enumeration of microorganisms from deep-sea hydrothermal chimney samples

6

Upload: pierre-chevaldonne

Post on 21-Jul-2016

212 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Enumeration of microorganisms from deep-sea hydrothermal chimney samples

���������� ��������� � �� ����� �� �����������

������� �����

������ ����������� �� ���� ����

������������ ����������� ������� ������ � ��� ����� ��������� ������

�������� �� ������ �� !""#$ ���� �� �! %�� �� !""#$ �������� �! %�� �� !""#

��������

����������� ��������� � �� �������������� ������������ ����� ��� ��� ���� �������& �������� �������� ���

�������� ��� ���� �� ��� �������� ��� ��'������ � (��� � �� ��������� ��� �)������� ��������& *��� (� ��� ��� �

��� �� � ���� � ����� ��� ���� ������ ���� � � ������� � ������������ ����� ����� �� ����������� ���� �����

������� ����� & +�� ����� ������ � �������� ���� �� ��� �������� ����� �������� � ��������� ��� ����� ���

��������� � ��(�� � �� � ������� ��� �)������� �������� � ��� ,� ��� ����� �� �����& ����� �� ���� (���

������ �� ��� ���� ����� �( ������ ������� �� ��� -����������� ������ ��� �� ��� �� � ������ �� �& +��

���� ��� � ��� � ������� �������� �� � ��& !.�� ���� ��� ������� /��� (�����0&

�� !���"# 1����� ����$ ���2��� ����� ���� ���$ *���������� ����$ -������ �����

�� ���� ����

+�� ������ ��������� ��������� ���� �����

����� �� ����������� ���� ��� ���� ��� �����

��������� ���� ������� �������� 3!��4& +�� �

��������� � � (���� ��� �� ��� � � ��� ����

����� � ������������ ������ (� � ������ ����� ���

���� �� ��� )������ ������� ������

������� � ����������� �������& +�� ��� ��� ���

�� ��� ������� ��� �� � ��� �� ������� ���

������ � ��� � ����� ��( ����� � �� �������

��( ��)�� ��� ��� ������� (�5& ,����� � 5�(�

� �� ��� �� ��� ����� � �������� ��� ���� �����

���� ��������� ���� ��������� � & %�� �����

������ ���� ������ � ���������� �� �� ����� �

���� ��������� � � ��� ������ ��������� ��6��

������� �)������� �7.8� ����������� 9 ���5� �5�

��: 2��� & +�� '����������� �� ��� ���� ���� �

� ��� (����� ��� (��� ��� � ������� �������� �

�� (��� ����������;��& +�� (��� ��� ��� ���������;��

��� � �������� ��� ������������� �������� ��

�(��� ��� ����������� 2��� ��� ��� �8� �� (����&

<� � ����������� ���� ����������� �������

� ��� ����� ����� � � *�����5 �� ��& 3�4 ������� ����

����� � ���5�� ;����� �� ��� ��� ��� �������

��������� � � ��� ���� =������� ��� �������

��� �������� ���������& + ������ ������� ���

�������� ��� � ��������� � '�����6����� ���

������� � � ���� ���&

� ����� ��'������ � �� � '���5�� � � �����

.�>?�!."> @ "> @ A!>&.. �������� B !""> C�������� ������� -��� ������� ������� & �� �� ��� � �� ����� ������� =&D&

�� � . � > ? � ! . " > / " # 0 . . E > ? � ?

� ���� ������ �����& ��� ��� ����� F <� ������ -�������� �� ��� ������� � ������ G����� ���� H�( =��� (��5�HI .?".��.��!� G��& +��&F J! /".?0 "�� ?"7" �)�& �.7$�)F J! /".?0 "�� #77>$ ������F ��������K��� &������ &���

C�-� -��� ���� ,����� !E# /!"">0 �!!L�!#

Page 2: Enumeration of microorganisms from deep-sea hydrothermal chimney samples

���� ������ ��� ������ �� ���� ������� ������� ��

� ����� ������� ��� ��� ��� �� ��� ������� �

����� ������� ���� �� ����� ���� ���� ����������

������������������ ��� !� "��#$% &���� ������

� � ������ ������� � ���� �������� ��� ���

���� � � ������ ���� ������� � �������� ���

�� ����������� ������� "�'($% )��� ���� � ��� �����

� � ��� ���� �� �� ������ �� � ��������� �� ���� �� �

���� � � �� ������ ����� � �� ������*�� � �����

������� ���� �����% )��� ���� �� ������ �������� �

��� ����� ���� ���� � ������� ���� ��� �� ��

���� ��� ������� ���� ��� ��� ������� ���� ����

�������� �� ��� � �������% )��� �� ���� � ����

��������� ���� �� ������ �� ���� � � ���

������������� ����� � �������� ���� ����� �������

� � �� ���� ��� � ������ "+',,$% -���� � . �

���/ �� ��% "+$ ������ �� ���� �����0���� ������

� ����� �� � �� �������� � � ������ � �������%

&�� � ���� � �� � ������������� ��� ���

��� ������ ���� ����� � ����� ����� � 1�����2�

�� ����� ����� � ������� �������� �� 0����

��������� ",�$%

3��� ���� � ������� �� ����� �� �������� � �����

� ����� �� �� ���� � � �������� ������ �������

4��% ,% )���� � ��� ������� � ��� � �9� ������ ��� ����� ����� ��� ���� ����� � � �������� �� ��� ��� ���� ������ ����

����%

�� ���������� � ����� � ���� ��������� ������� �� !�""#$ %��&%� �,�

Page 3: Enumeration of microorganisms from deep-sea hydrothermal chimney samples

��� ����� ����� �� �� ��� ��� � ����� � � ����

������ � ��������� ����������� ����������� �� ��

������ � �� � ������� ���� ����� �� �� �����

��� ���� � �� �� ��� � ������������ ��� � ��

���� ��� �� ��� ��� ������������� ���� � ��

� ������� � ���� � ��� � � ��� �� �� ���� �

�� � ��� ����� � � ��������� ��������� �� �����

�� �� � � ������ ������ �

�� �������� �� ��� ��

!���� � � ���� �� � �� �� ��� ���� "#���

��� $ ��� "%����$� ������ ���� �� � �� � � �� ��

�� �� &�� '����� (� )&'(* �� +,-.�# ��� �� ��

/���%������� (��� )/%(* �� 0�,#� 1��� �������

� ����� � � � ������� ���2 �� �� ���� �� ��

������ � ��2 �� 3��� � ��� ��� �� � � � ���

���� � ��� � � ��� ��������� ��� ������

� � ���� � ���� � ��� ������� %���� - �� �

���� � ����� � �� ���� � �� ���� ��� �4 � ����

0�-5 ������� �� � ��� ���� �� �� � ��� � �� 6,7

����� ���� � ���� �� 8� ���� ��������� ���

� ������ �������� � ������9 � �� :��� �� ;�������

� � �� ��� � �� ��� ���� � � ���� �� ����� �

��� �� � ��� ��� ��� ��� 4� � ��� � ��� ���

����� � � �� � ��� �� �� �. �� �� � ��� ��

��� � ���� 0�-5 �������� ;������� � � �� � ���

��� � ���� ��� �������� �� �� ��� ������ ���

�� �� ��� � ���� � � ����������

8� � <. )�����4� ���� � ������� ������ �� *

�� ��� � �� �� ���� )���� ���� ��������� �. ��

����* ��.��� � ��4 � � ��� � �� ��������� �� ���

� ��� !���� � � �� � ���� � �� � =����� ������

���� �� ����� ���� )�. 1� 6> 2?9* �� �. ��� �+ �

%� � ���������� �� ���� � � � ���� � ������ �

�� - ��� �� >..�� ��� 6,7 �� ����� ������� ��

��� ���� � �� � ���� � �� �� �� �������� 8�

� �� � �� �� � � �� �� � �� � ��� � ��� � �� �����

��� ���� � ��� ��@ �� � �� ����� � ��������

�� ��� ���

8� ������� ���� ��� �� ������� ����� � ���

!����� �� �� � ��� ��> A 0�- �� ���� ;%'� ���� ����

� ��������� ���������� �� 6,7 �� �� ���2 �� �- ����

!���� � � ��� � � �� �� ���� � )������� =���2*

� ����� ��� � )#��� ��� .�00 �� ��� �9 *� :���

� � � � ���� � �� ���������� ��� ��� ����� � ��

��� �� �- ��� �� 6,7 �� �� ���2�

7 �� � � ����� � ��� ���� �� �� � ������� ��

�0-.� ������������ ��� � �� B����� =?�0 ���

C��� � �� �������� ���� � ;%'� ��� � ��

7������� ��� �� �� �� ��������� ������ � � ��

������� � �� �� 7B3#8 ������� �� � � �����

������ � �> � 8� ������ ����������� ���������

������ �� � �� 0.. � �� � � ����� � � � ��� �

��< � ��� �������� �� ����� � �� �� � ���� ���� �

� &������$ ��+ ��� 4 � �� ����� � )�� � �..� �����

��� � �������D� ��* � �� � �� ���� � � � �� � �

�������� � �� �� ���� � 0-5� � ����� � � �����

��� �� � �� ������ ��+�0. � � � � � ��� � ��

������� ���� 4�� � � � � �� ���� � ��

� ��� 8�� ���� ��� �� �� �� � �� � ���� ��

����� � �� �� ����� � �� � � ��� � ���� � �

�������� � �� �0� � ��� � �� ���� �����������

�� � �� � ���� � �� � ������� ���� ����� � ���

�� �

8� � ��� � �� � ���� ��� ������ �� ����

��� � ���� �� �� �� � �� � ����� � ��� � ���

� ��� ����� � ��� ������� �������� �� ��� � ��

� ��� ��� ��� �������� �� - �� ������� � �

� ������ � �� - ��� �� �� ...��� �� �� �������

�� � ��� � ��� � ���� � �� � ����9 � ��� �� %� �

������� ��2���� �� ������� �� � ������ � ���

��� � ��� ��� � 8� ���� �� �� � ��� � ��

�� �� � �� �.,7 �� 06 �� ��� � ��� � �� �� � �� �

�� �� � / ��� � /� ��� � 7 �� ���� � � � ����� �

:��� 0� '��� �� �� ��������� � �� ����� � ���� � ���������

� �� �� � ������� ���� ����� � ���� )� � ���� F?<&6

��� �� ��� � ���� � � ����� � ��� �� ''- �� � +,-.�# ��

�� &�� '����� (� *� ���� �� E �� � �� ��� � ����� �� A

������� � � ���� � �� �� ��� ������ �� A �� �� � � ���� ��

�� ��� ������ 3��� �� �� �.� � �� ��� ��� ����� �� ' �� ��

��� � ����� �� ��� � � �� � 4�������� �� � � ���� �� 0��

6�� ��� >> ��� <-5� � � � ���� ������.� � �� ������

�� ��� ������ �� ������� � ���� �������� ��� � �! "#$ %"&&'( )""*)"$ 0��

Page 4: Enumeration of microorganisms from deep-sea hydrothermal chimney samples

�� ��� ����� ����� � �� ���� ���� ��� ���������

���� ��� ��� �������� ��� ������

� ��������� ��� ��� ����� �� ��� ��� �� � � ���

������� �������� ��� ����� �� �� ���� �� �������

� � � ������ ��� �� �� � � ������ ��� ��� ���

���� ��� ����������� � � �����! � ����� ��� �� � �"

�� � � ��� �#������� �� � ��� ������� �� �� ����

� ��� �������� � �� ������� �� � ������� $����!� ��"

������ � ���� � %��& ��� �� ������' ��(���� ��� ���

��� ������!� �� ��� ��������� �����! ��� �� ��� ���

������ ��� �� ��� � �� � ����� � � ��� �� ��� ����

����

�� � �������

)��� ����� ����� ����� ������ ����� ��� ��������

����� � � � ����* ����������� � � ��� ��� ������

� �� ������ � ���� �� ���� ��� �� �+�

� ���� � � ���� �������� �#������ � ��� � ��� �

��������� �� )��� ���� � � �� �� �� ������ �

������ � ��� �#����� ����� ��,� ��� � ��� ����"

���� ��� ������ � ��� � ���� �,� �� ����*� ���"

������� ��� �#����� ����� ����� �� � ��� �����"

������ ������ � � ��� ��������� -����� �� � ���

������ �� ����� � ��� �������� �������� � ��

���� �������� ���� ��� �� ��"��������� ���� �

� �� � � �� ����� �� � ���� � �� � � �� �����������

�����(���� ��� ����� � ��� �������� ��(��� �������

. ����� � (���" ���� �������� � �� ��������� ��

��� � ����� � � ���� ������� /������ � � ������

��� ����� ���� �#������ �� ��� ������������ � � ��

� ��������� �#������ �� ��� � �� ��� ��� � ���"

��� �� ������ �� ������ � ���� � � /� �� ��"

����� ����� ����� ��� �������� � ������ � ������ �

��� �#������ � �� ������� ��� ��������� ����������

� ��� �#������� ����� � �� ����� �� �� � �� �

��� ������� ������� � � ��� ���� ������� /� ����

����� � ���� ��� ���� ���� ������� � ��� � ��

�� ������ �������

�� ������� � �������

)�� ���� ��� ���� ��� ���� �� � ����� � � �#"

�������� ��� � ������ ���� �������� �� � ���� "

������ ��������� 0�������� � ���� ��� ���������

� �� ���� �� �������� ��� ��� ����������� ���"

��(���� ��������� �� ���� �� � ������ ��� ����

�� ��������

���� ��� ��� �� ��� � ��� ������ ��� �����

)�� ����� �������� � �� ������ �� ����������

� � ��� ������� ������� ��� ���� � �� �������

��� ������� ���� �� � � ��� ����� ��� �� � �����"

���� -����� ��1����� ������� ������ ������ ��� �����

�������� )��� ��� -2-� )��� 3+ ��� ������

���� �� � � �����(����� ���� �� ��������� �

�� ������� �� �������� ������ %�+���&� ��� ��

�� ���� � ������� � ��(��� � �* �������

-2- �� ���� � ����������� �� �� ������ � ���

������ ����� �� ����� ���� �� �� ����������� �

��� ��� �� ���� ���� �������� �� ����� ��������

�� ���� ������ ��������� � ��� ������ %��&� . "

����� -2- �� ���� ��������� ������� �� ���� ��"

����� � ����������� ���� ���������� ��� �� � �����

/� ������ �� ����� ����� ��� ��������� ��� ����

���� � ������� ������ ���� �������� %4& ��� ��

�� ������ � ��� ������� �������

5 ��� � (�� ��1����� ������� ������ �� � ���

���� ����� � ��� � �� ������� � ������� ���

� ������ � ��� �������� � �� ������ �� ����� ���

��������� ��� ����������� 0#������ � �� ���� ���

� ����� � � ���� ������ ������� ������ ���� � �

��� ��������� ������� �� 6 ����* �� �� %3&� )����

���� �� ������� 7+,8+9 � ��� ��� ����� �� �#"

������ � ��� 48,�++9 ����� (�� �#������ ��� .����

��� ������� ��� �� (�� ������ �� �� � : ��3�9

����� �� �#������ �� ��� 38�3 � : ��3�9 ����� (�� �#"

������ ��� ;�� �� <,7 �#������ �� ��� ���������� �

��� ��� ����� �� ���� ���� �� ������� �� ����

79 � ��� � ��� ��� ��������� ���� ������� =��� �

����� �� �#���� � �������� � ���� � � �� �#�����

�������� ����� � � ���� ������ ������� �� �

4>7+�? � ��� 0@A� �� ��������� �� � ������ �

��� ������ �� ����� � ��� �������� ��� ���������

�� � � �� ������������ � � �� � ��������� �#����"

�� ��� )�� ������� ��������� ���������� � �#����"

�� � ������� � � ��� (�� �� ��"����� ��� ������

�� 3+�< � : ����9� � ���� �� � ��� ������� ������

��� ���� � ��� � �� ��� �+9 �� ����� � ���

������� ������� � �������� ��

=������� ��� ��� B� � ��� �� ���� ������� �

���� ������ ������� ������ �������� � ��

25@/� ; �� 5C ��� 25@/ ��� ������ ��� 5C

������ �����(���� ��� B� ��������� ������ �������

� ������(� ���*�� ��� �������� �� ������� ���

25@/�

�� ������������� �� ��� ��� ! "�#$ #� ��%������ &���' �() *�++,- .��/.�)��<

Page 5: Enumeration of microorganisms from deep-sea hydrothermal chimney samples

���� ������� �� ������

��������� �� ����������� �� � � ���� ��� ��

������ �� �� ������������� ���� ����� �� � �

��� ��� ���� ���� ����� �� � � ���� ��� �� � �

���� ��� �! �� � � ��� �����" ��������� ��##��

���������� �� ��$����$����� ���� ������ %� � �

�������� #�� �� � �� �����" � � ����� �� �����&

���� �� � � ������� ��� �� ��� �� ��" ��� ���&

��������" �� ��� �����������" ����� �'��� ����

��� ���� ������ (���)�" �� �)� ���� �)�����

���� � �����#�" *��" ��#�� ��������! � �� ��� �+&

,��� ������ �� ������ �����������- � ��������

�������� ����#���� ��� ��������� �� � � ���&

+��� ��������� �����+����� ������ �� � � �����&

������ .������� �� � � ��� ����� �� +��� �&

#���� ����� �� / $" 01�

2 � �#����� �'������ ��� �� #�)�� �������

�� � � ��� �� ���� ���� )��� ������" �� ���

�'������ ���� ������ � ����� ������ �� � � ���&

�������� #����� �� � � ���#���� 2 � �'������ ��&

3���� ��� ���4�+�� ������ � ��� ��� ��� � �

���#��� �������" +�� �� ��� )�� ��� ����� ��

����� ���� � �� ��������� )���� ��� ���� ���

�#�� / 51� 2 �����" �� �� ��������� � �� �'��&

���� �6���� �� �� ����� � � 3�� ��� �'������� ��

�������� #�� �� �##����� � � #�����&��#��������

��� ��� � �� � � ����� �� ��������� �� � � ��� ��

�� �� ��" 3������ � +���� )����� �� ���#�� �����

���� �� +� �##�#����� (���)�" � �� �� ��� ������

#����+�� � �� ���#��� �� �������" �� �� �� ����� � �

��� �� ���� ���� )����" +�� ����)�" � �� �� �

����� �� � � )����� �� ��#������� � �� �� +� 3�&

���� � ��� � � 7���#�� ���+��� ��� ���

������� � � #��� � ������� � � +�4����� ���

����8�������� 9#����� ������� ��������� ����

+� ��������� #�� �� ����+��� ��� � ��3���� #��&

����

2 �� ��� �� ������� � � 3�� :���������)� ����� ��

� � �����+����� �� ����������� �� ��� ��� ��

���� ���� )��� ������ / $" 01� ���+�� ��

� ��� �� +� )�� �+������ �� � � ������ �� � ���

���)� ������ �������" ��� ��� ��� � �� ���&

+�� � �#�� ������ ������ � � �������" � �� ��

����� #����� ������ � � �����" ��� #� �#� ���#��

��������� ��� � � ���� ��� ��#�� ���� ���

)����� #�+��� �� ��� �� � � ��)�������� ��

�� � ����� ��� �� �! �)�" ��4� � ����� ��#�3���

��������� ��������� ���� �����! /;"�"<" ;" �1" �

��� ����� ���� ���� �����! /�1�

�������������

�� � ��4 �� ���+���=��" >�?� @�� ��)� ���

�� A����&��B�����" ��� ��������� �� � � (��9 C<�

��� ��� C<$ �����" #����� ��� ��##�� ����� ��

�*�@� D7������C ��� D��)��C" ��� ��� �� �E@�

7���" �������� %% ��� F� > ���� �� ���� � ��4

G� H�+�� �� ��������� ��� �������" ?H�( ���I

�� �� �##������ ��#" �� ?� ������+� ��

������� �)������ � � ������#�" ��� ���� ?��.

�� �� ��##��� 2 �� ��4 ��� 3����� +� %A��&

���" **�* ��� � � ������� #�������

���������

/�1 F����� " (��� ��� �����" >�9� ��<�<! > ������� ��� #�&

��� #������� �� ���� ���3 ��� 8�� �#������ ������

H������� <" 5< �5<��

/ 1 F����� " (��� ��<<5! ���+��� ���������� ��� ���� �&

��� 8����� %�- *��8�� (���� ���� *������- � �����"

> �����" H�������� ��� G�������� %��������� �(��# ��"

*���" J����+��" ����" ���������'" ?�*� ��� 2 �����" ����"

����!" ##� �$� <;� ������ G��# ����� K����" ��� ���&

���" �>�

/$1 (���4" ��H�" ������" ����" � ���" ��>� ��� H����" F���

��<< ! %� ���� ���+��� ������ �� ���� ���� )��� ����&

������ A��* ���+���� ���� ���" �����

/01 (�++��" F���" �����" ��F� ��� F��#�" *� ��<��! K�� �� 7���&

#�� 3���� �� ������� +����� +� 8������� �����#��

�##�� ��)���� ���+���� $$" � 5�� ��

/51 ����" L�G� ��� A���" M�*� ��<��! 2 � ��� �� ���% ��

����������� ��� ������� �:���� ���8��� ?������ 9��&

���� 5" <0$�<0��

/;1 @��,�" ��%� ��� ��+�� �" ?�F� ��<�;! �����#� ����������

�� ���� �� ����� +����� �� �������" ����� ��������"

���� �����" ��� 4��# +���� ���#��� ��������� #��# ��# ���

��� ��������� ���������� >��� F� ���+���� $ " � ��� ;�

/�1 H����" F�" @�� ������" ��L� ��� H�� ���" ��L� ��<< ! ��&

���#� ������� ��� ��������� �� �#���� �+������� ���

��������� �� ��� ���� ��� �� �*&�9* #������ ��#���"

�##���� �� +����� �� ���� ������ F� ���+���� ��� ��� �;"

�$� �$�

/�1 G�+��4�" ��M�" �.��+��" ��7� ��� L���)�" %�7� ��<< !

�+������ :���������)� �������� �� +����� �� +����� ����&

������ ���+������ ;�" �;$��;;�

/<1 * �����+��" �� ��� L��I" F� ��<<$! 2 � ������ �� ��������

+����� �� ��4�� ��� ��#������ ��� �� � �:���� �����&

����� ������ �0" <�<�<$0�

�� ������ ��� �� ������� � ���� ����������� ������� !" # $$%& � '� " �5

Page 6: Enumeration of microorganisms from deep-sea hydrothermal chimney samples

���� ������ � � �������� � �� ���������� � � ������ �����

��� ! "��� �� ! � ��� #$������%� ��� %��� ! &����� � �&��

�� "���� ����"���� '�( ���� � � � ! )� "�� ������

"���� �� �� ���� &�� ����%����� �� ����"���� �����������

� � �� ���!����� * � � +�� �� ,, -�./� ��0�� *�������

,��� *�

���� 1 �� 2 ) �� 3 �� �� 3 � ������ '",� %�� "��� � !

��$"���� � ! ������ &����� ! � ��$�� ! 4$��$�� � ��

��� &$����� ! ������ �� !������%�� &����� �� ���, ���

� ���� %���� � �� ��5��� �$�&����� �,,� +�%�� � ���� �

&� � 67� 6�6.7��

��-� ��&��� 8 � 9 ���:-� 0�� +���"�� � ! ���"� �&$�����

�� 3����� *�"������ -�� ��� � 76; ,, 8��<�� � �� �

��/� 8 ��� 0 ����-� 0�� ���,� � � &� �,���� *� � =�� ���

��� >�� :�� 7�;6.7�;�

��;� ?���"�� � � � �"�� * � � 3����&��� � �� 2����� � �

����/� ��������@�� � ! ��� "��� &� � � 5����� -� "�

����� � ! � �� !� " ��� ���, �$&�$�!�� ���� & +� � -7�

�;6.�6�

��6� ���%���� 0 A �� ��B������ C * ����6� ���� �� ,��� "��� �

&�� �� �����"� �� ���, &��� #$�!��� ������� -��� ;6�.;6;

��7� �D?��� �� � � 3�����&��� � � � 8��E��� * � *���$�� � ��

C���� �� � ����6� ? � �$&������� &� �,���� �� � ����

����� �� �����% �� =�$�� /��� --/.--;

���� �������&��� � � B�F� C �� 3�"$����� C ) ���:�� � �$�

�� �� � ,� &��"� �� ��$"����� ����"��� &����� &� ������

� $��� �,,� +�%�� � ���� &� � 66� �-�;.�-��

��:� B����"�� � � ���� C � B,$�������� 3 �� ��������� 3

���:-� ��������� ������ ! ��� ������ � $�� "��� � ! � ��$�

"����� &����� �,,� +�%�� � ���� &� � ;;� /�7./:-

���� +��� ��� C � ������ ��������� ������� ! �",��� ! )������

'�%����&����� -�� ��� � �6� ,, 9����5��� )� � ��� ��� �

���� �� �"&������

�-�� *����� 3 �� �� � �$F� * ����/� �� &���� � "��� �� ���

�����E��� �D�E������� ��� '�( �����E��� �D�E������� ���

�� �E� � �� �9� ����� � � +� �� ,, /-6./;� ��� �� *���

�-�� B����"�� � � ����/� ��������� ������ ! ������ � $��� !

"��� &�� &$����� '�( ?��& � ! ���� �� �� �#$���

���� &�� +� � � �B�",� * 9 � ������ ) 9 � ������ + ) ��

� ��� C C � +�� �� ,, ���.��� ��5��� ) � 3� �� 9�

�--� ?$&��� ? � ?$&��� 8 �� �������� B A ���:6� � " �����

��*' 4$ �������� ������ ,� ���$�� �$��&�� ! � ��� %��$���

@�� � ! ���� �� ,��� &����� ���� �,,� ���� &� � 7� ��6.

��7

�-/� ���%�� ���E� * � 8 �!� �� � � 8$�@������ C � ��� ��$�� 9 �

9 $#$��� 1 � )�&���� 8 �� ���&�$��G���� � ����6� *�����

"���� ������,�� � ! ��� "��� ����� �� � � ! ���� �����

"� %��� ���"��� � �H6��= � ��� +�� *���� 3��� '�����

3��� =�5� ;� �6.�7

�-;� ���%�� ���E� * � 8 �!� �� � � 8$�@������ C � ��� ��$�� 9 �

9 $#$��� 1 � )�&���� 8 �� ���&�$��G���� � ����7� ���� �

�� � � ! ���� ����"� %��� ���"��� � �H6��= � ���

+�� *���� 3��� ���� & +� � ��� ,�����

�-6� 0�%��� � B ����6� � ����� ���"��� � 5�� �� �� �����

4$�� 4 5 � ��4 � ���� ����"� %��� ����� '�( ��4 �

?��� ����"� �����"�( *������� ���"���� )� � ��� ��

8� � ��� '������� �� �?$",����� � + � I�����&��� 3 � �

�$�����$J� � � �� 0� "� �� 3 + � +�� �� ,, �6:.���

�"����� 8� ,������ >�� �� 2����� �� ��

�-7� � ���� * � ���:-� �",��� ����� �� ��$"���� � ���

������� ! � &����� �J������ !� " "���� ����"���� �,,�

+�%�� � ���� &� � ;/� �/77.�/�-

�-�� ��"��� C 2 �� 1��� * � ����-� =�$�� &������ ���"�

&��� �� ���,��� ����"����( � 5��� � &� %��5 '�(

���,��� 9 � ����� �� ��� 8� &� ��& � �����

�3 5�� 8 0 �� *������� K � +�� �� ,, ��.-� B�$5�� ���

��"��� � �������

�� ���������� � ����� � ���� ��������� ������� �� !�""#$ %��&%� -�7