepasdePozos50caps;deNcepas
S
capas
atat.
fi
Humano
7.8
21
52.5
17
3k
ZH'
63.2
7
17.5
16
32
Humano-Animal
11'
P9
12
30
17
3%
aattSeot¿"csoawav-mmmqaBTOIq¿fi9‘!IWIWV«6zz699€C'sami;
yamooysu!»g¡vano
min-Io
03m8“epandenosmodopBaconoo;0;:opBadoogt
CC-krv'ü1.-..5:¿ous¡mis1101;.:=;1:...»7.;.o:Wmiommmmz:mafia-¿o
V- RESUMEN Y CONCLUSIONES
1).- Se ha ensayado 1a adicián de cianuro de sodio a diversos medios
apropiados para el desarrollo de estreptococos determinando la sen
sibilidad de los mismosfrente a diluciones de cultivos puros deestreptococos.
2).- Los medios probados fueron el caldo glucosado y el caldo de
Todd;y el medio de Rothe y otro denominado medio "A". que es una mg
dificación del medio "S.F." de Hajna y Parry. en los cuales se reegplazo la azida sodiza por el cianuro de sodio.
3).- No se observo diferencias marcadas en 1a sensibilidad de dichos
medios por lo que se adopto, por su simplicidad. el caldo glucosado
adicionado con 25 mg.fl de cianuro de sodio para emplearlo en la in
vestigacion de estreptococos en aguas.
h).- Se estudiá la eficacia del medioglucosado cianurado comparati
vamente con la del medio "A" exaninando 20 muestras de agua del Riode la Plata,56 de pozos semisurgentes y 65 de natatorios.
5).- El medio glucosado cianurado resulto ser algo más sensible aunque menos selectivo que el medio "A" con azida.fronte a aguas de rio
y pozos y menossensible y selectivo frente a aguas de natatorios.
No se aconseja por lo tanto emplearlo en sustitucián de los medios abase de azida bien conocidos.
6).- Se detcrminá paralelamente la presencia de bacterias coliformesen todas las muestras examinadas hallándose con relacion al núme
ro de muestras estrcptococos positiVas igual cantidad de muestras
- 26
de pozos coliformes positivas y considerablemente menos aguas de
natatorios coliformes positivas. Ademásen aguas de pozos y natatg;
rios el fi de muestras con Esgn. coli resulto muyinferior al de I
muostras con ostreJtococos. " I.7).- So estudiaron siguiendo las técnicas propuestas por Copper y
Ramadan128 cultivos puros de estreptococos aislados de las diver
sas muestras examinados, con el objeto de establecer ol origen ngmanoo animal de las mismos. Los cultivos de estreytococoa aísla;
dos, fueron 01a51ficacdosz por identificacion de cepas (a) y por
origen de contaminaclÉn (b).
8).- Los resultados alcanzados por los ensayos bioquíhicoa en la
clasificacion de entreptococos por identificacion de capas (a)no
concordaron totalmente con los hallados por Cooper y Ramadan;ll
gunas copas se aportaron en una o más reacciones de su comporta
miento normal.
9).—Distribuida: las copas identificadas por (a) de acuerdo a su
origen, se obacryÉ un predominio en aguas dc río. de estroptococoa
de origen.aniaml; en aguas de pozos de orígen humanoy en aguas de
natatorios igual porcentaje de copas de origen humanoy lnilil
10).- En los resultados alcanzados en la clasificacion de estroptocooos por origen de contaminacion (b) se obtuvo tambiéh un prg
dominio,en aguas de río de estreptococos de origen animal. en
aguas de pozos y natatorios yredominoron las contaminacionoa de cgi1
gen humano.
11).. Comparadasambas cla31f1caciones (a) y (b) se observs un
resultado aproximado en al origen de las cepas, en aguas de río
y pozos. En aguas de natatorios hubo una mayor discrepancia.
1:2).- Dadala simplicidad del mátado para establecer el origende la contaminaciSn (b) y el paralelismo obtenido an relación a
la clasificacián por capas (h) sería posible determinar por media
de la clasificacián (b) la naturaleza de la contaninacifin por es
troptococos en aguas de diferents origen.
cun-I.o o p-..
.28
Medio de godd sálido S32.
Iármula: Infusián de corazán 1000 ml.
Neopeptona 10 B.
Clfla 5 go
Ajustar 1a raccián con NaOHN/l a_pH 8.h. Hervir durante
5 minutos y agregar a 2 % de agar en polvo. Dejar en la marmita l hg
ra a 1 1/2 hora de modode fundir el agar y facilitar la filtracián.Filtrar a través de algodány distribuir en frascos. Esterilizar en.el autoclave 20 minutos a 1169c. El pHfinal debe ser de 7.8.
Medio de Todd liquido Q3].
Fármula l Infusián de corazán 1000 ml.
Neopeptona 20 z.
ClNa 2 Ro
CO3HNa 2 g.
POHHNaZ 0. 11- g o
Glucosa 2 g.
Pregaraaión ¡Sacar 1a mayor cantidad de grasa de un coraz‘n de vaca
Picar la carne cn máquina y agregar 1050 cc. de agua por cada libre
de carne. Agitnr y retirar con espátula las pequeñas particulas de g
grasa que quedan en la superficie. Poner la mezcla de agua y carne
en la heladera durante una noche. A la mañanasiguiente calentar du
rante media hora a una temperatura de 859G. Filtrar por papel.Agregar
neopeptana y ajustar el pH a 8.0 con NaOHN. y agregar el resto do
los componentes.-29
Hervir durante 15 minutos y filtrar a traves de papel.
Entubar en porciones de lO ml. y esterilizar en autoclave durante
l hora tres días sucesivos. El pHfinal debe ser 7,8.
Medio de Rothe {simula} S212.
Fármula s Triptosa 15 z.
Extracto de carne 4.5 g.
Dextrosa 15 z
ClNa 15 2.
Azida sodica 0.2 g.
Aguadestilada c.s.lOOO ml.
Calentar los componenteshasta disolucion. Agregar la dex
trosa y la azida sodica Filtrar por papel. Ajustar el pHa 7.2 con
NaOHN. Colocar en tubos de ensayo y esterilizar en autoclave a
11090. durante 15 minutos.
edio " " simjle P .
F6rmula a Triptosa 20 g.
Dextrosa 15 . go
ClNa 5 zo
P01+HK2 2.7 a.
PohHZK 2.7 zo
Azida sodica 0.2 g.
Aguadestilada eos. 1000 ml.
Calentar los componenteshasta disolucián. Agregar la dex
trosa y la azida sádica. Filtrar por papel. Ajustar el pHa 7.2 conNaUHN. Colocar en tubos de ensayo y esterilizar en autoclave a llODC
-30
durante 15 minutos.
gelatina nutritiva (H1).Fórmula a Extracto de carne 3 g.
Peptona 5 K
Gelatina 120 z.
Agua destilada c. a 19'00 m1.Calentar en el esterilizador a vapor hasta disolucián. de
Jar enfriar hasta 30°C. y ajustar el pHa 7,6 - 7.8.Agregar un tercio
de clara de huevo por cada litro de medio, calentar a fuego directo
hasta ebulliciÉn y filtrar en caliente por papel de filtro. Dejarenfriar hasta 3090. y ajustar el pHa 7.2 .Se distribuye en tubos a
razón de 10 ml. esterilizando en autoclave a 11090. durante 15 minu
tos. Enfriar rapidamente. Este medio debera ser perfectamente limpi
do y tener un pH de 7,2 a la temperatura ambiente.
Leche tornasolada {#1}.
DeJar en 1a heladera durante 18 horas. leche fresca cruda
de buena calidad. Retirar la crema y agregar luego 10 %de eolucián
de tintura de tornasol con lo que se obtiene un color azul púrpura.
Colocar en tubos de ensayo y esterilizar a lOOOC.durante 30 minu
tos tres días oonsecutivvs.
Leche azul de metileno gli-1).
Leche desengrasada con 0,1 fi de azul de metileno. Entubar
y esterilizar comoen el caso anterior.Leche verde B. de Janus l .
Preparar una solucián del colorante verde de Janua en agua
-31
destilada (dimetil safranina azodimetil anilina) al 1%. calentando
en baño maría a 8090. durante 15 minutos. Agregar a la leche desen
grasada estéril en una concantracián de l/l0.000. Distribuir 5 ml.en tubos pequeños de 10 ml.
galdo nutritivo {caldo bacto oeptonaz {#2}.
Ffirmula a Extracto de carne 6 g.
, Peptona 10 z.
Aguadestilada c.s. 1000 'ml.
Calentar lentamente y agitando. en baño maria a 6590. hasta
disoluci5n del extracto de carne y de la peptona. Recuperar el volu
menperdido.agregando agua destilada y ajustar el pH en forma tal
que despuás de la esterilizaciÉn se halle comprendidoentre 6.“ y
7.0 prbferiblemente 6.9 (azul de bromatimol). LLevar a ebullicidn
a llama directa y luego dejar enfriar hasta 25 SCJ Recuperar nueva
menteeltpeso perdido con agua destilada y clarificar por filtracidna traves de papel de filtro.
Distribuir en envases deseados y esterilizar en autoclaVe
a 12000. durante 15 minutos.
¿gar nutritivo 543).Fármula t Extracto de carne 3 g.
Peptona 5 Bo
Ala-1' 15 Bo
Aguadestilada c.s 1000 ml.
Disolver el extracto de carne y la peptona en el agua desti
- 32
lada calentando en esterilizador a vapor. Ajustar la reaccián (a la
temperatura ambiente) a un pH7.h (rojo fenol). Cortar el agar si
es necesario, colocarlo en un saco de gasa o mdselina y lavarlo en
una corriente de agua durante 15 minutos. Una vez bien escurrido se
agrega a la solucion de peptona y extracto de carne y se lleva a
autoclave a 12090. durante 20 minutos. filtfándose en caliente. Dig
tribuir en tubos o frascos y esterilizar en autocloVe-durante 20 minutos a 12000. La reaccion final e la temperatura ambiente.deberá
ser DH7.2.
Mediopara determinar la. hidrolisis del almidán. (531.Se use agar nutritivo el cual se agrega antes de esterili
zar 0.2 Z de almidon soluble. Se procede luego a su esterilizacián
en forma similar a la preparacián del agar nutritivo. El medioeeteril se vierte en placas.
InhibiciSn nor 6.5 2 de Clfla {#3}.
Se usa agar extracto de carne al cual se le agrega entes de
ser esterilizado 6,5 5 de ClNa. Esterilizado el medio se coloca en
placas.
caldo bilis Sh2).Caldo nutritivo con 10 5 de bilis pura. Se entuba en por
. cionea de 10 ml.
Hiourato de sodio {kk}.
Fármula | Peptona 10 g.
Pepsina 5 go
Cl2Ca 0,03 g.
Eipurato de sodio lo g.
Cl3Fe a1 1% 1 gota
Aguadestilada c.s. 1000 al.
Se disuelve en al agua la peptona, pepsina y el Clnaa ca
lentando a ebullicidn. se deja enfriar y agrega luego el hipurato.
filtrar y ajustar el pH. Se esteriliza en autoclave 20 minutos a
1169C. Ajustar el pH a 7.1
grecimiento g QR2.6 {k5}.
Fdrmula 8 1) Caldo doztrosa
Dextrosa 10 g.
Extracto de carne 10 g.
Pcptona 10 g.
ClNa 5 a.
Asundestilada c.s. 1000 ml.
Ajustar el pHa 7,0 . Bsterilizar en autoclave 20 minutos.2) Solución buffer.
Glicocola. 7o505 80
ClNa. 5:85 En
Agua destilada 1000 ml.
Mezclar 6 partes de la solucidn (2) con h partes de NaOH
Nilo. A 900 ml. de medio (1) agregar 100 ml. del medio (2) y ajustar
el pH a 9.8 con NaOHNi guardar en frasco cerrado durante una nochepara precipitar completamente. Distribuir con precaucidn en tubos
chicos dejando el mínimode espacio libre.
Este medio debe usarse dentro de las H8horas. Bs esencial
- 3h
que el pH sea determinado electrométricamente antes y después de la
incubacion, debiendo existir una diferencia de solo 0.0h unidades.
Mediode telurito S32.
Se uso medio dc Todd solido al que se agregá antes de ver
ter en placas, 0.0%%de telurito de potasio.
Agar sangre al 10 fi {#3}.
Se agrega al agar nutritivo lo fl de sangre de caballo,est5
ril, antes de Verter el medioen placas de petri.Caldo lucosado al l Ml -.
Formula t Extracto de carne 3 n.
Glucosa 10 g.
Peatona 5 EO
Aguadestilada c.s. 1000 ml.
Disolver pa peptona y el extracto de carne en caliente, en
friar un pocoy filtrar. Agregarla glucosa. Esterilizar y ajustarel pHa 7,h - 7.8.
Hedios cianurados.—
La preparacion de los medios cianurados de Todd. Rothe.me
dio "A" y glucosado se efectúa agregando 25 mg % de cianuro de sodio
una vez que el medio ha sido esterilizado, momentosantes de ser usa
do.difitr1buy¿ndose luego en los tubos que ya contienen 1a muestra a
investigar. E1 cierre de los tubos debe ser hermético para evitar
el desprendimiento de CNH(tapones de corcho o gomaparafinados).
Fermcntacián de hidratos de carbono Shlï.
Indicador de Andrade.
-35
Fármula s Fucsina ácida 0.5 g.
Agua destilada 100 m1.
NaOh N/l 20 m1.
DisOIVerla fucsina en el agua. Agregar el alcali y dejara la temperatura ambiente durante la noche. Filtrar por papel defiltro.
¿ggg de ueptqggr(h61.oFórmula a Peptona 10 g.
ClNa 5 2
Agua destilada c.s. 1000 m1.
DisOIVBrla peptona y el ClNa en el agua calentando en
esterilizador a vapor. Filtrar en caliente a través de papel y ajugtar el pH a 6.8 - 7.0. Agregar el indicador de Andrade 1 %y este
rilizar a 12000. durante 20 minutos. Preparar en agua destilada unasolucián del azúcar deseada al 10%y esterilizar a 10090. durante
30 minutos. Agregar asebticamente 5 m1. de la solucifin de azúcar
a 100 ml. de agua de peptona con indicador de Andrade. Repartir en
tubos de ensayo can campanita (tubo de Durham)y esterilizar a 1009
durante 30 minutas. nl medio deberá tener un pH de 7,H e 7.6.
Agar sgggre nara hemálisisfihzl.Agar peptona con sanáre de caballo (recogida asápticamente)
al 5 %. El agar nutritivo contiene.2 fi de agar. l %de peptona. 1%
de extracto de carne y 0,5 fl de ClNa.
Se procede comoen la preparacián del agar nutritivo y se
agrega la sangre esteril antes de verter el medio en placas.
aldo M Ï Conke #6 .
Fármula t Taurocolato de sodio 5 g.
Lactosa 10 g.
Peptona 20 3.,
ClNa 5 z.
Aguadestilada c.s. 1000 m1.
Calentar en esterilizador a vapor durante dos horas y luggo colocar en la heladera durante la noche. Filtrar en frío al dia
siguiente y ajustar el pHa 7.H (rojo fenol);agregar 10 ml. de una
solución acuosa de rojo-neutro al 1%, distribuir en cantidades de
5 ml. en tubos de ensayo provistos de tubitos de fermentacián (Du
rham) y finalmente esterilizar en autoclave a 11500. durante 15 mi
nutos, o a 10096. durante 30 minutos tres días sucesivos. Este me
dio deberá ser.1impido, de color rojo clarote. libre de amarillo
o anaranjado.
MedioCitratgi(48).Fármula a Cloruro de sodio puro 5 g.
Sulfato de magnesio 0,2 g.
Fosfato monoamánico l a.
Fosfato dipotásico 1 g.
Aguadestilada c.s. 1000 ml.
DisoIVer agitando, hasta obtener una solucián limpida.
Agregar 2 g. de ácido cítrico. Lchar a pH6,8 (azul de bromoti
mol) con eolucián de WaOHN. Distribuir en tubos y esterilizar en
autoclaüe a 12090. durante 10 minutos.
-37
.. c "u‘
1’).o-M- Streptococcusaa anindicatcrof swimmingPoolponuuón. Allmmm. Health 18. 771 (1923).
2) .-WWJlorine Batasuna.ofcolonBa¿un and Stroptococci in a acumula Pool. MichiganExpanStamn NI 27 (1930).
3) «¡Egg Imp“, Rev. 0.3.11. m ¡3+0pag. 171+(1951).
») .- ¡3M andan. Bnct. 35. 831(1932).5) .o Pam 9.5. x ganga g. A noto cn the use of doublopourcd blood
platea in the examinationor throat and nose cultuch ferhacunlytic Streptococcu. Amex-J.C].1n.Pa1k Tech Sum). 3. 70
(1939).6) o-W. Theinhibitoryactionofpotenciantc
lurito on coliform bacteria. J’.Path Bact. 51. 29 (191m).
7) .o W. Theislationof Stroptccoccitran mad culturas.JoBact. ¡+8. 113 (1914+).
8) .- W. EinBeltranzurRamaltungVonMastitiastroptokkcn aus wrunroinigen. Material M11qu Foreh 18.116 (1937).
9) o- Smdgg15.2,.x Lphath 3.9. Sodiunazlda tor the isolationo: Streptococcio J.Bact. ha. 293 (who).
10).- M. Theunaof sodiulazidafor the isolationofStreptococci. J.Bact. l0'2.'2!93(191d).
n) .- mm“. ANowYardstickfor "casarme SavagePollution.Saw. Works J. 12. 875 (19M).
12) .- M. Thaused‘sorfiumande andcrystal Violet1aa
-33
13)
14)
15)
16)
17)
18)
19)
20)
21)
22)
P
lBactc
aelective mediumfor Streptococci and Erxsipelothrix rhusioúathiaeoJ."Bacto.k6.Hajna A'At and Perrï G.5..Comparative Study of Presumptive and
donfirmativo media¡for Stroptococci‘ A. J.P.H.í33. 550 (19h3).p
-Hgite ch. 1 ShermanJ.M.0ccurrence of enteroeocci in milk. J.ha, 262 (19hh).
flegpggEgg. Isolatión of cortain bacteria in Cheese. Bull Dept.Agric. California. 33, 191 (l9kk).
Piko Rsu, The value of enrichment broth containing TeO3K2
and crystal Violet. J.Bact. 50. 211 (1945).
Pike. R'M’ The isolation of hemolytic Streptococci fron throatsswabs.ExperimentsWith sodiun azide and cristal violet enrich
ment broth. AmJ. Hyg. k1, 211 (19k5).
Winter C.E. x Sandholzer ng. Isolation of esterocooci fromnatural soúhes. Jour Bact. 51. 588 (19k6).
Leiguarda R,H, Peso o, e, x KempnxJ,c. La azida sádica y eltelurito de potasio en la inveetigacion de enterococos. Rev.
0.8.N.‘l21¡ 133 (19k7).
Ostrolegg M, x Hunter A.C¡
tococci. L.Bact. 51. 735 (19hs).
Rothe H°G. Personal communication to the Difco Laboratories
(19h8).;
gg;;pannw.L='and Seligmann. A comparative study of media forthe detection of streptococci in water and Savage. Am.J.Pub.
No. marzo (1950).
Thedistribution of enteric Strep
Health Assoc.
23) o
2h) .
25).
o
27) .v
28) .
29) .
30) .
Litskx W. MallmnnHng'Ph.D,F¡A.P.H¡A¡ x Fifield Cgï. A new
mediumfor the detection of Enterococci in water. AmericanJ.
of Pub. H. vol M3. 873 (1953).
gernard Claudio
"in vivo" inactivation by eyandde of brain Cytoehromeoxidase
Citado por H.J.A1baum J.Teperman y O Bodansky
and ita effect on glycolisis and on high energy phosphorous compound in brain.
Buernet Egfl'
teriol XXX:21. 1927).
The action of eyanides on Baeteria. J.Pathol Bae
Braun H. GuggenheimK. Ueber Atmungstypen bei fakultdtiv aero
ben pathogenen Bakterien Zentr. Bakteriol. Parasitenk I, Orig.
127. 97 - 10h (1932).
Braun I].
unter der Einwirkung von Kaliumeyanid. 2 Mitteilung. achwiez
Ueber das aerobe und anaerobe Wachstul der Bakterien
z.allgem Pathol u Bakteriol 1. 257 - 272 (1938) 2. 309 - 318
(1939).Buttiaux R. Distinction rapide entre Salmonella et baeilles pa
raeoli du groupe Ballerup-Bethesdau Ann. Inst. Pasteur. 83.156
167 (1952).
Moller 1. Diagnostic use of the Braun CNKtest within the En
terobacteriaceae, Acta Pathol Microbiol. Scand. 3k, 115-126
(195%).
Maria del Refugio Balcgzar de Aztegui Bertha Rodriguez Lagunes
x Consuelo Arteaga de Morghx. Metodo para el aislamiento selec
tivo de estreptoeocos de varias fuentes. Ciencia XIV(7-8) lha
1141* o
- F0 c
31)
32)
33)
34)
35)
36)
37)
38)
39)
k0)
k1)
.- ggpperAK.E._zRamadanF.M. Studies in the Differentiation be
tween Humanand Animal Pollution by means of Faecal Streptoco
cci í Gen-Microbiol 12, 180-190 (1955).
AndrewesFgw. x Horder T,J. A study of the estreptococci pa
thogenie to man. Lancet. 2-708 (1906).
.- Dible J.E. J. Path Bact. 2k - 3 (1921).
,- Lanccfield R,c, T, Exp. Med. 57 - 571 (1937).
9- Sherman J.M. Bact. Rev. 1 - 3 (1937).
,- Shattock P,M,E¡ 2 Mattick ¿.TgR; The seroleñicalgrouping ofstreptococci lactis (group N ) and ist relation ship to Streg
tococcus faecalis , J, Hyg. Camb. H3. 173 (19MB).
.- Cooner K.E, WoodN. Elliot E. Caswell Mzz Small w. Isolation
of Bact. para typhosumB. rrom faeces. J.Path Bact. 5h. 3h5
(1942).
.- googer KgE. x Linton A.H. The value of thallium acetate for
the isolation of genococci and atreptococci. MonBull Minist
Health. Lab. Serv. 6. 20H (19H7).
Mc. Leod J w Andoráon J s. Thomson Y . On the exiétence
of two forms of ¿figggperia b c
B. diphtheriae mitis, and a newmediumfor their differentia
B.di)htheriae gráis and
tion and for the bacteriological diagnosis of diphtneria. J.
Path Bact. 3h. 667 (1931).
Ferramola R. Examenbacterioldgico de aguas.
The bacteriological examination of water suptlies. Ministry
of Health. Londres N9 71 pag. 53 (1939).
O
OO
a U
COU...
o
0....n 0...!O
o
O...\.
.v
Dll... .lOOI
I
o...
.
OO.
l¡»2).- Standard Methods Of Water Analysis Pag. 200 89 ed. 1936.
ha) .- The bact. examination of water supplies No 71 pag. 51 Minis
“ÜJ -,
“5)
M6)
“7)
#8)
try of Health. Londres 1939.
AzorSIRuna; Differentiation of haemolytic streptococci from
humanand bovino sources by hydroly sis of sodium hippurate
J. infect Dis 30, 388 (1922).Shattock. Hirsch A,¿. A liquid buffered at pH9.6 for thedifferentiation of Str. faacalis fromStr. Iactis. J. Path
Bact. 59. 1+95(19W).
The bact. examination of water supplios N9 71 pag. 52 (1939).
Shattock P M.F. The streptococci of group D..the serological
grouping of str..bovis and ob3ervationes of serologically r_e_
fractory group D. streins J. GenMicrobiol 3,80 (1949).
Koser. 8,5. Differential test for colon anrágenes group inrelation to sanitary quality of water. J. Infect.Dis..35.1h(192k).- '
-—- o o nc.
j/ZV;"1S>/
- #2